포도근 추출물의 항산화 활성 및 산화스트레스에 대한 세포 보호 효과

포도근 추출물의 항산화 활성 및 산화스트레스에 대한 세포 보호 효과

김연숙^1,2․황진우³․신원빈⁴․박진수⁴․박선주⁵․박표잠^1,2,4

1건국대학교 생명공학과, ²건국대학교 약용생물자원연구소

3(주)하성, ⁴건국대학교 응용생명과학과

5부경대학교 화학과

Antioxidant Activity and Protective Effect of Extracts from Vitis vinifera Root on t-BHP Induced Oxidative Stress in Chang Cells

Yon-Suk Kim

, Jin-Woo Hwang

, Woen-Bin Shin

, Jin-Su Park

, Sun Joo Park

, and Pyo-Jam Park

1

Department of Biotechnology,

Nokyong Research Center, and

4

Department of Applied Life Science, Konkuk University

3

Hasung Corp.

5

Department of Chemistry, Pukyong National University

ABSTRACT The antioxidant activity and protective effects of tert-butyl hydroperoxide (t-BHP) induced oxidative stress in human liver Chang cells of the extracts from Vitis vinifera root (VVR) were investigated. The total polyphenol and flavonoid contents of the VVR water and ethanol extracts were 110.00±0.97 and 236.31±4.60 mg gallic acid equivalent/g extract, and 52.19±2.09 and 196.36±4.19 mg catechin equivalent/g extract, respectively. The IC

values for the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical scavenging activity of the water and ethanol extracts were 0.004±0.001 mg/mL and 0.004±0.001 mg/mL, respectively. The antioxidant activities of the VVR extracts were also determined by the 2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) radical scavenging activity, ferric reducing antioxidant power, and oxygen radical absorbance capacity. Moreover, the VVR extracts had a strong inhibitory effect on lipid peroxidation, as determined by the ferric thiocyanate and thiobarbituric acid values. The 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyltetrazolium bromide assay showed that both extracts had protective effects on Chang liver cells by increasing the cell viability and decreasing the production intracellular reactive oxygen species in t-BHP-induced oxidative stress.

Overall, these results suggest that the VVR extracts have antioxidant activities.

Key words: Vitis vinifera root, antioxidant activity, oxidative stress, protective effect, Chang cells

Received 22 November 2017; Accepted 30 January 2018 Corresponding author: Pyo-Jam Park, Department of Biotechnology, Konkuk University, Chungju, Chungbuk 27478, Korea

E-mail: [email protected], Phone: +82-43-840-3588

서 론

노화, 암, 심장질환, 동맥경화, 염증 등 다양한 질병을 유 발하는 산화적 스트레스의 원인 중 하나는 생체 대사 과정 중에 생성되는 활성산소종이다(1). 적당량의 활성산소는 생 체 내에서 항균작용, 세포 성장 등에 도움을 주지만 과도하 게 발생하거나 균형이 무너지면 세포나 조직에 손상을 일으 키게 된다(2). 활성산소는 생체 내에서 항균작용, 세포 성장 등의 작용에서 공격받는 세포를 보호하며, 인체는 과다 발생 한 활성산소를 억제하기 위한 catalase, glutathione per- oxidase, glutathione S-transferase, superoxide 등과 같 은 항산화 효소를 가지고 있다(3). 하지만 이런 항산화 효소

의 작용 범위를 넘는 활성산소가 발생하게 되면 지질의 산 화, 단백질의 변성, DNA의 파괴 등을 일으켜서 백내장, 당뇨 병, 관절염, 감염, 위염, 노화, 치매, 암 등의 다양한 질병의 원인으로 작용하기도 한다(4). 이런 활성산소에 대항하여 항 산화 물질에 대한 연구가 많이 이루어지고 있으며, 잘 알려 진 항산화 물질로는 butylated hydroxyanisole(BHA)과 butylated hydroxytoluene(BHT) 등의 합성 항산화제와 폴 리페놀, 플라보노이드, 카로티노이드, 아스코르브산, 토코 페롤 등의 천연 항산화제가 있고(5), 최근에는 보다 인체에 무해하고 강력한 항산화제에 대한 요구가 증가하는 경향이 다(6).

