48
서 론
대장에 발생하는 용종은 통상적으로 비종양성과 종양성 으로 나누며 상피성 용종인 경우 세포의 성숙도에 따라 조 직학적으로 증식성(hyperplastic)과 선종성(adenomatous) 용 종으로 구분할 수 있다. 증식성인 경우 악성변화의 위험성 은 없으나 선종성인 경우 암발생률이 높아 정확한 조직학 적 진단이 임상적으로 중요하다. 증식성 용종은 조직학적 으로 성숙한 세포들로 구성되어 있어 조직학적으로 양성이 나 크기가 큰 증식성 용종에서는 부분적으로 세포의 이형 성(dysplasia)을 보이는 선종성 성분을 함유하기도 하여 선 종성 용종과의 감별이 중요하다.
p53단백은 DNA종양 바이러스인 SV (simian virus) 40의 T 항원에 결합하는 특성으로 인해 처음 분리되었고 그것의 유전자는 17번 염색체의 단완의 13 band에 위치한다.(1) 이 유전자 산물에는 야생형과 돌연변이형이 있는데 야생형의 p53단백은 여러 가지 원인에 의해 손상된 DNA에 부착하여
대장의 용종성 병변 및 암종에서 p53단백 및 CREB-binding Protein의 면역조직화학적 발현양상
중앙대학교 의과대학 외과학교실 및 1병리학교실
박 준 석․박 용 검․1김 미 경
책임저자：박용검, 서울시 용산구 한강로 3가 65-207 ꂕ 140-757, 중앙대학교 의과대학 외과학교실 Tel: 02-748-9959, Fax: 02-793-1042
E-mail: [email protected]
접수일：2005년 3월 24일, 게재승인일：2005년 5월 26일
Im m unohistochem ical Expression of p53 Protein and CREB-binding Protein in Polyps and Adeno- carcinom as of Colon
Jun Seok Pak, M.D., Yong Geum Park, M.D. and Mi Kyung Kim, M.D.1
Purpose: Alterations in the structure of the p53 protein are one of the most common changes associated with human cancers. The CREB-binding protein(CBP) is a transcriptional co-activators of various sequence-specific DNA-binding tran- scription factors and is involved in a wide variety of cellular activities, such as DNA repair, cell growth, differentiation, and apoptosis. This article examined the expression levels of the p53 protein and CBP as well as their diagnostic value in a biopsy sample.
Methods: Immunohistochemical analysis were performed in 60 hyperplastic polyps, 180 adenomatous polyps, and 120 adenocarcinomas which had sampled from colono-fibroscopic exam from January 2000 to August 2003.
Results: 1. p53 protein expression was observed in 15%
(9/60) of hyperplastic polyps, in 68.9% (124/180) of adeno- matous polyps, and in 80% (96/120) of adenocarcinomas (P
＜0.01). 2. p53 protein expression according to the cellular atypia in the adenomatous polyp was observed in 45% (27/
60) of mild dysplasia, 78.3% (47/60) of moderate dysplasia, and 83.4% (50/60) of severe dysplasia. There was an in- creasing tendency in high grade dysplasia, which is statis- tically significant (P＜0.05). 3. p53 protein expression ac- cording to the level of differentiation was observed in 90%
(54/60) of well differentiated adenocarcinomas, 78% (39/50) of moderately differentiated adenocarcinomas, and 30% (3/
10) of poorly differentiated adenocarcinomas (P＜0.01). 4.
CBP expression was observed in 30% (18/60) of hyperplastic
polyps, 70.6% (127/180), of adenomatous polyps, and 85%
(102/120) of adenocarcinomas (P＜0.01). 5. CBP expression according to cellular atypia in adenomatous polyp was observed in 48.3% (29/60) of mild dysplasia, 76.6% (46/60) of moderate dysplasia, and 86.7% (52/60) of severe dys- plasia (P＜0.05). 6. CBP expression according to cellular differentiation was observed in 90% (36/60) of well dif- ferentiated adenocarcinomas, 86% (43/50) of moderately differentiated adenocarcinomas, and 50% (5/10) of poorly differentiated adenocarcinomas (P＜0.05).
Conclusion: The p53 protein and CBP expression can indicate the malignant potentiality of the colon cell indirectly.
