Journal of Sasang Constitutional Medicine

사상의학회지 J of Co^띠t. Med Vol. 10 뼈 2.1998

太陽人 , 太陰人의 處方과 藥材가 體防細廳

(3T3-Ll) 의

t

金樹凡. . _高炳熙^.

.

The effects of proliferation and differentiation on

adipocyte 3T3-Ll by prescriptions and herbs of Taeyang-In

and Taeum-In

Kim Su-beom . ^{Kho Byung-hee} . ^{Song Il-h. 까mg}

In order to know the effect of proliferation 때d differentiation on edipocyte 3T3-LI by

presc 디ptions and herbs, Taeyangin( 太陽A) ^’s Okapijangcheok-tang( 五加皮뾰흉傷) . Mihudeungsikjang-

tang( 爛狼蘭直陽擾) . Acanthopanacis Cortex( 표加皮 ) . Phragmitis 에11Z 뼈a( 盧根:) and Taeumin( 太陰

A) ^’s Taeumjowi-tang( 太陰調몹擾). Ch ∞ngslmyo 매a-tang( 淸,c, 鐘子擾) . Cheongpae 잃gan-tang( 淸R힘얹흉

8꾸擾) . Galkeunbupyong-tang( 홉根浮鼎擾). ^{Coicis Semen( 意월仁:)} . ^{Rhei Und 띠ati Rhizoma( 大劃}

Mori Cortex( 훌白皮) . 미mi Cortex( 懶R白皮). H이otrichia Vermiculus( 轉멤 . _{Kalo 뼈naxii Cortex( 海}

쩨혀皮) . Ephedrae Herba( 麻黃) . Imperatae Rhiz αna( 白쫓根), were used and had some effects.

I. 까le proliferation effect of edipocyte

I) At the Taeyangin( 太陽A) ^’s prescriptions and herbs, Oka 미 angch ∞k-tang( 五加皮밤홉屬) .

Mihudeungsi 세 ang-tang( 爛狼購植陽擾) . Acanthopanacis Cortex( 五加皮) have a control effect at

the boiling water-extract and ethyl al ∞hol-e 자m다. Phragmitis Rhizoma( 盧根:) have a control

effect at the ethyl alcohol-extract.

2) At the Taeyangin( 太陰A)' ^’s presc 꺼ptions and herbs, Taeumjowi-tang( 太陰調몹場) .

Cheongsimyo 매 a-tang( 淸,c, 運子滾) . Cheongpaesagan-t 때g( 淸師鴻府擾) . Gall ^‘eunbupyong-tang( 훌

. .

慶熙大學校 함짧과大챙 四象뽑장웹

- 사상의학회지 제 10 권 저12호 1998 -

根浮鼎浚:) have a ∞ntrol effect at the b이ling water 경짜act and ethyl 허∞hol-e 뼈'act. Coicis

Semen( 慧화仁:) . Rhei Und ^띠ati 빠zorn 어大劃 . _{Morl Cortex(} 훌白皮) . ^{미miCo πex( 懶良白皮:)} .

Kalopanaxii Cortex( 海빼皮). Eph 뼈me Herba( 麻劃 of the boiling water-e 뼈없., Holotrichia

Vermiculus( 總꽤) . Kalopanaxii Cortex( 海炯皮) of ethyl alcohol-extract have a control effect on

edi 따없. 에1ei Und 띠ati 뻐zoma( 大黃) . 미때 Cortex( 懶良白皮⁾ . Eph 어me Her 뼈麻黃) of

high-density have a cyto-toxicity.

2. 까le differentiation effect of edipo 양te

I) At the Taeyangin( 太陽 A:)' ^’s prescriptions and herbs during the natural di 많rentiation, Phragmitis

에1izoma( 斷良) of the boiling w 없er-e 찌'aCt, Okap 빼gchek-tang( 五加皮뾰홉優:) . Acanthopanacis

Cortex( 五加皮) of the ethyl 외∞h이f 찌aα have a cyto-toxicity on the first-di 많rentiation.

2) At the Taeumin( 太陰A)'s prescriptions and herbs during the natural di 없rentiation, Ulmi Cortex

( 敵良白皮:). K ^외opanaxii Cortex( 海빼皮:) of the boiling water-extract have a cyto-toxicity on the

first-differentiation. Ch ∞ngsimyonja-tang( 淸^lei 鐘子擾). Eph 벼me Herba( 麻劃 of e뻐yl

alcohol 경xtract have a control effect on the redifferentiation.

3) At the Taeyangin( 太陽 A:) ^’s prescriptions and herbs on the first-differentiation during the induced

differentiation, Acanthopanacis Cortex( 五加皮) of ethyl alcohol-extract has a control effi 없.

Okapijangchek-tang( 五加皮뾰훔編:) . Acanthopanacis Cortex( 五加皮) . ^Phm _{맑litis 에lizoma(JJ 훌根}⁾

of the boiling water-extract have a cyto-toxicity.

