카드뮴으로 유발한 간세포 자멸사에서 진피의 보호효과
노규표1#, 변성희1, 이종록2, 박숙자2*, 김상찬1*
1 : 대구한의대학교 한의과대학, 2 : 대구한의대학교 제약공학과
Protective effect of Citrus unshiu peel on the cadmium-induced apoptosis in HepG2 cells
Gyu Pyo Noh
1#, Sung Hui Byun
1, Jong Rok Lee
2, Sook Jahr Park
2*, Sang Chan Kim
1*1 : College of Korean Medicine, Daegu Haany University
2 : Department of Pharmaceutical Engineering, Daegu Haany University
ABSTRACT
Objective : Citrus unshiu peel (Citri Unshius Pericarpium) has been prescribed to suppress coughing and phlegm in Korean medicine. In this study, the effect of ethanol extract of Citrus unshiu peel (CEE) on apoptosis was investigated using cadmium chloride (CdCl
2) treated HepG2 cells.
Methods : CEE was prepared by extracting 300 g of Citri Unshius Pericarpium in 3 L of ethanol for 72 h. Apoptosis was determined by the TUNEL assay. The mitochondrial membrane potential (MMP) was monitored using the membrane- permeable fluorescent dye Rh123. The expression level of each protein was monitored by Western blot analysis.
Results : CEE protected HepG2 cells from apoptosis as determined by the TUNEL assay. A decrease in MMP was observed in cells exposed to cadmium, indicating that mitochondria are involved in the induction of apoptosis. However, CEE recovered the reduction in MMP caused by cadmium. In addition, decreased expression of B-cell lymphoma 2 (Bcl-2), procaspase, and poly(ADP-ribose) polymerase (PARP) by cadmium was increased by CEE. The anti-apoptotic effect of CEE was found to be associated with inhibition of JNK and p38 phosphorylation when examining the expression of phosphorylated MAPK by Western blot.
Conclusion : This study showed that CEE exerted anti-apoptotic effects in cadmium-induced HepG2 cells by inhibiting the reduction of MMP and changes in the expression level of apoptotic proteins. These results suggest the potential for CEE to be used for heavy metal-induced liver damage.
1)Key words : Citrus unshiu peel, cadmium, apoptosis, MMP, caspase
Ⅰ. 서 론
잘 익은 귤은 남녀노소가 즐겨 먹는 대표적인 국민 과일 중 의 하나이다. 귤을 즐기는 일반적인 방법은 과육을 섭취하는 것이지만 보고된 연구들에 의하면 과육보다 과피에 유용성분이
더 많이 함유되어 있으며, 비타민 C의 경우 과육보다 과피에 약 4배 이상 더 많다. 생활 속에서 귤피를 활용하는 방법에는 잘 세척된 귤피를 말려 차로 이용하는 것으로 비타민이 풍부 하여 감기예방에 도움이 된다고 알려져 있다. 한방에서 귤피, 즉 진피(陳皮)는 겉면이 황적색~어두운 갈색이 되도록 건조
*Corresponding author : Sook Jahr Park, Department of Pharmaceutical Engineering, Daegu Haany University, Gyeongsan 38610, Republic of Korea.
·Tel : +82-53-819-1298 ·Fax : +82-53-819-1406 ·E-mail : [email protected]
Sang Chan Kim, College of Korean Medicine, Daegu Haany University, Gyeongsan 38610, Republic of Korea.
·Tel : +82-53-819-1862 ·Fax : +82-53-819-1860 ·E-mail : [email protected]
#First author : Gyu Pyo Noh, College of Korean Medicine, Daegu Haany University, Gyeongsan 38610, Republic of Korea.
·Tel : +82-53-819-1864 ·Fax : +82-53-819-1406 ·E-mail : [email protected] ·Received : 19 Oct 2020 ·Revised : 16 Nov 2020 ·Accepted : 25 Jan 2021
하여 저장한 것으로 이기(理氣), 조습(燥濕), 조중(調中), 화담 (化痰), 지해(止咳) 등의 효능을 얻고자 할 때 사용되었다. 陳 皮의 약리작용으로는 위장관 평활근 이완작용, 항 위궤양작용, 위액분비 촉진작용, 거담 및 감기 치료효과, 소염 및 항 알러지 효과, 강압 및 혈관확장 작용, 자궁수축억제 작용, 콜레스테롤 저해작용 등이 보고되었다
1,2). 陳皮에는 flavonoid 계열의 화 합물이 다수 함유되어져 있는 것으로 보고되어 있는데 그 중에 대표적인 것이 hesperidin과 hesperitin 등이며
3), 이 화합물 들은 항산화
4), 항염
5), 항암
6)등의 생리 활성이 보고되었다.
