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©The Korean Society of Food Science and Technology
고당 및 올레산으로 유도된 간세포에서의 염증반응에 대한
말차(Camellia sinensis) 추출물의 보호효과
김종민
1· 이 욱
2· 강진용
1· 박선경
1· 신은진
1· 문종현
1· 김민지
1·
이효림
1· 김길한
1· 정혜린
1· 박효원
2· 김종철
3· 허호진
1,*
1경상국립대학교 응용생명과학부(BK21), 농업생명과학연구원 2국립산림과학원 산림특용자원연구과, 3(재)하동녹차연구소Protective effect of matcha green tea (
Camellia sinensis) extract on high
glucose- and oleic acid-induced hepatic inflammatory effect
Jong Min Kim1, Uk Lee2, Jin Yong Kang1, Seon Kyeong Park1, Eun Jin Shin1, Jong Hyun Moon1, Min Ji Kim1, Hyo Lim Lee1, Gil Han Kim1, Hye Rin Jeong1, Hyo Won Park2, Jong Cheol Kim3, and Ho Jin Heo1,*
1Division of Applied Life Science (BK21), Institute of Agriculture and Life Science, Gyeongsang National University 2Division of Special Forest Resources, Department of Forest Bioresources, National Institute of Forest Science (NIFoS)
3Institute of Hadong Green Tea
Abstract To evaluate hepatoprotective effects, the antioxidant capacities of matcha green tea extract (Camellia sinenesis) were compared to those of green leaf tea and the anti-inflammatory activities in HepG2 cells were investigated. Evaluation of the total phenolic and total flavonoid content, 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) and 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activity, and inhibitory effect on lipid peroxidation indicated that the aqueous extract of matcha green tea presented significant catechin content and antioxidant capacity compared to those of green leaf tea. In addition, the extract had considerable inhibitory effects on α-glucosidase, α-amylase, and advanced glycation end-products. The matcha green tea extract significantly increased cell viability and reduced reactive oxygen species in H2O2- and high-glucose-treated HepG2 cells. Furthermore, in response to oleic acid-induced HepG2 cell injury, treatment with matcha green tea aqueous extract inhibited lipid accumulation and regulated the expression of inflammatory proteins such as p-JNK, p-Akt, p-GSK-3β, caspase-3, COX-2, iNOS, and TNF-α. Matcha green tea could be used as a functional material to ameliorate hepatic lipid accumulation and inflammation.
Keywords: matcha green tea, hepatoprotective effect, lipid accumulation, anti-inflammatory effect, inflammatory pathway
서
론
간에서 나타나는 대사성 질환의 한 종류인 비알코올성 지방간 (non-alcoholic fatty liver disease)은 간 조직 내의 지방이 과도하 게 축적된 것으로, 이는 간지방증(hepatic steatosis), 지방간염 (steatohepatitis), 간섬유증(liver fibrosis) 등과 같은 다양한 간 질환 을 야기한다(Park 등, 2006). 비알코올성 지방간은 최근 서구화된 식생활에 따른 당뇨의 증가로 인해 비만 인구의 60-80%에서 나 타나고 있으며, 국내 성인 인구의 16-33% 정도로 추정된다(Jeong 등, 2013). 특히, 과도한 고탄수화물과 고지방의 섭취로 인해 흡 수된 유리지방산 및 중성지방은 간세포의 세포질에 축적되며, 이 과정을 통해 산화적 스트레스, 염증반응 및 세포 사멸을 초래하 는 과정이 나타난다(Angulo, 2002). 과도한 지방 축적은 간 조직 에서 지방산과 콜레스테롤 합성을 촉진하는 지방산 합성 효소 (fatty acid synthase, FAS), 아세틸 보조효소 에이카복실화효소 (acetyl-CoA carboxylase, ACC), 3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-coenzyme A reductase (HMGCR) 등의 단백질의 발현을 증가시 키며, tumor necrosis factor-α (TNF-α)와 같은 염증성 사이토카인 의 분비가 증가된다(Chang 등, 2013). 지방 합성 과정 중 생성되 는 TNF-α는 간세포에서 FAS 수용체와 반응하여 지방 대사와 관 련된 효소의 발현을 지속적으로 유도하고 지방간의 발달과 인슐 린 저항성을 야기하며 간 손상을 촉진시킨다(Gao 등, 2018). 또 한 phosphorylated c-Jun N-terminal kinases (p-JNK)의 활성 증가 와 세포 생존과 관련이 있는 phosphorylated protein kinase B (p-Akt)의 활성 감소를 통해 cyclooxygenase-2 (COX-2), inducible nitric oxide synthase (iNOS)의 발현을 촉진하여 지방간염이 지속 되는 결과가 나타난다(Lim 등, 2012). 따라서 현대인의 서구화된 식습관이 지속됨에 따라 고당 및 고지방으로 유도되는 지방간염 을 효과적으로 예방 및 억제할 수 있는 천연 유래 소재를 통해 건강기능식품에 대한 연구가 필요하다.
