Jo u rn a l of the Pharm aceutical Society of Korea
20, 92-96 C1976) ^
Insulin 이 흰주1 의 LDH Isozyme 에 머처는 i 닷텔
와 수 흘
•
절 측mm±m
(Received February 25, 1976)
Chung Ki Lim and Ki Song Choi ^College of Pharmacy, Sung Kytm Kwan Universityy Seoul llOi): The Effect of Insulin on Lactate Dehydrogenase Isozyme in the Liver, Muscle and Serum of Albino Rats.
A b s t r a c t A series of experim ental groups has been studied in the state of hypoglycem ia caused by a single intraperitoneal in je c tion of in s u lin after 24 hrs of fasting albino rats and then the variation of LDH activities and LDH isozyme patterns in the liver, muscle and serum had been reported. T he total L D H activity has been elevated in the live r and the muscle above the average level for control group, b ut increased continusly d urin g 20 m in and decreased in the 20시 45 m in intervals and increased again in 45 m in in the serum. T he change of LDH isozyme patterns had been shown that in the live r LDHs was increased, LDH4 was decreased and in the muscle L D H i was d im in ishe d by 30 m in , was restored again after 45 m in and LDH2 decreased about 94 percentage at 30 m in, increased again to the average value and LDH5 increased to 30 m in, decreased by 45 m in and increased greater again after 45 m in and in the muscle LDH3, LDH4, and LDHs were increased to the greatest by 20 m in , dec
reased in 20시 45 m in intervals and increased again after 45 m in.
Lactate d e h y d ro g e n a s e (L D H )는 홀® 에서 그 이 된다는 것이 알려져 있으 며 쏠히 해 빨 에 서 L D H isozym e pattern 이 확© 6한으로 털{b된다는 것도 밝혀져 있어 I별*-¥ 6함으로 fIJffl되고 있다. 그4^ 혜과 L D H isozym e g f t 월f t에 I S한 해송도 있다.
한편 in su lin 이 에 미치는 영향에 I S해서는 후 혁 으 로 W햇되어 « 송된 바가 많으나
효구^ in s u lin 이 L D H iso zy m e에 미처는 영향에 확해서는 쯤된 바가 SO로 없으므로 룹놓는 in s u lin 을 흰쥐에 g S 하여 0T, ®5l혁 및 ifilif 의 L D H ffitt과 L D H iso2yme 의 pattern 를
하여 옳^^의 회 을 얻었기에 S 송한다.
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June. 1976 M ^ ^ 93
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Siffi 170~220g 되는 흰쥐의 암컷을 6마리씩 으로 나누어 24B#rBT 시킨 후 왔류 (a), insulin g J l 황 105^ 경 과#융 (b), 20;0'경 과?¥ (c), 30융 경 과 (d), 45융 경 과f 음 (e) 및 60융 경 과f 숨 ( 0 로 나누어 b, C , d, e 및 f S H 흡흡 tSK 1 k g # 30 unit 외 insulin (Eli Lily, in j. ) 을
우 하 고 Btflfl 에 따라 b, c, d, e 및 f #용을 용흡 발 11 하였다.
LDH isozyme 의 55• 행 및 를 음 유 증류수로 5f&의 hom ogenate 로 만든 다옴, 봉 600 rp m)해서 얻은 _ h S ? g과 을 델a 하여 얻은 jfiri#을 용은 2. 5 X 7 . 5 cm 의 ce l
lulose acetate plate (T it a n I II , H elena C o . )에 sp o ttin g 한 후 T ris-b a r b it a l bu ffer ( p H 8. 8 )를 하여 180V, a S m A / c m 웰i« 로 찮®융I I하고 (H e le n a C o; T ita n , Cat. 1 5 0 0 ) n itr o - blue tetrazolium 으로 황fe한 후, acetic acid 용액 으로 시 켜 해한 다옴 건조시 켜 서 d ensitom ete' (H e len a Co; Q u ic k Scan Cat. 1020) 로 L D H isozym e 의 뿔을 하고 in - tegration 하여 L D H isozym e 의 를 흥ill하였다-
LDH activity 의 ; 및 천fi®의 lOOOfg homogenate 를 JS-D:®■벨(S600 rpm) 하여 그 i ;®?호을 6f&로 a g 하여 로 하고 Berger & Broida'Si®혜 후하여 LDH 로
하였 다. KKSffiJSCpyruvic acid lOOmg, K2HPO4 132. 5 mg 를 증류수로 1000 ml 로 함 . pH 7.8) 1ml 에 ；S-NADH2 (Sigma Chemicals) 1.0 mg 를 ' 짧 켜 37° 께 서 2^~ 3 Strfi한 후 타 homogenate 0.1 ml 를 넣 고 37° 에 서 30：9fE5 K 별시 킨 후 2, 4-dintrophenyl hydrazine ^ (2, 4-dinitrophenyl hydrazine 200 mg, C-HCl 85 ml 를 증류수로 1000 ml 로 함 ) 1.0ml 를 넣어 ■참S 에서 20융H mm 후 0.4N-NaOH 절?g 10 ml 를 넣어 5 ^ 0 & S 하였 다가 25:0' 에 spectrophotometer (Coleman junior model 6C)JL 525 nm 에 서 optical density ■를:
SOS하였다. 미리 해 둔 calibration curve에 *6늦하여 jflitf I'ml 및 IFF, I g rfi의 LDH ffitt® 를 B-B uniti9>로 하였다.
