Vitek system에서 同定되는 효모균의 種類 및 Germ tube test의 有 用 性

대한임상병리사회지 : 제 25 권 l 호 1993

Vitek system에서 同定되는 효모균의 種類 및 Germ tube test의 有 用 性

동아대학교 임상병리과 류지한·고득영·최혜원·이영길 Key words : YBC card, Germ tube

1 . 서 론

효모균은 유성생식 과정에서 형성되는 포자 형 태 에 따라 자낭균 효모 (i\scosporogenous

yeast ), 담자균 효모 ( Basidiosporogeπous yeast),

불완전 효모균 (lmperfect yeast) 의 3 group으로 나누어지며， 전 세계에 약 500 여 종이 있는 것 으로 알려져 있다 1)

효모균은 기회감염균으로 면역이 저하된 사 람， 즉 hormone 불균형， 항암제 투여자， 후천 성 면역결핍증 (AIDS) ， 진성당뇨， 백혈병환자 둥에서 심각한 감염의 원인균이 되고2 ， 4 ， 5) ， 특 히， 전신성 진균증 (systemic candiasis) 을 동반 하기 때문에 임상 미생물실에서 정확하고 신속 하게 분리 동정하여야 한다5 ， 11)

효모균의 동정은 형태학적·생화학적·혈청학 적 방법으로 동정 되어진다2) 현재， 임상미생 물실에서 효모균 동정을 할 수 있는 장비로서 는 API system(Analytab products plainview,

NY) 와 Autobac(Pfizer, Inc. New York-NY), MS-2 (Abbott Diagnostics, Dallas, TX) 및

Vitek AMS(Vitek system, Inc., Hazelwool, Mo)

둥이 국내에 소개되고 있다3 ， 7)

본원 에 서 는 Vitek AMS 의 YBC (Y east bio- chemical card) 와 Gram 염 색 , Germ tube test, india ink preparation, slide culture 둥올 사용하 여 분리 동정을 실시하고 있는데 그 중 Germ

tube test는 효모굵 중 병원성이 강한 것으로

알려 진 Candida albicans 를 빠르고 경 제 적 으로

동정하는데 적당한 검사로서 3 ， 7 ， 8) 미생물 검사 실에서 널리 사용하고 있다.

저자는 본원의 임상 가검물에서 분리되는 병 원성 효모균의 종류를 파악하고 Germ tube

test 의 유용성을 알아보기 위해 Vitek AMS 의

YBC card와 동시에 검사를 실시한 바 높은 일 치율을 보였기에 다음과 같이 보고하는 바이다.

n. 재료 및 방법

1. 대 상

1992 년 5 월부터 93 년 4 월까지 1 년 동안 본 원 임상병리과 미생물실에 의뢰되었던 검체에 서 분리된 243균주와 정도관리를 위한 대조균 주인 Caπdida albicans ATCC 14053, Candidα

tropicalis A TCC, Candida parapsilosis A TCC, Cryptococcus laureπtii A TCC 76438 둥 총 247

균주를 대상으로 하였다.

굵종의 동정은 Gram 염색， Germ tube검사，

india ink검 사， Vitek AMS 의 YBC card를 사용 하여 실시하였다.

2. Germ tube검 사

Corn meal배지나 5% 면양 혈액 한천배지에

서 자란 효모균올 Gram 염색올 실시하여 효모 굵임을 확인한 후 사람 혈청 0.5 rnf1 에 소량의 효모균을 풀어 3TC 의 배양기에 4 시간 배양하

여 현미경으로 Germ tubes 폰재유무를 확인하 였다.

3. Vitek AMS훌 이용한 자동화 방법

제품의 사용 설명서에 따라 효모균을 corn

meal 배지나 5% 면양 혈액한천배지로부터 잘

분리된 집락을 면봉으로 따서 0.45--0.5% 멸 균 생리 식염수 1.8 ma 에 풀어 균액의 탁도를

McFarland standard 2.0 에 맞춘 다음 YBC

card 에 접종하였다.

접종된 card를 30-C 배양기에 18 시간 .42 시 간 .66 시간 동의 방법으로 배양하여 Vitek

AMS로 판독하였다.

m. 걸 과

1992 년 5 월부터 1993 년 4 월까지 1 년간 총 분리 동정된 효모균은 243균주이었다.