(J Korean Surg Soc 2005;69:48-53)
Key Words: p53, CBP, Colon, Polyp, Adenocarcinoma 중심 단어: p53, CBP, 결장 용종, 선암종
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ Departments of Surgery and 1Pathology, College of Medicine, Chung-Ang University, Seoul, Korea
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ 손상된 세포가 세포 주기 중 G1단계에서 S단계로의 이동을
억제하고 손상된 세포의 복구, 합성 및 세포고사(apoptosis) 를 자극함으로써 인체 내 발생하는 종양을 억제하는 것으 로 알려져 있다.(2) 돌연변이형의 p53단백은 정상적인 p53 유전자의 기능이 소실되어 손상된 DNA가 복구되지 않고 다른 유전자 돌연변이의 기회를 증가시켜 발암과정에 관여 한다.(3) p53은 유방암, 폐암, 두경부암종 등 인체 악성종양 에서 가장 흔하게 돌연변이를 일으키는 유전자 중 하나이 며 그 돌연변이는 전암성 단계에서도 발견되므로 발암현상 의 중요한 사건으로 인식되고 있어서 예후인자로서 중요하 게 여겨지고 있으나 그 작용 시기는 아직까지 논란의 대상 이 되고 있다.(4)
CREB-binding protein (CBP)은 다양한 DNA 의존성 전사 인자들의 활성인자 중 하나로 DNA repair, 세포의 성장 및 분화, 세포고사 등과 같은 다양한 세포활동에 관여하는데 발암과정에서의 역할은 아직 규명되지 않은 채 논란의 대 상이 되고 있고 최근 들어 종양억제역할에 대한 연구결과 들이 보고되고 있다.(5) 특히 p53과의 상호작용에 의한 성 장억제효과에 대해 초점이 모아지고 있는데 이러한 CBP의 성장억제능력은 p53과 관련되어 이루어지리라 추측되고 있고 p53의 NN-terminal region에서의 인산화로 인해 p53 action을 극대화한다는 보고도 있다.(6-11)
식생활의 변화와 내시경 검사의 발달로 과거에 비해 대 장병변이 증가하고 대장의 전암성 병변(precancerous lesion) 인 선종성 용종의 정확한 조기진단이 강조되고 있다. 이에 대장의 용종성 병변에서 p53 및 CBP의 발현도를 알아보고 이형성세포와 암세포에서 이들 단백의 발현양상을 조사하 여 이들 단백의 발암과정에서의 역할 및 관련유무를 가늠 해 보고 최근 들어 논란의 대상이 되고 있는 p53과 CBP의 상호관계를 규명해 보고자 한다.
방 법 1) 연구재료
중앙대학교 의과대학 부속병원에서 최근 3년간 시행한 대장내시경 생검표본을 대상으로 보존상태가 양호한 파라 핀 포매괴를 추출하여 증식성 용종 60예, 선종성 용종 180 예 및 대장암으로 진단된 120예를 연구대상으로 하였다.
증식성 용종은 광학현미경상 점액이 풍부한 성숙된 세포 들로 구성되어 있고 부분적으로 세포의 이형성을 보이지만 선종성 용종으로 진단하기에는 병리조직학적 진단기준에 미흡한 경우를 대상으로 하였고 선종성 용종은 세포 내 점 액성분이 거의 없고 핵의 과염색상 및 빈번한 분열이 동반 된 세포의 이형성이 있는 선들의 증식이 있으면서 주변 간 질로의 침윤이 없는 경우로 경도의 이형성을 보이는 60예, 중도의 이형성을 보이는 60예, 그리고 고도의 이형성을 보 이는 60예였다. 대장암종은 WHO 분류에 의거하여 고분화
의 선암종(60예), 중등도분화의 선암종(50예), 저분화의 선 암종(10예)으로 분류하였다.
2) 면역조직화학적 염색
각 예의 파라핀 포매 조직에서 4∼5μm 두께의 절편을 박절하고 탈파라핀한 후 무수알코올, 90%, 75% 및 50% 알 코올에서 차례대로 함수과정을 거쳐서 증류수에 5분간 수 세하였다. 내인성 과산화효소의 활성을 억제하기 위해 0.5%
hydrogen peroxide에 10분간 처리 후 증류수로 수세하였다.
