Effects of Aurantii Immaturus Fructus (AI) on Atopic Dermatitis (AD) Induced by DNCB in Mice

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DNCB로 유발된 생쥐의 아토피 피부염에 대한 지실 (枳實)의 효능

박젬마ㆍ채중원

동신대학교 한의과대학 소아과학교실

Received: November 30, 2014 ∙ Revised: February 2, 2015 ∙ Accepted: February 6, 2015 Corresponding Author: Chae Jung Won

Department of Pediatrics, Dongshin University Hospital at Mokpo, 313, Baeknyeon-daero, Mokpo-si, Jeonlanam-do, 530-822, Republic of Korea.

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ISSN 1226-8038(Print), 2287-9463(Online), http://dx.doi.org/10.7778/jpkm.2015.29.1.027

Abstract

Effects of Aurantii Immaturus Fructus (AI) on Atopic Dermatitis (AD) Induced by DNCB in Mice

Park Jem Ma․Chae Joong Won

Department of Pediatrics, College of Oriental Medicine, Dongshin University

Objectives

The purpose of this study was to investigate the effects of AI on AD induced by DNCB in mice. AI has antiallergic property that is useful in treating allergy-related-diseases, such as asthma, anaphylactic shock, acute bronchitis and skin diseases, skin pruritus from gastrointestinal diseases. However, AI has not been studied intensively yet regarding anti-inflammatory effect on AD. Therefore, this study was conducted on 2,4-dinitro- chlorobezene (DNCB)-induced mice to investigate effects of AI in AD.

Methods

In the experiment, we divided mice into four groups: a normal group (NOR), a control group (CON), an AI spread group (AI spread), and an AI spread and feeding group (AI spread & feeding). Then examined the changes in the body weight, weights of spleen and ear, thickness of dorsum skin and ear skin, clinical aspects on dorsum skin, historical assessments, proliferation of splenocytes in vitro and in vivo, and cytokine (TNF-α, IL-10).

Results

From the experiment, the ear weight of AI spread & feeding group was significantly dropped and the ear thickness of both AI spread and AI spread & feeding were decreased significantly. Dorsum skin thickness was also decreased significantly in both AI spread and AI spread & feeding group. Also, AI treatment improved the symptoms of AD, such as coloration, erythema and desquamation and had a better effect on AI spread & feeding group. In histopathological observation, thickened epidermis, hyperkeratosis, pigmentation, hypergranulosis, parakeratosis were diminished as well in both AI spread and AI spread & feeding group. In vitro, we could observe when AI was increased as proliferation rate of splenocytes were increased, too.

Conclusions

In conclusion, these data suggest that AI can decrease symptoms of AD and show AI can be useful herbal therapy for AD.

Key words : Aurantii Immaturus Fructus (AI), 2,4-dinitrochlorobenzene (DNCB), Atopic dermatitis (AD)

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Ⅰ. Introduction

우리가 살고 있는 환경은 급격히 발달하는 산업으 로 인해 빠르게 오염되고 있고 새로운 화학물질이 증 가하면서 많은 양의 알레르겐에 노출되어 면역기능 이 상이나 알레르기 질환이 증가되고 있다. 최근 우리나 라 아토피 피부염 (Atopic Dermatitis, AD)의 유병률이 2001년부터 2005년까지 7.6배나 증가하였고, 전체 인 구 중 영유아의 이병율은 10 % 이상 되어 현대의 흔한 문명병이 되었다^1,2).

AD는 재발과 악화가 반복되고 만성으로 경과하는 염증성 피부질환으로서 주로 영유아에서 가장 먼저 나 타나는 알레르기성 질환이다. 심한 소양감, 홍반, 삼출, 부종, 인설과 부스럼 딱지 등의 특이한 양상을 가지며, 비염, 천식 등 다른 알레르기 질환으로 이행될 수 있어 장기치료를 요하는 질환이다. 유전학적, 환경적, 면역 학적 요인, 약리학적 이상 및 정신적인 스트레스 등 여 러 가지 인자들의 상호작용이 원인으로 추측되고 있고

3-5), 최근에는 AD의 주된 기전으로 T helper (Th) cell의 면역학적 이상이나 백혈구의 비면역학적 이상이라고 보고한 바 있으나, 아직 정확한 원인은 밝혀지지 않고 있다^6,7).

한의학적으로 奶癬, 胎癬, 乳癬, 濕疹, 胎斂瘡, 浸淫瘡, 四彎風 등의 범주에 속하는 AD는 환경적, 정서적, 유전적, 음식물 등의 원인들로 인하여 본래 稟賦不耐 한데 안으로는 胎火, 濕熱이 쌓이고, 밖으로부터 風濕熱의 邪氣가 들어와 肌膚에 쌓여 유발된다고 보고 있 다^8,9).

AD의 치료로 항히스타민제와 스테로이드제 위주로 사용하고 있지만 장기간 사용 시 부작용을 야기할 수 있기 때문에^10,11), 부작용이 적으면서 치료효과도 높은 천연약물에 대한 관심이 높아지고 있으며 한방 치료제 에 관한 많은 연구가 이루어지고 있다^12-16).

枳實 (Aurantii Immaturus Fructus, AI)는 운향과 (Rutaceae)에 속한 상록소교목인 산등 Citrus aurantium L.과 탱자나무 Poncirus trifoliata Rafin. 의 미성숙한 과 실을 건조한 것으로 性은 寒하고, 味는 苦辛酸하며 脾經, 胃經으로 歸經되어 破氣消積, 化痰散痞 하는 효능 이 있다. 임상적으로는 急性氣管支炎, 喘息, 胃腸病으 로 인한 피부질환, 피부 소양감 및 anaphylatic shock 등 을 치료하는데 사용된다^17-19). AI에 관한 연구에 의하면 항알러지 작용^20-22)과, 비만²³⁾, 소화질환²⁴⁾ 등에 효과가

있었다는 보고가 있고, AI 외 4가지 약제 추출물이 포함 된 외용제의 AD에 대한 실험²⁵⁾은 있었으나 아직까지 AI 單味로 AD 개선에 관한 연구보고는 찾을 수 없었다.

이에 저자는 본 연구에서 DNCB로 AD를 유도한 생 쥐에 AI 추출물을 투여하고 도포하여 관찰한 후 AD 증상의 개선효과에 대한 유의한 결과를 얻었기에 보고 하는 바이다.

