자동화학분석기용 Mediace RPR 검사를 이용한 매독의 혈청학적 검사
김한성․이영경․강희정
한림대학교 의과대학 진단검사의학교실
Serologic Test for Syphilis by Mediace RPR Test for Chemistry Autoanalyzer
Han-Sung Kim, Young Kyoung Lee, and Hee Jung Kang
Department of Laboratory Medicine, Hallym University College of Medicine, Anyang, Korea
Background : Mediace RPR test for chemistry autoanalyzer, a nontreponemal serologic test for syphilis, was recently introduced in Korea. We evaluated the performance of Mediace RPR test.
Methods : For the evaluation of precision, within-run and total coefficient variations were analyzed. Two hundred and one sera were tested by Mediace RPR test to investigate the distribution of Mediace RPR titers in healthy subjects. Mediace RPR test was compared with RPR card test using 126 sera.
Results : Total coefficient variations for positive control, negative control and pooled sera were 9.1%, 46.6% and 35.3%, respectively. The results of Mediace RPR test in healthy subjects showed 0.44±0.28 (mean±standard deviation) RPR unit (RU), and the positive rate was 3.5%
(7/201). The agreement between Mediace RPR test and RPR card test was 73%. In some of the sera with a result of greater than 4.0 RU, Mediace RPR test showed markedly lower results than that of RPR card quantitative test.
Conclusion: Mediace RPR test has the advantages that it is useful for screening large number of samples and the results are objective. Mediace RPR test can be used as a quantitative test in sera with low titers. Dilution is needed to determine high titers in sera.
Adjusting cutoff for the setting of individual hospital is maybe helpful.
Key Words：Syphilis, Nontreponemal serologic test, Mediace RPR test
교신저자：강희정
우) 431-070 경기도 안양시 동안구 평촌동 896 한림대학교성심병원 진단검사의학과
전화：031)380-3929, FAX：031)380-3934 E-mail：[email protected]
서 론
매독의 혈청학적 검사법은 리포이드성 항원을 사용하는 비트레포네마 검사와 매독균 항원을 사용하는 트레포네마 검사로 분류할 수 있다[1]. 비트레포네마 검사인 Venereal Disease Research Laboratory (VDRL)과 Rapid Plasma
Reagin (RPR) 검사는 매독의 선별 검사로, 역가를 측정하여 치료 경과의 추적 검사로도 이용된다. 매독의 선별검사는 매독이 의심되는 환자뿐 아니라, 수술 예정 환자, 건강 검진, 헌혈자 등에서도 시행되고 있어서 다수의 검체를 처리하기 용이하여야 하나, VDRL과 RPR 검사는 검사 과정을 수기법 으로 시행하여야 하고, 결과의 판독도 검사자가 현미경 또 는 육안으로 직접 확인하여야 하는 단점이 있다. 또한 VDRL과 RPR 검사를 이용한 역가 측정은 검사 과정 중 검 체를 단계적으로 희석하여야 하는 번거로움이 따른다.
최근 자동화학분석기에서 검사 가능한 비트레포네마 검 사인 Mediace RPR 시약(Sekisui Chemical Co., Tokyo, Japan)이 국내에 도입되었다. 이 방법은 라텍스응집법을 이
Table 1. Precision of Mediace RPR test
Mean (RU) Within-run precision Total precision
Range (RU)
SD (RU) CV (%) SD (RU) CV (%)
Positive control 2.48 0.16 6.3 0.22 9.1 2.26-3.21
Negative control 0.40 0.14 35.3 0.18 46.6 0.13-0.75
Pooled sera 0.43 0.11 24.7 0.16 35.3 0.16-0.72
Abbreviations: RU, RPR unit; SD, standard deviation; CV, coefficient of variation.
용하는 방법으로 대량의 검체 처리가 용이하며, 정량적인 검사 결과를 제공한다[2, 3]. 저자들은 Mediace RPR 시약을 이용한 매독의 혈청학적 검사의 유용성 및 사용 경험에 대 하여 기술하고자 한다.
재료 및 방법 1. 대상
건강인 군에서의 측정치의 분포는 성인 건강검진 수진자 혈청 201 검체를 대상으로 조사하였다. 건강인 군은 의무 기록에서 매독을 의심할 만한 특이사항이 없었고, 성별 분 포는 남자 141명 여자 60명이며, 연령은 44.5±7.9세(평 균±표준편차)이었다. Mediace RPR 검사와 기존의 RPR 카드 검사의 비교는 RPR 검사가 의뢰된 검체 중 Mediace RPR 검사에서 0.8 RPR unit (RU) 미만의 결과를 보인 40검체와 0.8 RU 이상을 보인 86 검체를 대상으로 하였 다.
