아미노산과 단백질

아미노산과 단백질

생명과학의 기초 생화학

Chapter 2

2장의 개요

2.1 단백질의 구성단위 아미노산

2.2 단백질의 일차구조: 폴리펩타이드 2.3 단백질의 입체구조와 기능의 관계

아미노산과 단백질의 소개

1. 단백질은 건조한 세포 무게의 반을 차지 2. 세포에서 가장 다양하고 중요한 기능

3. 게라두스 뮬더: 동물, 식물에서 단백질 추출 4. 베르첼리우스(스웨덴): “Protein

 그리스어로 “protios”  첫째를 차지한다 5. 단백질  달걀흰자의 의미  일본

6. 고분자 분자량 6,000 ~ 수백만 7. 구성성분  아미노산의 공유결합 8. 아미노산의 중합체  폴리펩타이드

9. 아미노산의 순서  염색체의 뉴클레오타이드의 순서

 독특한 구조  특수기능

2.1 단백질의 구성단위 아미노산

1. 자연에서 모든 단백질의 아미노산은 L-α-아미노산 2. α-탄소에 아미노그룹(-NH

)과 R그룹

3. 쌍극성  생리적인 pH에서 카복실그룹과 아미노그룹의 이온화(Zwitter ion)

4. 두 개의 특징적인 p K

’값

5. 등전점: 하전이 “0”이 되는 p K

값

6. α-탄소가 대칭성을 갖는다.  입체이성 D형

아미노산의 화학적 성질

그림 2-1. α-아미노산의 삼차구조 (1) α-탄소가 카이럴하므로

정사면체가 결합된 모습 (2) (1)의 간단한 표현

그림 2-3. L-알라닌의 두 해리상태의 구조

그림 2-2. 쌍극성 아미노산(쯔비터이온)

그림 2-4. 알라닌의 적정곡선

그림 2-5. α-아미노산의 입체이성 구조

아미노산의 분류

1. 20개 아미노산(자연에 100여 개) 폴리펩타이드에 사용

2. 프롤린  하이드록시프롤린 / 세린, 타이로신  인산화

3. R-그룹의 특성에 따라 분류: 1. 비극성 아미노산, 2. 방향족 R-그룹 3. 음하전의 극성그룹

4. 양하전의 극성그룹 5. 하전이 없는 극성

4. 필수아미노산: 아이소루신, 루신, 발린, 트레오닌, 메싸이오닌, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘,

아르지닌, 라이신

* 히스티딘  유아발육 / 아르지닌  요소회로에서 모두 소비

그림 2-6.

아미노산들의 구조

1. 비극성 아미노산

- 글리신: 작은 R-그룹 회전에 최소의 입체장애

 밀집된 지역에 들어맞음

- 알라닌: 소수성인 메틸그룹, -CH₃을 갖음

- 발린, 루신, 아이소루신: 큰 비극성 R-그룹을 갖음

 소수성 상호작용에 관여

- 분해작용 결핍: 단풍나무시럽냄새오줌병 - 공모양의 단백질에서 주로 안쪽에 위치

 단백질 안정화에 기여

- 페닐알라닌: 분해결핍  페닐케톤뇨증

비편재화된 π 전자  자외선 흡수, 이차구조 형성의 힘

- 방향족아미노산: 280nm에서 최대흡수 - Beer-Lambert의 법칙

A = εc1 (c: 몰랄농도)

 1: 용기의 폭(1cm) ε = 몰흡광계수 A = 흡광도(280nm)

- 흡광도의 측정으로 몰랄농도에서 용액 속의 단백질의 농도 측정

- 트립토판: 식물에서 추출된 약물질의 전구체,

세로토닌(serotonin) 멜라토닌(melatonin) - 메싸이오닌: 메틸그룹 공여체

(에피네프린, 크레아틴, 멜라토닌 합성시)

2. 산성아미노산

- 아스파트산: p

K

- 글루탐산:

· p

K

· 두 개의 음하전, 칼슘이온과 강력하게 결합

· 내부 아마이드 유도체  피롤리돈 카복실산

· 면역글로뷸린의 무거운 사슬, 펩타이드의 N-말단 아미노산

그림 2-7.

γ-카복실글루탐산

그림 2-8.

