서 론
1)1983년 Warren과 Marshall에 의해 발견된 Helicobacter pylori (H. pylori) 감염은 소화성 궤양, 위염, 위선암 또는
접수: 2003년 3월 12일, 승인: 2003년 8월 12일
연락처: 박동균, 405-760, 인천광역시 남동구 구월동 1198 가천의과대학교 길병원 소화기내과
Tel: (032) 460-3773, Fax: (032) 460-3408 E-mail: pdk66@ghil.com
mucosa associated lymphoid tissue (MALT) 림프종 등의 중 요한 유발 인자로 알려져 있다.1,22)그러나 이런 질환은 감염 자의 일부에서만 발생하며 어떤 기전으로 다양한 상부위장 관 질환을 일으키는지에 관해서는 정확히 알려진 바가 없
Correspondence to: Dong Kyun Park, M.D.
Department of Internal Medicine, Gachon Medical School, Ghil Medical Center
1198, Guwol-dong, Namdong-gu, Incheon 405-760, Korea Tel: +82-32-460-3773, Fax: +82-32-460-3408
E-mail: pdk66@ghil.com
헬리코박터 파이로리에 감염된 위점막의 Glutathione 농도에 관한 연구
가천의과대학교 내과학교실, 길병원, 인하대학교 의과대학 약리학교실*
박동균․정승기․정문기․권오상․김선숙․구양서 김유경․김연석․최덕주․박창신*․정운계*․김주현
Glutathione Levels in Helicobacter pylori-infected Gastric Mucosa
Dong Kyun Park, M.D., Seung Ki Jeong, M.D., Moon Gi Chung, M.D., Oh Sang Kwon, M.D., Sun Suck Kim, M.D., Yang Suh Koo, M.D., Yu Kyung Kim, M.D., Yeon Suk Kim, M.D., Duck Joo Choi, M.D., Chang Shin Park, Ph.D.*, Woon Gye Chung, Ph.D.*, and Ju Hyun Kim, M.D.
Department of Internal Medicine, Gachon Medical School, Ghil Medical Center;
Department of Pharmacology, Inha University College of Medicine*, Incheon, Korea
Background/Aims: Oxidative stress may contribute to gastric epithelial damage and mutagenesis caused by Helicobacter pylori (H. pylori). H. pylori induces recruitment and activation of inflammatory cells, which produces reactive oxygen species. H. pylori extract directly induces the synthesis of reactive oxygen species in gastric epithelial cells and causes DNA damage. The aim of this study was to investigate the association between the levels of glutathione (GSH) and H. pylori density, histological findings, endoscopic findings, clinical variables, and virulence factors. Methods: Gastric biopsy specimens were obtained from 73 consecutive patients. The 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid) reaction was used to determine GSH levels. Results: The infection rate of H.
pylori was 68.5%. The GSH level was not related to age, sex, alcohol intake, and endoscopic findings. The GSH level was lower in patients infected with H. pylori. GSH levels were not correlated significantly with the grades of neutrophil, intestinal metaplasia, and atrophy. However, the GSH levels were significantly correlated with H.
pylori density (r=-0.296, p=0.01) and monocyte grade (r=-0.257, p=0.02). The GSH levels were not related to CagA, VacA, and UreA. Conclusions: This study suggests that H. pylori causes oxidative stresses which deplete GSH in gastric mucosa of patients infected with H. pylori. (Korean J Gastroenterol 2003;42:267-273)
Key Words: Helicobacter pylori; Glutathione
다. H. pylori 균주의 독성 인자, 균에 대한 숙주반응과 감수 성, 환경적 요인의 차이가 이러한 다양성의 원인으로 추측 되어 왔다. 활성화 산소유리기는 산소의 불완전한 환원으 로 생성되며 반응성이 매우 높아 세포의 지질, 단백질 및 핵산 등의 파괴 작용을 유발할 수 있어 급성 위점막 손상, 암이나 돌연변이를 유발한다.3,4 H. pylori가 위점막에 감염 되면 많은 염증세포 특히 호중구의 응집이 유발되며 활성 화된 호중구는 반응성이 높고 독성이 강한 산소유리기들을 생성하여 H. pylori와 연관된 염증과 소화성 궤양, 위선암의 유발에 중요한 역할을 할 것으로 생각한다.5 최근 H. pylori 는 그 자체에서 염증세포를 통하지 않고도 산소유리기를 생성한다는 주장이 제기되었고 CagA 양성의 H. pylori에서 산소유리기의 발생이 더욱 증가하고 핵산의 손상이 심함을 보고하였다.6,7
Glutathione (GSH)은 위장관점막에 풍부하게 존재하면서 다양한 산소유리기와 음식을 통해 섭취되거나 생성된 독성 물질로부터 세포를 보호한다고 알려져 있다.8,9 GSH 농도 의 감소는 다양한 소화기암과 암의 전구 병변에서 관찰되 며 GSH 농도의 감소 정도로 H. pylori 감염에 관련된 산소 유리기의 양을 추정하는 데 사용될 수 있다.10,11 또한 H.