카드뮴은 전기도금을 비롯한 다양한 분야에서 원료로 사용 되고 있는 중금속으로서 부주의한 관리로 인한 식이섭취 및 공 기 흡입을 통해 대부분의 중독 현상이 나타나며, 배설이 느리기 때문에 인체에 축적된다
7,8). 카드뮴에 대한 급성 노출은 배뇨 장애, 다뇨증, 흉통, 피로 및 두통 등을 유발할 수 있고
9), 오염 된 음식이나 공기에서 만성적으로 카드뮴을 섭취하게 되면 세 포 사멸로 인한 장기 기능장애가 발생하여 폐, 간 및 신 세뇨관 질환이 발생할 수 있다
10). 카드뮴은 주로 간에 축적되기 때문 에 카드뮴 유발 독성을 고려할 때 간은 가장 중요한 표적 기관 이라 할 수 있다
11). 간에서 카드뮴은 염증과 산화적 스트레스 를 초래하며 Mitogen-activated protein kinase (MAPK)를 통해 세포자멸사(apoptosis)를 유발하는 것으로 알려져 있다
12,13)
. 카드뮴 독성에 대한 연구로 갈근 열수 추출액의 해독작
용
14)과 동물 간에서 ginsenoside의 세포 내 분포와 대사
15), 간경변증에서의 세균전위(bacterial translocation)등 간의 대 사활동에 관한 연구들이 진행되어 왔다
16,17). 하지만 카드뮴으로 유도된 간 독성에 미치는 陳皮의 조절효과는 보고된 바 없다.
본 연구에서는 카드뮴으로 유도된 HepG2 세포에서 카드뮴 의 세포 독성에 따른 陳皮 ethanol 추출물 (CEE; ethanol extract of Citrus unshiu peel)의 세포 보호 효능을 확인하고 세포자멸사와 관련된 세포 내 분자기전을 살펴보고자 하였다.
Ⅱ. 재료 및 방법
1. 시약
Penicillin-streptomycin, fetal bovine serum (FBS), Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)은 Gibco BRL (Grand Island, NY, USA)에서 구입하였고, dimethylsulfoxide (DMSO), ethanol은 Junsei Chemical (Tokyo, Japan)에서 구입하였다. Anti-poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), anti-cleaved PARP, anti-cleaved caspase-3, anti-procaspase-3, anti-procaspase-9, anti-Bad, anti-B-cell lymphoma-2 (Bcl-2), c-Jun N-terminal kinase (JNK), extracellular signal-regulated kinase (Erk), p38, phosphorylated-Erk, phosphorylated- p38 (p-p38), phosphorylated-JNK antibody, horseradish peroxidase-conjugated goat anti-rabbit antibody, horseradish peroxidase-conjugated goat anti-mouse antibody는 Cell Signalling Technology (Beverly, MA, USA)에서 구입하였다. BCA protein assay kit는 Thermo
Fisher Scientific Inc (Rockford, IL, USA)에서 구입하였고
In situapoptosis detection kit는 Abcam (Cambridge, UK) 에서 구입하였다. Enhanced chemiluminescense detection kit는 Amersham Biosciences (Buckinghamshire, UK)에서 구입하였고, anti-β-actin, cadmium chloride (CdCl
2, 99.999%) 및 다른 일반 시약들은 Sigma (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다.
2. 陳皮 에탄올 추출물(CEE)의 제조
陳皮는 미륭생약㈜ (제조번호 KJP 140603-02)에서 제조 된 것을 구입하여 품질 검증을 실시한 후에 실험에 사용하였다.
건조 중량으로 300 g을 정량한 후, 100% ethanol 3 L에 침 지하여 24시간 동안 상온에 방치하면서 추출하였다. 추출액을 300 ㎜ filter paper (Toyo Roshi Kaisha Ltd, Tokyo, Japan) 로 여과하고 진공회전농축기(EYELA, Tokyo, Japan)를 통해 농축하였으며, 진공펌프(ULAC, G-50DA, Japan)를 이용하 여 동결건조하였다. 陳皮 에탄올 추출물(CEE)의 최종 수율은 17.58%였으며 DMSO에 녹여 실험에 이용하였다.