포도근(

Vitis vinifera

포도근으로부터 분리된 resveratrol의 항염증 효능에 관한 연구(8,9) 및 항암(10), 항산화(11,12)에 대한 연구가 일부 보고되어 있다. 또한, 포도근에 대한 연구로는 포도근으로부 터 분리된 wilsonol C, heyneanol A, ampelopsin A, pal- lidol A,

cis

trans

trans

분석 결과 포도근 열수 추출물 및 에탄올 추출물 모두 라디 칼 소거 활성 및 산화스트레스에 대한 세포 보호 효과가 우 수하였으며 간세포 보호 효과가 있는 건강기능 식품 소재로 서의 가치가 있을 것으로 판단된다.

재료 및 방법

시약

본 실험에 사용한 포도근은 2016년 10월 제천한방약초 (충북 제천)에서 구입하여 사용하였다. 실험에 사용한 Folin- Ciocalteu’s reagent, ferric chloride(FeCl₃), DPPH, ABTS, potassium persulfate, 2’,7’-dichlorofluorescein diac- etate(DCF-DA), 4,6-tripyridyl-S-triazine(TPTZ), lin- oleic acid, (4-pyridyl-1-oxide)-N-

tert

시료의 추출

본 실험에 사용된 포도근 시료는 열수 추출과 에탄올 추출 두 가지 방법으로 추출하였다. 열수 추출은 포도근 시료 100 g에 3차 증류수 1.0 L를 추가하여 95°C에서 90분 동안 추출 하고 여과지(No. 41, Whatman, Maidstone, UK)로 여과한 후 rotary vacuum evaporator(EYELA, Tokyo, Japan)로 농축하여 동결건조 하였다. 에탄올 추출은 포도근 시료 100 g에 70% 에탄올 1.0 L를 넣은 후 상온에서 24시간씩 총 3회 추출한 다음 여과하고 농축하여 동결건조 하였다. 추출한 포도근 시료는 냉동보관 하면서 실험에 사용하였다.

총폴리페놀 함량 측정

총폴리페놀 함량은 Folin-Denis법(14)을 약간 변형하여

포도근 추출물 200 μL에 1.0 N Folin-Ciocalteu 시약 및 20% Na₂CO₃ 용액을 각 1.0 mL씩 차례로 넣은 다음 실온에 서 30분 반응시킨 후 분광광도계(Thermo Scientific Mul- tiskan GO, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) 를 이용하여 700 nm에서 흡광도를 측정하였다. Gallic acid (Sigma-Aldrich Co.)를 표준물질로 사용하여 포도근 추출물 의 총폴리페놀 함량을 산출하였고 gallic acid equivalents (mg GAE/g extract)로 나타내었다.

총플라보노이드 함량 측정

총플라보노이드 함량은 Jia 등(15)의 방법을 약간 변형하 여 포도근 추출물 0.25 mL에 증류수 1.25 mL를 혼합하고 5% sodium nitrite 75 μL를 추가한 후 실온에서 5분간 반응 시켰다. 10% aluminum chloride 0.15 mL를 추가한 후 실 온에서 6분간 반응시킨 다음 1.0 M sodium hydroxide 0.5 mL와 증류수 275 μL를 차례로 가하여 혼합한 후 510 nm에 서 흡광도를 측정하였다. Catechin(Sigma-Aldrich Co.)을 표준물질로 사용하여 포도근 추출물의 총플라보노이드 함 량을 계산하였고 catechin equivalents(mg CE/g extract) 로 나타내었다.

