Evaluation of the usefulness of Techzyme HBsAg and Anti-HBs Techzyme HBsAg, Anti-HBs시약의 유용성 평가

임상병리와 정도관리：제23권 제2호 2001

J. Clin, Pathol. & Quality Control 2001：23：???-??? 1

Techzyme ^Ⓡ HBsAg, Anti-HBs시약의 유용성 평가

신소영․김문희․박윤미․권계철․구선회․박종우

충남대학교 의과대학 임상병리학교실

Evaluation of the usefulness of Techzyme ^Ⓡ HBsAg and Anti-HBs

So Young Shin,., Moon Hee Kim,., Yun Mi Park,., Gye Cheol Kwon,., Sun Hoe Koo,., Jong Woo Park.

Department of Clinical Pathology, College of Medicine, Chungnam National University, Taejeon, Korea

Background：The hepatitis B virus was one of the most prevalent infectious agent in Korea.

Serologic assays of the detection for hepatitis B surface antigen(HBsAg) and hepatitis B antibody(Anti-HBs) were useful markers for the diagnosis of viral hepatitis. Some of domestic hepatitis enzyme immunoassay(EIA) reagents have been developed. We analyzed one of them, Techzyme ^Ⓡ ELISA 3.0 HBsAg and Anti-HBs (Asan, Korea), to evaluate the clinical usefulness.

Methods：The precision, linearity, sensitivity and specificity of Techzyme ^Ⓡ HBsAg and Anti-HBs were evaluated with 150 clinical specimens from January to March, 2001.

Results：The within-run and between-run Coefficient of Variance(C.V.) HBsAg were 7.48 % and 11.12 % in negative control and were 2.34 % and 4.14 % in positive control, respectively. The within-run and between-run CV for Anti-HBs were 7.02 % and 14.6 % in negative control and 2.43 % and 4.97 % in positive control. On linearity test, the R ² for HBsAg was 0.9903 and the R ² for Anti-HBs was 0.9977. The concordant results were 94 % and 92 % for HBsAg and Anti-HBs with conventional reagents, respectively. The sensitivity and specificity for HBsAg were 100 %, both. And the sensitivity and specificity for Anti-HBs were 95.6 % and 96.3 %, respectively.

Conclusions：In conclusion, because of high sensitivity, specificity and high linearity, Techzyme ^Ⓡ ELISA 3.0 HBsAg and Anti-HBs appeared to be suitable for detecting HBs Ag and Anti-HBs in clinical laboratories.

Key Words：Techzyme ^Ⓡ HBsAg, Techzyme ^Ⓡ Anti-HBs, enzyme immunoassay

교신저자：신소영

우) 301-040 대전광역시 중구 대사동 640 충남대학교병원 임상병리과

전화：042-220-7793, FAX：042-257-5365 E-mail：

서 론

B형 간염 바이러스 감염은 무증상 보균자부터 만성 간염 환자 등의 다양한 임상상과 악화와 호전을 거듭하여 간의 섬유화 및 간암까지 진행되는 등 국민 건강에 큰 문제가 되 고 있어 B형 간염 바이러스의 표면 항원(HBsAg), 항체 (Anti-HBs)의 혈청학적 검사는 간염의 예방, 진단, 치료 및 예후 결정의 필수적인 지표가 되었다. 따라서 간염의 진 단에 있어서 민감도, 특이도가 높고 항원 자체의 특성 차이 에 의한 시약의 선택이 매우 중요한 바 그 국민의 항원 특

성에 따른 시약 제조가 중요하다고 생각된다[1].

간염검사법으로 제 1세대 EIA방법이 개발된 이래 제 3 세대 EIA 시약이 나오고 있으나 우리나라처럼 간염 유병률 이 높은 지역[2-4]은 병의 진단 뿐 아니라 국민 보건을 위 해 백신사업, 혈액사업 등에서도 널리 이용될 수 있는 저렴 하고 구입이 쉬우면서 대량검진에 필요한 간염시약이 필요 하다고 생각된다.

이에 저자들은 국내에서 개발된 시약 중 하나인 Tech- zyme ^Ⓡ HBsAg, Anti-HBs(ASAN, Korea) 간염 검사 시약의 임상적 유용성을 검토하여 상기 목적에 적합한지를 보려 하였다.