글루탐산과 파이로글루탐산의 구조

- 라이신:

· ε-아미노그룹 pK_a ‘= 10.53

· ε-아미노그룹  바이오틴, 리포산, 바이타민 A 유도체 레티나 부착

· 콜라젠  δ-탄소 하이드록실화  당이 부착.

· 일레스틴의 ε-탄소 산화되고 아미노그룹 제거  반응성 알데하이드 그룹  신축성 물에 불용성 결합아미노산  데스모신과 아이소데스모신

- 히스티딘: · 이미다졸염 완충용액 · 효소의 활성부위 아미노산

· 금속과 결합 · 히스티딘 탈카복실화  히스타민 - 아르지닌: · δ-탄소  구아니디늄그룹

 두 개의 아미노그룹 사이의 공명안정

· pK_a’=12.48

· 크레아틴 합성에 사용, 요소회로 참여

3. 염기성아미노산

- 세린:

· 일차알콜 + 인산  에스터결합 형성

· 인산화  활성도 조절

· p

K

· 네 개의 이성체

· 단백질에 단지 한 개의 L-트레오닌만 존재

· 인산과 반응 4. 중성아미노산

- 시스테인:

· 약산성, pK_a‘ = 8.33

· -SH 생리적인 pH에서 해리 안 됨

· 효소와 기능성 단백질의 기능에 필수적

· 납이나 수은은 –SH그룹과 반응  활성의 상실

· -SH 두 개 산화 시스틴, -S-S- 단백질 포개짐 - 타이로신:

· 페놀의 하이드록실 그룹  pK_a‘ = 10.0

· 생리적 pH에서 이온화 안 됨.

· 하이드록실 그룹  게스트린, 콜레스토사이토키닌  -SO₄가 붙는다.

· 단백질 kinase(발암성유전자)  인산화

· 분해능력의 결핍으로 선천성 유전병, 타이로시노시스, 타이로시니미아

· 타이록신, 카테콜아민, 멜라닌 합성의 전구체

- 아스파라진: 당 단백질의 탄수화물 가지사슬과 아마이드 결합

- 글루타민:

· γ-아미노질소  퓨린과 피리미딘 뉴클레오타이드 합성에 사용

· 간에서 요소로 바뀌며, 신장에서 암모니아로 배출

· 뇨에서 H⁺의 중화: 산 염기의 조절에 관여

자연에 나타나는 다른 아미노산

1. 콜라젠: 4-하이드록시프롤린과

5-하이드록시 라이신 포함 2. 우유의 카제인: 인산세린

3. 대장균 단백질 합성에서  N-포밀메싸이오닌

 시작단계의 아미노산

4. 자연의 아미노산 중 단백질에 나타나지 않음

호모세린, 오르니틴, β-알라닌, 및 δ-아미노뷰티르산

그림 2-9.

하이드록실화된 프롤린과 라이신

그림 2-10. 인산화된 아미노산

그림 2-11. 포밀화된 아미노산

그림 2-12.

단백질 합성에 사용되지 않은 아미노산들

2.2 단백질의 일차구조: 폴리펩타이드

1. 일차구조(primary structure)  아미노산의 수와 순서 2. 아미노그룹과 카복실그룹  펩타이드결합 

이중결합성질  아마이드그룹의 수소와 카보닐그룹의 산소  단단한 평면 위에 놓임

3. α-C원자는 펩타이드결합의 N과 C에 연결되는 단일결합(Φ와 Ψ)회전이 자유스럽다

4. 자유스런 회전  α-C원자의 R-그룹  삼차구조형성에 영향

5. 모든 펩타이드결합은 트렌스 모양

6. 프롤린: 피롤리돈의 –NH그룹이 관여되는

펩타이드 결합은 트렌스와 시스의 두 가지 배열로 일어남

펩타이드결합

그림 2-14. 단단한 폴펩타이드의 단위와 펩타이드그룹을 연결하는 결합은 큰 각도의 회전 가능성을 가짐

그림 2-15.

Cα-N 결합의

Φ

그림 2-16.