Ⅱ. Materials and methods

1. 재료 1) 시료

실험에 사용된 枳實 (Aurantii Immaturus Fructus, AI) 은 운향과 (芸香科：Rutaceae)에 속한 常綠小喬木인 광 귤나무 (酸橙) Citrus aurantium L.과 탱자나무 (枸橘) Poncirus trifoliata Rafin. 의 幼果로 동신대학교 목포 한방병원에서 구입하여 사용하였다.

2) 동물

실험에 앞서 동신대학교 실험동물윤리위원회 (승인 번호 : 2014-09-08) 의 승인을 거쳤으며 동물실험 전문 업체인 ㈜샘타코에서 7주령의 수컷 Balb/c 계통의 생쥐 (23 ± 2 g)를 구매하여 사용하였다. 사육장 반입 후 식 품의약품안전청에서 고시한 동물실험시설 규정에 적 합한 시설에서 1 주일 간 적응시켰으며 적응시간 중에 는 고형사료와 물을 충분히 공급하였고, 12시간 명암 주기 및 실내온도 (24 ± 2 ℃)와 습도 (55 ± 5 %)를 일정 하게 유지시켰다.

3) 아토피 피부염 유발 약물

아토피 피부염 (Atopic Dermatitis, AD)이 유발된 실 험동물을 만들기 위해 2,4-dinitrochlorobenzene (DNCB, Sigma, USA)를 사용하였다. AD를 유발하기 위해 ace- tone과 olive oil을 4대 1로 섞은 혼합액 (AOO)에 DNCB 를 1 % 비율로 희석한 혼합용액을 제모한 생쥐의 피부 에 도포하여 AD를 유발하였다.

2. 방법

1) 시료의 제조

시료 제조는 도포용 약물과 경구투여용 약물을 각각

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다르게 제조하였다. AI 200 g을 증류수 (D/W) 1,500 ㎖ 에서 100 ℃에서 4시간 열수추출한 후 찌꺼기를 제거 한 상층액을 모아서 감압농축기 (EYELA, Japan)를 이 용하여 농축하였다. 이후 동결건조기 (Samwon, Korea) 를 이용하여 동결 건조 하였다. 이 때, 최종적으로 얻어 진 AI의 동결 건조 분말은 32.5 g으로 수득율은 16.25%

이었고, 이를 증류수에 희석하여 경구 투여 시료로 사 용하였다.

등 부위에 도포하기 위한 AI 도포액을 제조하기 위 해서 100% 에탄올에 AI 200 g을 넣어 24시간 추출하 여 농축한 후 동결건조 하였고, 추출물을 에탄올 (지실 20 ㎎ 당 에탄올 1 ㎎)에 녹인 다음 이를 AOO에 희석 하여 사용하였다.

2) 아토피 피부염의 유발 방법

AD 유발을 위해 생쥐에 AOO액과 1% DNCB를 혼 합한 용액을 제모된 생쥐의 피부에 도포하였다. 이를 위해 동물전용 마취제인 zoletile (Virbac, France)을 완충 용액 (PBS)에 1:100 비율로 희석한 혼합액을 대략적인 생쥐 무게인 20 g 기준으로 100 ㎕를 복강 주사하여 마 취시켰다. 전기면도기를 사용하여 엉덩이 쪽부터 1차 제모하고 크림용 제모제를 바른 후 도표용 주걱으로 넓게 도포하여 5 ~ 10분 방치하였다. 온수를 거즈에 묻 혀 제모제를 제거하고 거즈를 이용하여 깨끗한 온수로 세척한 후 티슈로 물기를 제거하고 잔털까지 제거해서 상처 치유를 위해 24시간 방치하였다.

24시간이 지난 후 호흡마취제인 아이프란액 (iso- flurane, 중외제약) 1.5 ㎖으로 마취시킨 후 등 부위와 귀 부위에 AOO액과 1% DNCB가 혼합된 용액을 도포 하였다. 귀 부위는 pipet (yellow tip)을 이용하여 1일 1 회 3일간 혼합용액 30 ㎕을 도포하고, 등 부위는 1일 1회 3일간 혼합용액 50 ㎕을 도포하였다. 3일간 더 관 찰 한 후 등 부위에 AI 희석액 도포를 같이 시작하면서 10일간 2일 1회씩 총 5회에 걸쳐 혼합용액을 귀와 등 에 각각 30 ㎕와 50 ㎕씩 도포하여 최종적으로 AD를 유발하였다.

3) 시료 투여 및 도포

경구 투여는 AI를 열수 추출한 후 동결건조 시킨 분 말을 증류수에 희석하여 사용하였으며, 투여량은 500

㎎/㎏/day 농도로 10일간 투여하였다.

도포용으로 제조된 시료를 등 부위에 적절히 도포

하였으며, AD 유발액인 혼합용액을 바르는 시간과 최 소 4시간 이상 차이를 두었고, 도포 용량은 최종 혼합 액 기준으로 50 ㎕로 10일간 매일 일정한 시간에 도포 하였다.

4) 실험군 설정

실험을 위해 정상군, 대조군, AI 도포군, AI 도포 및 경구투여군으로 나누었다. 정상군 (Normal group)은 제 모 후 AD를 유발시키지 않고 증류수 투여와 AOO만을 도포한 군이며, 대조군 (Control group)은 AD를 유발하 고 증류수 경구투여와 AOO을 도포한 군이며, AI 도포 군 (AI spread group)은 AD를 유발하고 증류수 경구투 여 및 AI 추출액을 도포한 군이며, AI 도포 및 경구투 여군 (AI spread & feeding group)은 AD를 유발하고 AI 추출액의 경구투여와 AI 추출액 도포를 동시에 시행한 군으로 설정하였다. 각각의 개체 수는 정상군과 대조 군은 8마리였고, 실험군들은 10마리로 실험을 시행하 였다.

5) 체중의 측정

약물의 투여 및 도포로 인한 체중의 변화를 관찰하 기 위하여 총 4회에 걸쳐 생쥐의 체중을 측정하였다.

먼저 사육장에서의 적응 기간을 끝낸 후 실험을 시작 하기 전에 측정한 체중을 기준으로 삼았고 (Initial), AD 를 유발하기 위해 제모한 후 (Waxing)의 체중, 약물의 투여와 도포가 진행되는 2주 (2 Weeks)때에, 마지막으 로 희생시키기 전 체중 (4 Weeks)을 측정하여 비교하였 다. 체중의 측정은 측정일 오후 2시에 실시하였고, 전 자저울 (HANA, KC-200, Korea)을 이용하였다.

