여성 성매매자들에 있어서 Mycoplasma genitalium 및 Ureaplasma urealyticum 검출

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•교신저자：이길호, 단국대학교 의과대학 비뇨기과학 교실 충남 천안시 동남구 망향로 359 ^우 330-715 Tel: 041-330-715, Fax: 041-556-0524 E-mail: [email protected]

Received: September 7, 2010 Accepted: October 4, 2010

여성 성매매자들에 있어서 Mycoplasma genitalium 및 Ureaplasma urealyticum 검출

단국대학교 의과대학 비뇨기과학교실

[Abstract]

Detection of Mycoplasma genitalium and Ureaplasma urealyticum Infection in Female Commercial Sex Workers

Gilho Lee, Hee Yoon Park

From the Department of Urology, Dankook University College of Medicine, Cheonan, Korea

Purpose: To detect Ureaplasma urealyticum (U. urealyticum) and Mycoplasma genitalium (M.

genitalium) infections in female commercial sex workers (FCSW) in Korea.

Materials and Methods: Total 127 samples from FCSWs were randomly collected. Endo-cervical swab

was obtained and DNA was extracted from the samples. Gene amplification was performed with specific primers for U. urealyticum and M. genitalium from the patients’ DNA.

Results: Of the 127 samples, 49 samples were positive by amplification of U. urealyticum and 7 samples were positive by amplification of M. genitalium. In this study, the prevalence of U. urealyticum and M. genitalium in FCSW were 38.5% and 5.51%, respectively.

Conclusions: Detection of U. urealyticum was relatively high, whereas detection of M. genitalium was

relatively low in FCSW in Korea. Further studies should be performed to characterize the mycoplasma infections in sexually transmitted infectious core groups. (Korean J UTII 2010;5:182-187)

Key Words: Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma genitalium, Sex

서 론

성 전파성 감염증으로 70년대 중반까지 증가하던 임

균성 요도염의 빈도는 그 후 감소하는 반면, 비임균성

요도염의 빈도는 점차 증가하고 있다.

과거에는 요도

염을 유발하는 균을 주로 배양법으로 분류하여 임균이

자라면 임균성 요도염, 증상이 있지만 임균이 자라지

않으면 비임균성 요도염으로 분류하고 치료하였다. 하

지만 근 20년 동안 유전자 증폭법 및 염기서열 분석법

을 이용하거나, 과거에 잘 배양되지 않았던 균을 배양

할 수 있는 기술이 개발되어 임균성 요도염, Chlamydia

Table 1. Primers for amplifications

Targets Sequences

U. urealyticum 5'-CAA TCT GCT CGT GAA GTA TTA C-3'

5'-ACG ACG TCC ATA AGC AAC T-3'

M. genitalium 5'-AAG TGG AGC GAT CAT TAC TAA C-3'

5'-CCG TTG TTA TCA TAC CTT CTG A-3'

Globin 5'-GGT GAA CGT GGA TGA AGT TG-3'

5'-CAA CTT CAT CCA CGT TCA C-3'

외 비임균 및 비 C. trachomatis 요도염으로 분류하고

있다. 이러한 분류에 의하면 과거에는 C. trachomatis 감 염 빈도가 30∼50%까지 보고되었으나

최근에는 15%

정도로 낮게 보고되고 있다.

비임균 및 비 C.

trachomatis

감염균은 Ureaplasma

(U.

urealyticum), Mycoplasma hominis

(M.

등이 원인균으로 보고되고 있다.

하지만 U. urealyticum 는 건강인의 비뇨생식기에서 분리되기도 하고 경우에 따라서는 요도염, 전립선염 및 부고환염 뿐만 아니라 그 합병증으로 불임의 원인균으로도 알려져 있다.

성 매개 전파질환으로 분류하기 위해서는 성교를 통해 감 염균이 전파하여야 하는데 여성에서 Mycoplasma 속 (species)이 병을 유발하는 감염균인지 (pathogenic bacteria) 아니면 무해한 균인지 아직 잘 정립되어져 있 지 않다.

