사상체질의학회지
J. of. Sasang. Const. Med
Vol. 12. No 1. 2000
少陽人 忍훈麗地骨皮漫이 中消合m 포에 미II 는 影響
서용배* . 송정모*
Effecs of Soyangin Indongdeungjikolpitang
on the Complication of Diabetes
Sea Yong-bae . Song Jeong-mo
Dep!. 이 Oriental medicine, Graduate School 이 Woo Suk University
The purpose of this research was to investigate the effects of Indongdeungjikolpitang water exrract(lJTE)
on the complication of diabetes. IJTE did not affect the level of blood glucose in 외lox an- or
srreptozotocin-induced hyperglycemic mice, but inhibited the motility of gastrointestine. IJTE inhibited the
writhing syndrome induced by acetic acid, the permeability of evans blue into peritoneal cavity induced by
acetic acid, the paw edema induced by histamine, and the formation of cotron pellet granuloma. IJTE
increased the cell viability of thymo< 까 es and splenocytes. IJTE decreased the release of r -interferone( r
-IFN) and interleukin-2(1L-2), but did nor affect the release of interleukin-4(1L-4) from murine thymocytes.
IJTE increased the release of IL-4 and decreased the release of rumor necrosis factor- a (TNF- a) and
interleukin-l β (lL-l(3), but did not affect of r -IFN and IL-2 from murine splenocytes. IJTE decreased the
release of TNF- a and IL-l(3 from murine peritOneal macrophages. IJTE decreased the production of niric
oxide(NO) from murine peritoneal macrophages and increased the phagocytic aCtivity of murine peritoneal
macrophages. These results suggest that IJTE has an anti-inflammatory aCtion via the inhibition of TNF- a,
IL-l(3 and NO production from immune cells.
초 록
少陽A.i 忍양顧地骨皮場이 中消 合뺨효에 미치는 影響을 살펴보고자 하였고 結果는 다음과 같다.
l 陽管運動을 柳制하였다
2. Acetic acid 에 의 한 wrirhing syndrome 을 柳制하였다
3. Evans blue 에 의 한 毛細血管透過性을 柳制하였다 .
4. Hisramine 에 의한 急、性足浮睡을 柳制하였다
* 우석대학교 한의과대학 사상체짚의학교실 교신저자 : 서용배 주소)
전북 전주시 완산F 다가동 I 가 76-3 연수당한의윈 Tel) 063-283-6636
- 서용배 外 1A: 少빼A&. ‘ii!& 읍i; 옳이 <j> 消 合{III! 에 미치는 톨-
5. Cotron pellet 에 의한 肉흉睡 形成을 柳制하였다 .
6. 腦線細뼈 및 牌훌훌細뼈의細뼈生存率올 t 홉 Dr! 시켰다.
7. 뼈線細뼈로부터
'Y -IFN 및 IL-2 의 分泌를 柳制하였다 .
8. 牌홉細뼈로부터 IL-4 의 分泌는 增加시켰으나 , TNF- a 및 IL-1 f3 의 分泌는 柳制하였다 9. n흉脫 大食細뼈로부터 찌F- a, IL-1 f3 및 nitric oxide 의 分泌를 柳制하였다 .
10. 隨뾰 大食細뼈의 lucigenin chemiluminescence 및 FITC-conjugared E. coli engulfment 를 l足進하였다.
이상의 寶驗 結果 IJTE 는 題管運動을 柳制하였으며 , 鎭痛 및 抗찢作用올 나타냈고, 이들 작용은 免훌細 뼈로부터 TNF- a, IL-1 β 및 nitric oxide 의 生成올 柳制하기 때문인 것으로 추정된다 . 따라서 이러한 擬뼈 에 의하여
忍權地骨皮揚은
中消 合따효의 하나인 효을 柳制하는 데 有效한 것으로 思料된다.L 績 훌훌
忍장顧地骨皮楊은 李濟馬I)의 『東醫휩世保元』 중 r少陽A 몹受熱짧熱病論」에 수록된 新定 處方으로,
少陽A의 消1홉 중에서 中消에 사용하는 것으로 되
어 있다 .
消獨은 廳保病을 포필하는 넓은 의미의 病證으로, 역 대의 뽑家들에 의히여 三消로 區分되었다ι 13) 李
1)
는 少陽A 消1홈은 마음이 寬遠關達하지 못하고 階固隊 小하기 때문에 온다고 하여 그 원인을 性情의 偏急 현상에서 찾고 있으며,J: 消에는 핸隔散火楊 , 中消 에는 忍쪽顧地骨皮楊 , 下消에는 熟地黃좀흉楊을 治 方으로 제시하였다 .