pylori 감염은 GSH 대사 장애를 유발하여 산소유리기에 대 한 저항성의 감소를 유발한다고 알려져 있다.12,13
저자들은 본 연구에서 정상 위점막, 위염, 소화성 궤양 환자의 위점막의 GSH를 측정하여 H. pylori 유무 및 조밀 도, 염증세포 침윤 정도, 독성 인자, 각종 임상 지표 등과의 연관성에 관하여 알아보고자 하였다.
대상 및 방법
1. 대상
소화기내과 외래를 방문하여 상부위장관 내시경검사를 시행받은 73명의 환자를 대상으로 하였다. 최근 1개월 이 내 NSAID, 항생제, proton pump inhibitor, rebamipide 혹은 bismuth 약제를 복용하였거나 과거 위수술을 시행받은 환 자와 급성 출혈 환자는 제외하였고 비타민 C, A, E, 녹차 를 복용하고 있는 경우와 산소유리기 생성을 증가시킨다고 알려진 위장관의 염증성 질환, 만성 질환, 악성 종양 환자, 임산부도 본 연구에서 제외하였다.
2. 방법 1) 위내시경검사
환자는 검사 전에 8시간 이상 금식하였고, 내시경 및 생검 기구들은 세정제로 세척한 후 2% glutaraldehyde로 소독하였으며 검사 전 30분에 전처치로 buthylscopolamine
bromide (20 mg)를 근육 주사하였고 2% lidocaine viscus 용액으로 인두의 국소 마취를 시행하였다. 내시경적 진단 은 updated Sydney system에14 근거하였고 위궤양이나 십이 지장궤양은 직경 0.5 cm 이상의 점막 결손으로 정의하였다.
2) 조직학적 검사
위점막 생검 조직은 각 환자의 위 전정부에서 4개를 가 능한 한 근접한 곳에 육안적으로 미란이나 궤양이 없는 부 위에서 채취하였고 전정부와 체부에서 한 조각씩 채취하 였다. 처음 채취한 2개의 생검 조직은 GSH 측정을 위해 조직 채취 즉시 영하 70℃에 보관하였고 나머지 2개의 생 검 조직은 조직학적 검사를 위해 hematoxylin-eosin 염색과 modified Giemsa 염색을 시행하였다.
3) H. pylori 감염 확인 및 조밀도 판정
H. pylori 조밀도와 염증세포 침윤 정도는 updated Sydney System을 이용하여 grading하여 0, no; 1, mild; 2, moderate; 3, marked로 점수(score)를 주어 구분하였다. 전정부와 체부에 서 각각 한 조각씩 채취한 2개의 생검 조직으로는 신속 요 소분해효소검사(CLO test, Delta West, Bentley, Western Australia)를 시행하였다. 조직학적 검사에서 H. pylori가 검 출되고 신속 요소분해효소검사에서 양성이면 H. pylori 감 염으로 진단하였다. 조직학적 검사와 신속 요소분해효소 검사 결과가 일치하지 않는 경우는 실험 대상에서 제외하 였다.
4) Western blot 검사
내시경검사와 동시에 혈액을 채혈하여 혈청을 분리하고 영하 70℃에 냉동 보관하였다가 일괄하여 Western blot (Helicoblot 2.1, Genelabs diagnostics, Singapore)검사를 시 행하였다. Western blot의 시행 방법은 kit 설명서에 의거하 여 시행하였으며 매회마다 양성 및 음성 대조군을 kit의 견 본을 이용하여 시행하였다. Western blot검사를 하면 일반 적으로 6가지의 항원띠가 관찰되는데 이 중 116 kD는 CagA 항원띠, 89 kD는 VacA 항원띠, 30 kD는 UreA 항원 띠를 나타낸다.