LDH isozyme 의 는 LDH isozyme 의 i g g J t 에 f t 해 유용 휴 fti하였 다.
ifllll의 ：£S~Somogy-NeIson 하여 하였 다.
IS 종 및 펼
LDH S ttg - ffF , 및 jflrit의 LDH 는 Table I 에 한 바와 같다.
f f 에 서 는 insulin g H 황 이 경 파함에 따라 LDH-gttffi가 _h류하였 으며 fg N l 서 는 f 운j투.
휴에 i t 해 I한 9X10센 unit 나 _h뷰되 었 다.
I혔I처에 서 도 insulin g |락황 LDH?S14ffi가 itiP 되 었고 fg후은 학}1 황에 i t 해 13X10걸 unit 가 J#
Jq되 었으나 c fN l 서 는 보다 4X10스 unit 가 iST■되 고 있 다.
뾰» 에서도 을 K?와한 모든 Iff이 보다 L D H tS ttffi가 i :류되고 f f 음는 의 항9
2 ©인 660 unit 로서 S00 unit 가량이 itSn되 었고 e g유은 |향 50 unit 가 ffiT■되 고 있 다.
Flatt 등22세 rat 에 insulin 을 앉||하였을 때 adipose tissue 의 lactate ：토많후이 한다는 췌송를 한바 있고) Clarissa 등22그은 rat 에 insulin 팔|화로 행|화에서 의 lactate i# ；jp를 높하고 있 다. * 에서 insulin S 렸로 rat^와 fff, 및 ifiltff에서 의 LDH 가 i t * 된다는 램
* 를 얻은 것은 tiJn 황송를 뒷받침하는 이라 하겠다.
94 # • ： Insulin 이 LDH isozyme에 미 처는 Vol. 20, No. 2
Table I —-T he activities of liver, muscle and serum and its d istrib utio n T o ta l L D H
group a c tiv ity LD H sC % ) LD H 4C% ) L D H s C ^ ) L D H a C ^ ) L D H iC % ) B-B u n it
live r a 13.9X10® 12.4X105(88. 2) 1,6 X 10 ^(1 1.8 ) b 14.1X105 12.2X105(S6. 8) 1. 9 X 105(13. 2) c 14.7X105 13.3X10K 90. 5) 1.4X105(9. 5) d 14.4X10® 13.3X105(92) 1.4X105(8) e 14.7X1Q5 13.4X10®C91) 1.3X105(9) f 14.8X1Q5 14.8X10^(100) 0
muscle a 10.6X1Q5 5 7 .8 X 1 0 K 5 4 .1) 2 0 .1X10K19) 11.2X10^(10. 6) 9.3 X 10K 10. 6) 8 X 10^(9. 6) b 10. 9X10® 66.5X 10K 61) 2 2 .1 X 1 0 ^ 2 0 .3 ) 10 .5X 1 0^(9.6 ) 7 . 1 X 1 0 K 9 .6 ) 2. 8 X 10^(2. 6) c 10.2X10® 62.8X10^(61. 6) 20.5X 10^(20.1) 8 .7 X 1 0 K 8 .6 ) 6.6 X 1 0 K 8 . 6) 3 .3 X 1 0 ^ 3 . 2) d 10. 8X10® 8 6 .5 X 1 0 ^ 8 0 .1 ) 17.2X10K15. 9) 3 .8 X 1 0 ^ 3 .5 ) 0.5 X 10 K 3 . 5) 0(0) e 11.6X105 6 3 .9 X 1 0 K 5 5 .1) 27. 9X 10관(2 4 .1 ) 15 *6X10^13. 4) 5 .9 X 1 0 ^ 1 3 .4 ) 2 .7 X 1 0 ^ 2 . 3) f 11.9X105 8 9 .1 X 1 0 ^ 7 4 .9 ) 16.1X10^(13.5) 5.6X10*C4. 7) 5 .6 X 1 0 ^ 4 .7 ) 2. 6 X 10^(2. 2)
serum a 360 109(30. 7) 16(4.5) 67(18. 7) 67(18. 7) 73(20. 2)
b 475 209(44.1) 55C11. 9) 81(17) 81C17) 41(8. 6)
c 600 192(32) 120(20.1) 131(21. 8) 131(21. 8) 65(10. 9)
d 400 104C26.1) 33C8. 2) 83C20. 6) 83(20. 6) 78(19. 6)
e 310 58C18.7) 29C9. 4) 66(21. 5) 66(21. 5) 70(22. 75
f 660 142(21.6) 130(15. 6) 139(21) 139(21) 124(18. 9)
L D H is o z y m e 의p a t t e r n 별f k ~fF, 희 및 의 L D H isozyme pattern 은 T able I에 출 긁한 바와 같다.
