Development of Polymeric Drugs Utilizing Dithiocarbamate Chitosan: Formation and Antimicrobial Activities of Dithiocarbamate Chitosan-Mg(II)-Tetracycline Complex

약학회지 제39권 제 4 호 373~379(1995) Y a k h a k H oeji V o l.39. N o.4

디처오카바메이트 커토산을 지지체로 이용한 고분자 약물의 개발：

디 치오카바메어 트 커토산-M g(ll)-테트라사이 클린 복합체의 생성 및 항균성

김윤텍 • 유종호* • 정연진 ■이정수 ■김영미*

부산대학교 약학대학, •동화약품 중앙연구소 {Received April 24, 1995)

D e v e lo p m e n t o f P o ly m e r ic D r u g s U t iliz in g D i t h io c a r b a m a t e C h i t o s a n： F o r m a t io n a n d A n t im ic r o b ia l A c t iv it ie s o f D it h io c a r b a m a t e C h ito s a n - M g (II)- T e tr a c y c lin e C o m p le x

Youn Taeg Kim, Jong Ho Yu*, Yun Jin Jung, Jeoung Soo Lee and Young Mi Kim"' College of Pharmacy, Pusan National University, Pusan 609-735, Korea

^Central Research Institute of Dong Hwa Pharm. Co., Anyang 430-010, Korea

Abstract— C o u p lin g o f tetracycline (Tc) to d ith io c arb a m ate chitosan(D T C C ) v ia chelate b o n d w a s c a r­

ried o u t in the presence of Mg (II) ion b y one- a n d two-bath process. In one-bath process. DTCC w a s treated w ith Mg(II)-Tc solution. In two-bath process. DTCC w a s treated w ith Mg(II) to pro duce DTCC- MgOi). w h ic h w as isolated a n d treated in tu r n w ith Tc solution. The effect o f p H a n d te m pe ratu re o n b in d in g o f Tc w as investigated varying the pH o f the solu tio n from 2.6 to 3.2 at 10 a n d 30 °C. B in d in g o f Tc w as n o t alTected greatly b y s u c h variations in p H a n d tem perature. A m o u n t o f Tc b o u n d to 1 g m o f m atrix reached to 180 m g. Release of Tc from DTCOMg(II)-Tc w a s investigated b y b a tc h a n d flow m e tho d , a n d the a m o u n t o f Tc released ag a inst tim e followed b y flow m e th o d exhibited n e a r line ar re­

latio n sh ip . DTCC-Mg(II)-Tc show ed very prolonged an tim ic ro b ia l activity c o m p are d to th a t o f free Tc w h e n it w as tested against Escherichia c o liT G -l a n d Bacillus subtilis NA-1.

Keywords □ D ithio carb am ate chitosan~Mg(II)-Tetracycline com plex. A n tim icro b ial activity

최근 고분자지지체와 약물을 결합시킨 제어방출성 또는 수용체 표적성 약물의 개발에 관한 연구가 많이

보 고 되 고 있다.*"®* 고분자지지 체로부터 약물이 방출되

는 속도는 고분자지지체와 약물분자의 결합특성에 따 라 달라지게 된다. 결합방법에는 공유결합, 배위 흑은 chelate결합( 4 H = '"50 kcal/m ole), 수소결합, 이온 결함(z\H = '10 15 k cal/m ole), van der W a a ls결 합 (4 H = U kcal/m ole)을 들 수 있으며. 이들은 각각 결합특성이 다르므로 약물의 방출속도 또한 달라지게 된다. 배위 또는 chelate결합은 금속이온과 약물의 특 성에 따라서 결합에너지가 크게 다르므로 방출속도를

• 본 논문에 관한 문의는 이 저자에게로

조절하기가 쉽고 반응과정이 간편하다는 점을 고 려 하 여 chelate 결합을 이용한 고분자약물의 개발에 관 한 연구들이 발표되고 있 다 .