3. 세포 배양
HepG2 cell은 American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA)에서 구입하였으며 10% FBS, 100 units/㎖ penicillin이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 37℃
와 5% CO
2조건에서 배양하였다. 세포는 100 ㎜의 배양접시 에서 80% 이상의 confluence에 도달하도록 배양하여 실험에 이용하였다.
4. TUNEL assay
4 well chamber slide의 well당 1×10
5개의 농도로 세포를 배양하여 CEE를 24시간 전 처치 후, 카드뮴을 3시간 더 처치 하였다. PBS로 2회 washing한 후에 4% paraformaldehyde 로 고정하여
In situapoptosis detection kit (ab206386)를 이용하여 염색 후, light microscope (eclipse Ti-E, Nikon, Japan)로 관찰하였다.
5. MMP 측정
Mitochondrial membrane potential (MMP)의 변화는
Rh123을 이용하여 측정하였다. 처치가 완료된 세포에 Rh123
을 1:1000 비율로 30 분 간 염색하고, trypsin을 통해 수거된
세포를 1% FBS를 첨가한 PBS에 부유시켜 0.5 ㎖을 FACS
tube에 옮긴 후, Partec GmbH FACS Calibur flow cytometer
(Münster, Germany)를 이용하여 측정하였다. 한 샘플 당
20,000개의 세포를 분석하였다.
6. Total cell lysates의 준비
처치가 끝난 세포를 PBS로 2회 세척 후, radioimmunoprecipitation assay (RIPA) buffer (1%
NP-40, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS, 25 mM Tris-HCl pH 7.6, 150 mM NaCl)와 halt protease and phosphatase inhibitor cocktail (Thermo)을 100:1로 혼합 한 lysis buffer 를 첨가하여 4℃에서 30 분간 반응시킨 후, 원심분리 (15,000 × g, 4℃, 20 min)하여 단백질을 포함하 는 상층액을 전세포 추출액 (whole cell lysates)으로 취하였 다.
7. 단백질 농도 측정 및 Immunoblot analysis
단백질 농도는 BCA protein assay kit를 사용하여 정량하 였고, 정량한 단백질을 8-12%의 SDS-polyacrylamide gel 에서 전기영동하였다. Gel 상의 단백질을 nitrocellulose membrane으로 전이하고, 항체의 비특이적 결합을 억제하기 위해 5% skim milk로 2 시간 이상 반응하였다. 일차항체 및 이차항체를 반응시켜 준 다음 enhanced chemiluminescense detection kit를 사용하여 발광시켜준 후, Amersharm Imager 600 (GE Healthcare, Freiburg, Germany)을 이용하여 감 광하였다. 각 단백질의 발현량은 Image J (version 1.50i, National Institutes of Health)를 이용하여 densitometric analysis를 실시하였다.
8. 통계적 검정
모든 실험은 3회 이상 반복 실시하였으며 실험 결과는 mean
± S.D.로 나타내었다. 유의성 검정은 윈도우용 SPSS ver.
23 프로그램을 사용하여 one way analysis of variance (ANOVA) 분석을 실시하였다. 사후검정은 등분산 검정이 성립 할 경우 Tukey HSD test를 이용하였고, 등분산 가정이 성립 하지 않았을 경우 Tamhane T2 혹은 Dunnett T3 방법을 통해 유의성을 평가하였으며, p값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의하다고 판정하였다.
III. 실험결과
1. 카드뮴으로 유도된 세포자멸사에 대한 CEE의 보호 효과
간세포에서 카드뮴으로 유도된 세포자멸사에 대한 CEE의 보호 효과를 확인하기 위하여 TUNEL assay를 실시하였다.
24 시간의 CEE 처치 후, 카드뮴을 3 시간 처치한 결과, 대조 세포에 비해 진한 갈색의 핵 (화살표)을 가진 세포들을 관찰하 였다 (Fig. 1A). 이들은 세포자멸사에 의해 DNA 분절 (fragmentation)이 일어나 DNA를 포함하는 핵이 염색되어 갈색으로 나타난 것이다. 즉, 카드뮴이 DNA 분절을 통한 세 포자멸사를 유도한 것으로 설명할 수 있다. CEE 단독에 의해 서는 세포자멸사가 유도되지 않았고, 카드뮴에 의해 증가된 TUNEL positive 세포의 수는 100 ㎍/㎖의 CEE 전처치에 의해 통계적으로 유의하게 감소하였다 (Fig. 1B).