6) 귀 및 비장 무게의 측정

귀와 비장의 무게는 실험 마지막 날 생쥐를 희생시 킨 후 측정하였다. 귀의 경우, 정확한 측정을 위하여 가위로 귀를 절제한 다음 수동형 펀치기를 이용하여 직경 5 ㎜의 둥근 절편을 만들어 측정하였고 비장의 경우 개복 후 비장 전체를 적출한 후 미량 저울 (OHAUS, USA)을 이용하여 무게를 측정하였다.

7) 귀 및 등 피부 두께의 측정

AD가 유발된 생쥐에서 시료의 도포 및 투여로 변화 된 귀 두께와 등 피부 두께를 측정하기 위하여 실험 마지막 날 생쥐를 희생시킨 후, 등 피부와 귀의 피부를

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절제한 후 디지털 캘리퍼 (Mitutoyo, Japan)를 이용하여 각각의 두께를 측정하였다.

8) 피부 표면의 육안적 관찰 및 Symptom score 판정 실험기간 동안의 약물도포 및 투여에 따른 AD의 변 화 정도를 관찰하기 위하여 각 군별 생쥐의 등 부위를 Digital camera (Samsung, Korea)로 촬영하였고, 이를 기 초로 생쥐의 등에 발생한 피부질환의 병변 정도를 관 찰하여 수치화하였으며, 피부 부종과 종창의 정도를 다음의 기준에 따라 판정하였다.

0점 : 피부병변이 없는 정상인 상태 1점 : 경미한 착색이 있는 상태 2점 : 짙은 착색 및 홍반이 있는 상태 3점 : 홍반과 낙설이 동반된 상태

4점 : 홍반과 낙설, 혈흔이 존재하는 상태 5점 : 홍반과 낙설, 혈흔이 뚜렷한 상태

9) 조직학적 관찰

약물투여로 발생한 생쥐 피부의 조직학적 관찰을 위해 Hematoxylin & Eosin (H&E) 염색을 시행하였다.

생쥐로부터 얻어진 등 부위 피부 조직을 10% 포르말 린에 고정한 후 파라핀에 포매하였고, 포매된 조직을 미세절단기 (Sakura, Japan)를 이용하여 4 ㎛ 두께로 박 절하여 슬라이드에 부착시킨 뒤 탈수와 투명 (cleansing) 과정을 거쳐 흐르는 물에 침전시켰다. 파라 핀을 제거하는 과정을 거친 조직 절편은 Hematoxylin (SIGMA, USA)과 Eosin (SIGMA, USA)으로 염색하였 고, 과염색된 부분은 흐르는 수돗물에 5분 정도 수세하 였다. 이후 다시 탈수 및 투명과정을 거쳐 봉입 (mounting) 하여 100배율 광학현미경으로 관찰하였다.

10) 비장세포 증식율에 미치는 영향 (1) in vitro 실험

정상 생쥐의 비장 세포 분리는 Wysocki²⁶⁾ 및 Mizel²⁷⁾ 등의 방법에 의하여 실시하였다. 분리된 비장 세포 부 유액을 RPMI 1640 배지로 희석하고 96 well plate에 1.0×10⁶ cells/㎖ 농도로 접종한 다음 비장 세포에 LPS 5 ㎍/㎖ 과 AI를 농도별 (0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1.0

㎎/㎖)로 첨가한 후 각 37 ℃의 CO2 배양기에서 24 시 간 배양한 다음 Ez-cytox 15 ㎕를 각 well에 첨가하고 차광상태에서 2시간 정도 배양한 후 각 well의 흡광도 를 Microplate Reader로 450 ㎚에서 측정하였다.

(2) in vivo 실험

실험 종료 시 in vitro 방법과 동일하게 각종의 처치 를 실시한 실험 생쥐의 비장을 적출한 뒤 비장세포 부 유액을 RPMI 1640 배지로 희석하고 96 well plate에 1.0×10⁶ cells/㎖ 농도로 LPS를 첨가하고 Ez-cytox 15 ㎕ 를 각 well에 첨가하고 차광상태에서 2시간 정도 배양 한 후 각 well의 흡광도를 Microplate Reader로 450 ㎚에 서 측정하였다.

11) Cytokine 측정 (1) 채혈 및 혈청분리

Cytokine 측정을 위해 생쥐에게 동물 마취제인 Zoletile (Virbac, France) 희석액을 생쥐 20 g 기준으로 100 ㎕ 복강주사로 마취시킨 후 심장 채혈하였다. 채혈 한 혈액을 plastic tube에 담아 실온에 30분 정도 방치하 였다가 3,000 rpm으로 30분간 원심분리 시켜 상층의 혈청을 분리하였다.

(2) Tumor necrosis factor-α(TNF-α) 양 측정 혈청 내에서 생성되는 TNF-α 양을 mTNF-α ELISA kit (Invitrongen, U.S.A.)를 이용하여 측정하였다. 이 때 Kit의 각각의 96 well plate에 혈청 100 ㎕를 넣었으며, 실온에서 2시간 동안 incubation한 다음 washing buffer 로 4회 세척하였다. Biotin conjugate 100 ㎕를 첨가하 고 1시간 실온에서 incubation한 다음 washing buffer로 4회 세척하고, 준비해 놓은 streptavidin-HRP를 각 well 에 100 ㎕씩 분주한 다음 실온에서 30분 동안 in- cubation한 후 washing buffer로 4회 세척하였다. 그 다 음 stabilized chromogen을 각 well에 100 ㎕씩 분주한 후 빛이 차폐된 실온에서 30분 동안 incubation한 후 stop solution을 각 well에 100 ㎕씩 주입한 다음 Microplate Reader를 이용하여 450 ㎚ 파장에서 측정하 였다.

(3) Interleukin (IL-10) 양 측정

혈청내 IL-10 양을 측정하기 위해서 혈청 50 ㎕를 standard diluent buffer 50 ㎕ 와 혼합한 solution 100 ㎕ 을 96 well plate에 분주한 다음 Biotin conjugate 50 ㎕ 를 첨가하고 2시간 실온에서 incubation한 다음 다시 washing buffer로 4회 세척하였다. 희석하여 준비해 놓 은 streptavidin-HRP를 각 well에 100 ㎕씩 분주한 다음 다시 실온에서 30분 동안 incubation한 후 washing buf-

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fer로 4회 세척하고, stabilized chromogen을 각 well에 100 ㎕씩 분주한 후 빛이 차폐된 실온에서 30분 동안 incubation한 후 stop solution을 각 well에 100 ㎕씩 분 주한 다음 Microplate reader를 이용하여 450 ㎚ 파장에 서 측정하였다.