Electron spin resonance(ESR)를 이용한 DPPH 라디칼 소거능 측정

DPPH 라디칼 소거능 측정은 Lee 등(16)의 방법에 따라 메탄올에 녹인 60 μM DPPH 60 μL와 다양한 농도의 시료 60 μL를 넣어 잘 섞은 후 2분간 실온에서 반응시킨 다음 ca- pillary tube에 옮겨 ESR spectrometer(Jeol Co., Ltd., Tokyo, Japan)에서 측정하였으며, 그 측정 조건은 central field 3475 G, modulation frequency 100 kHz, modu- lation amplitude 2 G, microwave power 5 mW, gain 6.3

×10⁵, temperature 298 K였다.

ABTS 라디칼을 이용한 총 항산화력 측정

ABTS 라디칼을 이용한 항산화력의 측정은 Re 등(17)의 방법을 약간 변형하여 사용하였다. 7.4 mM ABTS 용액과 2.4 mM potassium persulfate를 혼합한 다음 암실에서 12

~16시간 동안 반응시켜 ABTS 라디칼을 생성하였다. 생성 된 ABTS 라디칼의 흡광도가 734 nm에서 1.5가 되도록 증 류수로 희석한 후 3.0 mL를 취하고 시료 1.0 mL를 넣은 다음 실온에서 10분간 반응시켜 734 nm에서 흡광도를 측정 하였다. 결과는 Trolox를 표준물질로 사용하여 mM Trolox equivalent/mg extract로 나타내었다.

FRAP를 이용한 총 항산화력 측정

FRAP 측정은 Kim 등(18)의 방법에 따라 300 mM ace- tate buffer(pH 3.6), 40 mM HCl에 녹인 10 mM TPTZ 및 20 mM FeCl₃･6H₂O를 각각 10:1:1(v/v/v)의 비율로 혼 합하여 FRAP 시약을 제조하였다. 시료 0.15 mL와 3.0 mL

의 FRAP 시약을 혼합하고 37°C에서 5분간 반응시킨 후 593 nm에서 흡광도를 측정하였다. 결과는 FeSO₄를 표준물 질로 사용하여 mM FeSO4 equivalent/mg extract로 나타 내었다.

ORAC 측정

포도근 추출물의 항산화 활성을 peroxy radical의 생성 과 소멸에 의한 fluorescent의 감소율인 ORAC 방법을 이용 하여 측정하였다. 2,2’-Azobis(2-methylpropionamidine) dihydrochloride(AAPH)를 사용하여 과산화 라디칼을 생 성하였고, 항산화 활성 비교 표준액으로 20 μM Trolox를 사용하였다. Fluorescent 표준용액은 Ou 등(19)의 방법에 따라 fluorescein sodium salt(Sigma-Aldrich Co.)를 75 mM phosphate buffer를 이용하여 78 nM 농도로 제조하였 다. 항산화 활성의 측정은 포도근 추출물 및 비교 표준액 50 μL에 fluorescent 표준용액 50 μL를 가하고 과산화 라디칼 유발물질인 221 mM AAPH 25 μL를 추가하여 반응시킨 후, spectrofluorometer(SpectraMax M2/M2e, Molecular De- vices Corp., Sunnyvale, CA, USA)를 사용하여 excitation 485 nm, emission 538 nm에서 5분마다 2시간 동안 형광을 측정하였다. ORAC는 비교 표준액 Trolox를 이용하여 산출 하였는데 그 식은 다음과 같다.

ORAC (μM TE)＝ CTrolox･(AUCsample－AUCblank) Csample･(AUCTrolox－AUCblank)

C_Trolox는 Trolox의 농도(20 μM), C_sample은 샘플의 농도

(g/L)이며 AUC(area under curve) 계산식은 다음과 같다.

