49(1) : 40∼ 46 (2018)
40
모과 부탄올 분획의 예쁜꼬마선충 내의 항산화 효과
김준형1·안창완1·김영지1·노윤정1·김수진1·김주은1·Abinash Chandra Shrestha1 함하늘1·임재윤1·조형권2·김대성2·문광현3·이정호3·정경옥3·김대근1∗
1우석대학교 약학대학, 2한풍제약, 3(재)순창건강장수연구소
Antioxidant Activity of n-Butanol Fraction of Chaenomeles sinensis Fruit in Caenorhabditis elegans
Jun Hyeong Kim1, Chang Wan An1, Yeong Jee Kim1, Yun Jeong Noh1, Su Jin Kim1, Ju-Eun Kim1, Abinash Chandra Shrestha1, Ha-Neul Ham1, Jae-Yoon Leem1, Hyung-Kwon Jo2, Dae-Sung Kim2,
Kwang Hyun Moon3, Jeong Ho Lee3, Kyung Ok Jeong3 and Dae Keun Kim1*
1College of Pharmacy, Woosuk University, Jeonju 55338, Korea
2Hanpoong Pharm. Co., LTD, Wanju, 55336, Korea
3Sunchang Research Institute of Health and Longevity, Sunchang 56015, Korea
Abstract − Chaenomeles sinensis (Thouin) Koehne fruit (Rosaceae) has been used as a traditional medicine in Korea, Japan and China to treat sore throat, diarrhea and inflammation. The ethanol extract of C. sinensis fruit was successively partitioned as methylene chloride, ethyl acetate, n-butanol and H2O soluble fractions. Among those fractions, the n-butanol fraction showed the most potent DPPH radical scavenging and superoxide quenching activities. To verify antioxidant activities, the n-butanol fraction was checked the activities of superoxide dismutase (SOD) and catalase activities, and intracellular ROS levels and oxi- dative stress tolerance in Caenorhabditis elegans. Furthermore, to see if increased stress tolerance of worms by treating of the n-butanol fraction was due to regulation of stress-response gene, we quantified SOD-3 expression using transgenic strain. Con- sequently, the n-butanol fraction elevated SOD and catalase activities of C. elegans, and reduced intracellular ROS accu- mulation in a dose–dependent manner. Moreover, the n-butanol fraction-treated CF1553 worms exhibited significantly higher SOD-3::GFP intensity.
Keywords − Chaenomeles sinensis, Caenorhabditis elegans, Antioxidant, SOD, Catalase, ROS
인간을 포함한 대부분의 호기성 생물체에서 생산되는 활 성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 세포내 많은 양 이 축적되면 생체 분자와 반응하여 산화적 스트레스를 일 으켜 노화를 촉진하고, 파킨슨병을 비롯하여 알츠하이머 질 환, 암 등과 같은 노화와 관련된 수많은 건강상의 문제를 일 으키는 것으로 알려져 있다.1-3) 활성 산소종의 종류로는 hydroxyl radical(·OH), superoxide anion radicals(·O2−), hydrogen peroxide(H2O2), organic peroxide(ROOR’) 및 peroxynitrite(ONOO−) 등이 있으며, 이러한 활성 산소종과 반응하여 산화적 손상으로부터 세포를 보호하는 물질을 항
산화제라고 한다.4,5) 또한 인체 세포 내에는 superoxide dismutase(SOD), catalase 및 glutathione peroxidase(GPx) 등과 같은 방어체계가 존재하여 활성 산소종의 생성과 생 성된 활성 산소종을 소거하지만 노화가 진행될수록 체내의 효소만으로 활성 산소종의 공격으로부터 인체를 보호하기 가 어려워진다. 따라서 외부에서 공급되는 vitamin C를 비 롯한 각종 항산화제의 공급이 필요하며, 강한 항산화 활성 을 가지면서 부작용이 적은 천연물 유래 항산화제 개발이 필요한 실정이다.6-8)
모과(Chaenomeles sinensis(Thouin) Koehne, Rosaceae)는 한국을 비롯한 중국, 일본 등에서 전통적으로 소화불량, 진 해, 복부팽만경감 및 이뇨작용 등에 사용되어 왔다.9,10) 본 연구에서는 모과 70% ethanol 추출물의 용매 분획을 DPPH
*교신저자(E-mail):[email protected] (Tel): +82-63-290-1574
free radical 및 superoxide 소거능을 측정하여 가장 강한 항산 화능을 나타낸 n-butanol 분획을 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)을 이용하여 항산화 기전을 연구하였다. 선충 내의 항산화 효소인 SOD와 catalase의 활성과 세포내의 활성산 소종의 축적 억제 능력을 측정하였다. 또한, juglone으로 유 도된 oxidative stress에 대한 저항능력을 확인하고 이와 관 련하여 선충 내의 oxidative stress 저항 단백질의 증가 여부 를 확인하기 위하여 SOD-3::GFP를 포함한 형질 전환 선충 인 CF1553을 이용하여 SOD발현 증가 여부를 확인하였다.