이 기간에 분리 동정된 효모균은 C. albicans

외 10종이었다. 그중 C. albicans가 가장 많았으 며， 다음은 C. tropicalis 풍의 순으로 나타났으 며 , C. albicans와 C. tropicalis가 총 진 균 중 79.4

%로 상당히 많은 부분을 차지하였다 (Table 1).

T able 1. Classification of 243 strains of yeasts.

Organisms Number isolated Percent

Candida albicaπs 148j 60.9

Candida tropicalis 45 i 18.5

Candida parapsilosis 15 6.2

Candida glabrata 9 3.7

Trichos]XJron beigelii 5 2.1 Candida guilliermondii 3 1.2

Candida lusitaniae 2 0.8

Cryptococcus laurentii 2 0.8

Candida humicola 0.4

Cr뺑ococcus neoformans 1 0.4

TricMsporon pullulaηs 0.4

U nidentified 11 4.6

Total 243 100.0

검체의 분포는 urine( 35.8 % )이 가장 많았으 며， fluid 검체 (2.1 %)가 가장 적은 분포를 보였

q(Table 2).

243균주 중 Vitek AMS 의 YBC card 에 서 동 정된 균주는 232균주로 95.5% 의 높은 동정률 을 보였으며 (Table 3), 18 시 간이 209 건 (86.0

%), 42 시간이 21 건 (8.6%) ， 66 시간이 2 건 (0.8

%)로 대부분 18 시간대에서 분리 동정되었다

(Table 4).

Vitek AMS의 YBC card 에서 동정되지 않은 균주는 11 균주 (4.5%) 를 차지하였다. 3균주는

Germ tube 검사가 양성이었고， 나머지 8균주는

T able 2. The distribution of clinical specimens in 243 strains.

Specimens Number Percent

Urine 87 35.8

Sputum(Throat) 71 29.2

Other 34 14.0

Blood 17 7.0

Stool 16 6.6

Pus 13 5.3

Fluid 5 2.1

Total 243 100.0

Table 3. Yeast identification results with AMS -YBC.

No. of is이ates

Organisms Total Correct indentifi어 at:

18 42 66H Candida albicans 148 139 9 0 Candida tropicalis 46 44 2 0

Caηdida parapsilosis 15 11 4 0

Candida glabrata 8 8 0 0

Trichosporon beigelli 5 3 2 0 Candida guillie1^‘mondii 3 1 2 0

Candida lusitaniae 2 2 0 0

Cr)φ，tococcus laurentii 2 1 0 1

Caπdida humicola 1 0 0 1

Cr)φ，tococcus neoformans l 0 1 0 Trichosporon pullulans 1 0 1 0

U nidentified 11 0 0 0

Total 243 209 21 2

-

-118 -

Table 4. Comparison of the results between 어지는 경향이다. 그렇지만 효모균 동정률은 Vitek AMS--YBC and Germ tube test. 95---97% 로 Vitek AMS와 거의 비슷한 수준으

POSltlve Vitek AMS-YBC 148 Germ tube test 151

% Agreement 98.0

negatlve 95 92

Germ tube검사가 음성 이 었다 (Table 3).

C. albicans를 빠르고 경제적으로 분리 동정하 는 것으로 알려진 Germ tube검사와 Vitek

AMS 의 YBC card의 일치율은 98.0% 로 높게 나타나 유용성이 상당히 있었다 (Table 4).

N. 고 활

Vitek AMS의 YBC card는 임상검체 중에서 신속·정확·편리하게 효모균올 동정하기 위해 고안해 낸 자동화 동정 기기이다9.11)

자동화 기기는 생화학적 검사를 card로 사용 하여 효모균의 발효능 (fermentation) 과 동화능

(assimila tion) 을 판독하므로서 효모균을 동정하 는데 가장 간단한 방법으로 제작 되었으며 lO)，

Vitek AMS 의 YBC card 법은 Wickerham과 Burton 의 생화학적 반웅올 근거로 효모균을 동정하게 된다9)

각 YBC card 에는 30개의 well 이 있는데， 26

개의 well에는 각종 아미노산， 당배지 퉁 생화 학적 반웅검사를 보기 위한 물질이 들어 있고 4개 의 well은 negative control well 이 다.