항원성 회복을 위하여 10 mM citrate (pH 6.0) 완충액에 담가 5분간 2회 극초단파 처리 후 실온에서 냉각시키고 50 mM Tris 완충용액(TBS, pH 7.5)으로 수세하였다. 면역조직화학 염색의 비특이성 반응을 제거하기 위해 30분간 염소혈청으 로 처리하고, 여분의 용액을 제거한 다음 일차항체인 p53 (Zymed Co, USA, mouse monoclonal, 1：50)과 CBP (C-1 SC7300, Santa Cruz Biotechnology Zymed Co, USA, mouse monoclonal, 1：50)을 실온에서 하룻밤 반응시킨 후 TBS로 5분간 3회 수세한 다음 biotin이 부착된 이차항체(Zymed Co.
USA)에 20분간 작용 후, streptoavidin과 결합한 과산화 효소 복합체를 가하여 20분간 반응시킨 후 AEC chromogen (3- amino-9-ethylcarbazole) 용액으로 발색하고 Mayer hema- toxylin으로 대조 염색을 실시하여 광학현미경으로 관찰하 였다. 면역조직화학 염색반응의 음성 대조군으로는 대장조 직에서 일차 항체를 처리하지 않고 음성대조 시약으로 대 체하여 이용하였다.
3) 면역조직화학적 염색 판정 및 분석
p53단백과 CBP단백에 대한 염색의 판정은 전체세포의 10% 이상에서 핵에 적갈색의 염색상을 보일 때 양성으로 판정하였고 양성률이 10∼30%인 경우를 + (국소적), 30∼
70%인 경우를 ++ (다발성), 70% 이상인 경우를 ++ + (미만성)으로 판정하였다.
통계학적 유의성은 chi-square test로 분석하여 P＜0.05인 것을 의의있는 것으로 하였다.
결 과
1) 용종성 병변 및 암종에서 p53단백의 발현 p53단백은 대부분 핵 내에서 적갈색으로 발현되었고 발 현강도는 증식성 용종이나 선종성 용종에 비해 대장암종에 서 높았다. 주위 정상 대장점막에서는 선와(crypt)의 기저부 에 있는 세포에서 약하게 발현되었고 증식성 용종에서는 60예 중 9예(15%), 선종성 용종에서는 180예 중 124예 (68.9%), 그리고 암종에서는 120예 중 96예(80%)에서 의미 있는 발현이 나타났다. 따라서 암종에서는 다른 용종에 비 하여 p53단백의 발현이 의의있게 높았다(Table 1, P＜0.01).
선종성 용종에서는 경도의 이형성을 보이는 60예 중 27
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ 예(45%)에서 의미있는 발현을 나타냈는데 이 중 19예(31.7%)
는 다발성, 8예(13.3%)는 미만성 발현을 보였다. 중도의 이 형성을 보이는 60예 중 47예(78.3%)에서 발현이 의미가 있 었는데 이 중 33예(55%)는 다발성, 14예(23.3%)는 미만성 발현을 보였다. 고도의 이형성을 보이는 60예에서는 50예 (83.4%)가 의미있는 발현을 나타냈고 이 중 23예(38.4%)가 다발성, 27예(45%)에서는 미만성 발현을 보였다(Fig. 1).
따라서 선종성 용종에서는 경도의 이형성을 보이는 용종 에서 보다는 중도 및 고도의 이형성을 보이는 용종에서 발 현이 높았다(Table 2, P＜0.05).
대장암종에서는 고분화도 선암종 60예 중 54예(90%)에서
의미있는 발현을 나타냈고 이 중 45예(75%)는 미만성 발현 을 나타냈다. 중등도의 분화도를 보이는 암종에서는 50예 중 39예(78%)에서 의미있는 발현을 보였는데 이 중 10예 (20%)는 다발성으로, 29예(58%)는 미만성 발현을 보였다.
저분화암종 10예에서는 3예(30%)에서 양성소견을 보였다.
암종에서는 분화도가 좋을수록 발현율이 의의있게 높았다 (Table 3, P＜0.05)(Fig. 2).
2) 용종성 병변 및 암종에서 CBP의 발현
CBP은 대부분 핵 내에서 적갈색으로 발현되었고 발현강 도는 증식성 용종에 비해 선종성 용종이나 대장암종에서 높았다. 증식성 용종에서는 60예 중 18예(30%), 선종성 용 종에서는 180예 중 127예(70.6%) 그리고 암종에서는 120예 중 102예(85%)에서 의미있는 발현이 나타났다(Table 4, P＜
0.05).