재료 및 방법
실험재료 − 본 실험에 사용한 모과는 2017년 한풍제약에 서 제공받아 김대근교수가 검증한 후 실험에 사용하였으며, 표준품은 우석대학교 약학과 생약표본실에 보관하고 있다 (WSU-17-009).
추출 및 분획 − 건조 된 모과 300 g을 분쇄 후 70% ethanol 로 진탕하며 70oC에서 5시간씩 3회 온침 추출하였다. 그 추 출액을 수욕상에서 감압농축하여 ethanol엑스 약 28 g을 얻 었으며, 이 ethanol엑스를 증류수로 현탁시키고 상법에 따라 동량의 methylene chloride(2.2 g), ethyl acetate(2.9 g) 및 n- butanol(15.4 g)의 순으로 용매 분획하여 각각의 분획을 얻 었다.
DPPH Free Radical 소거법에 의한 항산화활성 측정11)− 96well plate에 시료를 ethanol로 각 농도 별로 조제한 용액 에 13 μM의 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)을 일정량 씩 가하였다. 10초간 진탕한 후 25oC에서 30분간 방치한 후 microplate reader를 이용하여 520 nm에서 흡광도를 측정하 였다. 대조약물은 L-ascorbic acid를 사용하였다. 항산화 효 과는 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도와 비교하여 그 래프로 나타내었다. 각 시료에 대한 DPPH radical 소거작용 을 3회 반복하여 측정하였다.
Riboflavin 유래 Superoxide 억제 활성12) − 시료의 superoxide 억제능력은 methionine, riboflavin, NBT로 구성 된 평가 시스템을 이용하여 광화학 작용을 측정하는 것이 다. 반응 혼합액은 2.6 μM riboflavin, 3 mM methionine, 75 μM NBT, 0.1 mM EDTA, PBS(pH 7.4) 및 여러 농도의 시료로 이루어졌다. 혼합물은 light box에 넣은 후 5분마다 자리를 임의로 바꾸어 주면서 15분 동안 방치하였다. Light box 안의 온도는 20±1oC, 빛의 밝기는 5,500 lux를 유지하 였다. NBT는 빛 아래에서 blue formazan으로 환원되며, blue formazan형성 억제능이 superoxide 억제능력인 된다. 이 생 성물을 560 nm에서 측정하였다.
예쁜꼬마선충의 배양13)− 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans, wild type)과 Escherichia coli OP50은 우석대학교 차동석교수로부터 제공받은 것을 사용하였으며, Escherichia
coli OP50을 도말한 nematode growth medium(NGM) agar plate(20oC)에서 배양하였다. 시료는 DMSO를 용매로 한 stock solution 상태로 멸균된 NGM plate(50oC)에 첨가되었 으며, 최종 DMSO 농도는 모든 상태에서 0.1% (v/v)를 유 지하였다.