(A) (B)
Fig. 1. Effect of CEE on cadmium-induced apoptosis in HepG2 cells
(A) Apoptotic cells were detected by TUNEL assay. Arrows indicate TUNEL positive cells with dark brown color. (B) TUNEL-positive nuclei were counted, and the results were expressed as the fold value of control. (significant as compared to control, **p < 0.01; significant as compared to cadmium alone, ##p ＜ 0.01; C, control).
2. 카드뮴으로 감소된 mitochondria membrane potential (MMP)에 대한 CEE의 효과
카드뮴으로 유도된 미토콘드리아의 기능 장애에 대해 CEE 가 보호 효과가 있는지를 확인하기 위하여 HepG2 cell에서 24시간 동안 CEE (100 ㎍/㎖)를 전처치 후, 카드뮴을 3시간 처치하고 Rh123로 염색하여 flow cytometry로 mitochondria membrane potential (MMP)을 조사하였다. 대조세포에서는 Rh123에 형광염색 강도를 가지는 세포의 비율 (RN1 fraction) 이 3.59 ± 2.84%이었으며 카드뮴 단독 처치 시에는 32.74
± 9.28%로 RN1 fraction 비율이 통계적으로 유의하게 증가
하여 MMP 감소를 보였다. 그러나 이러한 RN1 fraction의 증가는 CEE의 전처치에 의하여 9.96 ± 4.54%로 유의하게 감소하였다.
CEE를 단독 처치한 세포에서는 4.28 ± 2.44%의 RN1 fraction을 나타내어, CEE 단독처치는 대조군과 비교하여 MMP에 변화를 주지 않음을 확인하였다 (Fig. 2). 이 결과를 통해 CEE는 카드뮴으로 유도된 MMP 감소에 대해 저해효과가 있음을 확인하였다.
Fig. 2. Effects of CEE on cadmium-induced mitochondrial dysfunction
MMP was measured with flow cytometry (upper) and assessed by the fraction with low Rh123 fluorescence intensity (lower). (significant as compared to control, **p < 0.01; significant as compared to cadmium alone, ##p ＜ 0.01; C, control).
3. CEE가 세포자멸사 관련 단백질의 발현에 미치는 영향
세포자멸사에 기여하는 단백질들의 발현이 CEE에 의해 영 향을 받는지 확인하기 위하여 HepG2 cell에 CEE (100 ㎍/
㎖) 를 24 시간 전 처치 후, 카드뮴을 3 시간 처치하여, Bad, Bcl-2, procaspase-9, procaspase-3, PARP의 단백질 발 현을 측정하였다. 그 결과, 카드뮴에 의해 증가된 Bad의 발현 이 CEE 전 처치에 의해 감소함을 확인하였다. 또한, Bcl-2, procaspase-9, procaspase-3, PARP는 카드뮴의 처치에
의해 감소하였으며, CEE 전 처치에 의해 이들 단백질들의 변 화가 대조세포 수준으로 회복되었다 (Fig. 3). 이상의 결과로 카드뮴에 의한 HepG2 cell의 세포사멸이 세포자멸사에 기인 함을 확인하였으며 CEE는 카드뮴에 의한 세포자멸사 관련 단 백질의 변화를 효과적으로 억제함으로써 세포 보호 효과를 나 타냄을 알 수 있었다.
(A)
(B)
Fig. 3. Effect of CEE on the expression of apoptosis-associated proteins
(A) HepG2 cells were pre-treated with CEE (100 ㎍/㎖) for 24 h and further incubated with cadmium (100 μM) for 3 h. The level of expression of the apoptosis marker protein was monitored by immunoblot analysis. β-actin was used as a loading control. (B) The relative intensity of protein bands was measured by scanning densitometry and quantified as a fold value of control. (significant as compared to control, **p < 0.01; significant as compared to cadmium alone, ##p ＜ 0.01; C, control).
4. CEE가 카드뮴으로 활성화된 MAPK의 단백질 발현에 미치는 영향
카드뮴으로 유도된 세포자멸사에 MAPK가 관여함이
12,13)알려져 있기 때문에 CEE가 MAPK의 발현에 어떤 영향을 미 치는지 조사하기 위하여 immunoblot 분석을 실시하였다.