中消는 ‘消줬善Qrl, 軟食倍常’ 혹은 ‘善食而홈’ 둥 을 主효으로 하는 당뇨병의 한 유형이라 할 수 있
는데2.11) ’ 李
1)
는 합병증으로 樓펌, 腦펌背覆, 中滿鼓 眼이나 失明동의 眼病이 발생한다고 하고, 여기에 危亦林11) 의 ‘忍쪽麗을 多用한다’는 내용을 예로 들 어 말함으로써 忍쏟顧地骨皮楊의 처방목적이 단순 히 消홈을 치료하는데만 있는 것이 아니고 消뼈로 인한 합병증을 다스리고자 하는 데에도 목적이 있 음을 시사하고 있다
忍캉顧地骨皮楊에 대한 실험적 연구로, 崔12) 는 허loxan 투여 高血廳 白鼠에 대하여 少陽A 消휩에 사용하는 w:n 뭘散火楊, 忍、쪽顧地骨皮場, 熟地黃줌흉 楊이 高血廳의 개선에 유효한 작용을 하고 있으며, 특히 忍장顧地骨皮楊은 廳民에 수반되는 高服血효 을 개선시키는데 유효하다고 하였다. 또한 高13)는
srreptozorocin 을 투여한 高血廳 白鼠를 대상으로 한
實驗에서 忍쪽훌훌地骨皮楊의血廳降下憐能올 입증할 수 있었다고 하였다.
著者는 이와는 다른 관점에서 忍쪽麗地骨皮楊이 消홈의 합병증으로 나타나는 樓펌둥의 병증에 어떠 한 작용을 미칠 것인지 살펴볼 필요가 있올 것으로 생각하여 鎭痛效果와 消갖作用, 그리고 免授作用 등 을 중심으로 忍、캉顧地骨皮楊이中消의 合뺨효에 미 치는 影響을 살펴보고자 하였다
진통작용을 알아보기 위해 acetic acid 에 의한 WrI-
떠 ng syndrome 며數 측정을 , 소염작용을 관찰하기
위해 毛細血管透過性 , 急性足浮睡 및 肉흉睡形成에 관한 실험을 실시하였고, 연역작용을 관찰하기 위해 뼈線細뼈, 牌鷹細8힘 및 8흥뺨 大食細 8힘의 증식 ,
cytokine 의 분비 및 負食能에 대한 실험을 실시하였
다. 그리고 血廳에 미치는 영향을 알아보기 위하여
streprozorocin 및 alloxan 에 의 한 高血廳 유발 후 血廳
降下作用을 측정하였고 , 活性벚의 陽內 이동거리를 측정하여 陽管運動의 억제효과를 살펴 보았다
著者는 이와 같은 실험을 통하여 少陽A 忍、쪽顧 地骨皮楊의 中消 合f휴효에 미치는 影響을 살펴 본 바 有意한 결과가 있어 보고하는 바이다 .
II. 힐힘재료 및 땅법
1. 재료
1) 동물
본 실험에 사용한 생쥐는 면역세포 실험시에는 6-8 주령 BALB/c 계 수컷올 , 기타 실험에서는 20::1::
2g IC 뼈 수컷올 사용하였으며, 흰취는 150-180g
- 187 -
Prescription of Indongdeungjikolpitang
¾|!J!T uÖÌT ‘ÍÖÌ(g)
忍 훌 l¹niwat Fo/i"", l’
山茶횟 umiat Cbrrex 7.5
It!!š¨ Lycii RAdicil Cbrrex 7.5
賣 Ji CiJpliµ0j RhiLJiI,u 7
'lli fl3 Phe¼>tInlliri Cbrrex 3.75
:t 흉 Scrophu!ariat ºulix 3.75
줌 흉 S<iphorat Radix 3.75
生地 Remaniat Rmlix CruduI 3.75
w 많 A nema".htnae Rhizoma 3.75
톨 T Gar.ÌiatFruaÉ 3.75
}ÅÐfe1 Lycii Fruct.É 3.7
!iN† R¿i FructÉ 3.7
휴꺼 :Jf Schizo,ltp.¹tat Herba 3.7
防 I!\ Sapolhnikoviat Radix 3.75
金銀?E Lonicerat F/ol 3.75
To0al amount 7
- 사상찌짙의학회지 쩌 12 권 채 1 효 mJ -
SD 계 수컷을 대한실험동물에서 구입하여 , 온도 22
:t2'C, 습도 55:f: 5%, dark/light 12 시간의 조건하에서
l주일 이상 실험실에 적웅시킨 후 사용하였으며, 고
형사료와 물을 자유스럽게 섭취하도록 하였다 .