이에 저자들은 성매개 질환의 높은 위험군 인 여성 성매매자를 대상으로 유전자 증폭법을 이용하 여 U. urealyticum 과 M. genitalium의 유병률을 조사하 여 Mycoplasma 감염의 임상적 의미를 추정하고자 한다.

대상 및 방법

1. 대상

2004년 4월부터 8월까지 약 5개월에 걸쳐 경기도 에 있는 1개 보건소에서 주기적인 건강검진을 받기 위해 모인 여성 성매자 410명 중 유전자 증폭법으로 임균과 C. trachomatis 감염이 없었던 환자 중 무작 위로 선택된 127명을 대상으로 하였다. 대상군의 평 균연령은 26±7세 였다.

2. 검체에서 DNA 추출

Phosphate-buffered saline (PBS, 8g NaCl, 0.2g KCl, 1.44g Na2HP04, 0.24g KH2PO4, pH 7.4)을 적신 면봉 을 자궁경부 안쪽에 넣어 상피세포를 얻어 미리 냉 장 보관된 1ml의 PBS 용액이 들어있는 소독된 1.5ml 관에 보관하였다. 여러 번 vortexing을 시행한 후 면 봉은 버리고 13,000 xg로 원심분리한 후 상층액은 버 린 후 다시 PBS 용액으로 다시 한 번 반복하여 수 세, 원심분리 후 상층액을 버리고 침전물을 남아있는 PBS 용액으로 부유시켰다. Wizard genomic DNA purification kit (Promega, USA)를 이용하여 genomic DNA를 추출한 후 TE buffer (DNA rehydration buffer) 로 용해시킨 후 -20℃에 냉장 보관하였다.

3. 중합효소연쇄반응

(polymerase chain reaction)

시동염기서열은 바이오니아 (대전, 대한민국)에

의뢰하여 제작하였으며 그 순도는 MALDI-TOF로

확인하였다. Housekeeping 유전자는 beta-globin으로

하였으며 이를 바이오니아에 제작 의뢰하였다

(Table 1). 모든 증폭 혼합물은 master 혼합물을 만

들어 24µl씩 분주하였으며 위에 추출한 주형 1µl를

혼합하여 증폭하였다. Master 혼합물 24µl 안에는

Taq polymerase 1 unit (Promega, USA), 10배

Solution B (20mM Tris-HCl 100mM KCl, 0.1mM

EDTA, 1mM DTT, 50% glycerol, 0.5% Tween 20,

0.5% Nonidet-P40) 2.5µl를 사용하였다. dNTP 혼합

Fig. 1. Polymerase chain reaction results of Ureaplasma urealyticum in patient samples. M; 100bp DNA ladder marker, S1,2,3,4 were from patients samples. N1 was from negative control. S1, 2, 3 showed positive bands.

M N P

Fig. 2. Polymerase chain reaction results of Mycoplasma genitalium in patient samples. M; 100bp DNA ladder marker. P and N were from patients samples. N showed negative result and P showed a positive band.

물 (Promega, USA) 200µM, MgCl

(1.5mM), 시동염 기서열 앞, 뒤 방향으로 각각 25pmole로 총 25µl로 만들었다. 유전자증폭기는 GeneAmp 9700 (Applied Biosystems, USA)를 사용하였으며 첫 회 증폭 조건 은 94℃에 4분, 94℃에 30초, 55℃에 30초, 72℃에 30초로 25회 증폭하였으며 72℃에 4분 연장하였다.

House keeping 유전자인 beta-globin의 증폭은 상기 같은 조건의 master 혼합물을 만들고, 증폭조건은 94℃에 4분, 94℃에 30초, 53℃ 30초, 72℃에 1분 50초로 30회 증폭하였으며 72℃에 4분 연장하였다.