5) GSH 측정 방법
Giffith 등15의 방법으로 위생검 조직에서 GSH를 측정하 였다. 영하 70℃에 보관된 위생검 조직의 무게를 재어 20 mg의 조직당 1% picric acid 100 µL를 넣고 분쇄기로 파쇄 하여 균질화시킨 후 4℃에서 3,000 g에서 20분 동안 원심 분리하였다. 윈심분리를 한 후 얻은 상층액 5 µL와 증류수 195 µL를 혼합한 후 6 mM NADPH를 포함한 0.125 M Na2HPO4 700 µL와 6 mM 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)
(DTNB) 100 µL를 가하고 30℃에서 4분 동안 반응시켰다.
그 후 혼합액에 glutathione reductase 1 kU/L (5 µL)를 첨가한 후 파장 412 nm에서 spectrophotometer (Beckman DU 650, Fllerton, CA, USA)로 60초 동안 흡광도(absorbance)를 측정 하였다. GSH (Sigma Chemical Co. St. Louis, MO, USA) 표준곡선을 이용하여 정량하였으며 결과는 위점막 조직의 무게로 보정하여 나타냈다.
6) 통계 분석
측정치의 결과는 평균값과 표준편차(mean±SD)로 표 시하였고 통계 프로그램 SAS 8.01 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA)을 이용하였다. Two tailed non-parametric statistic을 사용하였으며 Wilcoxon rank sum test로 두 군을 비교하였고 Kruskal-Wallis test로 각 군을 비교하였다. 각 종 조직학적 지표와 GSH 농도와의 연관성은 Spearman's rank correlation coefficient를 이용하여 검정하였다.
결 과
1. 대상 환자의 임상적 특징
연령층은 17~77세 사이로 평균 연령은 42세였고 남자 45명, 여자 28명으로 남녀 비는 1.6:1이었다. 50명(68.5%) 에서 H. pylori 양성이었으며 음성군과 평균 연령, 남녀 비, 흡연자와 음주자의 비율은 차이가 없었다(Table 1).
2. H. pylori 감염 여부에 따른 위점막 GSH 농도 성별, 나이, 흡연력, 음주력에 따른 위점막의 GSH 농도 의 차이는 없었다(Table 2). H. pylori 양성군의 GSH는 139
±150 nmol/mg tissue로 H. pylori 음성군의 232±289 nmol/
mg tissue보다 통계적으로 유의하게 낮았다(Fig. 1, p<0.05).
3. Update Sydney System에 의한 grade와 위점막 GSH 농도와의 연관성
위점막 GSH는 H. pylori 조밀도가 증가할수록 감소하였 다(Fig. 2, r=-0.296, p=0.01) 또한 위점막 GSH는 단핵구 침 윤 정도가 증가할수록 감소하였다(Table 3, Fig. 3, r=-0.257, p=0.02). 위점막내 중성구 밀도와 장상피화생과 위축의 정 도와는 유의한 연관성은 없었다(Table 3, Fig. 4).
4. 내시경적 진단에 따른 위점막 GSH 농도
위점막 GSH는 H. pylori 조밀도가 증가할수록 감소하였 다(Fig. 2, r=-0.296, p=0.01) 또한 위점막 GSH는 단핵구 침 윤 정도가 증가할수록 감소하였다(Table 3, Fig. 3, r=-0.257,
p=0.02). 위점막내 중성구 밀도와 장상피화생과 위축의 정 도와는 유의한 연관성은 없었다(Table 3, Fig. 4).
Table 1. Clinical Features of the Patients
Helicobacter pylori status Positive
(n=50)
Negative (n=23) Age (yr)*
Sex (M:F) Smoker Alcohol drinker
42.1±15.8 28:20 23 (46%) 26 (52%)
41.0±10.1 17:8 6 (26%) 8 (34%)
*Mean±SD.
Table 2. Glutathione Levels in Gastric Mucosa according to Clinical Variables
Clinical variables GSH (nmol/mg tissue)
p value Sex male (n=45)
female (n=28)
173±184*
162±240* NS Age 10~29 (n=12)
30~49 (n=42) 50~79 (n=19)
151±125*
158±219*
202±225*
NS
Smoking yes (n=29) no (n=44)
189±255*
158±174* NS Alcohol yes (n=34)
no (n=39)
134±207*
166±235*
NS
NS, not significant.