2) 시약 및 기구
실험에 사용한 시약은 Dulbecco ’s mod 피ed Eagle ’s
medium{DME), penicillin-streptomycin, D 띠becco ’s phos-
phate buffered saline(DPBS-A), lipopolysaccharide(LPS),
lucigenin, 3-{ 4- 5-<1 따1ethyl-thiazol-2yl]-2, 5-diphenyltetra-
zolium bromide(MTI), )'-incerferon( r -I Fl-l), zymosan,
S띠fanilamide, N-naphthylethylenediamine' 2HO 은 Sigma
Co. 에서 , RPMI 1640, fet 에 bovine serum(FBS),
따psm 은 Gibeo Co. 에서 , mouse r-interferon( r-I 애) immuno-
assay kit, mouse incerleukin-2(1L-2) immunoassay kit,
mouse interle 띠<in-4(1L-4) immunoassay kit, mouse tu-
mor necrosis factOr- a (TNF- a) immunoassay kit, incer-
leukin-I {3 (lL-1 (3) immunoassay kit 는 R&D Co. 에서 ,
FITC-conjugated E. coli K-12 bio-particles 는 Molecular
Probes Co. 에서 구입하여 사용하였으며 , 기타 시약은
cell culture 용 및 1 급 시약을 사용하였다. 사용기구는
culrure flask(Nunc), multi-well plate(96-well, 24-well,
Costar), microplate-reader (Dynatech MR5000), C02
incubator (Vision scientific Co.), micrometer(Mitutoyo
Co.), blood glucose test meter(su 야r glucocardTM II,
Arkray Co.), inverted microsco 야(Nikon Co.), freeze dry
apparatus (llsin Co.), luminometer(Berthold 96LP) 동을
사용하였다.
2. 'l:J 밸
1 ) 검액의 조쩌|
본 실험에 사용한 忍쪽顧地骨皮楊의 처방 구성은
『東홈홉世保元\) 어l 준하였으며, 사용한 약재들은 又E 大學校附屬 韓方病院에서 정선된 재료를 구입 하여 사용하였다.
처방 3 첩 분량을 중류수 1,500mJ 로 2 회 가열 추 출한 후 , 여과하여 여액을 rota η evaporator 로 농축한 다음, freeze dryer 로 동결건조하여 분말 45g 을 얻어 (수득율 18.1%, 以下 lJTE 라 합) 동물실험시에는 생
리식염수에 용해시켜 사용하였다.
2) 혈당 실험
(1) StreptozotocinOiI 의한 혈당 강하 실험
생쥐를 24 시간 절식시킨 후 srreptOzotocin(S1Z) 45
m 때<g 을 citrate buffer solution(pH 4.5) 에 용해시켜 꼬
리정맥에 주사하였으며 , 사료는 S1Z 투여 후부터 공급하였다. 24 시간 후에 혈당을 측정하여 수치가
300mg/dl 이상인 생쥐 10 마리를 l 군으로 하여 실험
에 사용하였다\4.11) 대조군에는 생리식영수만을 , 실 험군에는 IJTE 500m 방<g 을 l 일 l 회씩 정해진 시간 에 경구투여 하였고 , 약물 투여 다음날부터 7 일간 매일 약물을 투여하기 전에 혈당을 혈당측정기로 측정하였다.
(2) 때loxan 에 의한 혈당 강하 실험
생쥐를 24 시간 절식시킨 후 외lox an 75mg/kg 을 꼬 리정액에 주사한 다음 , 48 시간 후에 꼬리에서 채혈 하였다. 혈당올 측정하여 수치가 300mg/ml 이상인 생쥐 10 마리를 l 군으로 하여 실험에 사용하였다\8) 대조군에는 생리식염수만을 , 실험군에는 IJTE 500 m 때<g 을 l 일 l 회씩 정해진 시간에 경구투여 하였고 ,
- 서용배 外 1,A. :少빼A 忍ξ81& 율lU 이
'*'
消 合빼1I에 미치는 W톨-
약물 투여 다음날부터 7 일간 매일 약물올 투여하기 전에 혈당을 혈당측정기로 측정하였다.
(3) 당부하 실험
생쥐 I 군을 10 마리로 하여 24 시간 절식시킨 후
IJTE 500mg/kg 을 l 희 경구투여하고 l시간 후에 dex-
trose 2g/kg 올 경구 투여한 다음, 30, 60, 120 및 180
분에 혈당을 측정하였으여 , 대조군에는 생리식염수 만올 투여하여 혈당올 혈당측정기로 측정하였다.
(4) 장관운동 실험
생쥐 l 군을 10 마리로 하여 24 시간 절식시킨 후 대조군에는 생리식염수만을, 실험군에는 IJTE 500
mg/kg 을, 실험대조군에는 atropine sulfate IOmg/kg 을
l회 경구투여하고 10 분 후에 활성탄을 0.5% methyl
cellulose 에 현탁시켜 10% 현탁액을 만들어 경구투여
한 후 10 분 후 경추탈골 하여 치사시킨 다음, 장 전 체의 길이에 대한 활성탄의 이동 거리를 측정하여 억제효과를 평가하였다 19)
3) 진톰작용 실험
생쥐 8마리를 1 군으로 하여 acetic acid 에 의한
writhing syndrome 을 Whitcle20) 의 방법 에 따라 측정 하
였다. 대조군에는 생리식염수만을 , 실험군에는 IJTE
500mg/kg 을, 실험대조군에는 aminopyrine 100mg/kg
을 각각 경구투여하고 , I 시간 후에 0.7% acetic acid
10ml/kg 을 복강내에 주사한 다음 10 분 후부터 10 분
간의 writhing syndrome 의 횟수를 측정 하였다 .
