Autoanalyzer I Channel Evaluation in I

임앙병리검마파악외7\ 1 : 머132뀐 깨13오， 48-52 , 2000.

자동혈구계산기 SE-9000의 I M! channel과

HPC mode의 유용성 평 가

울산의대 서울중앙병원 임상병리과 임영근 · 김천희 · 강윤흐1. 박찬정 · 지현숙

I M! Channel and HPC Mode Evaluation in CBC Autoanalyzer SE-9000

L im, Young Keun. , Kim, α1un Hee. , Kang , Yun Hee. , Park, αlall Jeong. , α피， Hyun Sook De [Xl rtment of Clinical Pathology, αUege of Medicine,

Ulsαn University and As an Medical Centeκ

Seoul, Koreα

Background SE-9000(Sysmex , Japan) automated cell counter provides an estimate of immature cells referred to as heamopoietic progenitor cells (HPC). Th e purpose of 단lÏs study was the evaluation of the Heamatology Ana lyzer , SE-9000 I M! (lmmature cell information) channel , HPC mode.

Method 140 peripheral blood stem cell collections were achieved from the stem cell collection room. Th e linearity and precision of HPC and 1 M! count and the correlation of the HPC count and CD 34+ stem cell count in peripheral blood stem cell collections.

Result : Th e linearities of 1 M! and HPC for SE-9어o was r=0.9878 and r=0.9592 each.

π1e cetì잠cients of vareations for 1 M! and HPC of SE-9000 were : for HPC (l ow) , 114.2%;

for HPC(medium) , 37.9%; for HPC (lri gh) , 17.9%; for IMI (l ow) , 56.5%; for 1 M! (medium) , 2 1. 9%; for 1 M! (high) , 3 1. 4% respedtively. 1 M! and HPC count showed the positive correlation with CD 34+ stem cell count with the correlation coefficients of 0.6633.

Conclusion π1e SE-9α)() enables the easy and rapid determination of the IMI and HPC coun t. the 1 M! and HPC count shows good correlation with CD 34+ stema cell count by ISHAGE guideline using Fl owcytometry. Wh ereas CD 34+ stem cell count is expensive and examined for long time. Th e 1 M! and HPC count of SE-9α)() is clinically useful for monitoring the peripheral blood stem cell coun t.

Key Words: HPC , 1 M! channel , CD 34+ stem cell , Peripheral blood stem cell

1 . 서

^룰

‘-

말초혈액 조혈모세포 채집 시기를 결정하는 예측인자로 채집전 말초혈액의 백혈구수， 단핵 구수， CD34+ stem cell수 측정이 이용되고 있으 며 (Bensinger, 1995. Hass, 1994), 이 중 CD34+ stem cell수 측정을 보편적으로 사용하고 있다. 그러 나， 이 방법은 고가의 유세포 분석기와 단클론항 체와 숙련된 인원이 필요하며， 4시간 이상의 시 간이 소요된다(Mohle， 1996. 김， 1998. Remes, 1997). 최근 Sysmex사에서는 자동혈구계산기 SE- 9ω0에 IMI(lmmature cell Infomation) channel 과 HPC (Hematopoietic Progenitor Cell) mode를 신 설 하여 조혈모세포를 측정하는 방볍을 개발 소개 하였다(Yamane， 1995). 이 방볍은 특별한 장비와 시약이 필요 없으므로 비용 감소와 시간 단축을 할 수 있다고 하여， 본 검사실에서는 말초혈액 조혈모세포의 적절한 채집을 위한 예측인자로서 IMI chnnel과 HPC mode를 이용할 수 있는지를 평 가하였다(김， 1998).

II. 재료 및 방 법

1 . 검 체

서울중앙병원 조혈모세포실에서 채칩된 140개 의 딸초혈액 조혈모세포 검체는 채집 즉시 EDTA tube와 heparin tube에 담아 충분히 mix하여 응고 를 방지하고， 혈액검사실로 즉시 우송하여 IMI와 HPC 검사와 CBC 검사， CD34+ stem cell을 시행 하였다. 또한 정상인의 말초혈액 조혈모세포 검 사는 혈액검사실에 의뢰된 EDTA 혈액을 사용하

였다.

2. IMI 와 HPC 측정법

자동혈구 계산기 SE-cxxx)의 검사 mode를 ‘ CBC + Diff ’ 에 서 HPC mode로 전환하고， Back-ground

chec바19을 실시 하여， IMI channel의 상태를 확인 한 후에 mannual로 검사를 실시하였다.

3. CD34+ stem cell 수 측정법 (ISHAGE

권고안， 1996)

의뢰된 검제를 일정량의 PBS로 희석한 후 CD45 FITCj C34 PE monoclonal antibody를 이 용

하여 two- color 직접면역형광염색을 한 후에 적

혈구를 용혈과 고정을 하고， 유세포 분석기를 이 용하여 분석하였다.