AUC＝1+f5/f0+f10/f0+...+fn+5/f0

Ferric thiocyanate(FTC) 방법에 의한 지질과산화 억제 활성 측정

Ferric thiocyanate에 의한 지질과산화 측정은 Kikuzaki 와 Nakatani(20)의 방법으로 측정하였다. 포도근 추출물 4.0 mL, 2.51% linoleic acid 4.1 mL, 50 mM 인산 완충용 액(pH 7.0) 8.0 mL, 증류수 3.9 mL를 첨가하여 용액을 잘 혼합한 후 40°C 어두운 곳에서 지질과산화를 유도했다. 이 혼합 용액 0.1 mL, 75% 에탄올 9.7 mL, 30%-ammonium thiocyanate 0.1 mL를 순서대로 첨가한 후 잘 섞어주었다.

여기에 20 mM ferrous chloride(3.5% HCl에 녹인 것)를 0.1 mL 가한 후 잘 혼합하여 3분 후에 분광광도계를 이용하 여 500 nm에서 흡광도를 측정하였다. 음성대조군으로는 시 료 대신 물과 에탄올을 사용하여 반응시켰고, 양성대조군으 로 비타민 C 및 α-tocopherol을 사용하였다.

Thiobarbituric acid(TBA) 방법에 의한 지질과산화 억제 활성 측정

포도근 추출물 4.0 mL에 2.51% linoleic acid 4.1 mL,

50 mM 인산 완충용액(pH 7.0) 8.0 mL, 증류수 3.9 mL를 첨가하여 용액을 잘 혼합한 후 40°C 어두운 곳에서 지질과 산화를 유도한 후 2일 간격으로 지질과산화 억제 활성을 측 정하였다. 먼저 각 시료 용액 1.0 mL, 20% trichloroacetic acid(TCA) 2.0 mL, 0.67% TBA 2.0 mL를 넣어 혼합한 후 열탕조에서 10분간 가열 처리하여 흐르는 물에 냉각시킨 다음 3,000 rpm에서 10분간 원심분리 하고 상층액을 532 nm에서 흡광도를 측정하였다.

세포 배양

정상 간세포(human liver cells, Chang cells)를 불활성 화한 fetal bovine serum 10%와 1.0% penicillin-strep- tomycin이 첨가된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium 배지에서 37°C 및 5% CO2 조건에서 배양하였다.

세포독성 측정 및

-BHP에 의한 세포의 산화스트레스로 부터 세포 보호 효과 측정

세포의 생존율은 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide(MTT) 환원 방법을 이용하 여 측정하였다(21). 세포의 독성 측정은 Chang 세포를 48 well plates에 7×10³ cells/well 농도로 분주한 후 24시간 동안 배양하고, 포도근 추출물을 최종 농도(0, 0.025, 0.05, 0.1, 0.2 mg/mL)가 되도록 세포에 처리하여 24시간 동안 더 배양하였다. 이후 MTT 용액(0.2 mg/mL)을 가하고 37°C에서 4시간 더 배양하여 MTT를 환원시켜 생성된 for- mazan이 배지에 떨어져 나가지 않도록 배지를 조심스럽게 제거하였다. Dimethyl sulfoxide를 150 μL 분주하여 20분 동안 혼합한 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

t

t

세포 내 활성산소종 소거능

활성산소와 반응하여 형광을 발산하는 DCF-DA를 이용 하여 세포 내에 생성되는 활성산소의 정도를 측정하였다.

Chang 세포를 96 well black plates에 2×10⁴ cells/well의 농도로 분주하고 24시간 동안 배양한 후 농도별 시료를 1시 간 전처리하였다. 200 μM

t

Table 1. Extraction yields, total polyphenol and flavonoid contents of Vitis vinifera root (VVR) extracts

(% w/w) Total polyphenol content

(mg GAE/g extract)¹⁾ Total flavonoid content (mg CE/g extract)¹⁾ Water extract

Ethanol extract

4.70 2.17

110.00±0.97^a 236.31±4.60^b

52.19±2.09^a 196.36±4.19^b GAE: gallic acid equivalents, CE: catechin equivalents.

1)Values represent means±SD (n=3). Means with different superscripts (a,b) in the same column are significantly different by Tukey’s multiple comparison test at P<0.05.