대조군의 writhing syndrome 횟수- 실험군의 writhing syndrome 횟수 억제율(%)= uu n un X 100
대조군의 writhing syndrome 획수
4) 소염작용 실험 (1) 모세혈관투과성 실험
생 쥐 8 마리 를 l 군으로 하여 evans blue 에 의 한 모 세혈관투과성을 Shimomura21) 의 방법에 따라 측정하 였다. 대조군에는 생리식염수만을, 실험군에는 IJTE 500m 밍kg 을, 실험대조군에는 sodium salicylate 300 m밍kg 을 각각 경구투여하고 , I시간 후에 1% evans
blue 5mVkg 올 꼬리정맥에 주사하였다 . 주사 후 즉시
0.6% acetic acid IOmVkg 올 복강내에 주사하고 , I시
간 후에 복강액올 생리식염수 5ml 로 세척하여 회수 한 다음, 3,000rpm 에서 5 분간 원심분리하였다. 상등 액올 취하여 620nm 에서 홉광도를 측정한 다음 미리 작성한 검량선에 의해 유출된 evans blue 의 양을 비 색정량하였다 .
대조군의 evans blue 유출량 - 실험군의 evans blue 유출량 억제윌 %) = --- & & x 100
대조군의 eva 따 blue 유출량
(2) 급성 足浮흩 실험
생쥐 8 마리를 l 군으로 하여 histamine 에 의한 급 성 足浮睡을 허 둥23) 의 방법에 따라 측정하였다 . 대 조군에는 생리식염수만을 , 실험군에는 IJTE 500
mg/kg 을 경구투여하고 , I 시간 후에 좌측 足에 기염
물질로 h잉tamine-0.9% s외 10 어30 μg/20 μI) 을 足廳 피 하에 20 μl/hind paw 를 주사하였다. 주사 직전, 직후 15 분 , 30 분, 60 분, 120 분, 180 분에 足 두께를 mlcro-
meter 로 측정 하였다 .
(3) 육아증형성 실험
흰쥐 5 마리를 l 군으로 하여 육아종형성올 Hara
24)
의 방법에 따라 측정하였다 . PentObarbital 30mg/kg 을 복강주사하여 흰쥐를 마취시킨, 동부위 정중선을 따 라 털을 제거하고 피부를 절개하여, 양측 견갑부 피 하에 미 리 중량읍 측정(
약 35-40mg) 한 멸균 cortOn
pellet 2개를 삽입하고 봉합한 다음, 대조군에는 생
리식염수만을, 실험군에는 IJTE 500mg/kg 을, 실험대 조군에 는 phenylbutazone 40mg/kg 을 l 일 l 회 씩 5 일 간 각각 경구투여하였다 . 6일째 흰쥐를 마취하여
cortOn pellet 주위에 증식한 육아조직을 조심스럽게
분리한 후 60.C 에서 항량이 될 때까지 건조시켜 중 량을 측정하였다 .
대조군의 육아종 중량 - 실험군의 육아종 중량
억제율{%) = ‘ n n X 100
대조군의 육아종 중량
189 -
- 사상채짙의학회지 쩌12권 쩌 1 효 ;ro) -
5) 연역 싫험
(1) 세포 분리 및 배양 실험
생쥐의 흉선세포 및 비장세포 분리는 Wysockim 및 Mize! 둥26) 의 방법을 이용하였다 . 생쥐 5 마리를 l 군으로 하여 IJTE 500m 밍kg 을 l 일 l 회씩 7 일간 경 구투여 하였으며 , 8 일째 생쥐를 경추탈골하여 치사 시켰다 . 적출한 흉선 및 비장을 D띠becco ’s phosphare
buffered s외ine A(DPBS-A) 를 넣은 perri dish 에서 잘게
분쇄하고 멸균된 stainless mesh 로 여과하여 세포부유 액을 얻은 후, DPBS-A 로 2 회 세척한 다음il,500rpm 에서 10 분간 원심분리), 흉선세포 및 비장세포 부유 액으로 하였다.