녹차는 전 세계적으로 널리 음용하는 음료로서, 페놀성 화합물 (phenolic compound)과 탄닌(tannin), 카테킨(catechin) 등이 다량 함 *Corresponding author: Ho Jin Heo, Division of Applied Life
Sci-ence (BK21), Institute of Agriculture and Life SciSci-ence, Gyeongsang National University, Jinju 52828, Korea
Tel: +82-55-772-1907 Fax: +82-55-772-1909 E-mail: [email protected]
Received January 26, 2021; revised March 29, 2021; accepted march 29, 2021
유되어 있으며, 다른 천연 소재에 비해 catechin의 함량이 우수한 것으로 알려져 있다(Cabrera 등, 2006). 녹차는 우수한 항산화 활 성 및 항균 작용, 라디칼 소거활성뿐만 아니라 신장 보호효과, 항 당뇨 활성 등과 같은 다양한 생리활성을 가지는 것으로 보고되 고 있다(Sharma 등, 2012; Tang 등, 2013; Kim 등, 2020). 하지 만 우수한 품질의 녹차 채취 시기는 제한적이며, 높은 수분함량 으로 보존성이 낮아 이화학적인 변화로 인한 품질 변화가 나타 나기 쉽다. 따라서 녹차는 다양한 가공을 통해 저장 및 유통되고 있다(Park, 2005). 특히, 가루 형태로 가공된 형태의 말차(matcha green tea)는 일반적인 잎 녹차와는 달리 수확 전 차광재배하며, 잎 전체를 사용하는 녹차와는 달리 수확 직후 줄기가 제거되어 증기처리 된 가공품으로써, 영양소의 소실이 낮고 테아닌의 함량 이 상대적으로 높아 기호성이 높아진다고 보고되었다(Sakurai 등, 2020). 또한, epicatechin (EC), epigallocatechin (EGC), (−)-epicatechin-3-gallate (ECG), (−)-epigallocatechin-3-gallate (EGCG) 의 함량이 녹차의 다른 가공품인 우롱차(oolong tea), 홍차(black tea), 호지차(hojicha) 등과 비교하였을 때, 호지차에 비해서는 1.05 배, 홍차에 비해서는 9.8배 함량의 catechin을 함유하는 것으로 보 고되었다(Sato, 1999). 녹차의 생리활성에 관한 연구는 지속적으 로 보고되고 있지만, 녹차의 가공품인 말차에 대한 연구는 상대 적으로 미흡한 실정이다. 따라서 본 연구는, 녹차에 비해 상대적으로 연구가 미흡한 말 차 추출물이 잎 녹차와 비교하였을 때 카테킨 함량과 항산화 활 성의 변화를 비교 분석하고, 산화적 스트레스와 고당으로 유도된 독성에 대한 간세포 보호효과와 올레산(oleic acid)로 유도된 지 방 축적 억제 활성을 평가하여 지방간으로 인한 염증반응의 개 선 기작을 구명함으로써 녹차의 가공품 중 하나인 말차의 건강 기능식품으로서의 이용 가능성을 평가하고자 실험을 진행하였다.
재료 및 방법
시료 채취 및 제조 본 연구에 사용된 말차는 (재)하동녹차연구소(Institute of Hadong Green tea, Hadong, Korea)로부터 시료를 제공 받아 사용하였다. 말차 제조에 사용된 녹차 잎은 색, 질감과 같은 품질특성과 엽록 소, 아미노산의 함량과 같은 기호성을 향상시키기 위하여 약 20 일간 차광 재배한 것을 사용하였다. 녹색의 유지를 위해 과열증 기 처리를 250oC에서 1분 내로 처리하였으며, 빠르게 냉각한 뒤자동 건조기(Kawasaki Tea Machinery, Kakegawa, Japan)를 이용 하여 수분함량이 10% 미만이 되도록 하였다. 건조된 녹차는 비 드 밀(Bead mill, Kawasaki Tea Machinery)의 회전마찰력(50-55 rpm)을 이용해 분쇄하였으며, 입도분석기(LS 13 320, Beckman Coulter, Brea, CA, USA)를 이용하여 입자크기가 13-14 μm가 되 도록 하여 말차를 제조하였다. 말차의 활성을 평가하기 위해 40 g의 말차와 가공 전의 잎 녹차를 50배의 증류수를 이용하여 40oC 에서 환류 냉각하여 2시간 동안 추출한 후, 이 추출액을 No. 2 여과지(Whatman PLC, Kent, UK)로 여과하여 진공농축기(N-N series, Eyela Co., Tokyo, Japan)로 농축하였다. 농축된 시료는 동 결건조기(Operon, Gimpo, Korea)를 이용하여 동결건조하였고, 이 를 −70oC에서 보관하면서 실험에 사용하였다.
고성능액체크로마토그래피를 이용한 카테킨(catechin) 함량 분석 말차 추출물의 catechin 함량을 분석하기 위해서 high performance liquid chromatography (HPLC, Ultramate 3000 series, Dionex, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 분석하였으며 컬럼은 C18컬럼
(250×4.6 mm, 5.0 μm, Prontosil, BISCHOFF Chromatography, Leonberg, Germany)을 사용하였다. 그리고 0.1% formic acid가 포 함된 증류수와 0.1% formic acid가 포함된 acetonitrile (ACN)을 각각 이동상 용매 A와 B로 이용하였으며, 10 μL의 시료를 주입 하여 1 mL/min의 유속으로 흘려주었다. 기울기 용매 조건은 B의 조성비를 0-30% (0-20 min), 30-50% (20-25 min), 50% (25-30 min), 0-50% (30-30.1 min)로 하였고, 컬럼 오븐은 40oC로 유지시켰으며, 검출 파장은 280 nm으로 하여 catechin 함량을 측정하였다. 총 폴리페놀 화합물 함량 및 총 플라보노이드 화합물 함량 측정
총 폴리페놀 함량 분석은 Folin & Ciocalteu’s phenol reagent가 시료에 함유된 폴리페놀 화합물에 의해 환원되어 몰리브덴 청색 으로 발색하는 것을 이용하여 함량을 측정하였다(Jeong 등, 2010). 시료 1 mL, 3차 증류수 9 mL Folin & Ciocalteu’s phenol reagent 1 mL을 혼합하여 실온에서 5분간 반응시킨 후, 7% Na2CO3 용액 10 mL와 3차 증류수로 4 mL를 첨가하였다. 이 혼합용액을 실온 에서 2시간 동안 반응시킨 후 760 nm에서 흡광도를 측정하였다. Gallic acid를 이용하여 시료와 같은 방법으로 작성된 검량선으로 총 페놀성 화합물 함량을 계산하였고, 이를 gallic acid equivalents (mg GAE/g extract)로 나타내었다.
총 플라보노이드 화합물 함량 분석은 시료 1 mL에 diethylene glycol 10 mL와 1 N NaOH 1 mL을 혼합한 후, 상온에서 1시간 방치하고 420 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 측정된 흡광도는 루틴(rutin) 표준정량곡선을 이용하여 총 플라보노이드 함량을 계 산하였고, rutin equivalents (mg of RE/g extract)로 나타내었다 (Abeysinghe 등, 2007).