4) At the Taeumin( 太陰A) ^’s prescriptions and herbs on the first-differentiation during the induced

differentiation, Coicis Semen( 慧화仁) . Ephedme Herba( 麻黃:) . ^{1m 야ratae Rhizoma( 白좋根) of the}

boiling water-extract and Eph 잉me Herba(* 劃 of the ethyl alcohol-extract have a control effect.

Kalopanaxii Cortex( 海網皮) of the boiling water-extract and the 때lyl alcohol-extract has a

Cyto-tOXIClty .

Considering this result, the Taeyangin( 太陽 A) . ^{Taeumin( 太陰A) ’s presc 꺼ptions and herbs have a}

∞nσ01 effect on edipocytes d삐ng the proliferation. Acanthopanacis Cortex( 五加皮), Coicis Semen( 慧

갔t) . 태hedrae Herb 삐麻횟 . _{Imperatae 에lIzom 바 白좋根} ) have a control effi 없 on edipocytes d삐ng the induced differentiation.

In the future, for treating a obesity need a vivo assay and ho 야 this study to help to know the

- 太陽A. ^{太陰A의 훌方과 훌 *;t 가}8듭防細뼈 (3T3-L 1 )의 $ 햄 分{

다聊IJ 어 101 치는 影훌 -

mechanisms of obesity.

첸〉 훌훌

食生活이 l 피t 되고 生活이 變化되며 社햄가 西歐it 가 됩으로써 우리나라에서도 D 滿이 하나의 훌病으로 자 리를 잡았다. 많은 사랍이 D 滿을 治續하기 위하여 勞力을 하며 最近에는 DE 滿으로 인하여 高血壓

.

.

l派6핏化 , 冠狀훨bl派훌뿔‘

.

.

.

의 여러 뾰狀이 나타난다는 보고가 있다.

H 휩jJI 은 ”體內의 R)]jj 組織量이 펴剩으로 햄加된 狀態”라고 定意하고 大體的으로 DE 滿이라 함은 標準體重 의 20% 以土을 超過한 狀態이거나 體內 順)]jj 이 男子에서는 體重의 25% 女子에서는 體重의 30% 以1: 인 境遇 이다.1* 因에 따라서 遺傳的 뻐滿 , 內分泌的 뻐滿 , 視똥下部性 HE 滿. 交感神經系의 異常에 의한 DE 滿 , 運動不 足에 의한 H 滿 , 없;食에 의한 DE 滿

.

泡의 樣때에 따라 ^R듭/]jj 細뼈의 크기가 增hn 하는 DE 大型

.

가지가 같이 일어나는 混合型으로 펌分하였다 .

四象醫쩔에서는 〔東醫홉l止保元 四端論〕의 ..뼈以呼/If 以吸 /lfR 뻐者 呼吸氣被之門戶也 牌以納 I 뽑以出 I

뽑牌者 出納水짧之府庫也” 라고 하여 太陽A과 太陰A의 HE 滿은 氣被之氣의 대사과정에서 나오는 病證이라 할 수 있 다. 찌醫함I!t 保元의 太陽A. 太陰A 얘^l젊論에서 HE 滿에 대해 언급된 것은 없으나 最近의 食生活 , 에^U'.햄짧境의 變化 및 i많젤l퍼인 요인으로 %滿이 올 수 있다고 보아 太陽A과 太陰A의 處 jj 과 藥材가 HE 滿에 미치는 영향 을 검토하였다 .

실험에 사용할 前JJ)]}jWl 뼈 (preadipocyte) 인 3T3-Ll 細뼈는 3T3 細뼈로부터 由來된 細| 뼈柱로써 그 生物 셜I 꺼 特tl 이 잘 밝혀져 있고. 적절한 조건아래에서 培養하면 ⁿ읍)]}j 細!泡(adipocyte cell) 로 分化하는 性質을 갖 고 있어 )]ij 爛^|_{뼈의 代짧過程은 물론} H읍防홉積과 順防細뼈의 分f갑웰程을 없究하는데 널리 使用되고 있다.

3T3-Ll 細뼈를 利재하여 1풋驗한 結果 retinol. retinoic acid. vitamin D group. vitamin E.

nicotinamide. phorbol ester. dihydroteleocidin B, lithium 등은 前暗助細뼈의 H 防細뼈로의 分化를 柳

制하지만. 이와는 달리 ascorbate, hemin, cadmium, corticosterone. cAMP 等은 順防細뼈로의 分化를 많進시킨다는 사실이 밝혀져 R/]jj 細뼈의 分↑다웰程을仔細하게 理解할 수 있는 水準까지 되었다.