대식세포의 분리는 IJTE 500mg/kg 올 l 일 l 회씩 7 일간 경구투여 하였으며 , 약물 투여 4 일째 생쥐 복 강에 3% rhioglycollare 2m! 를 주입하고 , 8 일째 경추 탈골하여 치사시 킨 다음 , 복강에 cold PBS IOml 를 넣어 복강세포를 수집하였다. 수집한 세포를 4"<: 에
서 1,300rpm 으로 10 분간 원심분리하고 RPMI 1640
배지로 2 회 세척 후 , 직경 120mm 야rri d빼어l 분주 하여 C02 incubaror 에서 배양시키고 2시간 후에 부 착되지 않은 세포를 제거한 다음, 부착한 대식세포 를 cell scraper 로 분리하여 사용하였다 . 생쥐 흉선세 포 , 비장세포 및 macrophage 는 RPMI 1640 배지를 사용하였으며, 배지에는 10% FBS 와 peOl 디llin-sere-
promycin(lOOunirs/ml, 100 μglm\) 올 첨가하여 사용하
였다
(2) 세포증식능 측정 실험
동일한 방법으로 분리한 흉선세포 및 비장세포의 중식에 미치는 IJTE 의 영향은 MTT 법27‘28)으로 측정
하였다. 96-well plare 의 각 well 에 분리한 흉선세포
및 비장세포를 각각 RPMI 1640 배지로 희석하여,
1.2x 106 c리Is/ml 농도로 분주하고 흉선세포에는 con-
canavalin A(Con A) 5 μg/m! 를 첨가하고 , 비장세포에
는 lipopolysaccharide(lPS) 10 μg/ml 를 첨가한 후, 3
7"<: 의 C02 incubaror 에서 48 시간 배양하되, 배양 종
료 4 시간 전에 M π 시약을가하였다. 배양 종료시 O.IN HCI 에 용해시킨 10% SDS 100 μl를 각 well 에 첨가하고 차광상태에서 18 시간 더 배양한 후, 발색 된 각 well 의 홉광도를 microplare-reader 로 570nm 에서 측정하여 , 대조군의 홉광도에 대한 실험군의 홉광도
를 백분율로 환산하여 세포생존율을 측정하였다.
(3) 세포활성물질 측정 실험
통일한 방법으로 분리한 흉선세포 및 비장세포를 각각 2xlO7 cells/ml 로, 복강 대식세포는 Ix 107 cells/m!
로 조제하여 , 96 well plare 에 200 μl씩 분주한 후 ,72 시간 동안 CO2 incubaror 에서 배양하였다 . 배양액올 원심분리(2,500 rpm, 5分,4 °C) 한 다음, 상동액 50 μl 룹 취하여 흉선세포에서 분비되는 r -IFN, IL-2 및 IL-4 의 양을 , 비장세포에서 분비되는 r -IFN, IL-2,
IL-4, TNF- a 및 IL-I fl 양을, 대식세포로부터 분비
되는 TNF- a 및 IL-I β 양올 각각의 mouse unmu-
noassay kir 를 이용하여 측정하였다. 즉 상둥액 50 μl
에 assay diluent 50 μl를 혼합하여 실온에서 2 시간 동안 incubarion 한 후 4 회 세척하였다 . 세척 후 anti-
mouse cyrokines conjugare con cent rare 100 μl를 가하여
실온에서 2 시간 incubarion 한 후 , 5 회 세척하고 sub-
srrare solurion 100 μl를 혼합하여 30 분 동안 실온에
서 incubarion 한다 Srop solurion 100 μl를 가하여
450nm 에서 microplare reader 로 홉광도블 측정한 후,
미리 작성한 검량선에 의해 cytOkines 의 양을 환산하 였다
(4) Nitric oxide 측정 실 험
동일한 방법으로 분리한 대식세포를 24 well plare 에 well 당 2x 106 cells 을 분주한 후, 대식세포로부터 생성되는 nirric oxide(NO) 의 양올 Griess 법29) 으로 측 정하였다. 각 well 에 LPS Iμg/ml 와 r -IFN 25
unirs/ml 를 첨가하여 24 시간 배양한 후, 배양액 100
μl와 Griess 시왜 1% s띠£anilamide + 0.1 % N-naph-
rhylenediamine 2HCI + 2.5% HjP04) 100 μl를 혼합
하여 96 well module 에 넣고 , 37"<: 에서 10 분간 방치 한 후 570nm 에서 microplare- reader 로 홉광도를 측정 하여 미리 작성한 NaN02 의 검량선에 의해 NOr 의 농도를 환산하였다 .
(5) Lucigenin chemiluminescence 측정 실험
동일한 방법으로 분리한 대식세포를 2x 106 cells/ml 가 되도록 DME(wirhour phenol red, 0.34g/L NaHC03, 2.6g ι HEPES, pH 7.2) 에 부유시켜 실험에 사용하였 다 Lucigenin 용액 의 제조는 IOml 의 DPBS-A 에 용해
- 서용배 外 1),.: 少뼈A 忍g 뺑톰!U! 이
'*'
消 合빼료에 미치는 %톨-
한 후, 여과 멸균하여 -20'C 에서 보관하면서 사용하 였다{stock solution). Lucigenin stock solution 은 사용하 기 직전에 DME 배지에 1/10 로 희석하여 사용하였 다 Chemiluminescence 측정은 luminometer 를 이용하 여 37'C 에서 측정하였다 .예.31) 측정용 microplate
(white) 의 각 well 에 준비된 대식세포 세포부유액 5011
l와 lucigenin 용액 501li 를 넣고 37'C 에서 15 분간 전 처리한 후, 5 분 간격으로 ω분 동안 chemilumi-
nescence 를 측정하였다.