ABTS 및 DPPH 라디칼 소거 활성 측정
2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) 라 디칼 소거 억제 활성은 2.5 mM ABTS와 150 mM NaCl이 포함된 100 mM phosphate buffer (pH 7.4)에 혼합한 후 70oC에서 30분 동안 반응하였고, 이를 여과시켜 ABTS 라디칼 용액으로 사용하 였다. ABTS 라디칼 용액은 734 nm에서 흡광도 값이 0.70±0.02가 나오도록 하여 사용하였다. 시료 20 μL에 흡광도 값을 조정한 ABTS 라디칼 용액 980 μL를 혼합하여 37oC에서 10분간 반응시 키고, 반응용액을 734 nm에서 흡광도를 측정하였다(Kim 등, 2003). 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 라디칼 소거 억제 활성은 80% 메탄올에 용해한 0.1 mM DPPH를 517 nm에서 흡광도 값이 1.00±0.02가 나오도록 하여 실험에 사용하였다. 시료 0.05 mL과 흡광도 값을 맞춘 DPPH 용액 1.45 mL를 첨가하여 실온에서 30 분방치 후 517 nm 파장에서 측정하였다(Blois, 1958). 지질과산화물 생성 억제효과 마우스의 뇌 조직을 이용한 지질과산화물의 생성 억제효과를 평가하기 위하여 Chang 등(2001)의 방법을 변형하여 실험하였다. 조직 적출은 경상대학교 동물윤리심의위원회 승인을 거쳐 진행 하였으며(경상대학교 동물실험인가번호 GNU-120831-M0067), 일 정한 환경이 유지되는 곳에서 사육된 institute of cancer research (ICR) 마우스의 뇌를 적출하여 무게의 10배에 해당하는 20 mM 트리스-염산 완충용액(Tris-HCl buffer, pH 7.4)을 첨가하고 균실 화시켰다. 이 용액은 6,000×g, 4oC에서 10분간 원심분리시켰고, 상등액을 실험에 사용하였다. 시료 0.2 mL, 상등액 0.1 mL, 0.1 mM 아스코르브산 0.1 mL, 10 μM 황산철(II) 0.1 mL와 1% 타이 오바르비투르산(thiobarbituric acid) 0.3 mL를 반응시켰으며, 37oC 에서 1시간 반응시켰다. 방치 후, 30% 트리클로로아세트산
(trichloroacetic acid) 0.3 mL을 첨가하고, 80oC에서 20분간 가열한 다음, 600×g에서 10분간 원심 분리 후 532 nm에서 흡광도를 측 정하였다. α-Glucosidase 및 α-amylase 억제 활성 측정 α-Glucosidase 억제 활성은 시료와 0.1 M 인산 완충 식염수(pH 6.9)와 0.5 unit/mL α-glucosidase를 혼합하여 37oC에서 10분 동안 반응시킨 후, 3 mM p-nitrophenyl-α-D-glucopyranosidase를 가하여 37oC에서 5분 동안 반응하여 microplate reader (Epoch 2, BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, USA)를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다(Apostolidis 등, 2007).
α-Amylase 억제 활성은 0.02 M sodium phosphate buffer (pH 6.9)에 시료와 0.1 mg/mL α-amylase를 혼합하여 37oC에서 10분간 반응시킨 후, 1% starch를 첨가하여 10분간 반응시켰고, 3,5-dinitrosalicylic acid solution (DNS)를 첨가하여 100oC의 항온수조 에서 5분간 발색시켰으며, 반응물에 3차 증류수를 가하여 540 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다(Nyambe-Silavwe 등, 2015). 최종당화산물 생성 억제 활성 측정
최종당화산물의 생성 억제 활성을 측정하기 위하여 시료와 0.2 M 인산 완충용액(pH 7.4)에 0.02% sodium azide, 50 mg/mL 소혈 청알부민(bovine serum albumin), 1.25 M 과당을 혼합하고 37oC에
서 3일간 반응을 진행하였고, 96-well black plate에 100 μL씩 분 주하여 형광광도계(Fluorometer, Infinite F200, Tecan, Männedorf, Swiss)를 사용하여 형광강도를 측정하였다. 들뜸 파장(excitation wave) 370 nm 및 방출 파장(emission wave) 440 nm에서 검출하 였으며, 이를 이용하여 최종당화산물 생성 억제 정도를 평가하였 다(McPherson 등, 1988).
간세포 배양
본 실험에 사용된 HepG2 세포(한국세포주은행, KCLB-88065, Korean Cell Line Bank, Seoul, Korea)는 인간의 간 조직에서 유 래한 것으로 간세포의 특징을 나타낸다. HepG2 세포의 배양은 10% 소태아혈청(fetal bovine serum), 50 units/mL 페니실린과 100 μg/mL 스트렙토마이신이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 배양 하였다. 세포는 37oC, 5% CO
2 조건이 유지되는
배양기(MCO-18AIC, Sanyo Electric Co., Ltd., Osaka, Japan)에서 배양하여 실 험에 사용하였다.
간세포에서의 산화적 스트레스 억제활성 측정
H2O2 및 high glucose에 의한 활성산소종 억제 활성을 측정하 고자 2',7'-dichlorofluorescein diacetate (DCF-DA)를 이용하였다 (Kim 등, 2019). 96-well black plate에 HepG2 세포를 분주한 뒤, 24시간 동안 배양하였고, 배양 후 시료를 농도별로 세포에 첨가 하여 배양한 후 200 μM H2O2 3시간 또는 200 mM glucose를 24
시간 동안 처리하였다. 배양이 끝난 후에 50 μM DCF-DA를 첨 가하여 50분 동안 반응시킨 뒤, fluorescence microplate reader (Infinite 200, Tecan Co., San Jose, CA, USA)를 사용하여 485 nm (excitation)와 535 nm (emission)에서 형광을 측정하였다. 간세포의 생존율 측정 HepG2 세포에 대한 보호 효과는 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide (MTT) assay를 이용하여 실험을 진 행하였다. Mitochondrial dehydrogenase에 의해 노란색의 수용성 기질이 청자색으로 전환되는 방법을 이용하였으며, 비수용성의 MTT formazan으로 환원시키는 미토콘드리아 활성을 이용하였다 (Heo 등, 2001). H2O2에 의한 간세포 보호 효과를 측정하고자 시 료 30 μL를 세포에 첨가하여 24시간 배양한 후 200 μM H2O2를 3시간 배양하였고 high glucose에 의한 간세포 보호 효과를 측정 하고자 시료 30 μL를 세포에 첨가하여 3시간 배양한 후 200 mM glucose를 24시간 동안 처리하였다. 이 상태의 HepG2 세포에 각 각 10 μL MTT를 처리하여 37oC에서 3시간 동안 배양하였고, 최
종 흡광도는 microplate reader (Epoch 2)에서 570 nm (determination) 와 690 nm (reference)에서 측정하였다.