Neogi와 Allen®은 chelate resin인 Dowex 4~

KDow Chemical Co., M idland, M I)에 F e (III)와 A l (III)을 결합시킨 루 , 4-amino-3,5,6-trichloropicoli- nic acid를 적용시켜서 생리활성을 조사한 바 있 다 . Kim 등 ^ 은 양모나 cotton등 자연산 섬유를 간단한 화 학처 리에 의하여 활성화시킬 수 있음을 발표한 바 있 다 . 특히 cotton은 섬유상태나 직물상태로써 알카리성에서 CS2로 처 리하여 간편한 조작하에서 xanthate group을 도입시킬 수 있으며, 생성된 xanthate group이 여러가 지 금속이온과 강한 chelate결합을 하는 것을 연구한 버■

374 김윤텍■유종호■정연진■이정수• 김영미

있다*세 *. 또한 여기에 착안하여 cotton xanthate와 Cu(II), Zn(II), Fe(III), AKIII), Zr(IV) 등을 결합시킨 후 이 돌을 고분자지 지 체로 이용하여 tetracycline, neo­

mycin, streptomycin, pyrithione등외 항생물질을 결 합시킨 후 , 이둘 섬유돌의 항균작용을 연구한 바 있다.

본 연구에서는 chitosan을 알카리성에서 C S2로 처러 하여 얻어지는 dithiGcarbamate chitosan (DTCC) 을 지지체로 하여 금속이온과 chelate결합을 할 수 있 는 항생물질인 tetracycline(Tc)을 대상으로 M g (II)을 이용한 DTCC-Mg(II)-Tc의 생성에 관하여 결합방식.

반응시간. 농도, 온도. pH 및 M g(II)/T c의 비율을 번 화시켰을 때 이둘이 약물의 결합에 미치는 영향. 약물의 방출특성 . 항균력의 지속시간을 조사하였다.

실험방법

시약및기기

염산 테트라사이클린은 Sigm a사에서, chitosan은 동 경 화성 공업 주식 희 사에 서 구입 하여 그대 로 사용하였 고 염화마그네슘과 기타 용매는 일급시약을 사용하였 다 . 미생물 실험에 사용된 배지는 D IF C O 제품을 사용 하였고, 균주는 Escherichia coli TGr-1. Bacillus subtilis NA-1 을 사용하였다.

자외선 흡광광도계는 U V IC O N 930을 사용하였고, IC P Q 는 Sh im adzu IC P Q 신 000을 , 적외선 흡광광도 계는 Bomem MB-100 FT-IR 을 , 원소분석기는 C A R L O E R B A STRU M DP200을 , pH 측정기는 C O R N IN G 150을 사용하였다.

Dithiocarbamate Chitosan(T>TCC)의 합성 - C h i­

tosan 7 g, 1 N-NaOH 100 m l, 이황화탄소 5 m /를 반응조에 넣고. 15°C에서 5시간동안 교반하여 Di- thiocabam ate Chitosan(D T C C )을 합성하였다. 생성 된 D TCC를 여과하여 분리하고 냉증류수. 냉에탄을, 냉아세론으로 세척하고 실온에서 수일간 건조시킨 후 , 분쇄하여 18-35 mesh사이의 시료만을 사용하였다.

DT CC는 원소분석 결과 황의 함량이 7.28%였고, IR spectrum에서 dithiocarbamate group(1480cm거이 확인되었다.

Dithiocarbamate Chitosan-Mg(II)-T etracydine 의 생성

한단계 방식 - 20°C에서 2.3 m M Tc-Mg(II) (1：1)

용액 100 m l를 일정 p H 로 조절한 후 , DTCC 1 용을 가 하고 교반시키면서 일정한 시간마다 반응용액외 p H 롤 조사하고 상등액 500 를 취해 시 간에 따른 Tc의 결합 량을 조사하였다. 반응용액의 초기 pH, 온도, 농도 및 M g(II)/T c의 비률 변화시키면서 동일한 조작을 행했 다 . Tc의 결합량이 최대일 때 여과하여 냉증류수, 냉아 세론으로 세척하고 여과한 후 , 저온에서 건조시켰다.

두단계방식 - KTC에서 염화마그네슘용액 1 0 0 m l 를 일정 p H 로 조절한 후 , DTCC 1 g을 가하고 교반시 켜 DTCC-Mg(II) complex생성반응을 행하였다. 일정 한 시 간마다 상등액 500 1-1；를 취해 시 간에 따른 M g(II) 외 견합량을 조사하였다. 30분에서 여과하여 냉증류수.