(6) E. coli engulfment 측정 실험
복강 대식세포의 식작용올 확인하기 위하여 FITC-
conjugated E. coli particles 를 Hanks' balanced s허 ts
solution(HBSS) 에 현탁시켜 sonification 한 후 사용하
였으며 , trypan blue 는 citrate buffer{pH 4.4) 에 250 μ g/ml 농도로 용해하여 사용하였다32) 분리한 대식세 포를 RPMI 1640 배지로 5x 10) cells/ml 되도록 조정한 후, 100 μl를 96well 에 분주하고 l시간 동안 CO2
incubator 에서 배양하였다 배양 후 배지를 제거하고 ,
sample 10 μglml 및 E. coli 현탁액 25 μl 가하여 l 시
간 동안 배양한 다음 , 배양액을 제거하고
extracellular fluorescence 를 억제하기 위해 trypan blue
100 μl를 첨가하여 inverted fluoromicroscope 로 관찰하 였다.’”
6) 톨계처리
모든 실험 결과들은 mean:!:SE 로 나타내었고 통 계처리는 stUdent t-test 를 실시하여 P<0.05 를 기준으 로 하여 유의성 여부를 판정하였다.
川. 필혐 결과
1. StreptozotocinOiI 의한 얼당 감아 효과
정상군의 혈당치는 98.5:!:3.7mgl 배 이었으며 , SlZ 를 투여한 대조군의 혈당치는 SlZ 투여 24 시간후에
416.3:!: 11.9mg/dl 로 증가하였고 , 7 일까지 약간 감소
하는 경향을 나타내었으며 ,I]TE 투여군은 대조군과 별 차이가 없거나 오히려 증가하는 현상을 나타내 었다{Table I).
Table I. Effect of Indongdeungjikolprtang water extractOJTE)
on blo 여 glu ∞se in streptozotocin-induced
diabetes mi∞
Blo< 성 suar levcl(m!!i'dJ) Group
I day 2 day 3 day 4 day ’ day 6 day 7 day
98.5 90.3 91.7 97.2 98.1
NormaJ
::t3.7 ::t4.2 ::t5.8 ::t3.5 ::t2.9
96.5 95.5
:t4.1 ::t3.3
416.3 381 377.5 354.8 343.8 찌6.2 358.8
Control
::t11.9 :t19.1 :t19.3 :t17.3 :t 2 1.9 :t31.7 :t38.6
I]TE 420.6 402.3 388.2 413.6 408.3 411.6 407.6
:t 18.5 :t 19.2 :t 16.8 :t24.7 :t 34.9 :t 18.5 :t 23.7
I]TE(500 mg/kg) was adminisrered p.o. once a day for 7 days and
srreprozoricin(45 mψkg) was injected i.v. ar rhe Isr day. The dara
represencs rhe mean::t SE of 10 따ceo
2. Alloxan 에 의안 앓당 강아 효과
정상군의 혈당치는 105.5 :!:4.7mgi 배 이었으며 , 외-
loxan 를 투여한 대조군의 혈당치는 alloxan 투여 48
시간 후에 316.3:!: 13.2mgl, 배로 증가하였고 , 7 일까지 약간 감소하는 경향을 나타내었으며 , I]TE 투여군은 대조군과 별 차이가 없거나 오히려 증가하는 현상 올 나타내었다{Table II).
Table II. Effect of IJTE on blαxl glucose in alloxan-
induced diabetes mice
Blα닝 suar levcl(m,I!/ 매) Group
2 day 3 day 4 day 5 day 6 day 7 day
57
m잭
빼
N 1003:t4.2
108.5 :t31 99.7
::t4.8 l!2.2 ::t3’
l! ’ l :t4.9
316.3 321.2 327.5
Control
:t13.2 :t15.1 :t18.2
312.4 3058 290.2
:t15.8 :tl1.3 :t18.7
!JTE 320.3 342.3 368.1
:tl ’3 :t16.7 :t15.9
358.9 333.3 331.6
:t21.4 :t14.5 :t16.4
I]TE(500 mψkg) was administered p.o. once a day fot 7 days and
allox 뼈75 mg/kg) was injected i.v. at the 1st day. The dara
represenrs the mean ::tSE of 10 mice
3. 당부아 억제 효과
24 시간 절식시킨 정상군의 혈당치는 52.2:1::2.5
mg/dl 이었으며 , dextrose 를 투여한 대조군의 혈당치
는 dextrose 투여 30 분 후에 161.2:1:: 18.2mgi 배로 증가 하였고, 시간이 경과함에 따라 점차 감소하여 3 시간 후
191 -
0 30 60 120 180 min,
Control 52.2 161.2 II 4 69.2 56.0
:t2.5 :t 18.2 :t7.2 :t 3.2 :t3.3
IJTE 320,3 150.8 liO.6 68.8 60,2
:t 15.3 :t 11.0 :t7,8 :t6.0 :t5.1
Group Dose
Movement of active carbon(%)
(mÈkg)
Control loo.0:t 3 ’
UTE 500 72.7:t 2.3*
Arropine
10 59.7 :t4.6*
sulfate
Dose No. of writhing
Group (m¼kg,
p.o.) syndrome
Control 24.5:!: 1.8
UTE 500 8.8:t 1.5*
Aminopyrine 100 12.0:t2.1*
Dose Leakage of evans
Group (m¼kg,
p.o.) blue{ μg/mI)
Control 12 ’ :to,5
IJTE 500 ’6 :t 0.6*
Sod, salicylate 300 4.4 :to. 5*
- 사상채질의학회지쩌12권 재 1 호 LroJ -
에는 거의 정상치로 회복되었다. IJTE 투여군은 대조군 과 별 차이가 없었다{Table III).