Oil red O staining
지방 축적 억제효과를 확인하기 위해 6-well plate 에 HepG2 세포를 분주하여 배양한 뒤, 24시간 후 소태아혈청이 들어있지 않은 DMEM 배지로 교체하여 12시간 배양하였다. 이후, 0.5 mM oleic acid가 첨가된 저 포도당 DMEM 배지를 첨가한 뒤, 시료를 처리하였다. 24시간 이후 지방 축적 정도를 확인하기 위해 Oil red O 염색 방법을 이용하였다.
Oil red O 염색은 배지를 제거한 뒤 PBS를 이용하여 씻어준 뒤, 세포를 고정하기 위해 4% formaldehyde를 넣어 1시간 동안 고정시켰으며, 증류수를 이용하여 formaldehyde를 완전히 제거하 였다. Isopropanol에 0.5% 농도로 녹인 Oil red O 시약을 증류수 와 6:4 비율로 섞어 희석한 후 각 well에 처리해 준 뒤 지방에 염색되어 있는 Oil red O를 아이소프로판올을 이용하여 녹여낸 뒤 microplate reader (Epoch 2)를 이용하여 500 nm 파장에서 측 정하여 지방 축적 정도를 확인하였다.
Western blot법을 활용한 단백질 발현 측정
Oleic acid를 처리한 HepG2 세포에서의 단백질 발현을 측정하 기 위해 1% protease inhibitor cocktails (Thermo Fisher Scientific, Rockford, IL, USA)이 함유되어 있는 lysis buffer (ProtinExTM Animal cell/tissue, Gene All Biotechnology, Seoul, Korea)로 용해 하였고, 용해액은 4oC, 13,000×g에서 12분간 원심분리시킨 후, 상
층액을 이용하여 동량의 단백질이 되도록 맞추었다. 단백질의 분 리는 sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel (SDS-PAGE)을 통하여 분리하였고, 분리된 단백질은 polyvinylidene difluoride membrane (Millipore, Billerica, MA, USA)으로 이동시켰고, 단백 질을 이동시킨 membrane 은 4oC에서 1차 항체와 12시간 동안 반
응시켰다. 사용된 1차 항체는 p-JNK (sc-6254, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), p-Akt (sc-514032, Santa Cruz Biotechnology), COX-2 (sc-376861, Santa Cruz Biotechnology), iNOS (sc-7271, Santa Cruz Biotechnology), β-actin (sc-69879, Santa Cruz Biotechnology), phosphated glycogen synthase kinase 3β (p-GSK-3β, CSB-PA166926, Cusabio, Hubei, China)와 caspase-3 (CBS-PA05689A0Rb, Cusabio), TNF-α (5178SC, Cell Signaling Tech, Danvers, MA, USA)이다. 이 후, membrane을 2 차 항체와 함께 실온에서 1시간 동안 반응시켰고, ECL (ProNATM ECL Ottimo, TransLab, Daejeon, Korea)과 반응하여 western blot imager (iBright Imager, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)를 이용해 단백질 발현을 확인하였다.
통계
모든 실험은 반복하여 진행 후, mean±SD로 나타냈다. 실험 결 과에 대한 통계적 유의성 검증은 SAS software (ver. 9.1, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA)와 one-way analysis of variance (ANOVA)에 의하여 평가되었으며, 그룹 간의 유의성은 Duncan의
다중범위검정법(Duncan’s new multiple-range test)으로 시행하였다 (p<0.05).
결과 및 고찰
카테킨(catechin) 함량 분석 가공 중 catechin 함량의 변화를 측정하고자 말차와 잎 녹차 추 출물의 catechin의 함량을 HPLC 분석을 이용하여 나타내었다 (Table 1). 잎 녹차 추출물에 함유되어 있는 catechin (EGC, EC, ECGC, ECG) 함량은 각각 39.27, 5.22, 38.18, 10.57 mg/g extract 으로 나타났으며, 말차 추출물에 함유되어 있는 catechin 함량 (EGC, EC, ECGC, ECG)은 각각 49.49, 8.74, 50.24, 13.75 mg/g extract으로 확인되어 잎 녹차 추출물에 비해 말차 추출물의 catechin 함량이 각각 1.2, 1.6, 1.3, 1.3배 우수한 것을 확인할 수 있었다. 이는 말차의 입자크기가 13-14 μm로서 잎 녹차보다 표면 적이 넓어 생리활성 물질의 추출이 용이해진 것으로 판단된다. 항산화 활성 비교 분석 말차와 잎 녹차 추출물의 항산화 활성을 비교해 보고자 총 페 놀성 화합물 함량, 총 플라보노이드 화합물 함량, ABTS 및 DPPH 라디칼 소거활성 및 말론다이알데하이드(Malondialdehyde, MDA) 저해활성을 평가하였다(Table 2). 말차 추출물의 총 페놀성 화합 물 함량은 325.00 mg of GAE/g로 잎 녹차 추출물(235.92 mg of GAE/g)보다 우수한 함량을 나타내었으며, 총 플라보노이드 함량 역시 말차 추출물(104.24 mg of RE/g)이 잎 녹차 추출물(83.87 mg of RE/g)보다 우수한 함량을 보였다. 항산화 활성을 평가하고자 ABTS 및 DPPH 라디칼 소거 활성을 확인하였으며, 말차 추출물 의 ABTS (IC50=276.56 μg/mL)와 DPPH (IC50=321.05 μg/mL) 라디칼 소거활성이 잎 녹차보다 우수한 ABTS (IC50=310.48 μg/mL) 와 DPPH (IC50=380.98 μg/mL) 라디칼 소거활성을 나타내었다. 또 한, 말차 추출물(IC50=59.98 μg/mL)이 잎 녹차 추출물(IC50=68.15 μg/mL)보다 우수한 지질과산화물 억제 활성을 나타내었다. 녹차에 존재하는 다양한 catechin은 우수한 항산화 활성을 보 이며, 말차가 우수한 항산화 활성을 나타낸 것은 이들 catechin에 의한 것으로 보이며, 이들 catechin의 뛰어난 항산화 활성을 바탕 으로 신경세포 보호효과, 혈압 감소효과 및 콜레스테롤 저감효과 등과 같은 뛰어난 생리활성이 보고되었다(Xu 등, 2004; Ortiz-López 등, 2016; Zhu 등, 2020). 또한 녹차는 Peumus boldus,