냉아세론으로 세척하고 저온에서 건조시켰다. 금속용 액의 초기 pH 및 농도를 번화시키면서 동일한 조작을 행했다. 10°C에서 일정 p H 로 조절한 Tc용액 100ml 에 DTCC-Mg(II) complex Ig 을 넣고 교반시키면서 일정시간마다 상등액 500 를 취해 시간에 따른 Tc의 결합량을 조사하였다. Tc용액의 농도 및 초기 p H 률 변 화시키 면서 동일한 조작을 행 했다. Tc외 결합량이 최 대 일 때 여과하여 냉중류수. 냉아세론으로 세척하고 저온 에서 건조시켰다.

DTCC-M g(II)-T c 의 IR spectrum 에서 di- thiocarbamate group이 1480 cirT'에서, tetracycl­

in e ^ amide group이 1675 crrf'에서 ,a,p-unsat- urated carbonyl stretching ba n d 가 , 1618 cm '에 서 , aromatic C = C band가 1540과 1450 c m '에서 , aromatic C-H bending b a n d 가 , 850과 690 cm *에 서 각각 확인되었다. 결합된 Tc와 M g이온외 앙은 반응 액 중에 남아있는 Tc와 C a 이온의 양을 원태 양에서 밴 값으로 각각 추정하였다. Tc의 양은 355 nm 에서 흡광 도를 측정하고. M g이온외 양은 IC P Q 틀 사용하여 정량 하였다.

Tc 및 Mg(II)의방출

Batch방식 - 뚫은 염산과 수산화나트륨용액으로써 p H 률 3과 7로 조절한 용액 500 m l에 시료 각 1 g을 가 하고 10"(그에서 교반하였다. 시간에 따라 상등액 500

^1/를 취하여 방출된 Tc와 M g (II)의 양을 정량하였다.

30°C에서도 동일한 조작을 행 했다.

Flow방식 - 내 경 6 m m , 높이 150 m m 인 colum n에 DTCC-Mg(II)-Tc I g 을 층진시킨 후 , KTC에서 pH 3 또는 pH 7액을 정 량펌프를 사용하여 (유 속 : 1 m l/분)

/. Pharm. Soc. Korea

pH2 6 pH2.0 pH3.0

30 60

Time (m in)

1 2 0

Fig. 1 — Binding of Mg(II)-Tc on DTCC as a function of time in one-bath process at different initial pH at ICrC. DTCC. 1 g, was treated with 100 ml of 2.3 mM Mg(II)-Tc(l：l) complex solution.

안정한

D T C C - M g ( I I ) - D T C C

를 생성 하면서 평형에

이를 것이 다

.

만약

M g ( I I )

이

T c

의 배위 자와 친화력 이

더 커서 안정한

1 ：2 c o m p l e x ( T c -

금속

- T c

)를 형성하

면

T c

와

D T C C

간의 결합은 잘 일어나지 않을 것이며

.

그 정도는

M g ( I I

)과

T c

용액을 먼저 작용시키는 한단

계방식에서 두드러지게 나타날 것이다

.

이 경우

T c

의

결합은

M g ( I I

)가

D T C C

에 결합된 상태에서

T c

와 작

용하게 되는 두단계방식을 적용하는 것이 유리할 것이

다

. T c

와

D T C C

간의 결함은 주로 배위결합에 기인할

것으로 생각되나 배위결합보다 결합에너지가 낮은 이 온결합도 관계할 것으로 생각하며

.

이들 약한 결합은 반응시간이 경과하면서

D T C C - M g ( I I ) - T c

로 부터

T c

또는

M g ( I I

)와

T c

가 헤러되는 현상을 나타낼 것으

로 생각된다

.

반응조건에따른약물의결함앙상

한단계방식 - D T C C 1 g

을

2 .3 m M M g ( I I ) - T c

용액

1 0 0 m l

와

1 0 ° C

와

3 0 ° C

에서 초기

p H

를

2 . 6

에서

3 . 2

까 지 번화시키면서 반응시켰을 때

,

시간에 따른

T c

의 결합

정도를 각각

F i g . 1

과

2

에 나타내었다

. 1 0 ° C

에서

p H

번화에 따른

T c

의 결합량은 크게 차이가 나지 않았으며

1

시간 경과했을 때 결합량이 최대가 되었다

. 3 0 ° C

에서

는

3 0

분 경과했을 때 결합량이 최대에 이른 후 다소 감

소하였고

p H

가

3 . 2

였을 때 결합량이 감소하였다

.