4 통 계

측정 된 결과는 Microsoft Excel를 통하여 IMI 와 HPC의 직선성， 정밀도와 정상치를 분석하였 으며， 유세포 분석기를 이용하여 겸사한 CD34+

stem cell 과의 상관성을 분석하였다.

III. 켜

_E를

1 . 직선성(Li nea rity)

과

말초혈액 조혈모세포 채집액 12 검체를 원액，

2 배， 4 배， 8 배， 16 배， 32 배 연속배수로 희석하여 두 번 검사한 결과， 1M!의 상관계수(Pearson’s correlation coefficient) 값 은 평 균 0.9878 , HPC 상관

계수값 평균은 0.9592로 나타났다(Fig. 1).

2. 정밀도 (Precision)

정밀도 검증을 위해 HPC 수치를 기준으로 0

x 10안L미만을 low( 정상 건진검체)， ⁰ x 10

⁶

/1이 상 5 x 10안L미만을 medium( 말초혈액 조혈모세 포 채집의 기준으로 설정)， 5 x 10

⁶

/L이상은

high(조혈모세포 이식한 환자의 겸제)로 분류하

여 각각 20번씩 검사하여 통계처리 하였다. HPC

는 low에 서 평 균 0.7 x 10 ⁶ /L , 표준편차 0.8 x

IMI linearity , R=O.9998

20 40 60 80 100

Dilution of harvest product

100000 ' 80000 r

60000 I 40000 : 20000

'c

o

0

」강。

• x -E-

100

HPC Ii neatiry ,

R=예.9976

20 40 00 00

Di lution of harvest product

뼈

%

때 때

」

~P(

〕←×Uα工

Fig. 1. Linearity of 1 M! and HPC in SE-9αu

Table 1. 안.ecision of HPC 뻐d 1 M! in SE-9α)() (N=20)

IMI x 106fL Medium HPC x

1。이L

Medium Hi gh

708 .5 Hi gh

Iρw

44.3

Lo w N=20

36.7 2 .3

0.7 6.1 Mean

222.8 31.4 8.0

21.9 1. 3

56.5 7.7

17 .4 2.3

37.9 0.8

114 .2 SD

CV

Flowcytometry로 검사한 CD34+ stem cell과의 비교를 통하여， 말초혈액에서의 조혈모세포채집 결정에 실제로 이용할 수 있는 지를 보았다. 말 초혈액에서 조혈모세포를 분리시킨 후 채집하여 14검체를 CD34+ stem cell과 비교한 결과 상관계 수가 0.6633으로 나타났다 (Fig. 2).

4. CD34 + stem cell 과의 상관계수 10 ⁶ jL , 변 이 계 수 114.2%로 medium에 서 는

표준편차， 변이계수 각각의 결과 값이 6.1 10 ⁶ jL, 2.3 x 10 ⁶ jL, 37.9% 로， high에 서 는 각각 44 .3 x 10 ⁶ /L , 7.7 x 10 ⁶ /L , 17.4%로 나타났다.

1M!는 평균， 표준편차， 변이계수의 결과 값이 low에서는 각각 2 .3 x 10안L， 1. 3 X 10 ⁶ jL, 56 .5%

로， medium에 서 는 각각 36.7 ^X 10 ⁶ jL, 8.0 10안L， 21.9%로， 피gh에 서 는 708.5 X 10 ⁶ /L , 222.8

X 10 ⁶ jL, 3 1.4%로 나타났다 (Table 1).

평균，

×

×

력를

-== ‘-

N. 고찰 및

혈액종양환자와 골수에 전이가 있는 고형종양 환자는 화학 요법과 방사선 치료를 하게 되는데，

고용량 화학요법의 경우 정상 조혈모세포(백혈 구 포함)와 암세포를 모두 파괴시키므로 백혈구 파괴로 인한 감염의 위험이 있다. 감염을 예방하 기 위해서 조혈모세포의 이식이 필요하다. 조혈 모세포의 양을 늘이기 위하여 인위적으로 약제 를 사용하여 말초혈액 조혈모세포를 증식시키는 3. 정상 참고치

건강 진단센터의 검체 100건을 검사하여 낮은 값에서 높은 값으로 나열하여 1 번째에서 95 번째 까지를 정상 참고치 구간으로 하였다. 참고치의 범위는 1M!가 6.4:::1:::0.01 X 10

⁶

/L이고， 최저 값은

o ^X 10

⁶

jL로， 최 고 값은 16 ^X 10안L로 나타났으 며， HPC는 0.4土 0.8 ^X 10

⁶

/L이고， 최저 값은 0

X 10

⁶

jL로， 퇴 고 값은 2 X 10

⁶

jL로 나타났다.