2. Mediace RPR 검사
시약은 Mediace RPR 시약을 이용하였고, Hitachi 7600 자동화학분석기(Hitachi Co., Tokyo, Japan)로 측정하였다.
결과는 RU로 표시되었고, 제조사에서 제시한 양성 판정치 는 1.0 RU였다. 제조사의 지침에 따르면 1.0 RU는 RPR 카 드 검사에서 1배의 희석 배수에 해당하였다. Mediace RPR 검사와 RPR 카드 검사의 비교에서 Mediace RPR 검사의 RU 값은 동일한 검체로 2회 검사하여 그 평균값으로 결정 하였다.
3. RPR 카드 검사
RPR 카드 검사에는 알피알 카드 테스트(아산제약, Korea)를 이용하였고, 제조사의 지침에 따라 검사를 시행하였다. RPR 카드 검사에서 양성을 보인 43 검체 중 추가적인 검사가 가 능하였던 30 검체는 생리식염수로 단계적으로 희석하여 RPR 카드 정량검사를 실시하였다.
4. 정밀도 평가
정밀도 평가에는 제조사에서 제공한 양성과 음성의 관리 물질과 정상인의 혼주 혈청(pooled sera)을 사용하였다. 양
성과 음성의 관리물질과 혼주 혈청을 10일 동안 1일 2회, 1 회 2번씩 측정하여 검사내(within-run) 정밀도 및 총 정밀 도를 평가하였다[4].
5. 고역가 검체 희석 검사
Mediace RPR 검사에서 3.6 RU, 4.3 RU, 7.1 RU, 10.4 RU를 보인 4검체를 생리식염수로 단계적으로 희석하여 다 시 검사하였다.
결 과
1. 정밀도
검사내 정밀도의 변이계수는 양성 관리물질에서 6.3%
(2.48±0.16 RU; 평균±표준편차), 음성 관리물질에서 35.3%
(0.40±0.14 RU), 혼주 혈청에서 24.7% (0.43± 0.11 RU)였고, 총 정밀도의 변이계수는 양성 관리물질에서 9.1% (2.48±0.22 RU), 음성 관리물질에서 46.6% (0.40±0.18 RU), 혼주 혈청 에서 35.3% (0.43±0.16 RU)였다(Table 1).
2. 건강인 군에서의 Mediace RPR 검사 결과
건강인 군 201예의 Mediace RPR 역가는 0.44±0.28 RU (평균±표준편차)의 결과를 보였다(Fig. 1). 제조사가 제시한 양성 판정치인 1.0 RU 이상의 역가를 보인 검체가 7예 (3.5%) 있었으나, 이들 검체들은 모두 RPR 카드 검사에서 음성 결과를 보였다.
3. Mediace RPR 검사와 RPR 카드 검사의 비교 총 126 검체 중 제조사가 제시한 양성 판정치(1.0 RU) 를 사용할 경우 Mediace RPR 검사에서 양성을 보인 검체 는 65 검체였고, RPR 카드 검사에서 양성을 보인 검체는 43 검체였다. 두 검사 사이의 전체적인 일치율은 73%
(92/126)였고, Mediace RPR 검사에서 0.8 RU 미만의 결과 를 보인 40검체와 2.5 RU 이상의 결과를 보인 10 검체는 모두 RPR 카드 검사와 일치한 결과를 보였으나, 0.8-2.5 RU의 결과를 보인 검체들에서는 두 검사 사이의 일치율이 55% (42/76)였다. 불일치한 예의 대부분은(28/34, 82%)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
0.1 0.3 0.5 0.7 0.9 1.1 1.3 1.5 1.7 1.9 2.1 2.3
RPR titer (RU)
Number of individuals
Fig. 1. Distribution of Mediace RPR titers in 201 healthy subjects.
Fig. 2. Correlation between Mediace RPR test and RPR Card Test.
Table 2. Comparison of Mediace RPR results with RPR card results
Mediace RPR RPR card
Total
Reactive Nonreactive
Reactive 37 28 65
Nonreactive 6 55 61
Total 43 83 126
Table 3. Mediace RPR test results with diluted sera Reciprocal of
serum dilution
Measured results / Calculated results (RU)
Case 1 Case 2 Case 3 Case 4
1 3.56 4.26 7.10 10.44
2 2.34 / 4.68 4.54 / 9.08 4.40 / 8.80 6.16 / 12.32
4 0.95 / 3.80 5.04 / 20.16 2.63 / 10.52 3.71 / 14.84
8 NT 6.34 / 50.72 1.52 / 12.16 2.20 / 17.60
Abbreviations: RU, RPR unit; NT, not tested.