f f 은 유 에서 LDH4 와 LDHs 2 fi 외 p a tte r n 만이 되였다. LDHs 는 in s u lin Ifjll 되였고 f i l 은 fWM 류에 Jt 해 I는 2 4 X 1 0 * u n i t 가 itSP 되었으며 L D H4는 R P t 로 in s u lin 왔 «
^ 되 어 jg N l 서 는 되 고 말었다. B ra ® 에 서 의 ± LDH 는 LDH5 로 알려 져 있 으 며 in s u lin S I북로 g ly c o ly s is 의 i#;*：로 0 한 p y ru v a te 의 초 ® ; 로 p y ru v a te 의 ig ® 에 크게 영 향을 받지
않은 LDHs의 이 으로 itJB되고 LDH4외 S14은 ('봤^>된 라고 생 각된다.
®5l화에 서 는 LDHi에 서 LDHs까지 5® 외 isozyme 이 술fN l 서 Ml® 되 었고, LDHi, LDH2, LDH3
및 LDH4는 insulin 30융까지 는 점 차 g f t 이 {£~F되 었으며 , LD H i는 30융 ® 서 는 ?S i햇되고 있다.
또한 LDH2는 30융 경 파시 에 의 1/18, LDH3는 I 한 1/3로 크게 g f t 이 ® T ■되 며 L D H 4는 S'it；3 X 1 0 i,u n it 가 되 고 있다. K f 우로 L D H s는 에 it：해 50^ 에 K 탈하는 29X10«unit 가 JtJB되고 있다. 그러 나 30용 경과t i 황는 L D H z, LDH3, LDH4가 K S t로 itJP 되 기 시 작하여 LDHi도 다시 해토되 었으며 45:55' 경 과 1U블는 LDHs를 •한 은 isozyme 이 다시 j필;^'되고 있다.
H e r m a n n 등 은 흰쥐에 in s u lin 을 S R 하였을 때 iT에서 는 g ly c o g e n ：토 " 이 ■되 나 |g|화 에서 는 in s u lin g 북t을 45:9'까지 는 R S f로 g ly c o g e n 토*&많이 된다고 하였 다. 45상 t i황
#
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June, 1976 m ^ m 95
F i t 1-
b
CRrcupj
■The v a ria tio n of L D H activities, control group.
10 m in . afte r in s u lin ad m in istra tio n . 20 m in . after in s u lin ad m in istratio n.
30 m in . after in s u lin a d m in istra tio n.
40 m in . after in s u lin ad m in istratio n, 60 m in . a fte r in s u lin ad m in istra tio n .
® - L iv e r, Muscle, - * - Serum.
L D H s외 이 크게 되고 L D H i^ L D H 4 의 이 다시 렸 ^되 고 있는 것은 H e rm a n n 등의 한 바와 §1^ 가 있는 것으로 생 각된 다.
J fllS에 서 는 L D H i ~ L D H5 5 ® 의 iso zy m e 이
j l 술되 었으며 L D H4, L D H s 는 in s u lin g
용황 20:9•까지는 ffitt이 itSn되었다가 20;9'~
45융 사이에 되고 45융 황 다시 itJP 되 는 « [퍼을 나타내었다. LDHi, LDH2는 45상 까지 S t t 외 율®이 5U로 없었으며 45융 경과 후에 g t t 외 it j n 를 나타내고 있다.
(group)
F ig：. 2— T he v a r ia tio n of L D H isozyme p a tte rn of liver, muscle and serum .
LD H s, *** L D H4, L D H3, L D H2,
— - L D H3
m
Fiff. 3~ T h e average blood sugar v a ria tio n of each experim ental group.
탈?¥의 JfillKft,®는 Fig. 3과 같다. S I I S 은 88mg/dl 로서 lE^ 이 나 b gMl 서 » 1/2로 f£ T 되었고 햇는 12m g/dUilF외 를 나타내고 있다.
1) Insulin을 흰쥐에 ©렸하여 f f F , 행I화 및 하의 LDH 행® 14K 및 LDH isozyme patt- ern 의 텔fk를 SU®하였다.
2) LDH 는 insulin fff 및 ®5|화에서 itJn 되나 Jfilif에서는 insulin g 화봤 20
•까지는 if jn 되고 20융~45융 사이에 IE할f i 로 되며 45요 황에 다시 itJn 되었다.
3) ®|최외 LDH isozyme 은 insulin S S 로 LDHi 의 ffitt은 크게 되 며 LDHs 의 S t t 은 S J t 로 ItJB되었다.
4) 3T의 LDH isozyme 도 insulin 로 LDHs 의 이 ：!#；!)«되 나 LDH4 외 f i t t 은 <£1^되 었 다.
5) Jfllif의 LDH isozyme 은 insulin 로 모 든 LDH isozyme 의 S t t 이 콤구 itJn 하는 ffl W I허이나 LDH3, LDHi, LDHs 는 S 텍황 20융까지 크게 itJB되고 20융~45;& 사이에 되었다
가 45:9•빨 다시 itJB되었다.
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