Matricaria recutita, Baccharis trimera, Cymbopogon citratus, Pimpinella anisum, Mentha piperita, Ilex paraguariensis 등과 같 은 다양한 차와 비교하였을 때, 우수한 항산화 활성과 총 페놀성 화합물 함량 및 총 플라보노이드 화합물 함량을 보였는데, 이는 gallic acid, catechin, EC, procyanidin B2 및 quercitrin의 함량이 상대적으로 높은 것으로 나타났다(Zielinski 등, 2014). 뿐만 아니 라 녹차에 함유되어 있는 theanine과 γ-aminobutyric acid (GABA) 는 뛰어난 항산화 활성을 가진다고 보고되고 있으며, 카페인 역 시 우수한 항산화 활성을 바탕으로 인지기능 및 뇌 보호효과를 나타낸다고 보고하였다(Abreu 등, 2011; Di Lorenzo 등, 2016). 따 라서 다양한 생리활성을 함유하고 있는 녹차를 이용하여 제조된 말차 역시 우수한 항산화 활성을 보였으며, 잎 녹차에 비해 말차 의 항산화 활성이 높은 것은 우수한 항산화 활성을 가진 catechin (ABTS, IC50=157.25 μg/mL; DPPH, IC50=128.21 μg/mL; MDA, IC50=22.78 μg/mL) 함량의 차이(Table 1)에서 나타나는 것으로 판 단된다. α-Amylase 및 α-glucosidase 억제 활성 측정 α-Amylase는 음식의 섭취 과정 중 탄수화물의 가수분해에서 가 장 우선적으로 작용하는 효소로서 전분을 올리고당으로 분해한 다. 이후, exo-type의 탄수화물 분해효소인 α-glucosidase는 소장 융모막에 존재하며, 분해된 올리고당을 흡수 가능한 단당 형태로 가수분해하여 포도당으로의 분해를 촉진시킨다(Gua 등, 2006). 이 들 효소에 의해 탄수화물은 단당류로 분해되며, 소장에서 흡수되 는 과정을 거쳐 혈당을 상승시키며, 과도한 단당류는 간에 축적 되어 지방간을 유도하는 것으로 보고되고 있다(Musso 등, 2012). 따라서 α-amylase와 α-glucosidase의 억제는 체내로 섭취된 탄수 화물이 혈중으로 흡수되는 것을 저해하고 포도당의 유리 속도를 지연시켜 혈당 상승을 감소시킬 수 있는 방법으로 이용되고 있 다(Kumar 등, 2011). 따라서 본 연구를 통해 말차 추출물이 가지 는 α-amylase와 α-glucosidase의 억제 활성을 평가함으로서 체내 로 흡수되는 단당류의 흡수 억제에 대한 연구를 진행하였다(Fig, 1). 5 μg/mL 농도의 말차 추출물의 α-amylase의 저해 활성은 71.15%로 우수한 저해활성을 나타내었으며, 2 μg/mL 농도의 말 차 추출물은 70.06%의 저해활성을 보였으며, IC50 값은 0.6695 μg/mL로 나타났다(Fig. 1A). 이어서 α-glucosidase에 대한 말차 추 출물의 저해효과는 Fig. 1B에 나타내었으며, 1,000 μg/mL 농도의 말차 추출물의 α-glucosidase의 저해 활성은 98.11%으로 우수한 Table 1. Catechin conetents of aqueous extract of leaf green tea and matcha green tea (Unit: mg/g extract)
EGC EC EGCG ECG Total catechin
Leaf green tea 39.27±0.58b 5.22±0.21b 38.18±0.08b 10.57±0.07b 093.24±0.33b Matcha green tea 49.49±0.12a 8.74±0.06a 50.24±0.57a 13.75±0.11a 122.22±0.21a
Results are mean±SD (n=3). Data were statistically represented at p<0.05, and different small alphabets mean statistical significance.
Table 2. Antioxidant capacity of aqueous extract of leaf green tea and matcha green tea
TPC1 TFC2 ABTS3 DPPH4 MDA5
Catechin - - 157.25±3.57c 128.21±5.18c 22.78±1.01c
Leaf green tea 235.92±1.25b 83.87±1.03b 310.48±2.48a 380.98±5.15a 68.15±3.57a Matcha green tea 325.00±7.35a 104.24±5.17a 276.56±4.25b 321.05±3.24b 59.98±2.48b 1)TPC, total phenolic content; 2)TFC, total flavonoid content; 3)ABTS, ABTS radical scavenging activity; 4)DPPH, DPPH radical scavenging activity; 5)MDA, malondialdehyde (MDA) inhibitory effect. Results shown are mean±SD (n=3). Data were statistically represented at p<0.05, and different
small alphabets mean statistical significance. Results of TPC and TFC are presented as mg of GAE/g and mg of RE/g, respectively. Results of ABTS, DPPH and MDA are presented as IC50 value (μg/mL).
저해활성을 보였으며, 500 μg/mL 농도의 말차 추출물은 89.36% 의 저해활성을 나타내었으며 말차 추출물의 IC50 값은 122.37 μg/ mL로 확인되었다. 체내로 흡수되는 탄수화물은 다양한 소화 효소의 저해를 통해 흡수를 막을 수 있으며 간 조직 내의 지방 축적을 억제할 수 있 다고 보고하고 있다(Kumar 등, 2011). Li 등(2007)에 따르면 녹차 에 함유되어 있는 EGCG는 sucrose가 glucose로 분해되는 것을 억제하여 체내 섭취를 억제하며, 장내에서 glucose의 섭취를 억 제하여 항당뇨 활성을 가진다고 보고하였다. 또한, 양성 대조군 으로 사용된 acarbose는 탄수화물의 섭취를 줄여주는 항당뇨 치 료제로 사용되고 있으나, 복통, 설사 등과 같은 부작용을 동반하 는 것으로 알려져 있다(Kim 등, 2014). 하지만 녹차에 함유되어 있는 gallic acid는 acarbose의 작용을 도와주며, acarbose와 gallic acid의 혼합 섭취는 acarbose의 단독 활성과 유사한 억제 효과를 나타내어 acarbose의 섭취를 줄여 부작용을 예방할 수 있는 것으 로 보고되었다(Oboh 등, 2016). 이러한 탄수화물 가수분해 효소 저해를 통해 단당류의 흡수를 줄여 지방간의 발현과 이로 인한 염증반응을 억제할 수 있을 것으로 보인다. 또한, 말차 추출물의 저해활성은 양성대조군으로 이용된 acarbose (α-amylase, IC50=10.18 μg/mL; α-glucosidase IC50=168.14 μg/mL)보다 뛰어난 억제 활성을 나타내었고, catechin (α-amylase, IC50=3.16 μg/mL; α-glucosidase
IC50=90.18 μg/mL)과 유사한 억제 활성을 나타내었다. 이러한 결 과를 통해 catechin 및 gallic acid 등과 같은 생리활성 물질을 함 유하는 말차는 탄수화물 가수분해 효소의 억제제로서의 이용 가 능성이 높은 것으로 판단된다.