Mediace RPR 검사 양성, RPR 카드 검사 음성 결과를 보였 다(Table 2).
Mediace RPR 검사와 RPR 카드 정량검사 결과를 비교 한 30 검체 중 24검체는 Mediace RPR 검사에서 2.5 RU 이하의 결과를 보였고, RPR 카드 검사에서는 1:1 (15검 체) 또는 1:2 (9 검체)의 역가를 보였다. 6검체는 Mediace RPR 검사에서 3.0 RU 이상의 결과를 보였고, 모두 RPR 카 드 검사에서 1:4 이상의 역가를 보였다(Fig. 2). 한 검체는 Mediace RPR 검사의 결과는 4.3 RU이었으나, RPR 카드 검사의 역가가 1:128, 이었고, 다른 한 검체는 Mediace RPR 검사의 결과는 4.9 RU, RPR 카드 검사의 역가가 1:16으로 Mediace RPR 검사의 결과가 RPR 카드 검사의 결과에 비 하여 현저하게 낮았다.
4. 고역가 검체 희석 검사
조사한 4검체 중 3.6 RU를 보인 검체는 희석하여 실시 한 Mediace RPR 검사에서 유사한 결과를 보였으나, 4.3 RU, 7.1 RU, 10.4 RU를 보인 검체는 희석하여 측정한 결과 가 더 높은 결과를 보였다(Table 3).
고 찰
매독의 혈청학적 검사 중 비트레포네마 검사는 가격이 저렴하고, 시행하기가 용이하며, 민감도가 양호하여 선별검 사로 널리 사용되고 있다[5]. Mediace RPR 검사는 일본 에서 개발되어 일본 내 여러 의료기관에서 사용되고 있는 비트레포네마 검사로 객관적인 결과를 얻을 수 있고, 대량 의 검체 처리가 가능한 검사이다[2, 3].
Mediace RPR 검사의 정밀도 평가에서 양성 관리물질 의 총 변이계수는 9.1%였으나, 음성 관리물질과 혼주혈청 의 변이계수가 각각 46.6%와 35.3%의 결과를 보였다. 실 제 표준편차는 양성 관리 물질에서 0.22 RU, 음성 관리물 질에서 0.18 RU, 혼주혈청에서 0.16 RU로 큰 차이가 없 었고, 정량검사 결과의 해석에 큰 영향을 주지 않을 것으로 보인다.
비트레포네마 검사에서는 위양성이 빈번하게 나타나는 것이 단점이다. 급성발열성 질환, 임신, 자가면역 질환, 만성 염증성 질환, 노인 등에서 위양성이 있을 수 있고, 정상인의 1-2%에서도 위양성이 나타난다[6]. 위양성의 경우 항체의 역가는 높지 않아 대부분 1:8 미만인 반면, 임상 증상이 있 는 환자에서는 역가가 높아서 2기 매독에서는 대부분 1:32 이상의 고역가를 보인다[6].
Mediace RPR 검사에서 제조사의 지침에 따르면 1.0 RU 이상의 결과를 양성으로 보고한다. 이 기준을 적용할 경우 건강인 군 201예 중 7예(3.5%)에서 양성을 보였으 나, 7예 모두 2.5 RU 미만의 값을 보였고, RPR 카드 검 사에서 음성이었으며, 의무기록에서 매독을 의심할 특이사 항이 없어서 위양성으로 판단하였다.
RPR 카드 검사와 비교 시 Mediace RPR 검사에서 0.8 RU 미만의 결과를 보인 검체들은 모두 RPR 카드 검 사에서도 음성 결과를 보였고, 2.5 RU 이상의 결과를 보 인 검체들은 모두 RPR 카드 검사에서 양성을 보인 반면, Mediace RPR 검사에서 양성 판정치 주위의 결과를 보인 검체에서는 두 검사간의 일치율이 낮았다. Mediace RPR 검사에서 0.8-2.5 RU의 결과를 보인 검체들에서 RPR 카 드 검사와의 일치율은 55%였고, 이러한 불일치는 위양성에 의한 것으로 보인다.