반응

초기에는 용액중의 약물의 농도가 비교적 높아서

,

빠른

«n

용즐되어 나오는

M g ( I I )

및

T c

의 앙을

1 0

분간격으로

정량하였다

. 3 0 ° C

에서도 동일한 조작을 행했다

.

항균력실험

3 0 m l

외 접종물을 배양접시에 넣고

,

고화되기 전에

s t a i n l e s s s t e e l c y l i n d e r (

내경

: 9 m m ,

외경

: 1 1 m m )

틀 넣고 고화시킨 후

, c y l i n d e r

와 내용물을 모두 제거하

여 두개의

d i t c h

룰 만들었다

.

각

d i t c h

에

T c

로

2 m g

에

해당하는 시료를 넣고

,

수 적외

a g a r

용액을 떨어뜨려

시료를 고정시켰다

.

이것을

3 7 ° C

에서

2 4

시간 배양시킨

후 생성된

i n h i b i t i o n z o n e

의 크기를 즉정하였다

.

각

시료의 항균력에 대한 지속성을 조사하기 위하여

,

각

d i t c h

내의 내용돌을 같은 방법으로 새로 만든 배양접시

의

d i t c h

에 옮긴 후

, 3 7 ° C

에서

2 4

시간 배앙시키는 실

험을

i n h i b i t i o n z o n e

이 생기지 않을 때까지 계속하여

반복하였다

.

각 시료에 대한 비교물로써

T c 2 m g

을 사 용하여 위와 같은 조작을 행하였다

.

결과 및 고찰

T c

의 결합은 한단계방식과 두단계방식으로 행하여 그 결과를 비교 검토하였다

.

본 실험에서

T c

의

h y ­ d r o x y l

기와

3

급

a m i n o

기

, D T C C

의

d i t h i o c a r b a ­

m a t e , a m i n o

및

h y d r o x y l

기가 배위자로 작용할 수

있다

.

서로 다른 종류의 배위자 존재하에서 형성되는

t e r n a r y c o m p l e x

의 특성온 두 가지 요인외 지 배를 받

을 것으로 예상되는데 그 하나는 각각의 배위자에 대 한 금속이온의 친화력이며

,

또 다른 요인은

t e r n a r y

c o m p l e x

의 용해도이다

. D T C C

나

T c

내의 배위자에

대한

M g { I I

)의 친화력이 비숫하면

D T C C - M g ( I I ) -

T c t e r n a r y c o m p l e x

가 불용성이란 점을 고려할 때

이외 생성이 거의 정량적으로 일어날 것으로 예상된

다

.

만약

M g ( I I

)이

D T C C

또는

T c

어느 한쪽의 배위

자와 친화력이 커서 안정한

T c - M g ( I I ) - T c

흑은

D T C C - M g ( I I ) - D T C C

를 형성하는 경우

, T c

와

D T C C

간의 결합은 잘 일어나지 않을 것이다

. M g ( I I )

이

D T C C

의 배위자와 친화력이 크면

, M g ( I I

)파

D T C C

를 먼저 작용시키는 두단계방식에서는 처옴부

터

T c

와

D T C C

간의 결합온 잘 일어나지 않을 것이고

,

한단계방식에서는 반응초기에는 약물이 불용성 고분 자지지체에 어느 정도 결합하여

D T C C - M g ( I I ) - T c

를 생성하겠지만 시간이 경과하면

T c

는 일부 해러되고 더

디치오카바메이트 키토산을 지지체로 이용한 고분자 약물의 개발 375

Time (hrs)

Fig. 3 — Effect of concentration on binding of Mg(II)-Tc on DTCC as a function of time in one-bath pro­

cess when initial pH of the solution was 2.8 at 10°C. DTCC, 1 g. was treated with 100 ml of Mg(II)-Tc complex solution.

속도로 불용성 지지체에 결합했던 약물이 시간이 경과 하면 약한 결합이 해리되면서 평형에 이르는 것으로 생 각된다. 초기농도를 번화시켰을 때, 시간에 따른 Tc의 결합정도를 Fig. 3에 나타내었다. M g (II)- T c (l：l 몰 버) 용액의 농도를 1.15, 2.30, 4.60 m M 로 증가시키면 최대결합량에 도달하는 시간이 30분 , 1시간, 4시간으로

Time (m in)

Fig. 2 ― Binding of Mg(II)-Tc on DTCC as a function of time in one-bath process at different initial pH at 30TI. DTCC. 1 g, was treated with 100 ml of 2.3 mM Mg(II)-Tc(l：l) complex solution.