선충 체내의 항산화 효소(SOD, Catalase) 활성 측정14,15)
− 시료를 농도별로 조제한 plate에 성장 단계가 동일한 N2 선충을 배양하였다. 성체가 된 후 4일째에 선충을 모아 M9 buffer로 3회 세척 후 분쇄하여 효소활성 측정에 사용하였 다(homogenization buffer: 10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, pH 7.5). SOD 활성은 Ibrahim 등의 방법을 응용하여 측정하였다. 먼저 10 mM phosphate buffer(pH 8.0) 를 용매로 반응 혼합물(1.6 mM xanthine과 0.48 mM NBT) 0.49 mL를 만든 뒤 sample 10 μL와 37oC에서 5분간 pre- incubation시켰다. 그 후 xanthine oxidase 100 μL(0.05 U/
mL)을 첨가하고 37oC에서 20분 동안 incubation시킨 다음 69 mM SDS로 반응을 멈추고 570 nm에서 흡광도를 측정하 였다. Catalase activity는 Aebi의 방법을 응용하여 25 mM H2O2에 농도별 시료 50 μL를 3분 동안 반응시키고 240 nm 에서 흡광도를 측정하였다.
선충 세포 내 활성 산소종(ROS) 분석16)− 선충 세포 내 활성 산소종은 2',7'-dichlorodihydro fluorescein diacetate (H2DCF-DA)를 사용하여 측정하였다. 성장 단계가 동일한 N2 선충을 시료를 농도별로 제조한 plate에서 배양하였다.
성체가 된 후 4일째 50 μM juglone을 함유한 M9 buffer에 넣고 2시간 노출시킨 뒤 96 well plate에 담긴 50 μL M9 buffer에 5마리씩 옮겼다. 마지막으로 25 μM H2DCF-DA 50 μL를 첨가한 뒤 여기 485 nm, 방출 535 nm에서 흡광도 를 각각 측정하였다.
Oxidative Stress 저항성 평가17)− 성장 단계가 동일한 선충을 각각의 농도별 plate에서 배양하였다(250, 500 μg/
mL). Oxidative stress에 의한 내성은 기존 방법을 약간 변 형하여 평가하였으며, 성체가 된 후 7일째에 일시적으로 선 충을 1 mM juglone이 함유된 M9 buffer가 담긴 96well plate의 well에 옮기고 시간 별로 생존율을 확인하였다.
형질전환 선충 내 SOD-3::GFP 형광 측정 − 형질 전환 된 선충으로 SOD-3::GFP를 포함한 CF1553을 농도별로 투 여된 배지에 배양하였다. 성체가 된 후 3일째에 사용하였으 며, 선충은 sodium azide(4%)로 마취시켰고 GFP 발현은 형 광 실체 현미경(Olympus, Tokyo, Japan)으로 관찰하였다. 발 현강도를 정량, 분석하기 위해 현미경을 이용한 사진 촬영 과 ImageJ 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 모든 실험은 3회 반복하였다.
통계 분석 − 통계 자료의 값은 평균값±표준오차(mean±
S.E.M.)로 표시하였다. 그룹 간의 통계적 유의성 검정은 Student's t-test를 통해서 분석하였고 선충의 연속적인 생존
도는 Log-rank test분석 방법을 이용하였다. p값은 *p<0.05,
**p<0.01, ***p<0.001일 때 유의성이 있는 것으로 간주하 였다.
결 과
DPPH Radical 소거능 − 모과 분획 중에서, DPPH radical 소거 효과는 Fig. 1에 나타난 바와 같이 분획들 중 n-butanol 분획(IC50; 416.4 μg/mL)이 비타민 C(IC50; 19.3 μg/mL)보다는 낮았지만 가장 높은 DPPH free radical 소거 효과를 나타내었다.
Riboflavin 유래 Superoxide 소거 활성 − Riboflavin 유 래 superoxide quenching 활성에서는 대조군 비타민 C가 IC50값이 42.1 μg/mL로 superoxide quenching 활성을 보였 으며, 모과 분획 중 n-butanol 분획은 IC50값이 30.2 μg/mL 로 비타민 C보다 활성이 높았으며 농도의존적으로 superoxide quenching 활성을 나타냈다(Fig. 2).
