B형， c형 간염 바이러스 양성자에게서 type III

대한임상병리사회지 : 제 23권 1호 1991

B형， c형 간염 바이러스 양성자에게서 type III

procollagen-NH2 propeptide (p III NP) 검 사

이원 임상검사센타

이명희·양경모·최정숙

Key words : Fibroproliferative disease , PIIINP , Liver fibrosis , HCV Ab

1 . 서 론

교원질 (collagen) 은 우리 몸에서 가장 널리 분포 하는 결합조직 (connective tissue) 의 주요성분이며 또한 기 저 막 (basement membrane) 의 구성 성 분이 기 도 하다. 현재까지 6종류 (Type 1 -VD 가 존재하는 것으로 보고되고 있으며 Type III 교원질은 피부，

혈관벽， 간， 폐， 골수조직 등에서 발견된다1 ，2)

Type III 교원질은 전구물질인 Type III procollage- n으로부터 합성 되 며 이 procollagen은 양 말단에 propeptide extension peptides을 갖고 있 어 이 들을 아미 노말단 또는 카복시 말단 propeptide라고 하며 이 중 아미 노말단 propeptide는 type III collagen이 분해 또는 합성되는 과정에서 혈액 중에 유리되는데

Col 1

이를 PIIINP라 한다. PIIINP는 3개의 polypeptide 사슬이 횡 문 (cross-striation) 구조를 이 루며 3개 의 부분 즉 globular monomeric Col

collagenous trimeric Col 3 , Type III collagen 분 자 에 propeptides를 연결하는 짧은 Co12로 구성 되 어 있 고 42 ， 000의 분자량을 갖고 있 으며 Col 1 domain은 분자량이 10 ， 000 이 다3) (그림 1) .

혈액 중 PIIINP의 농도는 결합조직의 축적파 분해 가 일어나는 많은 질환에서 증가되며 일반적으로 Type 1 procollagen의 카복시 말단 propeptide

(PICP) 와 함께 발견되나 예를 들면 간섬유화， 간경 변과 같은 섬 유증식 성 (fibroproliferative) 질환의 초기에는 PICP에 앞서 PIIINP 농도가 증가되며 섬 유화가 진행되어 간경변증의 중증이되면 PICP가 더

Col 3

Co12

|훌三三三~잊g

뉴--내

Telopeptide region

Aminoterminal propeptide Type III collagen Aminoterminal segment

그림 1. Type III procollagen의 아미 노말단의 구조

증가하는 것으로 알려져 있다.)

또한 PIIINP는 진성 다혈구혈증 (polycythaemia vera) 과 같은 골수충식성 질환， 유방암， 난소암 등 의 악성종양， 잡상선거능 항진증 등의 내분비 질환 에서도 증가되며 성장발육이 늦은 어련이에게서 성 장호르몬 투여 후 발육의 지표로서도 PIIINP의 측정 이 유용한 것으로 보고되고 었다(표

표 1. PIIINP 측정의 임상척 의의

1.

내분비 질환

1)

성장호르몬 치료률 받는 어련이에게서 혈청 PIIINP 농도자 변화하므로 반응지표가 됨 . 2) 선단거대중 (Acromegaly) 에서 PIIINP농도

증가， 치료효과 반영

3) 갑상선 기능 저하증 -PIIINP 감소 강상선 기능 항진증 -PIIINP 증가 2. 악성질환， 종양 marker로서의 의의

1)

난소암 (advanced) 의 정 우 CA125보다 더 예 민한 marker임

2) Ewing ’ s sàrcoma의 치료효과 반영

3) 골전이가 일어난 유방암의 치료효과 monitoring

4) 원발성， 속발성간 신생물(Liver neoplasm)

에서 증가

3. 혈액 철환

1)

골수 섬유중에서 중가

2) 진성 다혈구중에 서 골수양 화생 (Myeloid metaplasia) 으로의 변형올 암시함

4. 폐섭유층에서 증가

5. 간질환

1)

간염증(알콜성 간염， 급성 바이러스 간염) 에서 PIIINP 농도 매우 증가

2) 급성 간염에서 만성 간염으로 발전할 때에도

PIIINP 농도 여전히 높으나 만성 간염상태

가 지촉됨에 따라 정상 범위로 떨어짐

함암제 (Methotrexate) 치 료 동안 섬 유증으

로의 발전율 예시함

6. 진행성 전신 청화증 (PSS) 에서 혈중 PIIINP 중가

현채 간섬유화 동의 섬유중식성 질환율 가진 환자 률에게서 섬유화의 진행정도률 진단할 수 있는 유일 한 방법은 조칙검사 (biospy) 인 것으로 알려져 있 다1) 그러나 조직검사는 반복검사의 어려움이 있고 검사 당시의 결합조직의 정척인 상태 (static

picture) 만을 반영하고 섬유화의 동적인 상태

(dynamin picutre) 를 제 공하지 못한다는 점 에 서 조 칙검사 이외의 다른 검사방법이 필요하였다1.5.6) 그 중 한 방법 으로서 1978년 Timple 등이 PIIINP 측정 법올 개발하여 혈청 PIIINP치와 간섬유화의 진행정 도 및 활동성 사이에 상관관계가 있음을 보고 하였