최종당화산물 생성 억제 활성 측정
최종당화산물(advanced glycation end-products)은 당뇨환자에서 생성되는 물질로서, 서구화된 식습관으로 인해 체내에 과도하게 축적되어있는 환원당과 단백질이 비효소적으로 반응하여 생성된 다(Nam 등, 2015). 체내에서 생성된 최종당화산물은 그 자체가 활성산소종을 생성할 뿐만 아니라 세포의 수용체와 반응하여 ROS 를 지속적으로 생산하여 체내 염증반응을 지속하는 것으로 보고 되고 있다(Nass 등, 2007). 따라서 본 연구를 통해 말차 추출물이 가지는 최종당화산물 생성 억제활성을 평가하였으며, 그 결과는 Fig. 1C에 나타내었다. 200 μg/mL 농도의 말차 추출물의 최종당 화산물 생성억제활성은 70.40%, 200 μg/mL 농도의 말차 추출물 은 49.03%로 우수한 억제 활성을 나타내었으며, IC50값은 35.57 μg/mL로 나타났다. 양성대조군으로 사용된 aminoguanidine은 최 종당화산물 억제제로 알려져있는 물질로서 IC50값은 36.35 μg/mL 로 나타났으며, 말차 추출물은 양성대조군으로 사용된 amino-guanidine와 유사한 억제 활성을 나타낸 것을 확인하였으며, 말차 에 다량 함유되어 있는 catechin (IC50=29.59 μg/mL)과의 억제 활 성 역시 유사한 결과를 나타내었다. Singh 등(2001)의 연구에 의하면 최종당화산물 생성에 영향을 미치는 화합물 중 하나인 methylglyoxal (MGO)과 glyoxal (GO) 화합물은 비가역적으로 단백질과 반응하여 중합체를 형성하는 것 으로 보고하였다. 이에 녹차에 다량 함유되어 있다고 보고된 EGCG는 A-고리의 6번과 8번 활성 위치에서 MGO와 GO와 같 은 반응성 dicarbonyl 종의 포획에 중요한 역할을 한다고 보고하 였다(Sang 등, 2007). 따라서 녹차 추출물에 함유되어 있는 EGCG Fig. 1. α-Amylase inhibitory effect (A), α-glucosidase inhibitory effect (B) and advanced glycation end products (AGEs) formation inhibitory activity (C) of aqueous extract of matcha. Results shown are mean±SD (n=3). Data were statistically represented at p<0.05, and different small letters represent statistical differences.
를 포함한 다양한 catechin 화합물에 의해 최종당화산물 생성이 억제된 것으로 판단된다. 또한, 다양한 고지방 식이로 유도된 동 물 모델에서 녹차 추출물이 최종당화산물의 생성을 억제하는 것 을 확인하였다(Sampath 등, 2017; Rutter 등, 2003). 결론적으로 말 차 추출물은 세포막 단백질이나 다양한 조직과 결합하여 세포 손 상을 초래하는 AGEs의 생성에 대한 우수한 억제활성을 나타내 어 AGEs로 부터 야기되는 독성을 낮추어 주는데 도움을 줄 수 있는 소재로써 이용 가능할 것으로 판단된다. 산화적 스트레스 및 고당으로 유도된 간세포의 산화적 스트레 스 및 보호효과 평가 체내에 과도한 당이 흡수되면 간세포의 세포질에 지방이 축적 되며, 산화적 스트레스의 생성과 염증반응이 증가한다(Angulo, 2002). 이는 간 조직의 기능 저하를 초래하고 간에서 글리코겐의 합성감소와 인슐린 저항성을 증가시킨다(Boden 등, 2002). 이는 간 조직 내에서의 산화적 스트레스를 증가시켜 간세포의 사멸을 촉진하게 되며, 간 기능의 저하와 염증반응이 증가한다(Lim 등, 2012). 따라서 산화적 스트레스 및 고당의 처리에 대한 간 세포 내의 활성산소의 생성 억제 효과를 확인하기 위해 HepG2 세포 에서 DCF-DA 실험을 진행하였다(Fig. 2A, B). DCF-DA는 세포 내에서 생성된 활성산소종에 의해 DCF로 변하게 되면서 형광을 띄는 것을 이용한 실험 방법으로 활성산소종의 함량 측정에 이 용되는 방법이다(Bak 등, 2012). 정상 대조군(100%) 대비 H2O2를 처리한 그룹에서는 135.22% 로 세포 내 ROS의 함량이 약 35% 증가하는 것을 보였으며, 양 성 대조군인 vitamin C를 처리한 그룹에서는 104.25%로 정상 대 조군과 유사한 ROS 함량을 나타내었다(Fig. 2A). 200 μg/mL 농 도의 말차 추출물의 ROS 생성은 정상 대조군 대비 101.48%, 100 μg/mL 농도의 말차 추출물의 ROS 생성은 115.57%로 나타나 우 수한 ROS 저해 활성을 나타낸 것으로 확인되었다. 또한, 정상 대 조군(100%) 대비 고당을 처리한 그룹에서는 125.87%로 ROS 함 량이 증가한 것을 보였으며, 양성 대조군처리 그룹에서는 98.49% 의 함량을 나타내었다(Fig. 2B). 또한, 100 μg/mL와 200 μg/mL 농 도의 말차 추출물의 ROS 함량은 각각 정상 대조군 대비 105.22% 와 97.58%로 우수한 ROS 소거 활성을 나타내었다. 또한, 간세포에서의 산화적 스트레스 및 고당에 대한 말차의 보호효과를 확인하기 위해서 MTT 측정법을 이용하여 실험을 진 행하였다(Fig. 2C, D). 산화적 스트레스를 처리한 그룹에서는 정 상 대조군(100%) 대비 H2O2를 처리한 그룹에서는 75.45%의 생 존율을 나타내었으며, 양성 대조군인 vitamin C를 처리한 그룹에 서는 95.15%의 생존율을 나타내었다(Fig. 2C). 100 μg/mL 농도와 200 μg/mL 농도의 말차 추출물의 세포 생존율은 각각 101.25%와 Fig. 2. Reactive oxygen species (ROS) inhibitory effect of aqueous extract of matcha on H2O2-induced (A) and high glucose-induced (B) cellular oxidative stress and hepatic cell viability of aqueous extract of matcha on H2O2-induced (C) and high glucose-induced (D) cytotoxicity in HepG2 cells. Results shown are means±SD (n=5). Data were statistically represented at p<0.05, and different small letters represent statistical differences.