이번 연구에서 Mediace RPR 검사의 양성 판정치로 1.0 RU를 사용할 경우 기존의 RPR 카드 검사에 비하여 양성예가 약 50% 많았고, 건강인 군에서의 양성률도 3.5%여서 위양성이 빈번한 것으로 보인다. 매독 선별 검사 에서 위양성이 증가하면 불필요한 확진검사를 실시하여야 하고, 환자에게 심리적인 불안감을 조성할 수 있는 문제가 있다. 반면, 증상이 없는 잠복(latent) 매독에서 비트레포 네마 검사에서 항체의 역가가 높지 않을 수 있고[6], 양성 판정치를 낮출 경우 위음성이 증가할 가능성이 있다.
Mediace RPR 검사를 시행하는 의료기관은 검사 시행 전 충분한 평가를 거쳐서 검사 대상 환자의 분포 등을 고려하 여 양성 판정치를 재조정하여 사용하는 것이 적절할 것으로 생각한다.
Mediace RPR 검사에서 2.5 RU 미만의 결과를 보인 검체는 RPR 카드 정량검사에서 모두 1:1 또는 1:2의 역 가를 보였으므로, 치료 효과의 판정을 위한 추적 검사시 Mediace RPR 검사에서 낮은 RU 값을 보일 경우 번거로운 검체 희석 과정을 피할 수 있을 것으로 생각한다. Mediace
RPR 검사에서 3.0 RU 이상을 보인 검체들을 RPR 카드 정 량검사에서 모두 1:4 이상의 역가를 보였으나, 수치간의 상 관성은 높지 않은 것으로 보였다(Fig. 2). 제조사의 지침서 에는 8.0 RU까지 직선성이 유지되는 것으로 설명되어 있 으나, 이번 연구에서는 4.0 RU 이상의 결과를 보인 검체 중 일부는 RPR 카드 정량검사에 비하여 현저하게 낮은 RU 값을 보였고, 고역가의 검체를 희석하여 검사한 결과, 항체과잉(prozone) 현상이 의심되었다. 매독의 혈청학적 검사에서 2기 매독 환자 등 항체의 역가가 높은 경우 항체 과잉 현상이 검사에 영항을 줄 수 있는 것으로 알려져 있다 [6, 7]. Mediace RPR 검사로 항체의 역가 측정을 하는 경우 4.0 RU 이상의 결과를 보인 검체는 희석하여 그 결 과를 확인하는 과정이 필요할 것으로 생각한다.
매독의 선별검사에 Mediace RPR 검사를 이용할 경우 대량의 검체를 빠른 시간내에 처리할 수 있었고, 정량검사 로 이용할 경우 낮은 역가를 보이는 검체에서 번거로운 검 체 희석 과정을 줄일 수 있는 장점이 있었다. 제조사가 제 시한 양성 판정치를 이용할 경우 위양성 결과가 다수 발생 하였고, 의료기관의 특성에 맞게 양성 판정치를 적절히 조 정할 필요가 있을 것으로 생각한다.
요 약
배경 : 최근 자동화학분석기에서 검사가 가능한 매독의 비트레포네마 혈청학적 검사인 Mediace RPR 검사가 국내 에 소개되었다. Mediace RPR 검사에 대해서 평가하고자 하였다.
방법 : 정밀도 평가는 검사내 변이계수와 총 변이계수를 조사하였다. 건강인 군에서의 Mediace RPR 검사 결과의 분포는 201 검체를 대상으로 조사하였다. Mediace RPR 검사와 Rapid Plasma Reagein (RPR) 카드 검사의 비 교는 126 검체를 대상으로 실시하였다.
결과 : 정밀도 평가에서 총 변이계수는 양성 관리물질에 서 9.1%, 음성 관리물질에서 46.6%, 혼주혈청에서 35. 3%였 다. 건강인군에서의 Mediace RPR 검사는 0.44± 0.28 RPR unit (RU)의 결과를 보였고, 7검체(3.5%)에서 양성을 보였 다. Mediace RPR 검사와 RPR 카드 검사의 비교에서 두 검 사 결과의 일치율은 73%였다. Mediace RPR 검사의 결과는 RPR 카드 정량검사의 결과에 비하여 4.0 RU 이상의 일부 검체에서 현저하게 낮은 값을 보였다.
결론 : Mediace RPR 검사는 대량의 검체를 빠른 시간 내에 처리할 수 있고, 객관적인 결과를 얻을 수 있다. 낮은 역가를 보이는 검체에서는 희석 과정 없이 정량적인 결과를 얻을 수 있으나, 고역가의 검체에서 정확한 정량검사를 위 해서는 희석하여 검사하는 것이 필요하다. 의료기관의 특성 에 맞게 양성 판정치를 적절히 조정하는 것이 효과적일 것 으로 생각한다.
참고문헌
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