Table 111. Effect of IJTE on bl∞d glucose in dextrose-
administered mice
Blαxi suar lcvei(m, μ/dl)
Group
Dextro 잊(2 glmo 야0) was 뼈ministc πd p.o. I hour after IJTE(5oo
m 잉생) was admin 잉【ered p.o. The data represents the mean:t SE of
10 mice.
4. 장관 끌톨 억제 효과
대조군의 장관 운동 거리를 100% 로 하였을 때, IJTE 투여군은 72.7 ::t2.3% 이었으며 , 실험대조군인
arropine sulfate 투여군은 59.7 ::t4.6% 로 대조군에 비
해 감소하였다 {Table IV)
Ta 미e IV. Effect 이 IJTE on gastrointestinal motility
Acrive carbon was admin ‘stered p.o. 30 min. after IJTE(500 m 바엄)
was administered p.o, The data represents the mean:t SE of 10 띠ce
*; Significantly different from concrol grou 아p<O.OI).
5. 전톰 효과
10 분간의 writhing syndrome 횟수는 대조군 24.5::t 1.8 회이었으며. IJTE 투여군은 8.8::t 1.5 회로, 실험대
조군인 aminopyrine 투여군은 12.0::t2.1 회로 대조군
에 비해 모두 유의성 있는 억제효과가 있었다. 진통 작용은 IJTE 64.1% 로 aminopyrine 51.0% 에 비해 강 력 하였다 {Table V).
Table V. Effect of IJTE and aminopyrine on writhing
syndrome indu ∞d by a ∞tic acid in mi ∞
Inhibition(% )
64.1 51.0
UTE was administered p,o. and the number of writhing syndrome
induced by 0.7% acetic acid was determined for 10 min. The data
represencs the mean:tSE of 8 mice. *; Significantly differenc from
concrol group(p<O,ool).
6. 모세얼관투과성 억제 효과
대조군의 evans blue 유출량은 12.5::tO.511g/ml 이 었으며 . IJTE 투여군은 5.6::tO.6 μg/ml 로 실험대조군 인 s 여iurn salicylate 투여군은 4.4 :!:0.5 μg/ml 로 모두 대조군에 비해 유의성 있는 억제효과가 있었다 . 모 세혈관투과성 억제율은 s어 lurn S외 l α late 가 64.8% 로
IJTE 55.2% 에 비해 강력하였대 Table VI)
Table VI. Effect 이 IJTE and sodium salicylale on the
permeability 이 evans blue into penloneal cavity
induced by acetic acid In mice
Inhibition(%)
55,2
64.8
IJTE was administered p.o 때d the permeabiliry of evans blue
induced by 0.6% acetic acid was determined 끼le data represents
the mean :tSE of 8 mice. *; Significantly different from control
group(p<O.ool)
7. 급엉 足浮睡 억제 효과
대조군의 족 부종율은 histamine 투여 30 분 후에
39.0% 로 가장 강력하였으며. IJTE 투여군은 대조군
에 비해 15 분 및 30 분에 대조군에 비해 감소되었다
(Table VII)
Dose Glanuloma
Group (mºpÆ, weigh[(mg)
p.o.)
0Õ<ncrol 36.4:t 1.5
lJTE 500 28.7 :t 1.8"
Phenylbu[azone 40 23.8:t 1.1""
- 서용배 外 1A: 少뼈Afl. 훗g 힘을i;a 이 ,*,i 뼈 合빼료에 미치는 Ii 톨-
Table VII. Anti-inflammatory activity of IJTE on his-
tamine-indu ∞d edema in mi∞ -;;aw
Timc(minutes) Group
60
0 l’ 30 120 180
1.59 2.15 2.21 2.05 1.8η 1.73
Control :to.Q2 :to.03 :to 03 :to.02 :to. 여 :!:0.03
m 긴 (39.0) (28.9) (18.9) (8.8)
1.59 2.03 2.05 1.99 1.83 1.69
IJTE :!:0.02 :to:02' :to.of' :to.Q3 :tom :to.02
(27.7) (28.9) (25.2) (15.1) (6.3)
IJTE(500 mg/kg) was administered p.o. and the [hid ‘ncss of hind
paw edema induced by his[amin 이 30J./g! μ 1) was dccermined wi[h
microme[er. The da 【a represents the mean-tS ε of 8 mice. ";
Significantly different from concrol group("; p<O.O χ ""; p<O.OI)
8. 육°t풍엉성 효과
육아종의 중량은 대조군 36.4:t 1. 5mg 이었으며 , I)TE 투여군은 28.7:t 1.8mg 으로, 실험대조군인 phe-
nylbutazone 투여군은 23.8:tl.lmg 으로 대조군에 비
해 유의성 있게 감소되었다 . 육아종형성 억제율은
phenylbutazone 이 34.6% 로 IJTE 21.2% 에 비해 강력
하였다 -(Table VIII).