116.49%의 생존율을 나타내 산화적 스트레스에 대한 보호효과를 나타내었다. 또한, 정상 대조군(100%) 대비 고당을 처리한 그룹 에서는 81.15%의 생존율을 나타내었으며, 양성 대조군인 vitamin C를 처리한 그룹에서는 98.40%의 생존율을 나타내었다(Fig. 2D). 100 μg/mL 농도와 200 μg/mL 농도의 말차 추출물의 세포 생존율 은 각각 94.22%와 100.88%의 생존율을 나타내 고당으로 인한 스 트레스에 대한 보호효과를 보였다. Kim 등(2020)은 녹차 추출물은 고지방 식이로 유도된 마우스 에서 항산화 시스템과 관련되어 있는 superoxide dismutase (SOD), 환원형 glutathione 활성의 개선을 나타내었으며, 지질과산화물의 함량을 낮추어 주는 것으로 보고하였다. 또한, 녹차 catechin은 고 지방 및 고자당 식이를 통해 당뇨가 유발된 렛(rat)의 간 조직에 존재하는 SOD, glutathione S-transferas (GST), glutathione reductase (GR), glutathione peroxidase (GPx)의 활성을 개선시켜 간세포 보 호효과를 보였다(Mehra 등, 2013). 녹차에 함유되어 있는 catechin 중 하나인 EGCG는 HepG2 세포에서 고당으로 유도된 인슐린 저 항성 유도 독성에 대해 p-Akt의 증가와 AMP-activated protein kinase (AMPK)의 활성화를 통해 간세포 보호효과를 나타내었으 며, EC 역시 고지방을 섭취한 마우스에서 NADPH oxidase 3 (NOX3)/NADPH oxidase 4 (NOX4) 발현을 감소시키고 산화 스 트레스를 완화하였다고 보고되었다(Cremonini 등, 2018). 따라서 말차에 함유되어 있는 다양한 catechin 화합물의 항산화활성에 의 해 활성산소종이 직·간접적으로 소거된 것으로 보이며, 이를 통 해 간세포의 생존율에 영향을 준 것으로 판단된다. 지방간 개선 효과 고지방 식이는 간 조직에서의 콜레스테롤 대사와 중성지방 및 인지질의 합성을 촉진시키는 것으로 보고되고 있으며, 특히 스테 롤 조절요소 결합단백질 1 (sterol regulatory element-binding protein 1, SREBP-1)은 FAS, stearoyl-CoA desaturase-1 (SCD-1) 등과 같은 중성지질 합성에 관련된 인자를 증가시키며, 조절요소 결합단백질 2 (sterol regulatory element-binding protein 2 (SREBP-2)는 콜레스테롤의 합성과 관련이 되어 있는 HMGCR의 인자 발현에 영향을 미치는 것으로 알려져 있다(Chang 등, 2013). 이러한 유전자들의 발현은 천연에서 유래한 다양한 물질들에 의 해 감소될 수 있으며, 이로 인해 간 조직 내 지방의 축적을 감 소시키는 것으로 보고되고 있다(Chen 등, 2017). 따라서 본 연구
에서는 말차 추출물을 이용하여 oleic acid에 의한 HepG2 세포에 서의 지방 축적 억제효과를 확인하기 위하여 oil red O 염색법을 이용하여 실험하였다(Fig. 3). 시료의 독성을 평가하고자 시료의 농도(20-1,000 μg/mL)에 따른 세포 생존율을 확인하였으며, 500 μg/mL 농도 이하에서는 시료의 독성이 나타나지 않아 처리 농도 를 20-500 μg/mL로 설정하여 실험을 진행하였다(Fig. 3A). Oleic acid를 처리한 군(100%)에 비해 말차를 처리한 군은 농도가 높아 질수록 지방 축적을 억제하는 결과를 나타내었으며, 특히 500 μg/ mL 농도에서는 우수한 지방 축적 억제활성(45.88%)을 나타내었다. 녹차에 다량 함유되어 있는 EGCG는 3T3-L1 세포에서 AMPK 를 활성화하고 지방 세포 분화를 억제하는 것으로 나타났으며, 고지방 식이를 먹인 마우스에서 liver kinase B1 (LKB1)을 통해 AMPK 활성화를 자극하고 간에서 새로운 지방 생성 경로에 관 련된 ACC와 FAS 등의 효소를 조절하는 것으로 보고되었다(Hwang 등, 2005; Santamarina 등, 2015). 또한, EGCG는 SREBP-1 유전자 의 발현 수준을 낮추고 활성 형태를 감소시켜 혈장 중성지방 및 간지질 수준을 낮출 수 있다(Liu 등, 2013). 따라서 이러한 연구 를 통해 본 실험에서 사용된 말차는 EGCG와 같은 catechin에 의 해 AMPK 경로를 활성화함으로써 다양한 지질 생성 유전자 및 단백질 발현을 조절함으로써 지방간 개선에 도움을 줄 수 있는 소재로써 이용 가능할 것으로 판단된다. 지방간으로부터 유도된 염증 개선 기작 평가 식물체 내에 존재하는 페놀성 화합물은 우수한 항산화 활성을 바탕으로 다양한 생리활성을 나타내고 있어 화합물의 특성 및 종 류에 따라 질병 예방에 도움을 줄 수 있으며, 특히 다양한 플라 보노이드와 catechin은 항당뇨 활성 및 지방간 개선을 나타내는 것으로 보고되고 있어 녹차 및 이의 가공품에 대한 연구가 지속 적으로 진행되고 있다(Hanhineva 등, 2010). 따라서 말차 추출물 을 이용하여 HepG2 세포에서의 염증 개선 기작을 확인하고자 연 구를 수행하였다(Fig. 4). Oleic acid를 처리한 그룹의 단백질 발 현량은 대조군(100%) 대비 p-JNK (638.24%), p-GSK-3β (287.51%), caspase-3 (251.32%), COX-2 (163.32%), iNOS (244.15%), TNF-α (213.28%)의 발현이 증가된 것을 확인하였다(Fig. 4). 반면, 500 μg/mL 농도를 처리한 말차 추출물 그룹은 JNK (27.32%), p-GSK-3β (33.67%), caspase-3 (23.91%), COX-2 (34.53%), iNOS (44.90%), TNF-α (52.49%)의 발현이 개선된 것을 확인하여 말차 Fig. 3. Inhibitory effect of aqueous extract of matcha on oleic acid-induced cell viability (A) and lipid accumulation (B) in HepG2 cells. Results shown are means±SD (n=5). Data were statistically represented at p<0.05, and different small letters represent statistical differences.