항산화 효소(SOD, Catalase) 활성 증가 효능 − Xanthine 을 기질로 xanthine oxidase의 효소반응 과정 중에 생성되 는 superoxide anion을 활용하여 SOD의 활성을 측정한 결 과 Fig. 3A에서 나타난 바와 같이 예쁜꼬마선충의 모과의 n-butanol 투여군은 SOD의 활성을 농도의존적으로 증가 시 켰으며, n-butanol 분획 500 μg/mL 투여군은 대조군과 비교 하여 SOD 활성을 약 17.3% 정도 증가시켰다(**p<0.01). 강 력한 반응성을 가진 활성 산소종인 hydrogen peroxide를 체 내에서 대사시키는 catalase의 활성은 Fig. 3B에서 나타난 바와 같이 n-butanol 분획 500 μg/mL 투여군이 대조군에 비
Fig. 1. DPPH radical scavenging effects of the ethanol extract, and its fractions from C. sinensis.
Fig. 2. Riboflavin-originated superoxide quenching activities of the ethanol extract, and its fractions from C. sinensis.
Fig. 3. Effects of the n-butanol fraction of C. sinensis on the antioxidant enzyme activity of wildtype N2 nematodes. (A) The enzymatic reaction of xanthine with xanthine oxidase was used to generate ·O2− and the SOD activity was estimated spectrophotometrically through formazan formation by NBT reduction. SOD activity was expressed as a percentage of the scavenged amount per control. (B) Catalase activity was cal- culated from the concentration of residual H2O2, as determined by a spectrophotometric method. Catalase activity was expressed in U/mg protein. Data are expressed as the mean±S.E.M. of three independent experiments (N=3). Differ- ences compared to the control were considered significant at
*p<0.05 and ***p<0.001 by one-way ANOVA.
해 catalase활성을 약 46.1% 정도 증가시켰다(***p<0.001) (Fig. 3).
활성 산소종(ROS) 감소 효능 − 모과 n-butanol분획의 농 도별 세포 내 활성 산소종의 감소 효능을 알아보기 위해 H2DCF-DA와 선충 내부의 활성 산소종을 반응시켜 형광을 관찰하였다. 활성 산소종 형광의 감소 폭은 대조군과 비교 하여 모과 n-butanol층 500 µg/mL 투여군에서 평균 약 4.5%
(*p<0.05) 활성 산소종을 감소시키는 것으로 확인되었다(Fig.
4).
Oxidative Stress 저항성 증가 효능 − 모과 n-butanol분 획이 선충의 stress 저항성에 미치는 영향은 oxidative stress 조건에서 선충을 배양하여 생존율을 확인하였다. 선충에
oxidative stress를 유도하기 위해서 juglone이 함유된 plate 에서 배양한 대조군 선충의 최고 생존 시간은 22시간 이었 으나, n-butanol분획 500 µg/mL 농도에서는 생존 시간을 31 시간으로 증가시켰다. 대조군의 평균 생존 시간이 13.2±1.0 시간이었으나 500 µg/mL 농도 처리군은 평균 생존 시간을 18.9±1.4시간으로 43.4%를 향상시켰다(***p<0.001)(Fig. 5, Table I).
형질 전환 선충 내 SOD-3의 발현 증가 효능 − 선충 내 에서 oxidative stress에 저항하기 위한 단백질의 증가 여부 를 확인하기 위해서 SOD발현 유전자의 증가 여부를 확인 하였다. SOD-3을 포함한 형질 전환 선충 CF1553을 사용하 여 실험한 결과 CF1553 형질전환 선충에 모과 n-butanol 분 획 500 µg/mL 처리군이 처리되지 않은 선충에 비해 높은 SOD-3::GFP 발현율(27.1%, ***p<0.001)을 보여 주었다(Fig.
6A, 6B).
Fig. 4. Effect of the n-butanol fraction of C. sinensis on the intracellular ROS accumulation of wild-type N2 nematodes.
The worms were incubated with 50 μM juglone for 2 h, and subsequently treated with the fluorescent probe H2-DCF-DA.
Intracellular ROS accumulation was quantified spectrometri- cally at excitation 485 nm and emission 535 nm. Plates were read 30 min for 120 min. Data are expressed as the mean±
S.E.M. of three independent experiments (N=3). Differences compared to the control were considered significant at
*p<0.05 and ***p<0.001by one-way ANOVA.