다7)

그후 PIIINP치와 간섬유화에 관련된 많은 연구들 이 발표되어 간섬유화의 지표 (marker) 로 PIIINP

측정이 유용한 것으로 소개되었으며 특히 알코올성 간경변시 PIIINP치가 높아지는 것으로 보고되었 다7) 또한 Zachariae 등8)은 methotrexate 치 료를 받는 건선 (psoriasis) 환자에 게 서 간섬 유화나 간경 변이 되는 경우 PIIINP치가 그렇지 않은 경우보다 유의하게 높았음을 보고하였다.이와는 달리 간섬유 화 뿐 아니라 간세포의 괴사， 염증 등에서도 PIIINP 치가 증가되며 염증을 동반하지 않은 간섬유화의 경 우 PIIINP치가 정상치를 보인다는 보고도 있다. 또 한 McCullough 등9)은 심 한 만성 활동성 간염 환자들 에서 간정변을 가진 그룹과 그렇지 않은 그룹 모두 에게서 같은 정도의 증가를 보인 PIIINP 농도가 면 역 억제 요법시 회복 정도에 따라 간정변 등에 상관 없이 두 그룹 모두 정상농도가 되므로 PIIINP는 간 섬유화의 지표라기 보다는 질병의 활동상태 (disease activity) 와 치 료에 대 한 반응정 도를 감시 (monitori-

ng) 하는 인자로서 더 유용하다고 보고 하고 있다.

그러므로 간섬유화의 지표로서 PIIINP의 유용성 은 계속 추적， 검토 중에 있으며 여기서는 Farmos

사의 Procollagen-PIIINP RIA Kit를 사용하여 B형 간염 바이러스검사에 양성을 보인 그룹과 C형 간염 항체 양성을 보인 그룹에서 PIIINP를 측정하여 얻은 성척과 함께 검사법을 소개한다.

II. 대 상

HBsAg

HBeAg 검사에서 양성을 보인 40 검체 와 HCV Ab 검사에서 양성을 보인 40검체 모두 80

검체를 대상으로 하였으며 동시에 AST

ALT 검사 를 병행하였다.

II I. 채혈 및 보존방법

검체는 혈청을 사용하였으며 heparin 또는 EDTA

로 처리한 혈장의 사용도 가능하나 혈청올 사용한

경우보다 10% 낮은 결과를 얻게 된다. 검체는 검사

시까지 -20.C 에서 동결보존하였고 2번의 동결， 융

해 의 과정 이 있 었 다 @ 홉언장치 (aspirator systenn)

동결

융해의 반복이 4번까지는 검체에 영향을 미 @ 파라필름， 시험판 치지 않는 것으로 나타나 있으며 검체의 보존은 냉

장온도에서 약 1주일간 안정하고 그 이상 보관시는 4. 방 법

적어도 -20.C 이하의 동결보존이 필요하다.

IV. 검사방법 1. 원 리

PIIINP의 측정은 경함반응의 원리에 의한다. 즉 검체 중의 미지의 PIIINP 항원 (Ag) 과 방사성 동위 원소 (125-l)가 표지된 PIIINP 항원 (Ag.) 이 일정량 의 PIIINP 항체 (Ab) 와 반응하여 항원， 항체 복합체

(Ag. Ab

Ag •. Ab) 률 형성하며 항원， 항체 복합체 에서 동위원소가 표지된 항원의 양은 검체 중 항원 (Ag) 의 양과 반비례하므로 검체 중 PIIINP 양올 정 량활 수 있다.

Ag __ Ag.Ab

+Abζr

Ag. 、 Ag •. Ab

Ag: ^{측정 할} PIIINP Ag Ag. :

1 표지 PIIINP Ag Ab: PIIINP 항혈청

2. 시 약

CD

1 표지 PIIINP Ag

@ PIIINP 항혈청

CID PIIINP 표준액 (0

1. 0

2.5

5.0

10

25

50 ng/nn

@판리혈청

@ 분리첨전시약

3. 기 구

@ 감마선 계 측기 (gannnna counter)

@ 항온수조 (waterbath) CID 20μ1， 500μl 피 렛

@ 믹서， 원심분리기 (2000g)

(단위 μ 1)

「|\시 약 λ 험 \관\ ^{Total Stan- Con-} _dard trol known ^{Un- 비륙이 반응} (NS

sample 200 200 200 200'

PIIINP [IzsI] (R때) 200 200 200 200 200

PIIINP anti- 200 200 200 -

serum(Blue)

distilled water - - 200

혼합 (Vortexτnix) 반응

ncubate 2hr/37C)

separatíon 500 500 500 500

reagent

혼합 (V ortex-mix)

반응

ncubate 30min/실온) 원심분리 15min/2000g at 4-20'C

흡인 여액 제거 계 측 (Count) : 1분간

5. 계 산

다음 식에 의해 각 표준액과 검체의 결함율율 얻 는다.