HepG2 cell에 카드뮴 (100 μM)을 1 시간 처치한 결과, 카 드뮴에 의해 Erk, JNK, p38의 인산화가 증가되었다. 하지만 CEE (100 ㎍/㎖)를 24 시간 동안 전처치하였을 때, 카드뮴
에 의해 증가한 JNK와 p38의 인산화가 대조세포 수준으로 억제되었다 (Fig. 4). 카드뮴에 의해 증가한 Erk의 인산화는 CEE의 전처치에 의해 변화되지 않았다. 이상의 결과로, 카드 뮴으로 인한 세포사멸에는 MAPK 인산화가 증가하였으며, CEE는 ERK가 아닌 JNK와 p38의 인산화를 억제함을 확인 할 수 있었다.
(A)
(B)
Fig. 4. Effect of CEE on phosphorylation of MAPK.
(A) Expression of phosphorylated MAPKs was assayed by immunoblot analysis with specific antibodies. HepG2 cells were treated with CEE (100 ㎍/㎖) for 24 h and then exposed to cadmium for 1 h. β-actin protein expression was measured as internal control. (B) The relative intensity of protein bands was measured by scanning densitometry and quantified as a fold value of control. (significant as compared to control, **p < 0.01; significant as compared to cadmium alone, ##p ＜ 0.01; C, control).
Ⅳ. 고 찰
陳皮는 운향과(Rutaceae)에 속한 상록 소교목인 귤(
Citrus unshiuMarkovich)의 성숙한 과실의 껍질을 건조한 것으로 한의학에서는 이기약(理氣藥)으로서 이기화중(理氣和中), 조습 화담(燥濕化痰)하는 효능이 있으며 약리학 측면에서는 거담 및 감기 치료효과, 소염 및 항 알러지 효과, 위장관 평활근 이완 작용 등이 있다고 알려져 있다
1,2). 陳皮를 비롯한 감귤류의 과 피에는 vitamin류, limonoid류 외에 페놀성 화합물 농도가 높 아 flavonoid류가 다량 함유되어 있다. 陳皮의 주요 성분 중 하나인 hesperidin은 90% 이상이 과피의 흰 부위에 함유되어 있으며
18)항관절염
19), 항궤양
20), 항알러지
21), 항알츠하이머
22)등의 효능이 밝혀졌다.
카드뮴은 생활에 필요한 주요 자원이기도 하지만 부주의한 관리로 인체에 노출될 경우 건강에 치명적인 해를 줄 수 있는 중금속이다. 카드뮴이 뼈에 축적되어 나타나는 이타이이타이 병(itai-itai disease)이 잘 알려져 있으며 폐, 간, 신, 장, 뇌 혈관 및 골 등 다양한 장기에서 카드뮴에 대한 독성들도 보고
되었다
8-11). 본 연구에서는 인체 간 세포주인 HepG2에서 카
드뮴에 의한 세포자멸사를 살펴보았다.
세포자멸사는 흔히 내인성 경로(intrinsic apoptosis)와 외
인성 경로(extrinsic apoptosis)로 분류된다. 외인성 경로는
수용체 매개성으로 Fas와 같은 사멸 수용체(Death receptor)
에 리간드(ligand)가 결합함으로써 유도되고, 내인성 경로는
DNA 손상, 활성산소종, endoplasmic reticulum (ER) 스트 레스, 미토콘드리아 막투과성의 변이 등에 의해 발생하며 B cell CLL/lymphoma-2 (BCL-2) family 단백질들에 의해서 조절 된다
23). TUNEL assay는 DNA 손상이 일어나 이중 나선 구 조에 분열이 생기고 아미노말단이 노출된 세포의 핵을 염색시 킴으로써 DNA 분절(fragmentation)이 발생하였는지 여부를 확인하는 실험이다
24). 본 연구에서는 cadmium으로 인해 증 가된 TUNEL 양성 세포수가 CEE에 의해 통계적으로 유의하게 감소함을 확인하였다.
미토콘드리아는 산화적 인산화를 통하여 ATP를 생성하여 세 포의 항상성을 유지하는데 기여하는 세포 내 핵심 소기관으로 서 아데닌 뉴클레오티드(adenine nucleotide)의 고갈, Ca
2+이나 인산염의 증가, 산화적 스트레스 등으로 인해 미토콘드 리아의 막 투과성이 증가되면 세포자멸사가 유도된다
25-27). 본 연구에서는 Rh123 염색시약을 사용하여 MMP의 변화를 조사하였으며, 카드뮴으로 인해 감소된 MMP가 CEE에 의해 다시 증가함을 확인하였다.