프롤린이 포함된 펩타이드결합의 시스와 트렌스 구조

폴리펩타이드

1. 단백질은 한 개 이상의 폴리펩타이드사슬이 포함 2. 단위 아미노산: 아미노산 잔기(residue)

3. N-말단잔기(N-terminal residue)과 C-말단잔기(C-terminal residue)

4. 단백질은 N-말단에서 C-말단으로 합성

5. N-말단은 왼쪽에, C-말단은 오른쪽에 표기

기능성 올리고펩타이드

1. 열 개 이하의 아미노산으로 구성된 펩타이드 2. 홀몬, 항생제, 독소 및 대사중간물질

3. 글루타싸이온: 트라이펩타이드, 적혈구세포의 산화에 의한 손상의 방지

4. 난포자극분비홀몬(FSH-RH),

황체형성홀몬분비홀몬(LH-RH) 스테로이드 합성자극 5. 바소프레신(외부혈관 억제 혈압증가)

옥시토신(평활근의 수축)

6. 항생제, 그라마시딘, 타이로시딘, 페니실린

7. 합성 펩타이드-아스파탐(L-아스파틸-페닐알라닐- 메틸에스터) 설탕의 200배 단맛

그림 2-17. 글루타싸이온의 구조

그림 2-18.

옥시토신, 바소프레신, 타이로시딘의 구조

그림 2-19. 페니실린의 구조

폴리펩타이드의 아미노산 순서의 결정

1. N-말단과 C-말단 아미노산의 잔기 확인 2. 이황화그룹이 있으면 절단

3. 서로 포개지지 않는 가능한 한 적은 수의 조각으로 제한된 절단

4. 이 조각들의 분리

5. 대략 20~30개의 잔기로 연결된 펩타이드에서 아미노산의 순서결정

=> 아미노산 순서분석기에 의한 순서분석

1. 아미노산의 N –말단과 C-말단의 확인

- 덴실화된 폴리펩타이드  높은 온도의 산성용액에서 펩타이드 결합 가수분해

- N-말단 잔기  강한 형광을 가지므로 표준물질과 비교 확인  매우 적은 양의 시료 사용

- 한 개의 폴리펩타이드사슬  한 개의 N-말단잔기

 폴리펩타이드의 수

- 인슐린: 덴실화된 글리신과 페닐알라닌의 두 개의 펩타이드

그림 2-20. 덴실클로라이드반응

- 이황화결합을 파괴시키는 β-머캅토에탄올을 요소와 구아니듐하이드로클로라이드와 같이 단백질 처리

 이황화결합은 시스테인 잔기가 됨

 원래의 단백질모양이 파괴됨

- 폴리펩타이드사슬 일직선으로 펼쳐지게 됨

- 자유로운 황화수소그룹이 아이오도아세트산 처리

 산소에 의한 재산화로 이황화결합의 재형성 막음 2. 수소결합 및 이황화그룹의 절단

그림 2-21.

머캅토에탄올, 요소, 구아니듐하이드로클로라이드

그림 2-22.

아이오도아세트산을 사용하여설퍼하이드릴그룹의 반응을 차단시킴

3. 서로 포개지지 않은 폴리펩타이드의 절단

- 폴리펩타이드내에 제한된 수의 메싸이오닌(2.3%) 포함

 사이아노젠브로마이드(CNBr)의 처리  큰조각을 얻음  C-말단 쪽의 메싸이오닌

- 트립신 처리: C-말단 쪽의 아르지닌 또는 라이신 - 라이신의 변형: C-말단 쪽의 아르진

- 카이모트립신

그림 2-23. 사이아노젠프로마이드에 의한 절단

4. 가수분해된 폴리펩타이드조각의 분리

- 순수한 상태로 폴리펩타이드 조각들의 분리(아미노산의 순서분석기 사용)

- 젤여과 방법(gel filtration), 다공성 고분자(큰 분자 먼저, 적은 분자 지연)

- 고성능액체크로마토그래피(HPLC) 사용

그림 2-24.

젤여과크로마토그래피법에 의한 단백질분자의 크기에 따른 분리

5. 전체 펩타이드 순서맞추기

그림 2-25.

성분 펩타이드의 순서의 포개짐을 분석하여 전체 펩타이드 아미노산의 순서를 얻게 된다.

2.3 단백질의 입체구조와 기능의 관계

- 입체구조(conformation):

1. 어떤 공유결합을 파괴없이 변환 가능한 그룹의 삼차배열 2. 에테인의 가려진 이성체, 비틀어진 이성체

3. 단백질은 무한한 수의 입체구조

 생물학적인 조건에서 제한된 수의 안정한 입체구조 4. 원래의 형태  삼차구조의 파괴  변성

- 평면구조(configuration):

1. 원자의 절대적인 배열, 주어진 원자 주위의 공간에서 치환그룹의 배치

2. 이성체는 한 개나 그 이상의 공유결합을 파괴하지 않고 서로 상호변환될 수 없다.