*Mean±SD.
Fig. 1. Glutathione levels in gastric mucosal tissues obtained from 50 H. pylori-positive patients and 23 H. pylori-negative patients.
The value was lower in HP (+) gastric mucosa than HP (-) mucosa.
HP, Helicobacter pylori.
*p=0.04.
*
Fig. 2. Correlation between gastric mucosal glutathione levels and H. pylori density.
Fig. 3. Correlation between gastric mucosal glutathione levels and monocytes infiltration grade.
대조군과 위염군이 소화성 궤양군에 비해 GSH 농도가 약간 높은 것으로 보이나 통계적으로 유의한 차이는 없었다 (Fig. 5). H. pylori 양성군에서도 대조군 210±185 nmol/
mg tissue, 위염군 139±179 nmol/mg tissue, 소화성궤양군 98±90 nmol/mg tissue로 질환에 따른 GSH 농도는 소화성 궤양군에서 낮았으나 통계적으로 유의한 차이는 없었다.
Fig. 4. Correlation between gastric mucosal glutathione levels and neutrophils infiltration grade.
Table 4. Effect of Virulent Factors on Glutathione Levels in Gastric Mucosa
Virulent factor No. (%) GSH (nmol/mg tissue)
p value CagA Positive
Negative
48 (96) 2 ( 4)
142±153
67±18 NS VacA Positive
Negative
25 (50) 25 (50)
142±159
137±144 NS UreA Positive
Negative
40 (80) 10 (20)
153±160
85±85 NS NS, not significant.
5. CagA, VagA, UreA 양성 여부에 따른 위점막 GSH 농도
H. pylori 독성 인자 중 VacA, UreA 여부에 따른 GSH 농도의 변화는 관찰되지 않았다(Table 4). CagA는 96%에 서 양성으로 나와 음성군과의 차이점을 평가할 수 없었다.
Table 3. Spearman's Correlation Coefficients between Grades of Update Sydney System and Glutathione Levels in Gastric Mucosa GSH levels (nmol/mg tissue)
r p
0 1 2 3
H. pylori Neutrophil Monocyte IM Atrophy
232 191 92 169 226
190 124 247 169 104
141 169 153 168 185
97 80 65 156 97
-0.296 -0.106 -0.257 0.001 -0.163
0.01 NS 0.02
NS NS Correlation between gastric mucosal glutathione levels and histological inflammatory scores for neutrophil and for monocyte and H. pylori density and IM and atrophy.
NS, not significant; IM, intestinal metaplasia.
Fig. 5. Glutathione levels from antral mucosal tissues according to endoscopic diagnosis findings. There were no significant differences of gastric mucosal glutathione levels among normal, gastritis and peptic ulcer disease.
* p=0.17, compared with normal.
†p=0.83, compared with gastritis.
고 찰
H. pylori는 위선종이 발생하는 데 매우 중요한 독립적 인자로 알려져 있다.1,2 그러나 어떤 기전으로 위선종을 발 생시키는지, 위선종 발생의 어떤 단계에서 영향을 주는가 에 관해서 아직 잘 알려지지 않았다. 산소유리기의 발생이 증가하거나 방어 기전의 손상이 오면 급성 위점막 손상의 원인이 되며 위상피세포의 DNA 손상을 일으키게 되고 이 로 인해 암이 발생 할 수 있는 것으로 알려져 있다.3,4 위점 막의 산소유리기는 주로 활성화된 호중구와 대식세포에 의 해 대량 만들어지고 H. pylori 감염에서 위점막에 많은 호 중구와 염증세포가 침윤한다. 산소유리기는 H. pylori가 소 화성 궤양과 위선종을 유발시키는 중요한 매개 인자로 추 측되어 많은 연구가 되고 있다.5,12
위전정부 점막에서 생검 조직으로 산소유리기를 측정한 연구에서 H. pylori에 감염된 군에서 산소유리기가 높게 측 정되었고 염증세포 특히 호중구 수가 증가할수록 산소유리 기가 증가하였다.5,16 이를 근거로 산소유리기의 발생원은 H. pylori 자체보다는 H. pylori에 의해 호중구가 모이게 되 고 활성화된 호중구와 대식세포라고 여겨져 왔다. 그러나 현미경적, 육안적 동일한 염증 정도를 보이는 군에서 H.