선종성 용종에서는 경도의 이형성을 보이는 60예 중 29예 Table 1. p53 expression in polyps and adenocarcinomas of colon
ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ p53 (%)
Number
Cases ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ of cases
(-) (+) (++) (+++) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
Hyperplastic
60 37 (61.7) 14 (23.3) 9 (15.0) 0 (0) polyp
Adenomatous
180 11 (6.1) 45 (25.0) 75 (41.7) 49 (27.2) polyp
Adenocar-
120 3 (2.5) 21 (17.5) 22 (18.3) 74 (61.7) cinoma
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
Table 3. p53 expression according to histologic grade in adenocar- cinoma of colon
ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ p53 (%)
Histologic Number
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ grade of cases
(-) (+) (++) (+++) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ Well* 60 0 (0) 6 (10) 9 (15) 45 (75) Moderate† 50 1 (2) 10 (20) 10 (20) 29 (58) Poor‡ 10 2 (20) 5 (50) 3 (30) 0 (0) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
*well = well differentiated; †moderate = moderately differentiated;
‡poor = poorly differentiated.
Table 2. p53 expression according to degree of cellular atypism in adenomatous polyps of colon
ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ p53 (%)
Degree of Number
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ cellular atypia of cases
(-) (+) (++) (+++) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
Mild 60 7 (11.7) 26 (43.3) 19 (31.7) 8 (13.3) Moderate 60 29 (3.3) 11 (18.4) 33 (55.0) 14 (23.3) Severe 60 2 (3.3) 8 (13.3) 23 (38.4) 27 (45) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
Fig. 2. Immunostain for p53 shows diffuse, strong nuclear reaction in well differentiated adenocarcinoma (A) and negative nuclear reaction in poorly differentiated adenocarcinoma (B) (×200).
Fig. 1. Immunostain for p53 shows negative nuclear reaction in hyperplastic polyp (A) and multifocal nuclear reaction in adenomatous polyp (B) (×200).
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
(48.3%)에서 의미있는 발현을 나타냈는데 이 중 16예(26.7%) 는 다발성, 13예(21.6%)는 미만성 발현을 보였다. 중도의 이 형성을 보이는 60예 중 46예(76.6%)에서 발현이 의미가 있 었는데 이 중 24예(40%)는 다발성, 22예(36.6%)는 미만성 발현을 보였다. 고도의 이형성을 보이는 60예에서는 52예 (86.7%)가 의미있는 발현을 나타냈고 이 중 24예(40%)가 다 발성, 28예(46.7%)에서는 미만성 발현을 보였다(Fig. 3).
따라서 선종성 용종에서는 경도의 이형성을 보이는 용종 에서 보다는 중도 및 고도의 이형성을 보이는 용종에서 발 현이 높았다(Table 5, P＜0.05).
대장암종에서는 고분화도 선암종 60예 중 36예(90%)에서 의미있는 발현을 나타냈고 이 중 34예(56.7%)는 미만성 발 현을 나타냈다. 중등도의 분화도를 보이는 암종에서는 50 예 중 43예(86%)에서 의미있는 발현을 보였는데 이 중 16예 (32%)는 다발성으로, 27예(54%)는 미만성 발현을 보였다.
저분화암종 10예에서는 5예(50%)에서 양성소견을 보였다.
암종에서는 분화도가 좋을수록 발현율이 의의있게 높았다
(Table 6, P＜0.05)(Fig. 4).
3) 용종성 병변 및 암종에서 p53 및 CBP의 동시발현율 총 360예의 대장의 용종성 병변에서 p53단백과 CBP는 71.2%의 동시 발현율을 나타냈다(Table 7).
고 찰
한국인에서 대장암의 발생률은 식생활 습관이 서구화됨 에 따라 타종양에 비하여 증가하는 추세이다. 대장암의 경 우 종양의 형성과정 중 여러 유전자, 즉 ras, p53, APC gene 등의 돌연변이 혹은 대립유전자의 소실이 전암단계로부터 각 시기마다 작용하여 발생하는 것으로 알려져 있다.(12) Fig. 3. Immunostain for CBP shows negative nuclear reaction in
hyperplastic polyp (A) and multifocal nuclear reaction in adenomatous polyp (B) (×200).
Fig. 4. Immunostain for CBP shows diffuse, strong nuclear reac- tion in well differentiated adenocarcinoma (A) and nega- tive nuclear reaction in poorly differentiated adenocar- cinoma (B) (×200).