그림 2-26. 에테인 이성체의 구조

단백질의 종류와 기능

1. 섬유상단백질:

· 폴리펩타이드의 횡적인 연결.

∙ α-케라틴(머리카락, 손톱)은 세 개의 오른쪽으로 도는 α-나선의 폴리펩타이드로 구성.

· 피부의 콜라젠, 뼈, 연골은 많은 양의 글리신(25%), 프롤린, 하이드록시프롤린(25%)들 때문에 α-나선이 없음.

∙ 왼쪽으로 도는 세 개의 나선(트로포콜라젠).

2. 구형단백질:

∙ 물에 잘 녹고, 최소 공간을 차지하는 집약된 구조

∙ 효소나 항체처럼 생체계에서 대부분을 차지하는 중요한 생체고분자

그림 2-27.

케라틴에서 세 개의 α-나선 코일의 모형

그림 2-28.

트로포콜라젠의 삼중나선의 모형

이차구조의 형성

1. α-나선(helix)의 구조: 오른쪽으로 도는  수소결합

2. β -병풍구조(β-pleated sheet): 비단 3. β-회전(turn)

4. 무질서코일(random coil): 수소결합지역이

잘못되거나 결핍됨.

1. α-나선구조

1. 오른쪽으로 도는 α-나선  시계반대방향

2. 각 펩타이드결합의 -NH, -CO 사이의 수소결합 

안정화(첫 번째 잔기의 아미노프로톤과 네 번째 잔기의 카보닐 산소 사이에서 얻어짐)

3. 한 번 회전에 3.6개 아미노산, 0.54nm 4. 불안정성:

· 비슷한 하전을 띤 R-그룹(Asp. His, Glu, Lys, Arg) 정전기적인 반발

· β-탄소 근처의 잔기들의 큰 치환 때문(Ile, Thr)

· 가지사슬 수소결합이나 이온결합의 형성 때문

그림 2-29. α-나선의 평균크기

2. β-병풍구조

- 잔기 사이의 거리: 0.35nm

- 근처 폴리펩타이드의 사슬의 –NH와 –CO그룹 사이의 수소결합에 의해서 안정화

- 평행과 비평행(실크의 섬유는 비평행의 β-병풍구조)

- 아밀로이도시스(amyloidosis)  주된 구조가 β-병풍구조 - β-파이브릴로시스(β-fibrillosis)  이차구조가 잘못 축적됨 - 아밀로이드(amyloid): 뒤틀린 β-병풍구조의 집합체

- 아밀로이드 퇴적  만성적인 부종, 일종의 암, 뇌의 질병(알츠하이머)

- 실험쥐: 수소결합 붕괴 시약 다이메틸설폭사이드  아밀로이드 감소

그림 2-30.

β-병풍구조의 평행과 비평행한 수소결합의 구조

· 다른 잔기와 펩타이드사슬 간의 상호작용 같은 정리된 계속적인 모양을 갖지 못하는 경우

3. 무질서한 코일

· 폴리펩타이드 사슬이 집약된 분자로 만들어지게 되는 원인(공 또는 타원체 모양의 구형단백질).

· 네 개의 아미노산 잔기  머리핀구조를 형성

4. β-회전

- 이차구조와 삼차구조의 중간구조:

초이차구조 또는 구조의 요소(motif) - 구형단백질:

α-나선과 β-병풍구조의 다양한 비율과 조합 - 초이차구조:

· βαβ요소  두 β-병풍구조 사이에 α-나선이 들어 있음

· β-머리핀구조 β-병풍구조가 역평행으로 진행함으로써 머리핀모양

· αα-요소 두 개의 α-나선이 비스듬히 반대방향으로 진행

· 그리스 열쇠 요소 네 가닥의 β-머리핀이 역평행으로 포개짐

· β-장벽의 요소: 연장된 β-병풍구조가 원통모양 구조 5. 초이차구조의 성분

그림 2-31. 초이차구조의 종류

분자가 스스로 선호하는 낮은 에너지 상태를 탐색한다.

단백질은 일차 아미노산의 순서가 이차 및 삼차구조에 영향을 주게 된다.