%결합율 (B/Bo)

(표준액 또는 검체계측량-비륙이반용 계혹량) XI00

(팽균표준액 계측량-비륙이반옹 계측량)

6. 입상 참고치

1. 7-4.2μg/1

V. 결과 및 고찰

지금까지 PIIINP 측정에서의 문제점은 표준항원 과 혈청검체 사이의 비평행현상 (nonparallelism) 이 었다. 이것은 기존의 상품화된 PIIINP Kit (e. g.

RIA-gnost kit) 가 bovine Col 1-3 PIIINP에 대 한 항체를 사용하였는데 이것에 의해서 인지가능한 항 원이 적어도 항원 특성과 분자량이 다른 3종류가 혈 청 검체에 존재하므로 이둘 중 분자량이 작은 항원

(Col 1 domain) 과의 교차반응으로 인해 실제의 값 보다 더 큰 결과를 얻었기 때문이다 1)

그러므로 이러한 문제점을 해결하기 위한 방법의 하나로 Behringwerke사의 PIIINP-Fab Assay Kit 가 있으며 또한 최근에는 Farmos사에 의해 특이 항 혈청과 반응조건을 선택하여 Col1 분해산물의 교차 반응을 없앤 특이성이 높은 Prócollagen PIIINP RIA kit가 개발되어 이전의 검사방법에서 요구되던 검체의 단계적 희석이 필요없이 희석 과정에서 생길 수 있는 오차를 해결하였으며， Col 1 domain을 detect하지 않으므로 PIIINP 평 균값은 RIA-gnost assay에 의해 얻어진 값보다 2.8배 정도 낮아졌고 결과 또한 50% 교차법 (intercept method) 억제곡선 (i nhibition curve) 으로부터 계 산되 어 지 는 것 이 아 니라 자동 감마션 계측기로 측정하여 직접 얻을 수 있으며 총 분석 (assay) 시간이 3시간으로 매우 신속 하며 예민한 방법인 것으로 알려져 있다.

HBs Ag , HBe Ag 양성 인 그룹 I 파 HCV Ab에 양성을 보인 그룹 II 에서 PIIINP 농도를 측정하여 다음과 같은 결파를 얻었다.

1. 그룹 1 (HBs Ag , HBe Ag 양성)

였다.

PIIINP 농도 (μg/ml) 증 례

A 4.3-5.0 3예

B 5.1-7.0(7.6) 3예 (1예 )

C 9.0-13.2 5예

이 중 C등급에 속하는 예에서는 3예에서 AST , ALT 활성 도도 모두 200unit를 넘 는 것 으로 나타났

다.

2. 그룹 II (HCV Ab 양성)

HCV Ab에 양성을 보인 검체 40예를 대상으로 P lII NP 농도를 측정 한 결과 24예 (60%) 에 서 PIIINP 농도가 다음과 같이 증가되 었으며 이 들을 5등급으로 구분하였다.

PIIINP 농도 (μg/ml) 증 례

A 4.3-5.0 3예

B 5.1-7.0 7예

C 7.1-10.0 8예

D 10.1-20.0 4예

E 21 이상 2예

합계 24예

PIIINP 농도가 증가된 24예 중 11 예 에 서 AST , HBs Ag과 HBe Ag에 양성인 검체 40예를 대상 ALT 활성이 모두 증가 되었으며 AST만 증가한 예 으로 PIIINP 농도를 측정한 결파 12 예에서 PIIINP 는 3예， ALT만 증가한 예는 없었다.

농도가 다음과 같이 증가되었으며 3등급으로 구분하

Serum type III Procollagen- NH

Propeptide Levels in the HBs Ag, HBe Ag Positive and the HCV Ab Positive Liver Disease

Lee, M.H., Yang, K.M., Choi, J.S.

Dept. of Ewon Reference Laboratory

ABSTRACT

Collagen is a major constitutent of most dense and loose connective tissues in the body. So far there are reported for 6types of collagen. Type III collagen is synthesized as a procollagen which contains propeptide extensions at both ends of the molecule. It has been shown that the concentration of antigens related to the aminoterminal propep- tide of type III Procollagen (PIIINP) where there is excessive deposition of collagen such as liver fibr- osis and cirrhosis or myelofibrosis or malignant disease as well as during normal growth. We meassured serum PIIINP concentration in 80 indiv-

iduals for two groups- one group ( 40 individuals) confirmed seropositive HBs Ag, HBe Ag, the other 40 samples was positive for HCV Ab test.

We used a radioimmunoassay kit [Procollagen (P IIINP) RIA : Farmos Diagnostica, Finland] and reference values for healthy individuals ranged from 1. 7 to 4. 2,ug/ml

PIIINP concentrations were mild elevated in 7 samples(4.3-7.6,ug/ml) and high elevated in 5 sample(9.0-13.2,ug/ml) with HBe Ag positive as well as HBs Ag.

And in case of HCV Ab positive 40 samples, P IIINP concentration were elevated in 24 sample totally(4.3-21,ug/ml).

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