대상 및 방법

1. 장비

2 신소영․김문희․박윤미․권계철․구선회․박종우

Fig. 1. A：Linearity of HBsAg of Techzyme ^Ⓡ . B：Linearity of Anti-HBs of Techzyme ^Ⓡ .

y = 1 8 .3 9 x + 0 .0 9 6 3 R

= 0 .9 9 0 3

0 0 .5 1 1 .5 2 2 .5 3

0 0 .0 2 0 .0 4 0 .0 6 0 .0 8 0 .1 0 .1 2 0 .1 4

E x p e c t e d v a l u e ( R a t i o )

Measured value (O.D.)

y = 9.0479x - 0.0054 R

= 0.9977

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5

0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

Expected value (Ratio)

M e asu red val u e ( O. D .)

Table 1. Within run and between run precision of Techzyme ^Ⓡ HBsAg and Anti-HBs

Analyte Control Mean O.D.* CV(%)＊

Within-run Between-run Within-run Between-run

HBs Ag Negative control 0.031 0.035 7.48 11.12

Positive control 1.456 1.469 2.34 4.14

Anti-HBs Negative control 0.032 0.038 7.02 14.6

Positive control 1.468 1.470 2.43 4.97

* O.D. : Optical Density

＊C.V. : Coefficient of Variance

검사 시 자동 microplate 효소면역장비인 Coda(Bio- Rad, U.S.A)를 이용하였으며, 민감도 및 특이도 분석을 위해 EIA 방법인 기존에 사용하던 C시약과 비교 분석하였 고 두 시약의 결과가 불일치를 보이는 경우 EIA 방법인 A 시약을 이용하여 검증하였다.

2. 대상 검체

HBsAg, Anti-HBs 검사를 위해서 2001년 1월부터 3 월 사이에 충남대학교 병원 임상병리과에 의뢰된 검체 중 무작위로 추출된 150검체의 환자혈청을 민감도 및 특이도 분석을 위해 사용하였고 음성표준물질(Techzyme ^Ⓡ HBsAg, Anti-HBs negative control, ASAN, Korea)과 양성표 준물질(Techzyme ^Ⓡ HBsAg, Anti-HBs positive con- trol, ASAN, Korea)을 정밀도 검증을 위해 이용하였다.

3.방 법 1) 정밀도의 평가

검사중 정밀도 측정은 NCCLS EP-5[5]에 준해 음성표 준물질과 양성표준물질로 20회 반복 측정하여 흡광도의 평 균과 변이계수를 구하였다.

2) 직선성

HBsAg, Anti-HBs 고농도 환자검체를 이용하여 NCCLS EP-6[6]의 기준에 따라 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32,

1：64가 되도록 단계희석한 검체를 제조하여 각각 4회 측 정한 후 평균값을 구하여 평가하였다.

3) 민감도와 특이도

150개의 임상 검체를 이용하여 Techzyme ^Ⓡ HBsAg과 Anti-HBs로 측정한 결과를 기존의 C시약 결과와 비교하 였다. 두 시약 검사 결과가 불일치한 경우 A시약으로 재검 하여 세 검사중 검사 결과가 일치한 경우를 참값으로 간주 하여 민감도와 특이도를 구하였다.

결 과 1. 정밀도 평가

검사중 정밀도는 HBsAg 음성표준물질의 경우 변이계수 가 7.48 %, 양성표준물질은 2.34 %였고, Anti-HBs는 음 성표준물질은 변이계수가 7.02 %, 양성표준물질은 2.43 % 였다. 검사간 정밀도는 HBsAg 음성표준물질은 변이계수가 11.12 %, 양성표준물질은 4.14 %였고, Anti-HBs는 음성 표준물질은 변이계수가 14.6 %, 양성표준물질은 4.97 %였 다. (Table 1)

2. 직선성

회귀분석은 HBsAg의 경우 y = 18.39x + 0.0963, R ²

= 0.9903이고 Anti-HBs는 y = 9.0479x - 0.0054, R ²

Techzyme ^Ⓡ HBsAg, Anti-HBs시약의 유용성 평가 3

Table 2. Discrepant results of 9 cases according to Techzyme ^Ⓡ HBsAg, C reagent and A reagent Techzyme ^Ⓡ

Total

Positive Negative

C reagent Positive 0 0 0

Negative 9(9*) 0 9

Total 9 0 9

* : The results of rechecked data by confirmatory method using A reagent

Table 3. Discrepant results of 12 cases according to Techzyme ^Ⓡ Anti-HBs, C reagent and A reagent

Techzyme ^Ⓡ Total

Positive Negative

C reagent Positive 0 9(9*) 9

Negative 3(3*) 0 3

Total 3 9 12

* : The results of rechecked data by confirmatory method using A reagent

= 0.9977로 통계적으로 유의한 선형회귀관계가 있었다.