3. 통계 처리

데이터의 통계 처리는 통계 프로그램 IBM SPSS Statistics 21을 사용하였다. 수합된 데이터는 one-way ANOVA 기법을 활용하였고, 통계적으로 유의한 경우 사후검정은 Tukey 방법을 시행하였으며, p-value가 0.05 미만인 경우에만 유의한 것으로 인정하였다.

Ⅲ. Results

1. 체중 변화에 미치는 영향

총 실험기간 (4주) 중 4회에 걸쳐 체중 변화를 관찰 한 결과, Normal 군을 제외한 나머지 군들에서 체중이 감소하는 경향이 보였다. 특히 희생 직전에 측정한 값

(4 Weeks)에서는 Normal 군에 비해 다른 군에서 모두 유의하게 감소하는 경향이 보였으나 Control 군과 비교 해서 AI spread 군 (p=.287)과 AI spread & feeding 군 (p=.561) 사이에서는 유의한 차이를 보이지는 않았다 (Table 1, Fig. 1).

2. 비장 무게에 미치는 영향

Normal 군에 비해서 다른 군에서 모두 증가하였고

Initial (0 Week)

Waxing

(1 Week) 2 Weeks 4 Weeks

Normal Mean (g) 24.34 24.30 23.80 24.74

SD 0.26 0.97 0.68 0.83

Control Mean (g) 24.08 23.87 22.97 22.86

SD 0.40 0.90 0.63 0.68

AI spread Mean (g) 24.18 23.98 23.29 23.13

SD 0.35 0.74 0.63 0.77

AI spread & feeding Mean (g) 24.07 23.66 22.58 23.06

SD 0.84 0.36 0.91 0.72

Normal : naive group, Control : only AD group, AI spread : AI spread group, AI spread & feeding : AI spread and administered group.

Values are represented as mean ± SD. All groups data were expressed as mean ± SD of 8 ~ 10 experiments.

Fig. 1. The changes of body weight in AD induced mice

Values are represented as mean ± SD.

Table 1. The Changes of Body Weight in AD Induced Mice

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유의한 차이를 보였지만 Control 군과 비교해서 AI spread 군과 AI spread & feeding 군 사이에서는 유의한 차이를 보이지는 않았다 (Table 2, Fig. 2).

3. 귀 무게에 미치는 영향

생쥐의 귀를 수동 펀치를 이용하여 일정한 크기로 도려낸 다음 무게를 측정하여 각 군간을 비교한 결과 Control 군에 비해서 AI spread & feeding 군 (p=.014)에 서 유의성 있는 감소가 관찰되었다 (Table 3, Fig. 3).

4. 귀 두께에 미치는 영향

생쥐의 양쪽 귀를 수동 펀치를 이용하여 일정한 크 기로 도려낸 다음 무게를 재고 평균값을 사용하여 각 군의 차이를 비교한 결과 Control 군에 비해서 AI spread 군 (p=.000) 과 AI spread & feeding 군 (p=.000) 모두에서 유의성 있게 감소하였다 (Table 4, Fig. 4).

5. 등 피부 두께에 미치는 영향

생쥐의 등 피부를 절제하고 디지털 캘리퍼를 이용 해서 등 피부의 두께를 비교해 본 결과 AI spread 군

Spleen weight (g)

Mean ± SD

Normal 0.0800 0.01224

Control 0.1106 0.01341

AI spread 0.1071 0.01446

AI spread & feeding 0.1156 0.01671

Table 2. The Changes of Spleen Weight in AD Induced Mice

Ear weight (g)

mean ± SD

Normal 0.0066 0.00096

Control 0.0154 0.00167

AI spread 0.0135 0.00217

AI spread & feeding 0.0132^* 0.00119

* : Statistically significance compared with Control group (^* ; p<0.05).

Fig. 2. The changes of spleen weight in AD mice Normal : naive group, Control : only AD group, AI spread : AI spread group, AI spread & feeding : AI spread and administered group.

Fig. 3. The changes of ear weight in AD induced mice Normal : naive group, Control : only AD group, AI spread : AI spread group, AI spread & feeding : AI spread and administered group.

* : Statistically significance compared with Control group (^* ; p<0.05).

Table 3. The Changes of Ear Weight in AD Induced Mice

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(P<0.01)과 AI spread & feeding 군 (P<0.01) 모두에서 유의성 있게 얇아진 것을 확인할 수 있었다 (Table 5, Fig. 5).

6. 등과 귀 피부의 육안적 관찰소견

4주간의 실험이 끝난 후 등 피부에서 관찰되는 증상 의 정도를 관찰해 본 결과 Normal 군은 제모한 직후의 모습 (Fig. 11)과 실험을 마치고 희생시키기 직전의 사 진 (Fig. 12)에서와 같이 털이 자라난 점 외에는 별다른 병리적 소견이 없다. AD를 유발시킨 Control 군의 등

피부에서는 착색이 심하거나 홍반과 낙설이 병행된 모 습이 관찰되었다 (Fig. 13). AI spread 군 (Fig. 14)과 AI spread & feeding 군 (Fig. 15)에서는 Control 군에 비해 착색, 홍반 및 낙설이 현저하게 감소되는 경향을 보였 으며 이를 실험방법에서 제시한 5점 척도로 등 수치화 결과 유의한 차이가 있었다 (Table 6).

7. 조직학적 소견

모든 실험을 마친 후 희생시킨 생쥐의 등 부위의 피 부조직을 H & E염색 (Hematoxylin & Eosin stain evalua-

Ear thickness (㎜)

Mean ± SD

Normal 0.2038 0.01996

Control 0.4978 0.07860

AI spread 0.3488^** 0.03240

AI spread & feeding 0.3490^** 0.02470

** : Statistically significance compared with Control group (^** ; p<0.01).

Table 4. The Changes of Ear Thickness in AD Induced Mice

Back thickness (㎜)

Mean ± SD

Normal 0.4613 0.07376

Control 0.8111 0.08559

AI spread 0.5663^** 0.02268

Fig. 4. The changes of ear thickness in AD induced mice Normal : naive group, Control : only AD group, AI spread : AI spread group, AI spread & feeding : AI spread and administered group.