Table 2. DPPH radical scavenging activity of VVR extracts by

Sample DPPH radical scavenging activity (IC50, mg/mL)¹⁾

Water extract Ethanol extract Vit. C

0.004±0.001^NS 0.004±0.001 0.003±0.002

1)Values represent means±SD (n=3). NS: not significant.

Table 3. Values for ABTS radical scavenging, FRAP activity, and ORAC of VVR extracts

Sample TEAC

(mM Trolox eq./mg extract)¹⁾ FRAP

(mM FeSO4 eq./mg extract)¹⁾ ORAC

(μM TE eq./mg extract)¹⁾ Water extract

Ethanol extract BHT

0.908±0.012^a 0.910±0.013^a 1.813±0.022^b

1.494±0.019^b 2.514±0.018^c 1.363±0.121^a

110.481±0.083^c 99.931±0.610^b 20.483±4.512^a

TEAC: Trolox equivalent antioxidant capacity, FRAP: ferric reducing antioxidant power, ORAC: oxygen radical absorbance capacity.

1)Values represent means±SD (n=3). Means with different superscripts (a-c) in the same column are significantly different by Tukey’s multiple comparison test at P<0.05.

통계분석

실험 결과는 각 항목에 따라 평균±표준편차(SD)를 구하 였으며, 각 군 간의 유의성 검증은 GraphPad Prism 5.0 version(GraphPad Software, La Jolla, CA, USA)을 이용 하여 one-way ANOVA을 실시하였으며 Tukey’s와 Dun- nett’s test 방법으로 사후 검증하여

P

결과 및 고찰

포도근의 추출 수율 및 총폴리페놀, 총플라보노이드 함량

총플라보노이드 함량은 열수 추출물이 52.19±2.09 mg CE/

g extract이고 에탄올 추출물에서 196.36±4.19 mg CE/g extract를 나타내었다. 총폴리페놀과 총플라보노이드 함량 은 열수 추출물보다 에탄올 추출물에서 높은 수치를 나타내 었으며, 이는 Jun 등(24)의 복분자와 오디 추출물의 플라보 노이드 함량보다도 높은 수치를 보여준 결과이다.

ESR을 이용한 DPPH 라디칼 소거 활성

ESR을 이용하여 포도근 열수 및 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼 소거 활성을 측정한 결과를 Table 2에 나타내었다.

포도근의 열수 및 에탄올 추출물을 DPPH 라디칼의 50%

소거 활성 농도인 IC₅₀ 값으로 나타낸 결과 각각 0.004±

0.001 mg/mL로 같은 DPPH 라디칼 소거 활성을 보여주었 다. 이때 양성대조군으로 사용한 비타민 C의 IC₅₀ 값은 0.003

±0.002 mg/mL로 비타민과 비슷한 DPPH 라디칼 소거 활 성을 나타내었다. 또한, 이 결과는 Lee 등(25)의 삼채 뿌리 추출물의 DPPH 라디칼 소거 활성보다 높은 활성을 보여주 었다.

ABTS 라디칼을 이용한 총 항산화력

포도근의 열수 및 에탄올 추출물의 ABTS 라디칼 소거능 측정 결과는 Table 3에 나타내었다. Trolox를 표준물질로 사용하여 ABTS 라디칼을 이용한 총 항산화력을 TEAC(mM Trolox eq./mg extract) 값으로 나타내었다. 포도근의 열수 및 에탄올 추출물의 총 항산화력은 각각 0.908±0.012, 0.910±0.013의 TEAC 값을 나타내었으며, 양성대조군인 BHT는 1.813±0.022 TEAC 값을 나타내었다. 양성대조군 으로 이용된 BHT의 총 항산화력과 비교했을 때 낮은 활성 을 보였으나, 열수 및 에탄올 추출물에서 모두 농도 의존적 으로 ABTS 라디칼 소거능을 보여주었다(data now shown).

* *

*

*

*

*

*

*

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6

0 2 4 6

Incubation period (day)

Absorbance (500 nm) .