(Fig. 1.)

3. 민감도와 특이도

항원 검사의 경우 132예(92 %)가 서로 일치하였으며 불 일치를 보인 3예는 재검 결과 일치를 보여 총 141검체가 일치하여 94 %의 일치율을 보였다. 서로 불일치하는 결과 를 보인 9검체는 Techzyme ^Ⓡ 에서 음성을 보였고 C시약에 서 양성을 보였던 경우 A시약으로 재검결과 음성으로 판정 되었다(Table 2). 상기의 결과로 Techzyme ^Ⓡ HBsAg 시 약의 민감도와 특이도는 각각 100 %, 100 %였다.

또한 항체 검사는 138예(92 %)가 서로 일치하였고 12 예가 불일치를 나타냈으며(Table 3) Techzyme ^Ⓡ Anti- HBs 시약의 민감도와 특이도는 각각 95.6 %, 96.3 %였다.

고 찰

발견된 지 30년 밖에 되지 않은 B형 간염은 가장 흔한 바이러스 감염중의 하나이고 전세계적으로 약 3억의 만성보 균자가 있으며 해마다 25만명이 급만성 간질환으로 사망한 다고 알려져 있다[7]. 특히 endemic area로 알려진 우리 나라의 경우 4-17 % 정도로 높은 유병률을 나타내고 있고 [8-10], 급성간염, 만성간염, 간경변증 및 간세포암 등 만 성 간질환의 90 %가 B형 간염 바이러스와 밀접한 관계가 있어 적절한 간염 혈청학적 표지자 검사는 환자의 진단 및 추적 관찰에 필수적이다[11].

B형 간염 바이러스의 검사방법으로는 역수동적혈구응집 (Reversed passive hemagglutination：RPHA), 효소 면역측정법(Enzyme immunoassay：EIA), 방사면역측정 법(Radioimmunoassay：RIA) 방법을 사용하고 있으며

비용이 적게 들고 간편한 RPHA방법이 많은 검사기관에서 이용되어 왔으나, EIA법보다 민감도나 특이도면에서 차이 가 있어 미량의 HBs 항원과 항체까지 검출할 수 있는 EIA 나 RIA를 시행하는 것이 좋다. 그러나 B형 간염 혈청학적 검사는 감염상태나 B형 바이러스의 복제 능력에 대해 절대 적인 지표가 될 수 없으며 음성으로 나오는 경우도 감염이 나 재활성화를 배제할 수 없고 실제 바이러스 입자 수, 복 제 능력 등 감염상태나 항바이러스 제제 투여 후 추적관찰 에는 HBV- DNA를 검출하는 PCR이 적합하다[12]. 그러 나 PCR법은 검사과정에 시간과 노력이 많이 들고 오염으 로 인한 위양성의 확률도 있어 1차 선별 검사에는 실용적이 지 못하여 1차 선별 검사로는 민감도, 특이도가 높은 RIA 와 EIA검사법이 많이 사용된다. 그중 RIA는 동위원소의 처리 문제, 동위원소 자체의 위험성이 있어 그 사용이 점차 감소되는 추세에 있으며 검출강도가 높고 자동화가 가능하 여 많은 검체를 처리할 수 있는 EIA법의 사용이 점차 증대 되고 있어 국내외에서 민감도와 특이도가 높은 시약 개발 노력이 꾸준히 지속되고 있다.

이 결과 최근 개발된 Techzyme ^Ⓡ EIA 시약은 정밀도에 서 음성표준물질인 경우 일간 재현성 검사와 일일 재현성 검사에서 HBsAg은 변이계수가 7.48 %와 11.12 %이고 Anti-HBs는 7.02 %와 14.6 %로 높았으며 이는 평가 분 석시 기간이 짧았던 것과 몇몇 검사값이 높아 전체적으로 그 값이 높아진 것으로 이는 좀 더 많은 검체와 기간을 두 고 분석하여야 할 것으로 생각된다. 그러나 양성표준물질인 경우 일간 재현성 검사와 일일 재현성 검사에서 HBsAg은 변이계수가 2.34 %와 4.14 %이고 Anti-HBs는 2.43 %와 4.97 %로 우수하였다.