Fig. 5. The changes of thickness of dorsum skin in AD induced mice

Table 5. The Changes of Thickness of Dorsum Skin in AD Induced Mice

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tion) 후 관찰해 본 결과, Normal 군 (A)은 epidermis가 얇게 분포하였고, 다른 특이소견이 거의 관찰되지 않 았다. 이에 비해 Contorol 군 (B)은 epidermis의 두께가 과형성, 확장 되어, 그 주변에 과각화, 색소침착, 과립

증가, 부전각화증이 Normal 군에 비하여 현저하게 증 가된 것을 볼 수 있었고, AI spread 군 (C)의 일부는 Control 군에 비하여 Normal 군에 가깝게 epidermis의 두께가 줄어들었고, 그 주변에 세포변형과 각화 증상

Symptom score

Normal -

Control 4.13 0.64

AI spread 2.13^** 0.35

Fig. 6. Effects of AI on symptom score in AD mice

Symptom scores were estimated in each animal respectively. Normal : naive group, Control : only AD group, AI spread : AI spread group, AI spread & feeding : AI spread and administered group.

Fig. 7. Appearance after hair removal in the Normal group Clinical aspect of dorsum skin in Normal group were observed using digital camera at the hair removal day.

Fig. 8. Appearance before sacrifice in the Normal group Clinical aspect of dorsum skin in Normal group were observed using digital camera at the end of the day.

Table 6. Effects of AI on Symptom Score in AD Induced Mice

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Fig. 9. Appearance before sacrifice in the Control group Clinical aspect of dorsum skin in control group were observed using digital camera at the end of the day.

Fig. 10. Appearance before sacrifice in the AI spread group Clinical aspect of dorsum skin in AI spread group were observed using digital camera at the end of the day.

Fig. 11. Appearance before sacrifice in the AI spread & feeding group

Clinical aspect of dorsum skin in AI spread & feeding group were observed using digital camera at the end of the day.

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A B

C D

Fig. 12. Effects of AI on histopathological observation of dorsum skin in AD induced mice

Dorsum skin was stained with hematoxylin and eosin and observed light microscope (x100). (A) : Normal group, (B) : Control group, (C) : AI spread group, (D) : AI spread & feeding group.

Mean (%)

Normal 100.00

Control 116.46 5.90

AI spread 101.43 18.40

AI spread & feeding 0.0132^* 0.00119

Fig. 13. Effects of AI on proliferation rates of splenocyte in vivo

Proliferation rates of splenocyte were measured using modified MTT method described in materials and methods.

Table 7. Effects of AI on Proliferation Rates of Splenocyte in vivo

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등이 감소된 것을 볼 수 있었다. AI spread & feeding 군 (D) 역시 Control 군에 비하여 epidermis의 상대적으 로 두께가 줄어들었고 과각화, 색소침착, 과립증가, 부 전각화증 등이 현저하게 감소되었다 (Fig. 12).

8. 생체 내 비장세포 증식율에 미치는 영향

실험을 마친 후 생쥐에서 적출한 비장에서 비장세 포를 분리하고 LPS로 활성화 시킨 후 증식능을 측정하 였다. 측정값은 Normal 군을 100 (%)로 환산하였고 그 결과 Control 군에 비해 AI 처치군에서 감소하는 경향 이 보였으나 통계적으로 유의성이 있지는 않았다 (Table 7, Fig. 13).

9. 시험관 내 비장세포 증식율에 미치는 영향

정상 생쥐로부터 비장 세포를 분리하여 지실추출액 투여에 따른 비장세포 증식능을 관찰하였고, LPS를 첨

가하지 않은 군 Con (-)에 비해 LPS가 첨가된 군 Con (+)에서 증식능이 크게 상승하였으며 지실추출액의 농 도가 증가됨에 따라 증식율이 모든 투여 농도에서 Con (+)에 비해 유의한 수준 (P<0.01)의 비장세포 증식능이 증가하는 것이 관찰되었다 (Table 8, Fig. 14).

10. TNF-α에 미치는 영향

희생시킨 생쥐에서 채혈을 통해 혈청 내 TNF-α의 농도를 측정한 결과, Normal 군에 비해서는 다른 군들 이 유의하게 증가되었으나 Control 군에 비해 통계적으 로 유의한 차이가 나타나지는 않았다 (Table 9, Fig. 15).

11. IL-10에 미치는 영향

희생시킨 생쥐에서 채혈을 통해 혈청 내 IL-10의 농 도를 측정한 결과, Normal 군에 비해서는 다른 군들이 유의하게 증가되었으나, Control 군과 비교한 실험군

Proliferation rates (%)

Con (-) 0 ㎎/㎖ 100.00 ± 5.12

Con (+) 0 ㎎/㎖ 358.69 ± 18.47

0.0625 ㎎/㎖ 402.60 ± 4.63^**

0.125 ㎎/㎖ 400.31 ± 4.43^**

0.25 ㎎/㎖ 395.10 ± 7.35^**

0.5 ㎎/㎖ 402.27 ± 8.83^**

1 ㎎/㎖ 399.99 ± 6.18^**

** : Statistically significance compared with Control (+) 0 ㎎/㎖ group (^** ; p<0.01).

Fig. 14. Effects of AI on proliferation rates of splenocyte in vitro

Proliferation rates of splenocyte were measured using modified MTT method described in materials and methods. Normal : naive group, Control only AD group, AI spread : AI spread group, AI spread & feeding : AI spread and administered group.

** : Statistically significance compared with Control (+) 0 ㎎/㎖ group (^** ; p<0.01).

Table 8. Effects of AI on Proliferation Rates of Splenocyte in vitro

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들에서는 통계적으로 유의한 차이가 나타나지는 않았 다 (Table 10, Fig. 16).

Ⅳ. Discussion

영유아의 대표적인 알레르기 질환인 아토피 피부염 (Atopic dermatitis, AD)는 심한 가려움증과 함께 삼출, 홍반, 인설, 가피 등의 증상을 가지며, 일부 소수에서는 성인기까지 진행하는 만성 재발성 질환이다²⁸⁾. 현재까 지 AD의 치료제로 대부분 보습제와 항히스타민제, 스

테로이드제 등 단순 증상완화를 목적으로 하는 치료제 에 의존해 왔지만 대다수의 환자들로부터 치료를 중단 할 경우 재발과 악화를 야기하였다. 특히 항히스타민 제는 일시적인 진정 작용이 강하긴 하나 근본적인 치 료제로는 부적절하고, 스테로이드제는 장기간 치료 시 에는 간독성, 부신기능부전증, 세균에 대한 저항력 약 화, 당뇨병, 고혈압, 골다공증, 소화성궤양, 여드름, 성 장장애 등의 부작용이 있는 점이 문제시 되고 있다^29,30).