Table I. Effects of n-butanol fraction of C. sinensis on the oxidative stress tolerance of C. elegans Stress
condition Fraction Mean
lifespan (h)
Maximum lifespan (h)
Change in mean lifespan (%)
Log-rank test 1 mM
Juglone
Control 250 μg/mL 500 μg/mL
13.2 ± 1.0 15.1 ± 1.2 18.9 ± 1.4
22 25 31
- 14.9 43.4
-
*p<0.05
***p<0.001
Mean lifespan presented as mean±S.E.M data. Change in mean lifespan compared with control group (%). Statistical significance of the difference between survival curves was determined by log-rank test using the Kaplan-Meier survival analysis. Differences compared to the control were considered significant at *p<0.05 and ***p<0.001.
Fig. 5. Effect of the n-butanol fraction of C. sinensis on the stress tolerance of wild-type N2 nematodes. For the oxidative stress assays, worms were transferred to 96-well plate contain- ing 1 mM of juglone liquid culture, and then their viability was scored. Statistical difference between the curves was ana- lyzed by log-rank test. All experiments were done in tripli- cates.
고 찰
모과는 전통적으로 인후염, 설사, 염증성 질환 및 각기병 등과 같은 질환에 이용되어 왔다. 본 연구에서 모과의 추출 물은 DPPH radical과 superoxide소거활성 시험에서 농도의 존적으로 강한 항산화 활성을 보여 주었으며, 이러한 결과는 모과의 함유성분으로 알려진 다수의 flavonoid나 procyanidin polymer 등과 같은 polyphenol성 화합물들에 의한 것으로 추정된다.18,19) 모과 추출물의 용매 분획물 중 n-butanol 분 획이 가장 좋은 항산화 활성을 보여 주었으며, 이 n-butanol 분획을 예쁜꼬마선충을 이용하여 선충 내 항산화 체계에 미 치는 영향에 대해 시험하였다. 선충 내 항산화 효소인 SOD 및 catalase의 활성을 확인해 본 결과 모과 n-butanol 분획은 농도 의존적으로 SOD 및 catalase의 활성을 높이는 것으로 확인되어 활성산소종에 의해 야기되는 oxidative stress로부 터 방어하는 기전에 도움이 될 것으로 생각된다.20)또한 juglone으로 발생시킨 선충의 oxidative stress에 대한 저항 능력을 확인한 결과, 같은 oxidative stress 조건하의 대조군 과 비교하여 모과의 n-butanol 분획 처리군의 생존율이 농 도 의존적으로 크게 증가하였다. 이를 확인할 수 있는 기전 중의 하나로써, 형질전환된 GFP-fused transgenic strain CF1553을 이용한 oxidative stress 저항성 확인실험에서 저
항성 지표인자인 SOD-3::GFP 형광 발현율을 측정 한 결과, 형광 발현율이 농도 의존적으로 증가됨이 확인되어 oxidative stress에 저항하는 단백질의 발현이 상당히 증가되었음이 확 인되었다. 미토콘드리아에서 과잉으로 생성되거나, 각종 스 트레스, 세포 손상 등에 의해 생성되는 활성 산소종은 oxidative stress를 야기시키며, 각종 퇴행성 질환을 비롯한 암이나 염증성 질환 등과 관련되어 있음이 알려져 있다.21,22) 모과에서 보고된 apigenin과 같은 항산화 효능이 있는 flavonoid 성분들은 위와 같은 내용과 상당한 관련성이 있 을 것으로 사료된다.23,24) 모과의 n-butanol 분획이 체내의 SOD나 catalase 등의 항산화 효소의 활성을 증가시키고, 활 성 산소종의 축적을 억제하며 oxidative stress에 대한 저항 력을 높여 주는 효능은 암이나 염증성 질환 등의 예방 및 치료 효능과 더불어 항노화나 수명연장 등에 긍정적인 영 향을 줄 수 있을 것으로 추측되며, 차후 단일 물질 수준에 서의 항산화 활성 및 기전의 확인이 필요할 것으로 사료된다.
결 론
모과의 n-butanol 분획은 DPPH radical과, superoxide 소 거활성 시험에서 강한 항산화력을 보여 주었으며, 예쁜꼬마 선충 내의 항산화 효소인 SOD 및 catalase의 활성이 n- Fig. 6. Effect of the n-butanol fraction of C. sinensis on the expression of SOD-3 was determined using transgenic nematodes.