Control Water extract Ethanol extract Vit.C Vit.E

Fig. 1. Antioxidant activities of VVR extracts at 1.0 mg/mL in

P<0.05 versus control is significantly different

* * *

*

*

*

*

*

* *

0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35

0 2 4 6 8

Incubation period (day)

Absorbance (532 nm) .

Control Water extract Ethanol extract Vit.C Vit.E

Fig. 2. Antioxidant activities of VVR extracts at 1.0 mg/mL in

P<0.05 versus control is significantly different as

Caldas 등(26)은 포도 과피 추출물의 ABTS 소거능이 0.218

~1.626 TEAC 값을 나타낸 것과 비교해 포도근 추출물의 ABTS 라디칼 소거능 역시 우수한 것으로 나타났다.

FRAP법을 이용한 총 항산화력

FRAP법은 전자공여 능력을 통해 시료의 항산화 활성을 확인하기 위해 자주 사용되는 방법의 하나다. FRAP법을 사 용하여 포도근의 열수 추출물과 에탄올 추출물의 항산화력 을 측정한 결과 각각 1.494±0.019 mM FeSO4 eq./mg ex- tract, 2.514±0.018 mM FeSO₄ eq./mg extract를 나타내 었으며 포도근의 에탄올 추출물이 더 높은 항산화력을 나타 내었다(Table 3). 또한, 양성대조군인 BHT의 경우 1.363±

0.121 mM FeSO4 eq./mg extract 값을 나타내었고, 이는 포도근 열수 추출물과 에탄올 추출물이 항산화제인 BHT보 다 높은 전자공여 능력을 통한 항산화력을 나타낸다.

ORAC에 의한 항산화 활성 측정

ORAC assay는 radical 연쇄반응의 가장 핵심적인 단계 인 수소전자 전달과 관련하여 AAPH에 의해 생성된 free radical에 대한 항산화 물질의 소거 활성, 즉 radical chain breaking antioxidant capacity를 확인하는 방법이다(27).

ORAC assay를 측정한 결과 포도근 추출물의 항산화 활성 은 Table 3에서 보는 바와 같이 열수 추출물은 110.481±

0.083 μM TE eq./mg extract, 에탄올 추출물은 99.931±

0.610 μM TE eq./mg extract로 비슷한 활성을 나타내었 다. 이는 대조군으로 사용한 BHT(20.483±4.512 μM TE eq./mg extract)보다 높은 항산화 활성을 나타내었다. 감귤 추출물의 페놀성 화합물 함량과 ORAC 간의 상관계수를 분 석한 Hwang 등(28)의 연구에서는 그 상관관계가 0.884로 밀접한 관계가 있다고 보고하였다. 포도근 추출물 또한 높은 페놀성 화합물 함유로 인한 우수한 항산화 활성을 나타내는 것이라고 판단된다.

지질과산화 억제 활성

포도근 추출물의 지질과산화 억제 활성을 측정하기 위해 FTC와 TBA 방법을 사용하여 측정한 결과는 Fig. 1과 Fig.

2에 각각 나타내었다. FTC 방법은 TBA 방법에 비해 초기 지질과산화 상태를 측정하는 방법으로 알려진 것처럼 대조 군은 시간이 지남에 따라 지질과산화가 생성되어 흡광도가 증가하였으며, FTC 측정 방법은 4일째에 최고 수치를 보여 주고 TBA 측정방법은 6일째에 지질과산화가 최고 수치를 나타내었다. 또한, 포도근 열수 및 에탄올 추출물에서 지질 과산화를 강하게 억제하는 것을 확인할 수 있었으며 대조군 으로 사용한 비타민 C와 E보다도 더 우수한 지질과산화 억 제 활성을 보여주는 결과이다. 따라서 포도근 추출물은 천연 항산화제인 비타민 C와 E보다 높은 지질과산화 억제 효능을 나타내었으며 이러한 우수한 항산화 효능은 포도근 추출물 이 항산화 효과가 높은 천연 항산화제로 이용 가능성을 나타

낸다고 판단된다.