AD는 그 증상에 근거하여 한의학적으로 奶癬, 胎癬, 乳癬, 濕疹, 胎斂瘡, 浸淫瘡, 四彎風⁹⁾ 등의 범주에 속하는데,《諸病源候論》에서는 소아의 얼굴부위에

TNF-α (pg/㎖)

Mean ± SD

Normal 0.0772 0.0044

Control 0.0733 0.0027

AI spread 0.0774 0.0037

Table 9. Effects of AI on Serum Levels of TNF-αin AD Induced Mice

IL-10 (pg/㎖)

Mean ± SD

Normal 0.073889 0.007026

Control 0.103 0.011822

AI spread 0.094 0.010623

Fig. 15. Effects of AI on serum levels of TNF-α in AD induced mice

Fig. 16. Effects of AI on serum levels of IL-10 in AD induced mice

Levels of IL-10 in serum were measured using ELISA methods. Normal naive group, Control : only AD group, AI spread : AI spread group, AI spread & feeding : AI spread and administered group.

Table 10. Effects of AI on Serum Levels of IL-10 in AD Induced Mice

(13)

癬皮가 甲錯되고 건조하게 되는 것을 乳癬이라 하여 양 볼의 소양성 홍반을 특징으로 하는 유아기 영아습 진과 유사하고³¹⁾, 사지굴곡부의 소양증을 특징으로 하 는 四彎風은 사춘기 및 성인기 때의 아토피 피부염과 도 유사하다^32,33). AD의 원인으로는 風熱, 脾胃濕熱, 血熱, 血虛 등을 들 수 있는데³⁾, 曹³⁴⁾는 “此因在胎母受時氣邪毒或外感風熱誤服湯劑食五辛薑麵過多... 名曰胎熱”이라 하여 환경과 음식물에 의한다고 하였고, 王

35)은 “兒在胎中母多驚鞏或食熱毒之物”이라 하여 정 서적 요인에 의한다 하였으며, 曹³⁶⁾는 “小兒體有風熱脾肺不利或濕邪搏於皮膚壅滯血氣皮頑厚則變諸癬”

이라 하여 선천적인 요인과 臟腑의 不實로 인해 생긴 다고도 하였다.

현재까지 AD의 원인은 정확히 밝혀지지 않았으나 다양한 면역학적 이상과 유전적인 요소³⁷⁾, 환경적인 요 인³⁸⁾이 관여되어 있다고 보고되었고, 면역학적 이상으 로는 T 림프구의 활성화와 비활성화, 사이토카인 체계 이상, IgE의 증가, 세포매개성 면역의 감소 등이 AD의 병리로 작용한다고 한다³⁹⁾. 특히 T helper (Th) cell의 비 정상적인 작용으로 인해 Th1과 Th2의 불균형이 생겨 Th2 반응으로 치우쳐 AD가 생긴다는 점이 주된 기전 으로 보고 된 바 있다⁴⁰⁾. 이상의 한 · 양방적 원인들을 종합해 보면 영유소아에게 AD가 흔하게 생기는 이유 는 면역력이 약하고 臟腑가 미성숙하기 때문으로 소아 의 생리적 특징인 稟賦不耐하고 脾胃氣虛하여 風濕熱 의 邪氣를 感受하기 쉬우며, 痰積을 잘 유발시킬 수 있 다는⁴¹⁾ 조건과도 연관성이 있다. 이에 저자는 AI의 破氣消積, 化痰散痞 하는 작용이 AD 치료에 유의한 작 용을 할 것이라 판단하여 AI가 AD에 미치는 개선 효과 를 관찰하고자 하였다.

AI (枳實, Aurantii Immaturus Fructus)은 운향과 (Rutaceae)에 속한 상록소고목인 산등 Citrus aurantium L.과 탱자나무 Poncirus trifoliata Rafin.의 미성숙한 과 실을 건조한 것으로 性은 寒하고, 味는 苦辛酸하며 脾經, 胃經으로 歸經되어 破氣消積, 化痰散痞, 治積滯內停하는 효능이 있다. 임상적으로는 急性氣管支炎, 便秘, 胃酸過多, 胃下垂, 子宮下垂, 脫肛, 喘息, 胃腸病으 로 인한 피부질환, 피부 소양감 및 anaphylatic shock 등 을 치료하는데 사용된다^17-19). 약리학적으로 AI 물추출 액을 생쥐에 정맥주사했을 때 수동성 피부 anaphylaxis 반응과 시험관내 histamine 유리가 유의성 있게 억제된 것⁴²⁾과 AI 물추출액이 비만세포막에 빠르게 작용해 매 개물질 생성을 방해하여 histamine 유리가 억제될 가능

성이 있다는 연구가 보고되었다⁴³⁾.

AI는《神農本草經》에 “治大風在皮膚中如麻豆苦痒陰寒熱結, 止痢, 長肌肉, 利五臟” 이라 하여 처음 언급되었고, 《本草再新》에서는 “破氣, 化痰, 消食寬腸, 殺蟲, 敗毒” 이라 하여 AI의 작용을 언급하였다.

《延年方》에서는 風疹을 치료할 때 AI를 식초에 담 가 적신 후 불 위에 달궈서 적당한 온도가 되면 환부에 댄다 하였고, 《子母秘錄》에서는 婦人의 陰腫堅痛을 치료할 때 AI 반 근을 찧어서 炒하고 천으로 감싸서 환부에 댄다고 하였으며, 《太平聖惠方》에서는 소아 의 頭瘡을 치료할 때 AI를 태운 재를 豬脂로 개어서 바른다고 언급하였다.《藥品化義》에서는 “若皮膚作痒, 因積血滯於中, 不能營養肌表...爲血分中之氣藥, 惟此稱最” 라 하여 피부가 가려운 것은 積血이 안에 막혀 피부 표면의 영양이 제대로 이루어지지 않아서 생긴다 하였고, 血分 중 최고의 氣藥인 AI의 辛散苦瀉 하는 효력을 써야 한다고 하였으며¹⁸⁾, 《東醫寶鑑》에 서는 “遍身白疹, 瘙痒不止, 天陰日冷則重, 天淸日暖則輕. 此有寒邪伏於肌膚, 凝滯而成. 先服枳實酒, 更用枳實煎水, 洗患處, 兼服烏藥順氣散” 라 하여 癮疹에 AI 를 사용하였다⁴⁴⁾. 이러한 옛 문헌들을 보면 AI가 피부 질환에 유의하게 사용되었음을 알 수 있다.