Mean GFP intensity of CF1553 mutant was represented as mean±S.E.M. of the values obtained from 25 to 30 animals per each experiment. The GFP intensity was quantified using image software by determining average pixel intensity. Images of SOD-3::GFP expression of CF1553 worms in the presence or absence of the ethyl acetate fraction. Data are expressed as the mean±standard deviation of three independent experiments (N=3). Differences compared with the control were considered significant at ***p<0.001 by one-way ANOVA.
butanol분획 투여에 의해 농도 의존적으로 높아졌다. 또한 선충 세포내의 ROS의 발생량은 모과 n-butanol 분획 투여 군에서 농도의존적으로 감소하는 효과를 보여 주었으며, juglone을 이용하여 oxidative stress를 측정한 결과 생존율 이 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다. 이와 관련 하여 예쁜꼬마선충의 mutant인 GFP-fused transgenic strain CF1553을 이용하여 oxidative stress 저항성을 확인한 결과 oxidative stress에 저항성이 있는 단백질의 발현이 증가되었 음을 형광발현 정도를 측정하여 확인하였다. 이러한 결과로 볼 때 모과 및 n-butanol분획은 항산화 및 이와 관련된 질 병의 예방 및 치료를 위한 자원으로서의 가치가 충분히 있 을 것으로 판단된다.
사 사
본 연구는 산업통상자원부와 한국산업기술진흥원의 지역 특화산업육성사업(R0004383) 으로 수행된 연구결과입니다.
인용문헌
1. Köse, L. P., Gülcin, I., Gören, A. C., Namiesnik, J., Martinez- Ayala, A. L. and Gorinstein, S. (2015) LC-MS/MS analysis, antioxidant and anticholinergic properties of galanga (Alpinia officinarum Hance) rhizomes. Ind. Crops Prod. 74: 712-721.
2. Panieri, E. and Santoro, M. M. (2016) ROS homeostasis and metabolism: a dangerous liason in cancer cells. Cell Death Dis. 7: e2253.
3. Reina, M. and Martínez, A. (2018) A new free radical scav- enging cascade involving melatonin and three of its metab- olites (3OHM, AFMK and AMK). Comput. Theor. Chem.
1123: 111-118.
4. Dai, Y., Shao, C., Piao, Y., Hu, H., Lu, K., Zhang, T., Jia, S., Wang, M. and Man, S. (2017) The mechanism for cleavage of three typical glucosidic bonds induced by hydroxyl free radical. Carbohydr. Polym. 178: 34-40.
5. Ang, L. Z. P., Hashim, R., Sulaiman, S. F., Coulibaly, A. Y., Sulaiman, O., Kawamura, F. and Salleh, K. M. (2015) In vitro antioxidant and antidiabetic activites of Gluta torquata.
Ind. Crops Prod. 76: 755-760.
6. Karthishwaran, K., Shamisi, S. O. S. O. A., Kurup, S. S., Sakkir, S. and Cheruth, A. J. (2018) Free-radical-scavenging and antioxidant capacities with special emphasis on enzyme activities and in vitro studies in Caralluma flava N. E. Br.
Biotechnology & Biotechnological Equipment 32: 156-162.
7. Jeszka-Skowron, M., Stanisz, E. and De Peña, M. P. (2016) Relationship between antioxidant capacity, chlorogenic acids and elemental composition of green coffee. LWT-Food Sci.
Tech. 73: 243-250.
8. Gallego, M., Mora, L., Reig, M. and Toldrá, F. (2018) Sta-
bility of the potent antioxidant peptide SNAAC identified from Spanish dry-cured ham. Food Res. Int. 105: 873-879.
9. Zhang, M., Zhao, R., Zhou, S., Liu, W., Liang, Y., Zhao, Z., Li, S., Wang, T., Wong, T. and Zhao, H. (2018) Chemical characterization and evaluation of the antioxidants in Chaenomeles fruits by an improved HPLC-TOF/MS coupled to an on-line DPPH-HPLC method. J. Environ. Sci. Health C.
36: 43-62.