1. 폴리펩타이드 사슬간의 견인력과 반발력의 힘의 균형

 포개짐(folding)

2. 아미노산 가지사슬들 간의 견인력:

공유결합, 이온결합, 수소결합, Van der Waals 견인력, 소수성기의 상호작용

3. 반발력: 정전기적인 반발력, Van der Waals 반발력

삼차구조 및 관련 결합력

그림 2-32.

단백질의 삼차구조를 안정화시키는 공유결합 및 여러 가지의 상호 작용

- 공유결합: 펩타이드결합, 이황화결합

배위결합: 두 원자에 의해서 동등하지 않은,

전자쌍의 공여로 만들어지는 화학결합

 전이금속, 유기리간드들 사이에서의 상호작용이 중요.

- 이온결합: 반대 하전을 갖는 두 그룹 사이의 정전기적인 견인력에 의해 일어남.

1. 견인력

- 수소결합:

· 두 개의 전기음성적인 원자들 사이의 수소원자의 공여로 일어남

· 단백질에서 공유할 수 있는 수소원자를 갖는 그룹:

-N-H(펩타이드 질소, 이미다졸 및 인돌), –SH(시스테인), –OH(세린, 트레오닌, 타이로신, 하이드록시프롤린),

-NH₂, NH₃⁺(아르지닌, 라이신, 글루타민), - CONH2(카바미노, 아스파라진, 글루타민)

· 수소원자를 공유할 수 있는 그룹:

-COO^-(아스파트산, 글루탐산, α-카복실산), -S-CH₃(메싸이오닌), -S-S-(이황화 그룹),

=C=O(펩타이드와 에스터 연결)

- Van der Waals 견인력

· 한 분자에서 고정된 쌍극자가 다른 분자의 쌍극자를 유발

· 고정된 쌍극자의 양하전의 끝은 전자그룹을 끌어들이려 하고, 한편 음하전의 끝은 서로 밀어내려고 한다.

· 상호작용의 세기 1/r⁶

· 비극성 가지사슬들 간의 견인력 - 소수성상호작용:

비극성 가지사슬(방향족 고리, 탄화수소그룹)서로 붙게 되는 원인. π전자는 다른 π전자들과 서로 포개지는 능력이 견인력으로 작용.

- 정전기적인 반발력: 이온성 힘의 반발 - Van der Waals 반발력:

서로 매우 짧은 거리의 원자들 사이에서 작동.

전자구름의 상호반발에 의해서 유도된 쌍극자 때문에 나타난다.

2. 반발력

삼차구조의 결정

- 1950년대 X선 결정구조연구:

- 단백질의 α-나선 β-병풍구조, 핵산 DNA 이중나선의 구조

· 마이오글로빈: 죤 켄드류(John Kendrew)

· 헤모글로빈: 막스 페루츠(Max Perutz)

- X-선 조사  굴절의 모양(무거운 원자-더 진한 색) - 납이나 우라늄 사용, X-선 굴절모양의 비교

- 해상도 6Å  400, 1.4Å  25,000

그림 2-33. 단백질 결정에 X-선을 통과시킨 굴절의 모양

그림 2-34. 마이오글로빈의 X-선 회절의 모양

그림 2-35.

콩 단백질인 콘카나발린 A의 삼차구조 전자밀도 지도

- 근육에서 산소보관, 세포를 통하여 산소를 운반:

153개의 아미노산을 갖는 한 개의 폴리펩타이드사슬과 철을 포함하는 분자인 힘(heme)

- 힘분자의 유기화학 성분인 폴피린: 네 개의 피롤고리 - 여덟 개의 구역의 α-나선, 다섯 개의 비나선구조 구역

존재

- 힘: 분자의 바깥쪽, His F7  힘의 평면 - 가역적인 산소부착  Fe²⁺ 일 때

- 물 분자 여섯 번째 배위:

· Fe²⁺  Fe³⁺(산화)

· 페릭마이오글로빈은 산소결합 불능 1. 마이오글로빈

그림 2-36.

프로토폴피린IX와 철을 포함한 힘(heme) 그룹

그림 2-37. 마이오글로빈의 삼차구조

- 124개의 아미노산, 한 개 폴리펩타이드, 네 개의 이황화결합 - β-머캅토에탄올, 요소, 구아니딘염산염:

효소능력의 상실

- 공기의 노출  설퍼하이드릴그룹의 재산화:

여덟 개의 시스테인잔기가 네 개의 이황화그룹을 만들 수 있는 105가지 다른 분자내부의 이황화그룹을의 형성 가능 - 자발적으로 효소가 생물학적인 활성을 갖도록 재건된다.