pylori에 감염된 집단에서의 산소유리기가 더욱 증가하였다 는 보고와 호중구와 대식세포 등 다양한 염증을 유발할 수 있는 요인을 제거한 상태에서 위점막세포에 H. pylori를 감 염시킨 실험에서 H. pylori 감염 후 산소유리기의 증가와 GSH의 감소가 증명되어 H. pylori 자체에 의해서도 산소유 리기가 발생함이 알려졌다.6 본 연구에서는 update Sydney System을 이용하여 호중구, 단핵구, 장상피화생, 위축성 정 도와 H. pylori의 조밀도와 위점막내 GSH 농도와의 연관성
을 조사하였는데 H. pylori와 단핵구가 증가할수록 GSH가 증가하였고 호중구, 장상피화생, 위축성과는 연관성이 없 었다. 산소유리기 생성에 있어 H. pylori 자체와 만성 염증 세포의 역할에 관한 가능성을 시사하는 결과라고 생각한 다. 최근 연구에서는 H. pylori에 감염된 군에서 GSH의 감 소는 있었지만 H. pylori보다는 호중구와 단핵구의 수와 더 욱 밀접한 관계가 있음을 보고하였다.17 이런 결과의 차이 는 첫째, 위장관내 GSH의 농도는 다양한 음식 특히 과일 이나 채식 여부, 다양한 약제, 성별, 나이, 흡연 등에 의해 영향을 받을 수 있기 때문이다. 본 연구에서는 성별과 나 이, 흡연, 음주에 따른 GSH 농도의 차이는 없었다. 둘째, GSH를 매개로 하는 여러 효소들의 개인과 인종에 따른 class 와 활성도의 차이가 있을 수 있으며, 셋째 본 연구에 서는 가능하면 육안적으로 염증이 보이지 않는 전정부에서 생검을 하였기 때문에 호중구의 역할이 과소 평가 되었을 수 있었을 것으로 생각한다.
GSH는 non-protein tripetide thiol의 환원된 형태로 산소 유리기에 의한 산화 손상으로부터 세포를 보호하는 중요 한 방어 기전의 하나이며 산소유리기와 직접 반응하여 감 소하므로 산소유리기를 간접적으로 측정할 수 있는 방법 중의 하나이다.8,9 또한 GSH는 glutathione s-transferases와 glutathione peroxidase의 co-substrate로 작용하므로 다양한 발암 물질과 독성 물질, 산소유리기로부터 세포를 보호하 는 역할을 한다.18 급성 위궤양의 변연부에서는 GSH가 대 조군에 비해 현저히 낮고 궤양군의 정상 점막도 대조군에 비해 낮으며 치료 후에는 GSH의 상승이 있었으나 대조군 보다는 낮았다는 연구 결과는 GSH의 감소가 위궤양의 원 인이 될 수 있음을 암시한다.19 또한 동물실험에서는 위점 막내 GSH을 고갈시키면 궤양이 유발되고 에탄올에 의한 위점막의 손상이 GSH의 감소와 연관됨을 보고하였다.20,21 GSH 농도의 감소는 소화성 궤양 이외에 위암, 대장암 등 소화기암과 바렛식도, 식도이형성증 등 전구 병변에서도 관찰된다.10
그러나 GSH 농도의 감소가 이 같은 질환의 원인인지 결과인지 혹은 복합적인 결과인지에 관해서는 잘 알려지지 않았다. 국내 연구에서는 소화성 궤양군이 대조군에 비해 산소유리기의 증가는 있었으나 GSH의 유의한 감소는 없 었다는 보고가 있다.22 본 연구에서도 대조군과 위염군이 소화성 궤양군에 비해 GSH 농도가 약간 높았으나 통계적 인 유의성은 없었고 H. pylori 감염군에서도 같은 경향을 보였다. 이는 위점막내 GSH 농도의 감소가 단순히 산소유 리기의 증가만을 반영하는 것이 아니라 GSH를 매개로 하 는 다양한 효소의 환경적인 요인, 유전적 요인과 식습관 등이 복합적으로 관여하기 때문으로 생각된다. GSH의 대 사에 관여하는 효소는 GSH s-transferases, GSH peroxidase,
GSH reductase, γ-glutamylcystein synthetase 등이 있고, 최 근 연구에 의하면 H. pylori에 감염되면 GSH s-transferases 와 GSH reductase의 활성도의 감소가 관찰되어 산소유리기 에 대한 숙주의 저항성 감소를 유발할 수 있다고 보고하였
다.12,13 본 연구에서는 산소유리기, GSH 대사에 관여하는
효소들, 그리고 이들 효소의 isoform에 관한 조사가 병행되 지 않아 결과의 의미를 분석하는 데 제한점이 있다.