추출물의 보호효과를 확인하였다. 또한, oleic acid를 처리한 그룹 의 p-Akt (33.86%)의 발현은 대조군(100%) 대비 감소되었으며, 말차 추출물의 처리를 통해 oleic acid를 처리한 그룹에 비해 p-Akt 활성(36.47%)이 증가된 것을 보였다. 고지방 식이로부터 유래된 유리지방산은 장내에서 그람 음성 균의 생육을 증가시키며 그람 음성균의 외막에 존재하는 lipopolysaccharide (LPS)의 분비를 증가시킨다(Ehrchen 등, 2009). 장내에서 증가된 LPS는 고지방 식이로부터 유래된 유리지방산과 함께 Toll-like receptor (TLR) 신호 경로의 자극을 통해 간 조직 의 염증반응을 증가시키는 것으로 알려져 있다(Kim 등, 2012). 장내에서 흡수된 LPS와 유리지방산은 간 조직에서 JNK의 인산 화를 자극하고, 이는 이상 지질 혈증 및 지방산과 콜레스테롤 합 Fig. 4. Protective effect of aqueous extract of matcha on oleic acid-induced inflammatory pathway in HepG2 cells. (A) Representative western blots for total protein and expression of p-JNK, p-Akt, p-GSK-3β, caspase-3, COX-2, iNOS, TNF-α and β-actin; Protein expression levels of p-JNK (B); p-Akt (C); p-GSK-3β (D); caspase-3 (E); COX-2 (F), iNOS (G) and TNF-α (H) normalized to β-actin. Results shown are mean±SD (n=3). Data were statistically represented at p<0.05, and different small letters represent statistical differences.
성과 관련되어있는 FAS, ACC, HMGCR 등의 단백질 발현을 증 가시킨다(Chang 등, 2013). 또한, IL-1β, IL-6 및 TNF-α와 같은 전 염증성 사이토카인의 생성을 촉진하여 간 조직 내에서의 염 증반응을 지속한다(Fujiyama 등, 2007). 고지방 식이는 TNF-α receptor (TNFR) 1/2의 발현을 증가시켜 TNF-α의 흡수를 촉진하 며, 간세포에서 유리지방산의 수준을 크게 증가시키고 콜레스테 롤 합성과 지방산 합성을 촉진한다(Endo 등, 2007). 이는 인슐린 저항성을 증가시켜 지속적인 JNK의 활성화와 IRS-1의 인산화를 유발하고, iNOS와 COX-2의 발현을 촉진한다(Lim 등, 2012). 반 면, 말차 추출물을 처리한 그룹에서는 이들 염증성 단백질의 발 현이 감소된 것을 확인하였다(Fig. 4). Santamarina 등(2015)의 연 구에 따르면 녹차에 함유되어 있는 catechin은 ACC, FAS, SREBP-1 및 carbohydrate-responsive element-binding protein (ChREBP)의 발현 감소를 나타내었다고 보고하였다. 또한 녹차 추출물은 고지 방 식이를 통해 지방간이 발현된 동물모델에서 AMPK의 인산화 를 통해 TNF-α, IL-6 및 MDA의 수준을 크게 감소시켜 간 조직 에서의 염증반응을 효과적으로 감소시킨 것으로 보고되었다(Xia 등 2019). 이러한 결과와 마찬가지로 말차 추출물의 처리는 HepG2 세포에서의 염증성 단백질의 발현이 감소된 것을 확인하였으며, 지방간으로 유도된 간세포 내의 염증반응을 개선시켜 준 것을 확 인하였다.
요
약
본 연구는 가루녹차의 가공품인 말차를 이용하여 항산화 평가 와 고당으로 유도된 간세포에서의 간세포 보호효과와 지방간 개 선 활성을 평가하기 위해 진행되었다. 말차의 catechin 함량과 총 페놀성 화합물 및 총 플라보노이드 화합물의 함량은 잎 녹차보 다 우수한 함량을 나타내었으며, 라디칼 소거활성과 지질과산화 물 억제활성 역시 잎 녹차보다 우수한 것을 확인하였다. 또한, 항 당뇨 활성을 나타내는 α-glucosidase, α-amylase 및 최종당화산물 에 대한 우수한 억제활성을 확인하였다. In vitro 간세포 보호효 과를 평가한 결과, 말차는 효과적으로 산화적 스트레스 및 고당 으로 인한 활성산소 생성 억제활성과 간세포 생존율 나타내었다. 또한, oleic acid로 유도된 지방 축적에 대한 말차 추출물의 억제 활성을 확인하였으며, 지방간으로 인한 염증반응에 대한 조절을 확인하였다. 이러한 연구 결과를 바탕으로 녹차의 가공품 중 하 나인 말차는 가공 전 잎 녹차에 비해 우수한 카테킨 함량과 항 산화 활성을 지니며, 탄수화물의 섭취를 억제해주는 소화효소의 활성을 억제하여 간세포의 지질축적을 억제하는 데 도움을 줄 수 있을 뿐만 아니라 염증 감소에 도움을 줄 수 있는 소재로서의 가 능성을 확인하였다.감사의 글
본 연구는 농림축산식품부의 재원으로 농림식품기술기획평가 원의 수출전략기술개발사업(617072-5)의 지원을 받아 수행된 연 구결과입니다.References
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