효모균올 접종한 card를 30^VC 배양기에 over night 또는 two overnight 시 킨 후 reader /incu-

bator에 넣으면 자동적 으로 reader에 서 well 에 660nm 의 빛올 통과시켜 각 well 마다 생화학적 반웅이 일어난 것올 감지하여 일련의 code 번호 가 산출되고 균종이 입력된 computer에 전달 되어 균종올 자동적으로 동정하게 된다ω…)

현재， 국내에서 사용하고 있는 자동화 방법 은 API system 의 API20C와 본원에서 사용하 고 있는 Vitek AMS 의 YBC card 법이 대표적으 로 이용되고 있으나， ATB system 의 API 20C

는 semi-auto로 Vitek AMS 에 비 해 성 능 이 떨

로 보고되어 있다 11)

Vitek AMS 의 YBC card로 1 년 동안 분리 동 정한 11 종의 효모균은 Ling 둥의 17종 12) 에 비 해 적은 종류로 나타났으나， Ling 둥은 16개월 동안 분리 동정한 결과이고 국내 문헌은 찾아 볼 수 없어 비교할 수 없었다.

Candida species 중 에 서 C. albicaπs가 주 된 병 원성효모균이며， 다양한 임상증후를 유발시킬 수 있는 것으로 알려져 있는데13)， C. albicans는 60.9% 로 가장 많은 비중을 차지하였으며， 이 는 Sun 풍 14) 의 68.0%, 範田 둥 1) 의 7 1. 3% 에 비해 낮았으나 Tian 둥 12) 의 53.5% 에 비해 높 게 나타났다.

또， 최근에 자주 심각한 기회감염균으로 보 고 16) 되 는 C. tropicalis, C. parapsilosis균도 18.5

%， 6.2% 로 많이 동정되는 것으로 나타났으며 위 세 균주가 차지하는 비율은 총 85.6% 로

Perry 둥9) 의 82.7%, Tian 둥8) 의 83.6%, 範田 등 1) 의 8 1.5% 와 거의 일치함올 볼 수 있어 지 역적으로 별 차이가 없이 나타났다. 중추신경 계에 주로 침범하여 결해성 뇌막염·뇌종양·뇌 농양 및 여러 신경성 질환을 일으키는 15) C.

neoformans는 이비인후과 환자의 경부에서 생 긴 화농성 농에서 매우 드물게 1 건이 분리 동 정되었다.

실험 대상 란주의 검체 분포를 살펴보면 urine 이 35.8%, sputum 이 29.2% 로 절반 이상 을 차지 하였으며， stool올 합친 7 1.6% 는 Tian

둥 12) 의 88.8% 에 비해 다소 차이를 보였으며，

특히 sputum에서 Tain 둥 12) 의 53.9% 는 상당히 많은 차이가 있었다.

Vitek AMS 의 YBC card 에서 최종 동정되는 시간은 18 시간 배양 후가 86.0% 로 대부분 차 지하였으며， 42 시간이 8.6% 로 Liae 등9) 의 24

시간 배양 후 96.9% 보다는 떨어졌으나， 이것 은 18 시간 배양과 24 시간 배양의 6 시간 차이 로 인한 영향 때문이라 보이며， Zaatari 퉁 11) 의 70.8% 에 비해서는 상당히 높게 나타났다.

Vitek AMS 의 YBC card 에 서 동 정 된 232균주 95.5% 는 Zaatari 둥 11) 의 97.2% 보다 약간 낮

게 나타났으나， 높은 재현성과 상당한 동정률 로 인하여 미생물실에서 효모균 동정에 많은 도움이 되리라 보아진다.

Vitek AMS에서 동정되지 않은 11 균주의 원

인올 살펴보면 기계적인 문제와 검사자의 기술 적인 문제로 볼 수 있겠는더1 ; 우선 기계적인 문제로는 1) 너무 많은 양성반웅이 나타나는 경우， 2) 너무 적은 양성반웅이 일어나는 경우，

3) 분 리 된 균주가 computer의 data base에 들 어 있지 않은 경우， 4) glucose well 이 48 시간까 지 배양하여도 음성반웅일 경우이고， 검사자의 기술적 문제로는 1) 균주가 순수 분리되지 않 아 단일균주가 아닐 경우， 2) 균주가 효모균이 아닐 경우， 3) Vitek AMS 조작시 조작 실수로 인한 착오일 경우 등으로 본다9.10)

따라서 균주가 동정되지 않을 경우 Gram 염 색을 다시 실시하여 효모균임을 재확인하고 새 로운 YBC card로 재검사를 실시하는 것이 바 람직하다고 하겠다.