10. Nagahora, N., Ito, Y. and Nagasawa, T. (2013). Dietary chi- nese quince polyphenols suppress generation of α-dicarbonyl compounds in diabetic KK-A y mice. J. Agric. Food Chem.
61: 6629-6635.
11. Yoshida, T., Mori, K., Hatano, T., Okumura, T., Uehara, I., Komagoe, K., Fujita, Y. and Okuda, T. (1989) Studies on inhibition mechanism of autooxidation by tannins and fla- vonoids. V: Radical scavenging effects of tannins and related polyphenols on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical. Chem.
Pharm. Bull. 37: 1919-1921.
12. Ginnopolitis, C. N. and Ries, S. K. (1977) Superoxide dis- mutase. I. Occurrence in higher plants. Plant Physiol. Bio- chem. 59: 309-314.
13. Brenner, S. (1974) The genetics of Caenorhabditis elegans.
Genetics 77: 71-94.
14. Mekheimer, R. A., Sayed, A. A. and Ahmed, E. A. (2012) Novel 1,2,4-triazolo[1,5-a]pyridines and their fused ring sys- tems attenuate oxidative stress and prolong lifespan of Caenorhabditis elegans. J. Med. Chem. 55: 4169-4177.
15. Aebi, H. (1984) Catalase in vitro. Methods Enzymol. 105:
121-126.
16. Kim, H. N., Seo, H. W., Kim, B. S., Lim H. J., Lee, H, N., Park, J. S., Yoon, Y. J., Oh, J. W., Oh, M. J., Kwon, J., Oh, C. H., Cha, D. S. and Jeon, H. (2015) Lindera obtusiloba extends lifespan of Caenorhabditis elegans. Nat. Prod. Sci.
21: 128-133.
17. Lee, E. Y., Shim, Y. H., Chitwood, D. J., Hwang, S. B., Lee, J. and Paik, Y. K. (2005) Cholesterol-producing transgenic Caenorhabditis elegans lives longer due to newly acquired enhanced stress resistance. Biochem. Biophys. Res. Commun.
328: 929-936.
18. Nagahora, N., Ito, Y. and Nagasawa, T. (2013) Dietary Chi- nese quince polyphenols suppress generation of α-dicarbonyl compounds in diabetic KK-Ay mice. J. Agric. Food. Chem.
61: 6629-6635.
19. Sancheti, S., Sancheti, S., Bafna, M. and Seo, S. Y. (2010) Antihyperglycemic, antihyperlipidemic, and antioxidant effects of Chaenomeles sinensis fruit extract in streptozo- tocin-induced diabetic rats. Eur. Food Res. Technol. 231: 415- 421.
20. Azarabadi, S., Abdollahi, H., Torabi, M., Salehi, Z. and Nasiri, J. (2016) ROS generation, oxidative burst and dynamic expression profiles of ROS-scavenging enzymes of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and ascorbate
peroxidase (APX) in response to Erwinia amylovora in pear (Pyrus communis L). Eur. J. Plant Pathol. 147: 279-294.
21. Furukawa, S., Fujita, T., Shimabukuro, M., Iwaki, M., Yamada, Y., Nakajima, Y., Nakayama, O., Makishima, M., Matsuda, M. and Shimomura, L. (2017) Increased oxidative stress in obesity and its impact on metabolic syndrome. J.
Clin. Invest. 114: 1752-1761.
22. Wang, Y., Wang, W., Wang, N., Tall, A. R. and Tabas, I.
(2017) Mitochondrial oxidative stress promotes atheroscle-
rosis and neutrophil extracellular traps in aged mice. Arte- rioscler. Thromb. Vasc. Biol. 37: e99-e107.
23. Kim, C. S., Subedi, L., Oh, J. S., Kim, S. Y., Choi, S. U. and Lee, K. R. (2017) Bioactive triterpenoids from the twigs of Chaenomeles sinensis. J. Nat. Prod. 80: 1134-1140.
24. Oku, H., Ueda, Y. and Ishiguro, K. (2003) Antipruritic effects of the fruits of Chaenomeles sinensis. Biol. Pharm. Bull. 26:
1031-1034.
(2018. 3. 9 접수; 2018. 3. 19 심사; 2018. 3. 20 게재확정)