CagA 양성 H. pylori는 음성균에 비해서 더욱 심한 국소 염증을 유발하고 사이토카인과 급성기 반응 물질의 점막내 농도를 증가시킨다고 알려져 있다.23 최근 연구에서 CagA 양성 균주에서 다핵세포의 산소유리기의 발생이 증가하고 DNA oxidative damage도 증가한다는 보고가 있고 반면 CagA, VacA 양성 유무에 따른 GSH 농도의 차이가 없음 을 보고하기도 하였다.6,7,24 국내에서는 H. pylori의 독성 인 자에 따른 산소유리기의 차이에 관한 보고는 없었다. 본 연구에서는 CagA, VacA, UreA 여부에 따른 GSH 농도의 차이를 분석하였는데, CagA는 96%에서 양성을 보여 차이 를 분석할 수 없었고 VacA, UreA 양성 유무에 따른 차이 는 없었다.
요 약
목적: H. pylori에 의한 위점막 손상은 활성화된 염증세 포의 산소유리기 생성 및 자극과 관련이 있다고 알려져 왔 고 최근 H. pylori 자체에서도 산소유리기가 발생한다는 연 구가 있다. 본 연구에서는 updated Sydney system을 이용한 grading과 산소유리기를 간접적으로 측정할 수 있는 GSH 의 농도를 분석하여 위점막의 산소유리기와 H. pylori 조밀 도, 내시경적 진단, 염증 정도, H. pylori 독성 인자와의 연 관성을 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 2001년 5월부터 2001년 8월까지 본원에서 내시경 검사를 시행받은 환자 73 명을 대상으로 하였다. 위생검은 발적이나 미란이 없는 전 정부에서 4개의 조직을 채취하여 GSH 측정과 조직검사를 하였고 전정부와 체부에서 채취한 조직으로 요소분해효소 검사를 시행하였다. 혈액을 채혈하여 H. pylori 독성 인자 에 대한 Western blot검사를 시행하였다. 결과: H. pylori 감염률은 65.8%이었고 연령, 남녀 비의 차이는 없었다. H.
pylori 조밀도가 높을수록 GSH 농도는 감소하였고(r=-0.296, p=0.01) 단핵구 침윤 정도가 증가할수록 GSH 농도는 감소 하였으며(r=-0.257, p=0.02) 호중구와는 의미 있는 상관관계 가 없었다(r=-0.106, p=0.37). 위축 정도, 장상피화생 정도, 내시경적 소견, CagA, VacA, UreA와 GSH 농도의 관련은 없었다. 결론: 위점막내 GSH 농도는 H. pylori 조밀도와 단 핵구 침윤 정도와 밀접한 관련이 있었고 위축성, 장상피화 생의 정도와 내시경적 진단, H.pylori 독성 인자와는 관련이
없었다. 그러므로 위점막내 GSH 농도는 H. pylori 감염과 만성 염증 정도를 반영하는 유용한 지표라고 생각된다.
색인단어: Helicobacter pylori, Glutathione
참 고 문 헌
1. Forman D, Newell DG, Fullerton F, et al. Association between infection with Helicobacter pylori and risk of gastric cancer: evidence from a prospective investigation. BMJ 1991;
302:1302-1305.
2. Parsonnet J, Friedman GD, Vandersteen DP, et al. Helicobacter pylori infection and the risk of gastric carcinoma. N Engl J Med 1991;325:1127-1131.
3. Davies GR, Simmonds NJ, Stevens TR, Grandison A, Blake DR, Rampton DS. Mucosal reactive oxygen metabolite production in duodenal ulcer disease. Gut 1992;33:1467-1472.