376 김윤텍 • 유종호 • 정연진 • 이정수 • 김영미

길어졌고. 결합량 뿐만아니라 걸합% 도 52. 77, 94% 로 증가하였으나 (곡선 1. 3. 6 버교). 그 이상 농도를 증가 시켜도 약물의 결합은 더 이상 증가하지 않았다. 농도가 증가했을 때 결합%가 증가하는 것은 용액중의 약물농도 가 증가하면서 Tc가 DTCC에 결합하는 쪽으로 평형이 이동하기 때문으로 생각된다. Tc의 농도틀 2.3 m M 로 일정하게 하고 M g(II)/rc 농도비를 0.5, 1, 2로 중가시 키면 최대결합량에 도달하는 시간이 길어졌고. Tc의 결 합% 도 50, 77, 92% 로 중가하였다(곡선 2, 3, 4 비교).

KTC, M g(II)이 없는 상태에서 DTCC와 Tc의 결합을 조사 하였을때. pH 4.0 에서는 Tc의 결합이 일어나지 않았으며 pH 2,2에서 DTCC 1 g당 Tc가 24m g 결합하 였다. 이는 동일한 조건에서 Tc와 당량외 Mg(II) 존재하 에서 결합한 양의 33% 정도가 된다. pH 2.2에서는 Tc 가 protonation된 비율이 커지고 이것이 DTCC의 di- thiocarbamate기와 이온성 결합을 하기 때문으로 생각 된다.*"*

두단계 방식 - 2 0°C에서 pH 를 번화시켰을 때 DTCC와 결합하는 Mg(II) 의 양을 측정하여 그 결과를 Table I에 나타내었다. 10분 경과했을 때 평형에 도달하 였고. 초기 p H 가 2.5이상에서는 p H 변화에 따른 Mg (II)의 결합량에는 큰 차이가 없었다. 10°C, pH 3.5에서 농도에 대한 영향을 Table II에 나타내었다. 2.3 m M 이 하에서는 거외 100% 결합하였으나, 9 .2 m M 에서는 75% 를 나타내었다.

D T C O M g (II) complex와 Tc의 결합은 반응용액외 초기 p H 를 2.8에서 3.6까지 번화시켰을 때, pH 3.2 이

Table I ― Magnesium ion uptake of DTCC after 10 min at different initial pH of the solution at 20"C.(DTCC. 1 g. was treated with 100

ml

of 9.2 mM magnesium chloride solution).

initial pH 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 mmole 0.521 0.628 0.649 0.665 0.658 bound

%

^{bound 56.6 68.3 70.5 72.3 71.5}

Table II — Magnesium ion uptake capacity of DTCC when initial pH of the solution was 3.5 after 30 min at 1(TC. (DTCC, 1 g. was treated with 100 ml of magnesium chloride solution).

mM 1.15 2.30 4.60 9.20

mmole 0.115 0.229 0.434 0.691 bound

%

^{bound 99.7 99.7 94.3 75.1}

/. Pharm. Soc. Korea [3

E

s

o

o

o

o

o

^

1 3 3 3 6 6 L

pi

2 4 4

^

o

o

o

o n 1 1 3 6 3 6

^ K I 0

^ 4

^ 4

M □ A • ▼ A o

0 0s

M

/

OJ,

wlu

디처오카바메이토 키토산올 지지체로 이용한고분자 약물의 개발 377

Fig.

Time (hrs)

4 —— B in d in g o f Tc o n D T C C - M g(II) as a fu n ctio n o f tim e in tw c rb a th process a t different in itia l p H a t 10T3. D T C C - M g(II), 1 g, was treated w ith 100 m l o f 4.6 m M Tc solution.

상에서는 결합량에 커다란 차이률 나타내지 않았으며 , 2시간 정도에서 평형에 도달하면서 약 98% 정도 결합 하였고, 결합된 Tc가 다시 해리하는 현상도 나타내지 않았다. (Fig. 4)

약물의 결합은 농도가 높을수록, 온도는 낮을수록, 결 합 % 가 높게 나타났으며, 결합된 약물은 안정하였다.