Table 4. CBP expression in polyps and adenocarcinomas ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ
CBP (%) Number
Cases ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
of cases
(-) (+) (++) (+++) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ Hyperplastic
60 13 (21.7) 29 (48.3) 15 (25.0) 3 (5.0) polyp
Adenomatous
180 20 (11.1) 33 (18.3) 64 (35.6) 63 (35.0) polyp
Adenocarcinoma 120 8 (6.7) 10 (8.3) 40 (33.3) 62 (51.7) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
Table 5. CBP expression according to degree of cellular atypism in adenomatous polyps of colon
ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ CBP (%)
Degree of Number
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ cellular atypia of cases
(-) (+) (++) (+++) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ Mild 60 10 (6.7) 21 (35.0) 16 (26.7) 13 (21.6) Moderate 60 4 (6.7) 10 (16.7) 24 (40.0) 22 (36.6) Severe 60 6 (10.0) 2 (3.3) 24 (40.0) 28 (46.7) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
Table 6. CBP expression according to histologic grade in adenocar- cinoma of colon
ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ p53 (%)
Histologic Number
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ grade of cases
(-) (+) (++) (+++) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ Well* 60 1 (1.7) 5 (8.3) 2 (33.3) 34 (56.7) Moderate† 50 3 (6) 4 (8) 16 (32) 27 (54) Poor‡ 10 4 (40) 1 (10) 4 (40) 1 (10) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
*well = well differentiated; †moderate = moderately differentiated;
‡poor = poorly differentiated.
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
특히 p53 단백의 유전자는 DNA에 결합하여 DNA의 수리, 합성, 세포분화 및 고사(apoptosis)에 관여한다고 알려져 있 다.(13-15) 유전자의 돌연변이나 다른 세포성 단백 또는 바 이러스성 단백과 p53단백의 결합에 의하여 p53 단백의 정 상적인 기능이 소실되면 세포증식이 유발되고 또한 p53 단 백은 화학적으로 안정되어 핵 내에 축적된다.(16) p53 단백 은 여러 종양에서 발현되며 종양의 생물학적 악성도와 연 관이 있는 경우가 많아서 각 종양의 예후인자의 하나로 취 급되고 있다.(17-19) 대장의 상피성 종양에서 p53 단백의 발 현율은 보고자마다 차이가 많아서 46.6%에서부터 89%까지 보고되고 있고, 선종의 경우 이형성 정도에 따라 9%에서부 터 많게는 71%까지도 보고되고 있다(12,20-22). 본 연구에 서도 p53단백은 증식성 용종(15%)이나 선종성 용종(68.9%) 에 비해 대장암종(80%)에서 높게 발현되어서 전암성 병변 과 암종을 구분하는 데 도움을 줄 것으로 생각했다. 세포의 이형성에 따른 p53단백의 발현은 전체세포의 70% 이상에 서 양성소견을 보이는 미만성 발현에 의미를 두었는데 경 도의 이형성인 경우 13.3%, 중등도인 경우 23.3%, 고도의 경우 45%의 발현을 보여서 이형성의 정도가 심할수록 p53 단백의 발현율은 증가하는 경향을 보였으나 통계학적 유의 성은 없었다(P＞0.05). 세포의 이형성을 보이는 증식성 용 종 60예 중 9예(15%)에서만 p53단백에 양성소견을 보였으 며 9예 모두 다발성 발현으로 나타났고 미만성 발현을 보인 예는 없었다. 증식성 용종에서 부분적으로 관찰되는 이형 성적 세포들은 광학현미경적으로는 병리조직학적 진단기 준상 전암 병변으로 진단할 만한 이형성은 아니어서 증식 성 용종으로 진단되었지만 유전자적으로는 변화가 일어난 것이 아닌가 생각했다. 그렇지만 여러 분자병리학적인 연 구가 병행되어야 규명될 수 있을 것으로 사료되며 면역조 직화학적 위양성도 고려되어야 한다. 증식성 용종인 경우 대부분이 성숙한 세포로 구성되어 있고 용종의 극히 일부 분에서 세포의 이형성이 관찰되는 경우가 있는데 이런 경 우 헤마토씰린에 오신 염색에 의한 광학현미경적 관찰만으
로는 진단이 어려울 때가 있다. 증식성 용종은 암으로의 진 행이 거의 없고 선종성 용종은 전암성 병변으로 정확한 조 직학적 진단이 환자의 치료 및 예후와 밀접한 관계가 있으 므로 대장의 용종성 병변에서 증식성, 선종성 및 암종을 정 확히 진단하는 것이 중요하다. 내시경 검사로 채취되는 작 은 표본에서의 진단의 한계성과 얻어진 조직이 전체를 대 변할 수 없다는 점을 고려하여야 하겠지만 내시경 조직에 서 p53단백에 대한 면역조직화학적 염색이 병변감별의 한 방법으로 이용될 수 있으리라 생각했다.