직선성의 평가에서는 HBsAg의 경우 y = 18.39x +

0.0963, R ² = 0.9903이고 Anti-HBs는 y = 9.0479x -

4 신소영․김문희․박윤미․권계철․구선회․박종우

0.0054, R ² = 0.9977로 유의한 직선회귀식을 나타내어 측정농도에서의 직선성은 우수한 것으로 생각되었다.

민감도와 특이도 검사에서는 항원 검사에서 기존 시약과 94 %의 높은 일치율을 보였으며 항체의 경우 92 %로서 높 은 일치율을 보였다. 두 시약 검사 결과의 불일치를 보인 경우 다른 제품(A시약)으로 재검하여 세 검사중 검사가 일 치한 경우를 true result로 간주하여 두 검사의 민감도와 특이도를 관찰한 결과 항원 검사에서는 Techzyme ^Ⓡ 시약 의 민감도와 특이도는 각각 100 %, 100 %으로 기존의 C 시약보다 높은 민감도를 나타냈다. 항체 검사는 민감도와 특이도는 각각 95.6 %, 96.3 %이였으며 기존의 C 시약보 다 높은 특이도를 보여주었다. 이는 외국산 시약과 특이도 와 민감도를 개선한 제 3세대 EIA제품을 비교한 안[13]

등의 결과에서 보이는 99 %과 유사한 일치율을 보여주고 있고, 성[14] 등의 보고에서 나타난 Anti-HBs시약의 민감 도와 특이도가 99.6 %, 94.7 %의 결과와도 비슷한 수치로 국산의 타제품과 비교시도 손색이 없는 높은 민감도와 특이 도를 보였다.

이의 결과에 비추어 볼 때 새로 개발된 국산시약 Techzyme ^Ⓡ 은 높은 정밀도와 직선성을 보였고 민감도와 특이도가 높아 임상적으로 유용하게 사용될 수 있으리라 생 각되며 향후 백신사업이나 혈액사업에도 활용할 수 있을 것 으로 사료된다.

요 약

배경：B형 간염은 우리나라에서 만연하고 있는 질환중의 하나이며, 이에 대한 혈청학적 검사는 B형 간염 진단에 중 요하다. 최근 개발된 국산시약인 Techzyme ^Ⓡ (ASAN, Korea)을 이용하여 B형 간염의 표면 항원(HBsAg), 항체 (Anti-HBs)의 임상적 유용성을 검토하고자 하였다.

방법：2001년 1월부터 3월사이에 충남대학교 병원 임상 병리과에 의뢰된 150검체를 대상으로 민감도와 특이도를 검사하였으며 Techzyme ^Ⓡ 음성대조 물질과 양성 대조물질 을 이용하여 검사중 정밀도와 검사간 정밀도를 구하였다.

고농도 환자 혈청을 단계 희석한 후 직선성을 구하였다.

결과：정밀도에서 음성 표준물질인 경우 일간 재현성 검 사와 일일 재현성 검사에서 HBs Ag은 변이계수가 7.48 % 와 11.12 %이고 Anti-HBs는 7.02 %와 14.6 %이었다.

양성표준물질인 경우 일간 재현성 검사와 일일 재현성 검사 에서 HBsAg은 변이계수가 2.34 %와 4.14 %이고 Anti-HBs는 2.43 %와 4.97 %이었다. 직선성의 평가에서 는 HBsAg의 경우 R ² = 0.9903이고 Anti-HBs는 R ² = 0.9977이었다. 항원, 항체 검사에서 94 %, 92 %의 일치 율을 보였고 민감도와 특이도는 항원 검사에서는 100 %, 100 %이고 항체 검사는 각각 95.6 %, 96.3 %이었다.

결론：새로 개발된 국산시약 Techzyme ^Ⓡ 은 우수한 정밀

도와 직선성을 보였고 민감도와 특이도가 높아 임상적으로 유용하게 사용될 수 있으리라 생각된다.

참 고 문 헌

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