초기 용액외 pH 및 온도에 대한 영향은 크지 않았다.

Tc 및 Mg(II)의 방출

B a tc h 방식 - 1 0 °C 에서 D T C O M g ( II) - T c 와 DTCC-Tc로 부터 시간에 따른 Tc외 방출정도틀 pH 3. 7에서 측정했을 때외 결과를 Fig. 5에 나타내었다.

DTCC-Mg(II)-Tc의 경우 pH 7에서 6시간정도 경과 했을때 거의 평형에 도달하였으며, pH 3에서는 평형에 도달하는 시간이 훨씬 더디게 나타났다. 1 0시간 정도 경과했을 때 Tc의 방출정도는 pH 3. 7에서 각각 29, 15% 였고, 120시간 경과했을때는 pH 3, 7에서 각각 37. 21% 였다. pH 3 에서 방출량이 더 큰 것은 불용성 지지체에 결합했던 Tc가 산성용액에서 용출됨을 나타 낸다. DTCC-Tc의 경우, Tc의 방출은 초기에 빠른 속 도로 일어나서 1시간 경과했을 때. pH 3과 7에서 각각 44, 51%정도 방출되었으며 4시간정도 경과하면 거의 평형에 도달하였고, 이때 각각 64, 76%정도 방출되었 다 . DTCC-Mg(II)-Tc의 경우와 달리 p H 가 높은 쪽에 서 외 Tc외 방출량이 크게 나타나는데 이것은 DTCC-

Fig. 5

Time (h rs)

R e le a se o f Tc as a fu n c tio n o f t im e fro m D T C C - M g (II)- T c a n d D T C C - T c a t p H 3 a n d 7 a t 10°C b y b a tc h m e th o d . 100 m l o f b a t h s o lu tio n w a s a llo w e d to c o n ta c t w it h 1 g o f s a m p le . In c o rp o ra te d a m o u n t o f Tc per g r a m o f D T C C - M g (II)- T c a n d D T C C - T c w a s 0.4 1 9 m m o le a n d 0 .0 5 4 m m o le , respectively.

Tc간의 결합이 이온성 결합이기 때문 에 , p H 가 높으면 D T C C 의 dithiocarbamate 옴이 온기와 결합한 pro- tonated tetracycline이 용액중으로 방출되는 것으로 생각된다.

Flow방식 - 10. 30°C, pH 3과 7에서 시간에 따른 Tc및 M g (II)의 방출정도를 Fig. 6에 나타내었다.

DTCC-Mg(II)-Tc로 부터 시 간에 따른 Tc 및 M g (II) 외 방출량은 거의 직선으로 나타났다. Tc의 방출정도는 KTC, pH 3. 7에서 10시간에 경과했을 때 각각 23 및 22% 방출되었으며, 48시간 경과했을때 각각 69 및 6 8 % 이었다. 30°C, pH 3, 7에서는 10시간 경과했을 때 각각 33 및 31% 방출되 었으며 , 48시 간 경 과했을 때 각 각 83 및 78%로 나타났다. 1(TC에서 Tc외 방출은 p H 의 영 향을 거의 받지않으나 30°C에서는 p H 가 낮으 면 Tc의 방출이 조금 크게 나타났다. M g (II)의 방출은 p H 의 영향이 더 크게 나타나서, 10°C와 30°C에서 p H 3에서는 Tc와 M g (II)의 방 출 % 가 거의 비숫하게 나타나지만 pH 7에서는 M g (II)의 방 출 % 가 Tc보다 훨 씬 낮게 나타났다. M g (II)의 방출이 적어지는 것으로 보아 pH 7에서는 Mg(II)-Tc간의 결합보다 DTCC- M g(II) 간의 결합이 더 안정한 것으로 생각된다.

DTCC-Tc로부터 시 간에 따른 Tc의 방출정도는 1(TC,

30 50 Time (hrs)

Fig. 6 — Release of Tc and Mg(II) as a function of time from 1 g of sample at pH 3 and 7 at 10°C by flow method (flow rate ； 1 ml/min). In­

corporated amount of Tc and Mg(II) per gram of DTCC-Mg(II)-Tc was 0.419 and 0.696 mmole, respectively.

p H 7에서 10시간에 87%, 24시간에는 거외 100% 방 출되었으나, 같은 조건에서 DTOC-Mg(II)-Tc로 부터 는 22, 42% 로 나타났다. DTCC-Tc로 부터 Tc외 방출 이 DTCC-Mg(II)-Tc에 버해 훨씬 빨리, 완전히 일어 나는 것은 DT CC와 Tc는 chelate결합에 비해 약한 이 온결합을 하기 때문으로 생각된다.