CBP은 DNA와 결합하는 여러 특이적 전사인자들의 활성 인자(transcriptional co-activator)로 DNA 복구, 세포증식 및 분화 등의 세포 내 활동에 관여한다.(5) 또한 종양 억제자로 서의 역할이 몇몇 연구자들에 의해 보고되고 있다.(10) 특 히 여러 보고자들에 의해 두경부 암종 및 전암성 병변에서 CBP가 높은 발현율을 보여 발암단계에서의 CBP의 역할을 시사하고 있다.(23-27) 본 연구에서도 CBP은 증식성 용종 (30%)에 비해 선종성 용종(70.6%)과 대장암종(85%)에서 높 게 발현되었고, 세포의 이형성에 따른 CBP의 발현은 경도 의 이형성인 경우 48.3%, 중등도인 경우 76.6%, 고도의 경 우 86.7%의 발현을 보여서 이형성의 정도가 심할수록 CBP 의 발현율은 증가하는 경향을 보였다(P＜0.05). 이는 p53단 백과 마찬가지로 전암성 병변과 암종에서 CBP가 일부 역할 을 수행하고 있음을 시사하는 소견이다. 이를 뒷받침하기 위해서는 보다 세밀한 분자생물학적 연구가 필요하다. 총 360예의 대장의 용종성 병변 중 p53단백과 CBP은 71.2%의 동시 발현율을 보여 발암과정에서의 이들 단백의 상호작용 이 이루어짐을 시사하는 소견이다. 이상의 결과로 대장 내 시경 검사상 용종성 병변이고 광학현미경상 세포의 심한 이형성을 보이지만 선의 구조가 유지되어 있고 명확한 침 윤이 없어 병리학적 정의상 선종성 용종으로 진단된다 하 더라도 이형성을 보이는 세포들의 암으로의 진행을 임상적 으로 고려하여 병변의 세밀한 임상적 추적 및 관찰이 필요 하며 이는 암종의 조기발견 및 치료, 나아가서는 예후에 영 향을 미칠 것으로 생각했다.
결 론
이상의 결과로 p53단백과 CBP에 대한 면역조직화학적 검색이 내시경 검사에서 이형성을 보이는 증식성 용종의 추적관찰 및 비정형 병변과 암종을 구분하는데 그 진단의 정확도를 높일 수 있으리라 여기며 암종의 조기발견과 치 료에 기여할 수 있으리라 생각한다. 또한 p53단백과 CBP의 발현부위도 통계적으로 의미 있는 일치양상을 나타내어 CBP은 p53과의 서로 상호작용에 의해 발암과정 중 일부 역 할을 수행하리라 생각한다.
Table 7. Comparison of expression between p53 and CBP in polyps and adenocarcinomas of colon
ꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚꠚ p53
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
(-) (+) (++) (+++)
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ CBP (-) 34 (9.4)* 3 (0.8) 4 (1.1) 0 (0.0) (+) 9 (2.5) 60 (16.7) 2 (0.6) 1 (0.3) (++) 8 (2.2) 3 (0.8) 74 (20.7) 34 (9.4) (+++) 9 (0) 14 (3.9) 26 (7.2) 88 (24.4) ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
*( ) = % of positive cells.
ꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏꠏ
REFERENCES
1) Lane DP, Crawford LV. T antigen is bound to a host protein in SV40 transformed cells. Nature 1979;278:261-3.
2) Agarwak S, Mathur M, Strivastana A, Ralhan R. MDM-2/p53 co-expression in oral premalignant and malignant lesions:
potential prognostic implications. Oral Oncol 1999; 35:209-16.
3) Zambetti GP, Levine AJ. A comparison of the biologic activi- ties of wild type and mutant p53. FASEB J 1993;7:855-62.
4) Sakurai S, Sano T, Maeshima A. Gastric adenocarcinoma sequence with special reference to p53 and Ki-ras gene altera- tions. Virchows Arch 1995;427:119-24.
5) Goodman RH, Smolik S. CBP/p300 in cell growth, transforma- tion and development. Genes Dev 2000;14:1553-77.