본 연구에서는 Balb/c mouse 36마리를 정상군과 대 조군은 각각 8마리씩으로 하고 나머지 AI spread 군과 AI spread & feeding 군은 각각 10마리씩으로 나누어 DNCB를 사용하여 AD를 유발시켰다. 실험동물의 급 격한 체중 증가나 감소는 부작용의 가능성으로 인식되 는데⁴⁵⁾, 총 실험기간 (4주) 중 4회에 걸쳐 체중 변화를 관찰한 결과 Normal 군을 제외한 나머지 군들에서 체 중이 감소하는 경향을 보였다. 특히 희생 직전에 측정 한 값 (4 Weeks)에서는 Normal 군에 비해 다른 군에서 모두 유의하게 감소하는 경향이 보였으나 Control 군과 비교해서 AI spread 군 (p=.287)과 AI spread & feeding 군 (p=.561) 사이에서는 유의한 차이를 보이지는 않았 다 (Table 1, Fig. 1). 이러한 결과는 AD 증상 발현과 함 께 나타나는 일반적인 체중 감소로 해석되며 지실의 도포와 경구 투여가 체중에 큰 영향을 미치지는 않는 것으로 보인다. 그러나 2주 후부터 AI spread & feeding 군의 체중이 점차 증가한 것으로 보아 어느 정도의 경 향성을 두고 추후 치료제의 농도나 주변 환경을 고려 한 후속연구가 더 필요하다고 생각된다. 또한 AI spread

& feeding 군이 2주째까지 Control 군과 AI spread 군 보다 체중이 감소한 것을 보았을 때 AI의 破氣消積, 化

(14)

痰散痞, 治積滯內停 하는 작용도 반영된 것으로 해석 된다. 실제로 반²³⁾ 등의 연구에서 고지방 식이로 유도 된 비만 흰쥐에 茵蔯, AI, 山査를 각각 투여하여 실험 을 실시 한 결과 AI와 山査투여군의 체중증가율이 감 소되었고 그 중 AI가 비만 방지에 가장 효과가 좋은 것으로 평가되었다. 《神農本草經疏》에 의하면 “此藥性專消導, 破氣損眞...瀉痰有衝牆倒壁之力, 其爲勇悍之氣可知....故謂之益脾胃之藥, 非消導之外, 復有補益之功也”라 하여 AI에 대해 氣를 破하고 眞을 損傷시 키는 성질이 강한 氣藥이라 하며 脾胃를 疏通시켜 주 는 것이지 補益해주는 것은 아니라고 하였다. 《醫學入門》《本草備要》에서도 허약한 사람과 임산부에 게 AI를 잘못 복용해선 안 된다고도 하였으므로¹⁸⁾ AI 를 치료제로 사용할 시 농도와 용량에 대해 신중해야 할 것이며 그에 관한 후속연구도 필요하다고 생각된다.

비장은 가장 큰 말초 림프 조직으로 T와 B 림프구의 성숙과 기능을 수행하게 하고 적혈구의 재생 및 저장, 조혈작용 및 식작용, 각종 면역작용에 관여하는 중요 한 기관이며⁴⁶⁾ 비장종대는 일반적으로 면역기능이 증 가되는 경우에 일어난다⁴⁷⁾.

각 군간의 비장 무게를 비교한 결과 Normal 군에 비 해 다른 군에서 모두 증가하였고 유의한 차이를 보였 지만 Control 군과 비교해서 AI spread 군과 AI spread

& feeding 군 사이에서는 유의한 차이를 보이지는 않았 다 (Table 2, Fig. 2). 이러한 결과는 DNCB에 의하여 면 역 반응이 활성화 된 결과로 해석되며, AI는 비장의 크 기에는 큰 영향을 미치지 않았다.

부종은 DNCB로 유도된 국소 피부 부위의 일차적인 급성 반응으로 동물 모델은 귀의 부종과 귀 피부 조직 의 비후로 인해 귀 무게도 증가하는 경향이 있어 약물 의 항염증 작용을 평가하는 척도로 사용되어 진다⁴⁸⁾. 생쥐의 귀 무게를 측정하여 각 군간을 비교한 결과 Control 군에 비해 AI spread & feeding 군 (p=.014)에서 유의성 있는 감소가 관찰되었고 (Table 3, Fig. 3) 귀 두 께도 AI spread 군 (p=.000) 과 AI spread & feeding 군 (p=.000) 모두 유의성 있게 감소하였다 (Table 4, Fig.

4). 이러한 결과는 AI가 AD 증상을 개선할 수 있음을 시사한다.

등 피부에서는 두께뿐만 아니라 피부염 증상을 육 안으로 관찰하였고, 조직병리학적으로도 평가하였다.

등 피부를 절제하여 비교해 본 결과, AI spread 군 (p<0.01) 과 AI spread & feeding 군 (p<0.01) 모두에서 유의성 있게 얇아진 것을 확인할 수 있었고 (Table 5,

Fig. 5) 착색, 홍반 및 낙설이 현저하게 감소되는 경향 을 보였다. DNCB를 처치하지 않은 Normal 군을 살펴 보면 제모한 직후의 모습 (Fig. 7)과 실험을 마치고 희 생시키기 직전의 모습 (Fig. 8)에서와 같이 털이 자라난 점 외에는 별다른 병적인 소견이 없었다. AD를 유발시 킨 후 증류수를 처치한 Control 군의 등 피부에서는 착 색이 심하거나 홍반과 낙설이 병행된 모습이 관찰되었 다 (Fig. 9). AI spread 군 (Fig. 10)과 AI spread & feeding 군 (Fig. 11)에서는 Control 군에 비해 착색, 홍반 및 낙 설이 현저하게 감소되는 경향을 보였으며, 이를 실험 방법에서 제시한 5점 척도로 등 수치화 결과와 유의한 차이가 있었다 (Table 6). 이는 AI가 등 피부 두께 증가 를 효율적으로 억제한 것이라고 생각한다.