Table VIII. Effect of IJTE and phenylbutazone on the
formation of cotton pellet granuloma in rats
Inhibi[ion(%)
21.2 34.6
IJTE was administered p.o. once a day for 5 days and [he formation
of corron 야lIet granuloma was de[ermined. The data represents [he
mean :tSE of 5 rats. "; Significantly different trom control group(";
p<0.05, ""; p<O.Ol).
9. 훌섣시l포 및 비장시l포의 륭스앤| 미지는 효과 흉선세포에 concanavalin A(Con A) 를 처리하였을 때의 세포생존율을 100% 로 하였을 때 , IJTE 투여군 은 118.4:t 1.4% 로 대조군에 비해 세포생존율이 중 가하였으며 , Con A 를 처리하지 않았을 때 대조군의 세포생존율은 53.6:t 1.3% 이었으며 ,I)TE 투여군은
68.7 :to.5% 로 대조군에 비해 세포생존융이 중가하
였다. 대조군의 비장세포에 lipopolysaccharide(LPS) 를 처리하였을 때의 세포생존율을 100% 로 하였을 때,
I)TE 투여군은 121.9:t 1.2% 로 대조군에 비해 세포 생존율이 증가하였으며 , LPS 를 처리하지 않았을 때 대조군의 세포생존융은 59.4 :to.9% 이었으며 , IJTE 투여군은 74.5:t 1.3% 로 대조군에 비해 세포생존율 이 증가하였디 -(Table IX).
Table IX. Effect of IJTE on the cell viability 이 munne
thymocytes and splenocytes
Thymocytes(%) Group
Con A(+) Con A(-)
Control lOO.O:t 1.1 53.6:t 1.3
lJTE 118.4:t 1.4 68.7 土0.5
Splenocytes(%)
lPS(+) lPS(-)
100.0:t 1.2 59.4 :to.9
121.9:t 1.2' 74 ’ 土 1.3'
IJTE(500 m밍kg) was administered p.o. once a day for 7 days, and
thymus or spleen was separated. Thymocytes or splenocytes( 1.2x 106
cellslml) were cultured for 48 hαl π in C02-incubator. The cell
viab ‘licy was de[ermined by M1T me[hod. The da[a [epresents che
mean :tSE of 5 mice. "; Significantly differenc from concrol group
(p<O.OOI). Con A(+); Concanavalin A treaced group, Con A(-);
Concanavalin A non-treated group, lPS( +); lipopolysaccharide
treared group, LPS( -); lipopoly- saccharide non-creaced group.
10. 흉신세포, 비정세포 및 복캉 대식셰포로부터 세포월성률필 문비에 미지는 효과
흉선세포에서 분비되는 r -IFN 의 양을 측정한 결 과 , 대조군은 121.5:t 1.3pg/mJ 이었으며 , I)TE 투여군
은 37.9:t 1.5pg/mJ 로 대조군에 비해 감소하였다 .
IL-2 의 양을 측정한 결과 , 대조군은 173.0:t8.7pg/ml 이었으며 , IJTE 투여군은 61.1 :t4.9pg/ml 로 대조군에 비해 감소하였다 . IL-4 의 양을 측정한 결과 , 대조군 은 45.2:t 1.6pg/mJ 이었으며 , MMC 투여군은 45.5 :t
2.lpg/ 찌로 대조군과 별 차이가 없었다-(Table X)
비장세포에서 분비되는 r-IFN 의 양을 측정한 결 과 , 대조군은 258.2 土5.lpg/ml 이었으며 , iJTE 투여군 은 265.8 :t4.7pg/ml 로 대조군과 별 차이가 없었다.
IL-2 의 양올 측정 한 결과, 대조군은 253.4 :t5.4pg/ml 이었으며 , I)TE 투여군은 252.2 :t5.lpg/ml 로 대조군 과 별 차이가 없었다. ι4 의 양을 측정한 결과, 대
조군은 106.7 :t3.4pg/ml 이었으며 , I)TE 투여군은
219.3 :t4.8pg/ 찌로 대조군에 비해 증가하였다 . TNF-
a 의 양을 측정한 결과 , 대조군은 439.5:t 1O.5pg/ml 이었으며 , I)TE 투여군은 202.3 :t6.5p 밍ml 로 대조군 에 비해 감소하였다 IL-I P 의 양올 측정한 결과 , 대
조군은 164.3 :t6.lp, 밍찌이었으며 ,I)TE 투여군은 77.5
:t3.8pg/mJ 로 대조군에 비해 감소하였다 -(Table XI).
- 193