증폭한 DNA 5µl를 1.5% agarose gel (Promega, USA)에 0.5배 희석 TBE buffer (1M Tris, 1M boric acid, 20mM EDTA, pH 8.3)를 이용하여 100V 전압 으로 45분 동안 이동시켰다. Ethidium bromide (Sigma, USA)로 1시간 염색한 후 30분간 증류수로 수세를 시키고 사진을 얻었다 (Fig. 1, 2).

결 과

127명의 모든 검체에서 housekeeper 유전자의 일 종인 beta-globin이 검출되어 Mycoplasma 증폭에 적 당한 검체임을 알 수 있다. 127명 중 49명 (38.5%)에 서 U. urealyticum이 증폭 되었으며, 127명 중 7명 (5.51%)에서 M. genitalium에 양성이었다. 그러나 U.

urealytium과 M. genitalium이 동시에 검출된 여성은

없었다.

고 찰

1898년 Nocard와 Roux

가 가축으로부터 처음 mycoplasmas 분리하였으며, 사람에 있어서는 Dienes 와 Edsall

가 Bartholin 선 농양 환자로부터 처음 분 리한 이후로 다양한 Mycoplasma가 분리 보고되었다.

유전자 증폭법 (polymerase chain reaction)과 염기서 열 분석법 (sequencing and clustering)으로 분류한

함이 확인되었으며, 사람에서는 총 15종이 보고되어 있으며 그 중 9종이 비뇨생식기에서 발견된다. 요로 생식기에서 검출되는 Mycoplasma는 U. urealyuticum,

있으며, M. fermentans, M. penetrans, M. pneumoniae,

검출되고 있다. 이 중 U. urealyticum은 다양하게 분화 하여 biovar 1 및 2로 분류되고 그 안에는 약 14개의 다양한 serovars가 보고되고 있다.

Mycoplasma는 Mollicutes 계통 세균으로 그 크기는 1um 이하로 매우 작고, 구성하는 핵산의 크기는 0.58

∼1.38 megabases (MB)로 매우 간편하여 생존하기 위

해서는 진핵세포에 기생하고, 진핵 세포에서 일정한

영양분을 제공 받아야 생존 가능한 세균이다. 또한

특이하게 세포벽이 없고 진핵세포의 콜레스테롤로 부터 얻어진 풍부한 sterol로 구성된 세포막을 가지 고 있어 β-lactam계 항생제에 약제내성을 지니고 있 다.

해서는 기본적으로 Mycoplasma의 병인을 이해하여 야 한다. 전술한 것과 같이 Mycoplasma는 크기가 작 고, 단백질을 합성할 수 있는 DNA의 량이 적어 생 존을 위한 모든 영양분을 자신이 합성하여 사용할 수 없어, 필수 영양분을 숙주 세포로부터 얻어 사용 하여야 하고 숙주 세포가 죽으면 자신도 생존할 수 가 없다. 또한 독립적이고 튼튼한 세포벽이 없어 주 위 환경의 변화나 삼투압의 변화 등이 발생하면 생 존할 수가 없다. 하지만 숙주 세포 안으로 들어가 성공적인 생존을 위한 교두보가 마련된다면

주 세포를 죽이지 않고 장기간에 영양분을 제공받는

다.

그러한 이유로 특히 U. urealyticum와 M.

hominis는 비교적 병원성이 약하며 발병에는 숙주의

요인이나 환경적 요인이 크게 작용하며, 감염된 환 자 뿐만 아니라 건강인에서도 분리되고 있으므로 병 원성에 관해서는 불분명한 점이 많다. 하지만 증상 이 있는 환자에서 증상이 없는 사람에 비해 많은 수 의 Mycoplasma가 비뇨생식기에서 검출된다. 또한 병 원균이 존재할 수 없는 태반이나 양수막 등에서 발 견되며 이러한 균 존재는 산모나 태아에게 해가 될 수 있다. 그리고 역학적으로 성교를 시작하기 시작 하는 사춘기부터 Mycoplasma 감염률이 증가하는 동 시에 임질이나 C. trachomatis 감염이 있는 환자에서

고려한다면 일부 Mycoplasma나 환자의 상태에 따라 병원성이 있을 것으로 추정된다.