조직의 특징적인 변화로 부종, 색소침착, 각화 및 염 증관련 세포의 침윤 등을 들 수 있는데⁴⁹⁾, 피부조직을 H&E염색 후 관찰해 본 결과, Normal (A)은 epidermis가 얇게 분포하였고, 다른 특이소견이 거의 관찰되지 않 았다. 이에 비해 Contorol 군 (B)은 epidermis의 두께가 과형성, 확장 되어, 그 주변에 과각화, 색소침착, 과립 증가, 부전각화증이 Normal 군에 비하여 현저하게 증 가된 것을 볼 수 있었고, AI spread 군 (C)은 Control 군 에 비하여 Normal 군에 가깝게 epidermis의 두께가 줄 어들었고, 그 주변에 세포변형과 각화 증상 등이 감소 된 것을 볼 수 있었다. AI spread & feeding 군 (D) 역시 Control 군에 비하여 epidermis의 상대적으로 두께가 줄 어들었고 과각화, 색소침착, 과립증가, 부전각화증 등 이 현저하게 감소되었다 (Fig. 12). 이 결과는 육안적으 로 관찰한 피부 소견과 상응하며 AI가 AD에 대한 치료 효과를 입증한 것이라 생각되며, AI의 도포만을 시행 한 것보다 경구투여를 병행하는 것이 더욱 효과가 있 을 것이라고 생각된다.

비장의 크기 및 세포 수는 면역반응과 밀접한 연관 이 있으므로 면역 증진능을 관찰하기 위해 비장세포 증식율을 평가하는데⁵⁰⁾ 실험을 마친 생쥐의 비장에서 비장세포를 분리하고 LPS로 활성화 시킨 후 증식율을 측정하였다. 측정값은 Normal 군을 100 (%)로 환산하 였고, 그 결과 Control 군에 비해 AI 처치군에서 감소하 는 경향이 보였으나 통계적으로 유의하지는 않았다 (Table 7, Fig. 13). 정상 생쥐로부터 비장 세포를 분리 하여 AI 추출액 투여에 따른 비장세포 증식율을 관찰 하였고, LPS를 첨가하지 않은 군 Control (-)에 비해 LPS 가 첨가된 군에서 증식율이 크게 상승하였으며 AI 추 출액의 농도가 증가됨에 따라 증식율이 모든 투여 농

(15)

도에서 Control (+)에 비해 유의한 수준 (p<0.01)의 비장 세포 증식율이 증가하는 것이 관찰되었다 (Table 8, Fig.

14). 이상의 결과는 in vivo에서 비록 통계적 유의성은 없었으나 AI가 면역 억제 작용을 한 경향은 보여졌다 고 생각하며, 표본수를 늘리고 좀 더 정밀한 실험이 이 루어진다면 유의성 있는 결과를 얻을 수 있을 것이라 고 생각된다. In vitro에서 비장세포 증식율이 AI의 농 도가 증가됨에 따라 같이 증가 된 것으로 보아 AI가 비장 세포와 같은 면역 세포의 가속 확산 속도를 통해 면역 반응을 강화시킬 가능성이 있을 것으로 생각된다.

Cytokine은 면역세포가 분비하는 단백질로 면역체 계를 조절하는 중요한 매개체로서 면역증강 요인 및 면역억제 요인을 규명하는데 중요한 역할을 한다⁵¹⁾. Th1 cytokine의 일종인 TNF-α는 염증세포들을 활성화 시켜 염증반응을 촉진시키고, IL-10은 Th2 cytokine의 일종으로 Th1 cytokine에 반대로 작용하여 염증반응을 줄이는 항염증작용을 한다⁶⁾.

TNF-α의 농도를 측정한 결과, Normal 군보다는 증 가하였으나 Control 군에 비해 통계적으로 유의한 차이 는 없었고 (Table 9, Fig. 15), IL-10의 농도를 측정한 결 과도 마찬가지로 Normal 군에 비해서는 유의하게 증가 되었으나, Control 군과 비교했을 때 통계적으로 유의 한 차이가 나타나지는 않았다 (Table 10, Fig. 16). 이는 AI가 염증을 완화시키는데 있어 TNF-α나 IL-10와 무 관한 다른 기전으로 염증을 완화시키는 가능성이 있다 고 생각되어 후속 연구가 필요하다 판단된다.

이상의 결과, AI는 AD에 항염증 반응을 하여 피부 염 개선에 효과가 있음을 알 수 있었고, 도포만 시행한 군보다 경구투여를 병행한 군에서 더 효과적인 것을 볼 수 있었으므로 AD 치료에 광범위하게 이용될 수 있을 것으로 생각된다. 그러나 AI의 AD 치료 기전이 cytokine 양조절에 의한 균형이 아닌 비장 세포와 같은 면역 세포의 가속 확산 속도를 통해 면역 반응을 강화 시킬 가능성이 있을 것으로 유추할 수 있지만 어떤 기 전으로 치료 효과를 내는지 알아내지 못했기 때문에 추후 더 심도 있는 연구가 필요하다고 생각된다.

Ⅴ. Conclusion

AI가 DNCB로 유발된 AD에 미치는 영향을 관찰한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다.

1. AI spread 및 AI spread & feeding 군에서 체중변화 는 Control 군과 유의한 차이가 없었다.

2. AI spread 및 AI spread & feeding 군에서 비장 무 게의 변화는 Control 군과 유의한 차이가 없었다.

3. AI spread & feeding 군에서 귀의 무게가 유의하게 감소되었고, AI spread 및 AI spread & feeding 군 에서 귀의 두께가 유의하게 감소되었다.

4. AI spread 군 및 AI spread & feeding 군 모두에서 등 피부의 두께가 유의성 있게 얇아졌고, 착색, 홍 반 및 낙설이 현저하게 감소되는 경향을 보였으며 AI spread & feeding 군에서 더 효과가 있었다.

5. AI spread 및 AI spread & feeding 군에서 비후한 epidermis의 두께가 줄어들었고, 과각화, 색소침 착, 과립증가, 부전각화증 등이 감소되었으며, AI spread & feeding 군에서 더 효과가 있었다.

6. In vivo 상 AI spread 및 AI spread & feeding 군에 서 비장세포 증식율의 유의한 변화는 없었다.

7. In vitro 상 AI의 농도가 증가함에 따라 비장세포 증식률이 유의성 있게 증가되었다.

8. AI spread 및 AI spread & feeding 군에서 혈청 TNF-α와 IL-10 함량에는 유의한 변화가 없었다.

이상의 결과를 종합해 보면 AI는 항염증 반응을 통 해 생쥐의 AD를 개선하였다. 효과는 도포만 시행한 군 보다 경구투여를 병행한 군에서 더 효과적이었다. 따 라서 AI는 AD 치료에 광범위하게 사용될 수 있을 것으 로 생각된다.

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