세포독성 및 세포 보호능

정상 간세포인 Chang 세포에 대한 포도근 추출물의 세포 독성 및

t

t

t

t

t

0 20 40 60 80 100 120

Cell viabnility (% of control) .

Control 0.025 0.05 0.1 0.2 0.025 0.05 0.1 0.2 Water extract (mg/mL) Ethanol extract (mg/mL)

Fig. 3. Effect of VVR extracts on cytotoxicity in Chang cells.

VVR extracts were treated with various concentrations in Chang cells for 24 h. Values are expressed as the mean±SD of determi- nations made in triplicate experiments.

***

* *

** ***

*

###

0 20 40 60 80 100 120

Cell viability (% of control) .

Control 100 0.025 0.05 0.1 0.2 0.025 0.05 0.1 0.2 t -BHP Water extract (mg/mL) Ethanol extract (mg/mL) (μM)

Fig. 4. Protective effect of VVR extracts on t-BHP induced oxi-

P<0.001 vs. con-

P<0.05,

P<0.01, and

P<0.001 vs. t-BHP group.

###

***

*** *** ***

***

*** ***

***

***

0 100 200 300 400 500 600

ROS production (% of control)

Control 200 5 0.025 0.05 0.1 0.2 0.025 0.05 0.1 0.2 t -BHP NAC Water extract Ethanol extract (μM) (mM) (mg/mL) (mg/mL)

Fig. 5. Measurement of intracellular ROS production. The ex-

Data are expressed as the mean±SD of three different samples.

###

P<0.001 vs. control group.

P<0.001 vs. t-BHP group.

도근 열수 및 에탄올 추출물이

t

세포 내 활성산소종 소거능

Chang 세포에 200 μM

t

t

요 약

본 연구는 포도근 추출물의 항산화 활성을 확인하고자 열수 및 에탄올 추출을 통해 2종의 시료를 제작하여 추출물별 항 산화 활성을 비교하였다. 포도근에 포함된 총 폴리페놀과 총 플라보노이드 함량을 측정한 결과, 에탄올 추출물(236.31

±4.60 mg GAE/g extract)이 열수 추출물(110.00±0.97 mg GAE/g extract)보다 높은 총 폴리페놀 함량을 나타내었 으며, 총 플라보노이드 함량 또한 에탄올 추출물(196.36±

4.19 mg CE/g extract)이 열수 추출물(52.19±2.09 mg CE/

g extract)보다 더 높게 나타났다. ESR을 이용한 DPPH 라 디칼 소거능을 측정한 결과, 포도근의 열수 및 에탄올 추출 물 모두 50% 라디칼 소거 농도인 IC₅₀ 값이 0.004 mg/mL로 비타민 C와 비슷한 활성을 나타내었다. ABTS를 이용한 라 디칼 소거 활성, FRAP를 이용한 총 항산화능 측정 및 ORAC 에 의한 항산화 활성을 측정한 결과에서도 포도근 추출물이 높은 항산화 효능을 가지고 있음을 확인할 수 있었고, 특히 FRAP법과 ORAC법에서 양성대조군인 BHT보다 높은 항산 화 활성을 나타내었다. 또한, FTC 및 TBA법을 이용한 지질 과산화 억제 효능을 살펴본 결과, 포도근 추출물이 양성대조 군인 비타민 C와 비타민 E보다 우수한 지질과산화 억제 효 과를 나타내었다. 간세포를 이용하여 포도근 추출물의 세포 독성을 확인하기 위하여 MTT assay를 수행한 결과, 포도 근의 열수 및 에탄올 추출물 모두 0.2 mg/mL의 농도까지는 독성이 없음을 확인하였다. 간세포 보호 효능 실험에서는

t

감사의 글

이 논문은 2017학년도 건국대학교의 연구년교원 지원에 의 하여 연구되었음.

REFERENCES

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