항균력

D itch Plate방법으로 G( + )인 Bflci7；«s subfi/is 와 G (-)인 E. co/i■에 대한 각 sam ple의 항균력의 지속시간

을 각각 Table III에 나타내 었다.

Bacillus subtilis를 사용한 경우, free Tc가 5일동안 inhibition zone을 나타내는데 비해 Tc로서 동량인 DTCC-Tc는 11일 동안 inhibition zone을 나타내었 다 . 반면에 DTCC-Mg(II)-Tc는 당량의 free Tc가 7일 동안 inhibition zone을 나타내는데 비해 29일동안 계 속하여 inhibition zone을 나타내었다.

E. co/z■를 사용한 경우, DTCC-Tc는 당량의 free Tc 가 5일간 inhibition zone을 나타내는데 비해 10일 동 안 inhibition zone을 나타내었고, D T C O M g (II)- Tc는 당량외 free Tc가 10일 정도 inhibition zone을 나타낸데 비해 34일까지 지속적으로 inhibition zone 을 나타내었다.

결 론

한단계반응에서 Tc분자들은 초기에 빠른 속도로 결합 했으며, 결합량은 반응용액의 초기 pH 를 2.6에서 3.2까 지 변화시켰을 때 크게 번하지 않았다. Mg(II) 존재하에 서 DTCC와 Tc의 결합은 M g(II)을 통한 배위결합 뿐만 아니라 결합에너지가 낮은 이온결합도 관계되는 것으로 나타났고, 30°C에서는 반응시간이 경과함에 따라 결합 된 약물이 다소 해리되었다. Flow 방식으로 행한 DTCC-Mg(II)-Tc로부터 시 간에 따른 Tc 및 Mg(II) 의 방출량은 거의 직선으로 나타났다. DTCC-Mg(II)-Tc 외 항균력을 G (-)균인 Escherichin Co/i'NA-1 와 G( + )균 인 Bacillus Subtilis T G H 을 대상으로 하여 "Ditch Plate" 방범 으로 당량외 free Tc 및 DTCC-Tc를 사용하 여 행한 실험 결과와 비교하였을때 상당한 기간동안 지

Table III― Antimicrobial Activity

days inbition zone：diameter (mm)

strains drugs 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 27 28 29 30 33 34 35 B.

suhstilis

Free(2.0 mg)

Free(0.8 mg) DTCC-Mg(II)-Tc DTCC-Tc 느 E.

coli

Free (2.0 mg)

Free(0,8 mg) DTCC-Mg(II)-Tc^

DTCC-Tc'

' The amount of sample used for the test was equivalent to 2.0 mg of free drug.

" The amount of sample used for the test was equivalent to 0.8 mg of free drug.

Data omitted for printing.

}. Pharm. Soc. Korea

378 김윤텍•유증호

■

^{정연진•이정수• 김영미}

5 5 8

6 1 1 1 1 8 7 1 1 1 1 8 6 1 T—41

- nn

8

8 6

7-0 81-2 1

5 5 9 8 X1 IX

t-H

XI 9 6 0 9 l i

1

O1스

1 1 2 8 2 2 2

1 2 2 5 2 4 5 2 2 2 2 3 8 5 6 3 2 2

2 8

0

7 2

3 2 9

5 9 2

3

2 9

18

2

3

2 1

1 0 0 3

3

2 2 - 1

8 3 - 3

2 0 7

2 0 3 2 3 3 2

1 2 0 3 3 3 3 2 0 3 2 3 3 3 3 7 1 4 4 3 3 3 3 5 6 8 8 4 3 3 3

디치오카바메이트 키토산을 지지체로 이용한 고분자 약물외 개발 379

속성을 나타내었다.

감사의 말씀

본 연구는 1 9 9 2년도 한국과학재단 일반기초 연구과

제(921-1600-073-1) 연구비 지원에 의해 수행된 것중

의 하나이 기에 이에 감사드리는 바 입 니 다.

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