6) Gu W, Roeder RG. Activation of p53 sequence specific DNA- binding by acetylation of the C-terminal domain. Cell 1997;
90:595-606.
7) Sakaguchi K, Herrera JE, Saito S, Miki T, Bustin M, Vassilev A, et al. DNA damage activates p53 through a phosphorylation- acetylation cascade. Genes Dev 1998;12:2831-41
8) Giordano A, Avantaggiati ML. p300 and CBP, partners for life and death. J Cell Physiol 1999;181:218-30.
9) Appella E, Anderson CW. Post-translational modifications and activation of p53 by genotoxic stresses. Eur J Biochem 2001;
268:2764-72.
10) Grossman SR. P300/CBP/p53 interaction and regulation of the p53 response. Eur J Biochem 2001;268:2773-8.
11) Vo N, Goodman RH. CREB-binding protein and p300 in transcriptional regulation. J Biol Chem 2001;276:13505-8.
12) Bosari S, Viale G, Roncalli M. p53 gene mutations, p53 protein accumulation and compartmentalization in colorectal adenocarcinoma. Am J Pathol 1995;147:790-8.
13) Levine AJ, Momand J, Finlay C. The p53 tumor suppressor gene. Nature 1991;351:453-6.
14) Yonish RE, Lotem J, Sachs L, Kimchi A, Oren M. Wild type p53 induces apoptosis of myeloid leukemic cells that is inhibited by interleukin. Nature 1991;352:345-52.
15) Lowe SW, Schmitt EM, Smith SW, Osborne BA, Jacks T. p53 is required for radiation-induced apoptosis in mouse thymocy- tes. Nature 1993;362:847-9.
16) Hollstein M, Sidransky D, Volgelstein B, Harris CC. p53 mutations in human cancers. Science 1991;253:49-53.
17) Diller L, Kassel J, Nelson CE. p53 funtions as a cell cycle control protein in osteosarcoma. Mol Cell Biol 1990;10:5772-83.
18) Harris AL. Mutant p53-the commonest genetic abnormality in human cancer? J Pathol 1990;24:162-7.
19) Richard M, Elledge RM, Clark GM, Fuqua SA, Yu YY, Allred DC. p53 protein accumulation detected by five different antibodies: relationship to prognosis and heat shock protein 70 in breast cancer. Cancer Res 1994;54:3752-7.
20) Grewal H, Guillem JG, Klimstra DS, Cohen AM. p53 nuclear overexpression may not be an independent prognostic marker in early colorectal cancer. Dis Colon Rectum 1995;38:1176-81.
21) Lazaris AC, Theodoropoulos GE, Anastassopoulos P, Nako- poulou L, Panoussopoulos D, Papadimitriou K. Prognostic significance of p53 and C-erB2 immunohistochemical evalua- tion in colorectal adenocarcinoma. Histopatho 1995;10:661-8.
22) Hamana T, Kawai K, Serizawa A, Tsutsumi Y, Watanabe K.
Immunohistochemical demonstration of p53 protein in colorectal adenomas and adenocarcinomas. Reliable application of the heat-induced antigen retrieval method to formalin-fixed, paraffin-embedded material. Pathol Int 1994;44:765-70.
23) Lavielle JP, Brambilla E, Riva-Lavieille C, Reyt E, Charachon R, Brambilla C. Immunohischemical detection of p53 protein in preneoplastic lesions and squamous cell carcinoma of the head and neck. Acta Otolaryngol 1995;115:334-9.
24) Nadal A, Campo E, Pinto J, Mallofre C, Palacin A, Arias C, et al. p53 expression in normal, dysplastic, and neoplastic laryngeal epithelium. Absence of a correlation with prognostic factors. J Pathol 1995;175:181-8.
25) Agarwak S, Mathur M, Strivastana A, Ralhan R. MDM-2/p53 co-expression in oral premalignant and malignant lesions:
potential prognostic implications. Oral Oncol 1999;35:209-16.
26) Ambrosch P, Ruschenburg I. p53 and MDM-2 protein expres- sion in squamous cell carcinoma and neighboring dysplasia from the upper aerodigestive tract. Anticancer Res 2000;20:
3151-5.
27) Karamouzis MV, Papadas T, Varakis I, Sotiropoulou-Bonikou G, Papavassiliou AG. Induction of the CBP transcriptional co-activator early during laryngeal carcinogenesis. J Cancer Res Clin Oncol 2002;128:135-40.