4. Halliwell B, Aruoma OI. DNA damage by oxygen-derived species. Its mechanism and measurement in mammalian systems. FEBS Lett 1991;281:9-19.
5. Nielsen H, Andersen LP. Chemotactic activity of Helicobacter pylori sonicate for human polymorphonuclear leucocytes and monocytes. Gut 1992;33:738-742.
6. Beil W, Obst B, Sewing KF, Wagner S. Helicobacter pylori reduces intracellular glutathione in gastric epithelial cells. Dig Dis Sci 2000;45:1769-1773.
7. Danese S, Cremonini F, Armuzzi A, et al. Helicobacter pylori CagA-positive strains affect oxygen free radicals generation by gastric mucosa. Scand J Gastroenterol 2001;36:247-250.
8. Grisham MB, MacDermott RP, Deitch EA. Oxidant defense mechanisms in the human colon. Inflammation 1990;14:669- 680.
9. Pihan G, Regillo C, Szabo S. Free radicals and lipid peroxidation in ethanol- or aspirin-induced gastric mucosal injury. Dig Dis Sci 1987;32:1395-1401.
10. de Bruin WC, Wagenmans MJ, Board PG, Peters WH.
Expression of glutathione S-transferase theta class isoenzymes in human colorectal and gastric cancers. Carcinogenesis 1999;
20:1453-1457.
11. Eapen CE, Madesh M, Balasubramanian KA, Pulimood A, Mathan M, Ramakrishna BS. Mucosal mitochondrial function and antioxidant defences in patients with gastric carcinoma.
Scand J Gastroenterol 1998;33:975-981.
12. Verhulst ML, Van Oijen A, Roelofs H, et al. Antral glutathione concentration and glutathion S-transferase activity in patients with and without Helicobacter pylori. Dig Dis Sci 2000;45:629-632.
13. Miyuki Kimura, Shinji Goto, Yoshito Ihara, et al. Impairment of glutathione metabolism in human gastric epithelial cells treated with vacuolation cytotoxin form Helicobacter pylori.
Microb Pathog 2001;31:29-36.
14. Dixon Michael F, Genta Robert M, John H, et al.
Classification and grading of gastritis: The Updated Sydney System. Am J Surg Pathol 1996;20:1161-1181.
15. Giffith OW. Glutathione and glutathione disulphide in: E Bernt, Bergmeyer HU, eds. 3rd ed. Methods of Enzymatic analysis VIII. New York: Academic Press 1983:521-529.
16. Mannick EE, Bravo LE, Zarama G, et al. Inducible nitric oxide synthase, nitrotyrosine, and apoptosis in Helicobacter pylori gastritis: effect of antibiotics and antioxidants. Cancer Res 1996;56:3238-3243.
17. Shirin H, Pinto JT, Liu LU, Merzianu M, Sordillo EM, Moss SF. Helicobacter pylori decreases gastric mucosal glutathione.
Cancer Lett 2001;164:127-133.
18. Naito Y, Yoshikawa T, Boku Y, et al. Protective role of intracellular glutathione against nitric oxide-induced necrosis in rat gastric mucosal cells. Aliment Pharmacol Ther 2000;14
(suppl 1):145-152.
19. Hirokawa K, Kawasaki H. Changes in glutathione in gastric mucosa of gastric ulcer patients. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1995;88:163-176.
20. Boyd SC, Sasame HA, Boyd MR. Gastric glutathione depletion and acute ulcerogenesis by diethylmaleate given subcutaneously to rats. Life Sci 1981;28:2987-2992.
21. Szabo S, Trier JS, Frankel PW. Sulfhydryl compounds may mediate gastric cytoprotection. Science 1981;214:200-202.
22. Lee HK, Jung HK, Eun Lee KE, Yi SY. Generation of free oxygen radicals in Helicobacter pylori-infected gastric mucosa.
Korean J Gastroenterol 2000;36:317-325.
23. Crabtree JE. Gastric mucosal inflammatory response to Helicobacter pylori. Aliment Pharmacol Ther 1996;10(suppl 1):29-37.
24. Zhang QB, Nakashabendi IM, Mokhashi MS, Dawodu JB, Gemmell CG, Russell RI. Association of cytotoxin production and neutrophil activation by strains of Helicobacter pylori isolated from patients with peptic ulceration and chronic gastritis. Gut 1996;38:841-845.