유전자코드에 의해서 지정된 라이보뉴클리에이스의 아미노산의 순서는열역학적으로 선호되는 효소의 원래

입체구조를 구성하는 데 필요한 정보를 제공하고 있음을 알 수 있음.

2. 라이보뉴클리에이스

그림 2-38. 라이보뉴클리에이스 A의 일차구조

그림 2-39.

라이보뉴클리에이스 A의 변성 및 재현

- 두 개 이상의 동등한 또는 다른 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 기능성 단백질이 갖는 입체구조 - 두 개 이상의 단위체  올리고머(oligmer)

- 여러 단위체 : 촉매활성 조절이 효율적 - 단위체는 비공유성 힘에 의해서 서로 결합 3. 사차구조

단백질의 포개짐

타입 I.

1. 아미노산의 순서에 따라 α-나선과 β-병풍구조의 형성 2. 먼 거리의 상호작용으로 α-나선들이 접근하여

초이차구조의 형성

3. 완전한 단위체로 전체적인 포개짐 타입 II.

1. 폴리펩타이드의 자발적인 붕괴

2. 비극성 잔기의 소수성 상호작용의 조정에 의해 집약된 공모양의 구조를 만들게 됨

3. 용융된 공(molten glubule) 1. 포개짐의 원리

분자샤페론(chaperon):

- 부분적으로 포개졌거나 잘못 포개진 폴리펩타이드와 상호 작용

- 정확한 포개짐의 경로를 선택하거나 포개짐이 일어나도록 미세한 환경을 조절하는 기능

- Hsp70, 분자량 70,000 (heat shock protein)

- 소수성 잔기가 많아서 부적절한 응집을 막는 폴리펩타이드 지역에 결합

- 아직 포개지지 않은 폴리펩타이드를 보호하는 기능

- 세포막을 통하여 이동되기 전까지 포개짐을 억제하는 기능.

- 대장균에서 얻은 DnaK(Hsp70) 과 DnaJ(Hsp40) - 샤페로닌(chaperonin):

대장균에서 GroEL/GroES라 부르는 샤페로닌 체계가 필요

2. 포개짐에 관여하는 효소나 단백질

그림 2-40.

그림 2-41.

단백질 포개짐 과정에서 샤페론의 역할

이성화반응을 촉매하는 두 개의 효소

1. 단백질-이황화-이성화효소(protein disulfide isomerase, PDI)는 이황화결합의 상호교환 및 뒤 섞음을 촉매시키는 효소  PDI는 부적절한

이황화결합의 횡적인 연결로 얻어지는 포개짐의 중간체를 제거하는 반응의 촉매를 수행

2. 펩타이드 프롤린 시스-트렌스 이성화효소(peptide proline cis-trans isomerase, PPI)  프롤린

펩타이드결합의 시스와 트렌스 이성체를 서로

변화시키는 촉매효소

삼차구조의 파괴로 생물학적인 기능을 상실(온화한 변성은 가역적)하게 된 상태

1. 용해도의 감소

2. 내부구조의 변화 또는 펩타이드사슬의 붕괴와 상관없이 펩타이드사슬의 배열의 변형

3. 대칭성의 감소로 나선 구조의 상실

4. 화학반응성의 증가: 이온화, 설퍼하이드릴그룹

5. 단백질가수분해효소에 의한 가수분해 가능성의 증가 6. 원래의 생물학적인 기능의 상실 또는 감소

7. 결정형성능력의 상실 3. 단백질의 변성

단백질의 분리 및 취급할 때 변성이 되지 않도록 주의해야 할 열 가지의 규칙

1. 이온의 세기: 용액의 pH 2. 온도: 수소결합 파괴

3. 용액의 희석: 친수성의 증가

4. 금속이온: 정전기적인 상호작용

5. 수소결합의 형성 촉진제: 요소 또는 포름알데하이드

6. 계면활성제: 공기 접촉 시 산화유발 7. 유기용매: 소수성의 상호작용

8. 산화 및 환원제: 시스테인의 이황화결합 9. 물리적인 충격 또는 높은 에너지

10. 반응성 화합물: 아미노산 변형 화합물