일반적으로 미토콘드리아의 막 기능 장애로부터 유도된 세포 자멸사 촉진인자는 미토콘드리아에서 cytochrome-c의 유출을 유도하고 apoptosis marker인 BCL-2 family와 caspase 단백질의 발현을 조절하게 된다
28,29). BCL-2 family는 Bax, Bad, Bid와 같은 pro-apoptotic effector와 Bcl-XL, Bcl-2 와 같은 anti-apoptotic effector로 나뉜다. 본 연구에서는 카드뮴에 의해 Bad 단백질 발현은 감소하고 Bcl-2 단백질 발 현은 증가되었으나 CEE에 의해 이러한 단백질 발현의 변화가 회복됨을 확인할 수 있었다. 또한 미토콘드리아에서 유도된 cytochrome-c는 caspase-9, Apaf-1과 함께 apoptosome을 형성하여 caspase-8과 함께 procaspase-3를 caspase-3로 활성화하고 PARP 절단(cleavage)를 통해 세포자멸사를 유도
한다
30,31). Procaspase는 caspase의 전구체로 비활성 상태이
며 절단과정을 거쳐 활성형의 caspase가 됨으로 세포자멸사 신호가 발생할 때 procaspase의 발현은 감소하게 된다. 본 연구에서 Bcl-2, procaspase-9, procaspase-3, PARP의 단백질 발현은 카드뮴에 의해 감소하였으나 CEE에 의해 유의 하게 증가하였다.
카드뮴에 의해 유도된 세포자멸사에는 MAPK (Erk, p38, JNK)가 매개되는 것으로 보고되었으며, MAPK의 인산화는 하위 신호분자의 활성화를 통해 세포자멸사 신호를 핵으로 전
달한다
32,33). 본 연구에서는 immunoblot을 통해 cadmium이
MAPK의 인산화를 증가시킴을 확인하였으며, CEE는 JNK와 p38의 인산화를 선택적으로 억제하였다. 따라서, CEE는 HepG2 cell에서 JNK와 p38의 인산화를 억제함으로써 cadmium에 의한 세포자멸사를 억제한다고 판단되며, MAPK inhibitors를 이용한 후속 연구가 필요할 것으로 생각된다.
이상의 결과를 요약하여 볼 때, 陳皮 에탄올 추출물(CEE)은 카드뮴으로 유도된 간세포에서 DNA의 분절과 미토콘드리아 막투과성의 변이로 인한 세포자멸사를 억제하여 간세포보호 효과를 나타내었다. 이는 CEE가 pro-apoptotic effector인 Bad 단백질의 발현을 억제하고 anti-apoptotic effector인 Bcl-2 단백질의 발현을 증가시키고 procaspase-3, procaspase-9, PARP의 cleavage를 억제함으로써 나타나는 결과로 판단되며, JNK와 p38을 통한 MAPK의 인산화 억제도
카드뮴으로 유도된 세포자멸사 억제에 관여하는 것으로 나타 났다.
Ⅴ. 결 론
본 연구에서는 카드뮴으로 유도된 HepG2 세포자멸사에 대 하여 陳皮 에탄올 추출물(CEE)이 나타내는 조절효과를 조사 하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
1. 카드뮴은 DNA 손상에 의한 세포자멸사를 유발하였으나 CEE에 의해 세포자멸사가 유의하게 억제되었다.
2. 카드뮴은 미토콘드리아 막투과성을 증가시켰으나 CEE는 유의하게 막투과성 억제효과를 나타내었다.
3. CEE는 카드뮴에 의해 감소된 Bcl-2, procaspase(3과 9), PARP의 발현은 증가시켰고 카드뮴에 의해 증가된 Bad 단백질의 발현은 감소시켰다.
4. 카드뮴에 의해 Erk, JNK, p38 MAPK의 인산화가 확인 되었으나 CEE에 의해 JNK와 p38의 인산화가 억제되 었다.
이러한 결과들은 카드뮴을 처리한 간세포에서 CEE가 procaspase, PARP 및 pro-apoptotic, anti-apoptotic 성향 의 BCL-2 단백질들(Bad, Bcl-2)의 발현 조절과 JNK와 p38의 인산화 억제를 통해 내인성 세포자멸사(intrinsic apoptosis)를 억제함을 나타낸다.
감사의 글
이 논문은 2020년도 정부(과학기술정보통신부)의 재원으로 한국연구재단의 지원을 받아 수행된 연구임(No. 2018R1A5A 2025272).
References