•

300 H P C V S C 0 3 4

,

R = 0 .6 6 3 3

200 250

•

--

^~

^-- -

100 150

HPC x10

⁶

/L

(ax~φ 。

•X)

띄;“。 +@여디Q

Fig. 2. Correlation of HPC 때d CD34+ stem cell (N=140)

를 실시하였다. 직선성 검증을 위해서는 말초혈 액 조혈모세포 채집액 12검체를 원액， 2 배， 4 배，

8 배， 16배， 32 배 연속배수 희석하여 검사를 실시 하였고， 그 결과 IMI와 HPC의 각각 상관계수가 평균이 0.9878 과 0.9592로 나타났으며 (Fig. 1) , 12

검 체 의 범 위 가 IMI는 0.9698 - 0.9998로 HPC는

0.8934 - 0.9976로 우수한 결과를 나타내었다.

정밀도 검증을 위해서는 HPC 수지를 기준으 로 하여 o x 10

⁶

/L미 만은 low , 0 x 10

⁶

/L이 상 5

x 10

⁶

/L미만은 medium , 5 x 10

⁶

/L이상은 high로 구분하여， 각각에 해당되는 검체를 20회 반복 검 사하여 평균， 표준편차， 변이계수등의 수치를 구 하였는데 (Table 1) , 변이 계수가 높게 나타난 것은 말초혈액 조혈모세포의 수치 자체가 낮기 때분

인 것으로 생각된다. 5 x 10

⁶

/L을 백혈구수와 같 은 단위 로 환산한다면， 0.005 x 10

³

/uL가 되 고，

이것은 1 uL당 5 개의 세포수를 나타내는 것으로 수치가 얼마나 낮은 가를 알 수 있다.

정상 참고치의 검증을 위해서 본원에 내원한 건강진단 수검자의 CBC검체 중에 Diff flag 에서

‘Blast?’와 ’1m. 망an띠ocyte? ’의 소견을 보이는 검 체는 제외하고， 검사를 실시하여， 그 결과를 낮 은 값에서 높은 값으로 나열하여， 정상인에서는 매C cell 이 나오지 않는다는 가정하에 최저값에 서 95% 까지를 정상 참고치로 하여 IMI는 6 .4 ::t 0.01 x 10 ⁶ / L으로 매C는 0 ^.4::t 0.8 x 10

⁶

/L로 설 데， 충분한 양의 조혈모세포를 채집할 수 있는

기준으로 본원에서는 백혈구수 5 x 10

⁶

/L로 설 정 하고 있으며 (Mougi , 1997) , 말초혈 액 조혈모세 포 채집 시기의 예측인자로서 CD34+ stem cell의 측정이 가장 보편적으로 알려져 있다. 그러나，

이 방법은 고가의 장비와 시약， 숙련된 인원이 필요하고， 결과 보고까지의 시간이 4시간 이상 소요된다. 또한 아주 작은 수의 세포를 측정하논 것이기 때문에 검사실 간의 변이계수가 높다고 보고되고 있다(김， 1998).

최근에 Sysmex사의 자동혈구 계산기 SE-9α)() 은 IMI ch때nel과 HPC mode를 이용하여 조혈모 세포를 측정하는 방법을 개발하였다. 그 원리는 성숙백혈구와 미성숙세포의 지칠 함량의 차이를 이용한 것이다. 아미노산을 검체에 가하면， 지질 이 소량 함유되어 있는 미성숙 세포는 지질이 많은 성숙 백혈구보다 쉽게 아미노산이 부착되 어， 계면활성제를 가하게 되었을 때 아미노산이 적은 성숙 백혈구는 쉽게 파괴가 되고， 미성숙 세포는 파괴가 어렵게 된다.

이렇게 성숙 백혈구를 모두 파괴한 후에 R (radio frequency)!DC(이rect current) detection method 로 미 성 숙 세 포를 측정 하는 것 이 다(Ishili， 1997).

이를 이용하여 IMI와 HPC의 측정이 가능하게

되었고， 본원에서는 말초혈액 조혈모세포의 측

정에 이용하기 위하여 위와 같은 방법으로 검사

정하였다.

CD45 , CD34 항체를 이용하여 유세포 분석기

로 검사한 CD34( +) stem cell과 자동혈구 계산기 SE-9000과의 상관성 검 증을 위 해 서 140겸 제 를 검사하였으며， 그 결과 상관계수가 0.6633으로 나타났으며 (Fig. 2), 이 결과는 Mougi 등이 보고 한 0.66과(Movgi， 1997) 김문정 등이 보고한 0.74 (김， 1998)와 유사한 결과를 보였다.

이로써 자동혈구 계산기인 SE-9<XX)의 IMI c뼈­

nnel과 HPC mode를 말초혈액 조혈모세포를 채 집하는 시기를 결정하는 예측인자로 사용한다면，

CD34+ stem cell 검사에 비하여， 비용을 줄이고，

숙련된 인원이 필요치 않으며， 보고시간도 10분 이 내 로 단축할 수 있 게 되 어 CD34+stem cell 측 정의 보조적 방법으로 이용될 뿐만 아니라 유세 포 분석기를 보유하지 않은 기관에서도 유용하 게 이용할 수 있을 것으로 생각된다.

삼고문흰

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