지금까지 보고된 논문에 의하면 Mycoplasma는 다 양한 질환들을 일으키는데 남성에서는 요도염, 전립 선염, 부고환염 등과 그 합병증으로 불임 등의 비뇨 생식기 질환이 보고되고 있으며, 여성에서는 Bartholin 선 농양, 골반염, 습관성 유산 및 사산, 조기 분만으로 인한 저체중아 등이 보고되고 있다.

전 술한 것과 같이 Mycoplasma는 숙주세포가 없으면 생 존할 수가 없어 배양을 위해서는 영양분을 공급하는 vero-cell (kidney epithelial cells from African green

monkey)같은 공급세포 (feeder cell)가 필요하다. 이러 한 공급세포에서도 느린 대사를 하기 때문에 성공적 인 배양을 위해서는 수개월 혹은 1∼2년이 걸리기도 한다. 또한 크기가 1um 이하로 작기 때문에 배양해서 형태학적으로 진단하는 것은 매우 어렵다. 이러한 단 점을 극복하기 위해, 최근에 개발된 유전자 증폭법이 나 일부 Mycoplasma 핵산과 교잡할 수 있는 탐침자 를 이용하거나 효소면역검사법 등이 개발되었다.

특히 최근 연구와 진단목적으로 많이 쓰이는 유전자 증폭법은 Mycoplasma 속의 동정에 있어 배양방법과 비교하면, 84∼89%의 민감도와 95∼98%의 특이도를 나타내고, 24시간이내에 빠른 결과를 내고, 유전자의 염기서열을 분석하여 아형 구별을 할 수 있어 많이 사용되고 있다.

저자가 증폭한 염기서열은 MgPa 유전자로 이는 M. genitalium이 성공적인 숙주세포 침 투를 위한 부착 단백질 (adhesion protein)을 만드는 유전자로 M. genitalium 종에 일치하는 유전자 염기서 열을 가진다. 또한 U. urealyticum을 진단하기 위해 사 용된 염기서열은 urease을 만드는 핵산으로 U.

urealyticum이 공통적으로 가지고 있는 염기서열이

다.

Mycoplasma 검출은 성별 및 연령에 따라, 검

출장소에 따라 다양하게 보고되고 있다. 즉 Furr 등

은 젊은 연령군에서 더 많이 Mycoplasma가 검출되었 으며, U. urealyticum이 M. hominis보다는 약 4배 이상 더 많은 빈도를 나타냈다고 보고하였다. 하지만 저자 의 연구에서는 U. urealyticum이 M. hominis 보다 약 7 배 많았다. 이러한 차이는 연구 대상의 차이, 즉 성매 개질환의 전파에 중요한 역할을 할 것으로 추정되는 여성 성매매자의 특징이라고 생각할 수 있으나 본 연 구의 대상군이 작다는 것도 고려하여야 할 것이다.

또한 저자의 연구에서 대상군의 특수성을 고려한다

면 U, urealyticum의 빈도는 38.5%로 다른 집단과 비

교하여 높지 않았다. 생각할 수 있는 이유로 본 연구

의 대상군은 모두 임질이나 C. trachomatis의 감염된

사람은 제외하고 비임균성-비 클라미디아 표본만을

대상으로 하였다는 점이다. 전술한 것과 같이

혼합감염이 많은 점을 고려하면 실제로는 알려진 감

염자 수는 높게 밝혀질 것으로 생각한다.

결 론

상기 결과로 1개지역의 여성 성매매자들의 U.

urealyticum의 중합효소연쇄반응 양성률은 38.5%, M.

genitalium은 5.51% 정도로 나타났다. 향후 임상적

의미를 평가하기 위해서는 검사결과와 임상증상과 의 관련성 등에 대한 조사가 지속적으로 필요할 것 으로 생각한다.

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