C. albicans를 가장 경 제 적 이 고 간단하게 동정 하는데 널리 이용하는 Germ tube².⁷.⁸.¹¹) 검사법 과 Vitek AMS 의 YBC card 결과의 일치율은 98.0% 로 아주 높게 나타나 Germ tube 법의 높 은 유용성을 보여 주었으며， 앞으로 효모균 검 사에서는 Germ tube 법올 우선 실시하여 양성 이 나오면 Zaatari 둥 11) 과 같이 Vitek AMS 의

YBC card 법올 실시하지 않고 C. albicans로 동 정해도 무방하다고 하겠다.

이상으로 Germ tube 법의 상당한 유용성으로 인하여 값비싼 YBC card를 절약할 수 있어서 많은 경제적 효과가 있다고 보여지며， 또한 Vitek AMS와 YBC card를 사용하여 임 상 검 체

에서 효모균올 신속·정확하게 동정하여 임상의

에게 보고하여 환자 치료에 많은 도움을 줄 수 있으리라 사료되어진다.

V. 걸 론

1992 년 5 월부터 1993 년 4 월까지 1 년 동안 본원 임상병리과 미생물실에 의뢰 되었던 검체 로부터 Vitek AMS 의 YBC card 법 과 Germ

tube 법을 실시하여 분리 동정된 총 243균주의 효모균을 효모균의 종류 및 Germ tube법 의 유용 성을 분석하여 다음과 같이 요약할 수 있었다.

1. 이 기 간에 분리 된 균주는 C. albicaπs， C.

tropicalis, C. parapsilosis, C. glabrata, T. Beigelli, C. guilliermoπdii， C. laurentii, C. πeoformaηs， C.

humicola, C. lusitaniae, T. pullulans 등 11 종 이 었 다.

2. 총 243균주를 분리한 검체의 분포는

urine(35.8%), sputum(29.2%), others(14.0%), blood(7.0%), stool(6.6%), pus(5.3%), fluid(2.1

%) 둥의 순이었다.

3. 총 243굵주 중 Vitek AMS 에서 동정된 시 간은 18시 간대 (one overnight) 86.6%, 42 시 간 대 (two overnight) 94.6%, 66 시간대 (three

overnight) 95.5% 로 Vitek AMS 에서 동정된 균주는 232균주로 95.5% 이 었다.

4. 분 리 동 정 된 균주 중 C. albicans는 148균 주로 60.9% 를 차지하였다.

5. Vitek AMS 의 YBC card로 동정 되 지 않은 균주는 11 균주 (4.5% )를 차지하였고 3균주는

Germ tube 검 사 positive 이 었고， 나머 지 8균주는

Germ tube검 사 negative 이 었 다.

6. Caπdida albicaπs와 Germ tube검사의 일치 율은 98.0% 로 상당히 높게 나타났다.

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The Distribution of Yeast Indentified in Vitek System Application of Germ Tube Test

Ryu, J. H., Go, D. Y., Choi, H. W., Lee, Y. G.

Dept. of Clinical Pathology, Dong-A University Hospital

ABSTRACT

A recently introduced automated method for yeast testing. Vitek Auto Microbic System ( AMS) (Vitek System, Inc., Hazelwood, Mo) has been evaluated by comparison with the Germ tube test.

243 strains of yeasts isolated from clinical specimens during one year were identified simultianeously Vitek AMS YBC card and Germ tube test. Results of 209 isolates were ob- tained in 18hrs, 21 were obtained in 48hrs, 2 were obtained in 66hrs, the other 11 were un-

identified.

243 strains grouped into 11 specis, including C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C.

globrata, T. beigelli, C. guilliermondii, C. laurentii, C. neoformans, C. humicola, C. lusitaniae, T.

pullulans etc.

Respiratory, stool and urine specimens yield- ed 71.6% of the total organisms. The Vitek AMS YBC card and Germ tube tests correctly identified 148 of the 151 isolates of C. albicans (98.0% ). Our results suggested that Vitek AMS is a rapid, accurate, simple identifying method for common pathogenic yeasts.

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