'* (if _{究에서는 太| 陽A 處方과 藥材의} %홉狼嚴mlm 陽. ^{li:hn 皮빠휴陽 五加皮 處根과 太陰}A 處方과 藥材의 太陰뼈띔잃 消心述子陽 淸n힘훌훌/If 쩌 옳根浮홉陽 촬B 仁 大黃 혔白皮 輪根白皮 짧廳 海炯皮 風黃 . ^I견

c}t; 根을 뻐出하여 前^O듭)]}j 빼^JJ셈인 3T3-Ll 을 이용하여 增쩌흉效果와딩然分化! 양의 分化效果와 再分化效果 . ^{ii종짝훌分}

化I 바의 分化效果와 再分化效果에 관해 寶驗한 바 다음과 같은 結論을 얻었다 . 1. 뼈)]}j WlH 힘의 #휴꺼홉效없

1) 太陽A 處方의 五加皮 Jtl:f ￥陽. ^{觸狼顧.ft\'iJj 융f}易과 樂材의 五 hI! 皮에서는 전탕추출과 에탄올추출 모두에서.

- 사상의학회지 저110 권 저12 호 1998 -

i표根은 에탄올추출에서 細|泡t 엄짧의 때힘l效果가 있었다.

2) 太陰A 處方의 淸^R뻐爾Jln 易 흉根浮:쭉‘f& . 淸心造子陽 太陰調띔꿇에서 細^O힘增M의 柳힘j 效果가 있었 다. 樂材의 전탕추출은 慧화仁 大黃 蔡白皮 倫根白皮 圖黃^, .

悔힘皮 , 에탄올추출은 짧廳 海빼

JSI. 에서 柳制效果가 있었다. 大黃 倫根白皮 . 澈에서는 빼뼈毒性의 가능성이 유추되었다. 2. 뼈/w 細II힘의 分化썼果

1) 뎌然分떠받에 太 셨A 處方과 樂材의 경우. 初빼分fl:, 의 전탕추출은 앞根. 에탄을추출은 Hnn 皮바휴 없 . ^{linn 皮에서 빼|뼈毒}t'l 의 작용이 나타났다 .

2) 더然分化l 바에 太陰/^＼ 處方과 樂材의 경우. 初뼈分化의 전당추출은 倫根白皮 海해皮에서 빼^IJ!iJ 毒t'l

의 작용이 나타났다 . 파分化의 에탄올추출은 淸心述子陽 따黃에서 細| 뼈分化의 때없j 效果가 있었다.

3) 줍導分化l 냄에 太陽A 處方과 藥材의 初期分化의 경우. 五加皮의 에탄올추출은 細| 뼈分化의 柳 WI 效果 가 있었다. 五加皮밤홉陽 五加皮 짧根의 전당추출은 細뼈毒性의 작용이 유추되었다.

4) a 導分↑냉춤에 太陰A 處方과 藥材의 初期分化의 경우. ^{意J;(t:. 腦黃} 白쫓根의 전탕추출과 圖黃의 에탄올추출에서 細 n 힘分化의 柳制效果가 나타났다 . W:jf 헤^JSl 의 전탕추출과 에탄올추출에서는 細|

뼈뚫性 의 작용이 나타났다.

이상의 결과로 볼 때에 太陽A. ^太陰A 處方과 藥材는 증식과정에서 nE 滿이 완전하게 형성되기 전인 ^JJ읍| 야 빼|멤의 !f↑뻐섰없에서 유의하게 細II힘t 샘앤의 쩌^JWI 效果가 나타났으며 비만치료제로써의 활용가치가 있다고 사 려된다.

JJ읍IW 빼| 뼈의 分f^갑꾀f 에서 生體웠境의 조건과 비슷하게 ,홉훨分化된 조건에서는 liJJn &:^’ . _R

파훨 갚파仁 . ^I낀

것;

根에서 유의한 빼뼈分化의 柳制效果가 있었다.

앞으로 뻐滿의 기전을 밝히기 위하여 떼껴찌f앓을 통한 확인이 펼요하며, 또한 본 논문이 nE 滿이 억제되는 기전을 유추하는데 도움이 되기를 바란다.

I . 績 ^를률빼^&

食生活이 向上되고 生活이 變f 되며 社會가 西歐

f 가 됨으로써 우리나라에서도 R입힘이 하나의 흉病 으로 자리를 잡았다 . ^{많은 사람이 nE滿을 治標하기}

위하여 勞力을 하며 最近에는 n 짧으로 인하여 高血 壓, 혐탱病, 動!I/& 硬ft., 冠狀動^1!l1k 홍뽕, 腦직E 中, 退行性 關節씻, 痛1^{회. n뺀} 휴 , ^JI읍防JIf, ij주硬變효, 뽑職病,!1[

娘中^=").', 不Mfm: 等

2,5,10)

의 여러 在狀이 나타난다는 보 고가있다 .

nE滿흙은 “體內의^R읍防組織量이 過剩으로 增加된 狀態” 라고 定현^{}고 大醒낀으로 nE}滿이 라 함은 標i훌 體重의 20% 以t 을 超過한 狀態2.5.12.19)

이거나 體內 服助아 男子에서는 體重의 25%. 女子에서는 體重의 30% 以t 인 境遇이다

36)

原因에 따라서 遺傳的 nE 滿

.

異常에 의한 ^R맘폐. 運勳^;足에 의 한 ^R爛,M\ 食에 의 한 R腦^, 쫓物에 의한 8腦. ^社飯낌. ^經j햄的. ^心理的

要素에 의한 R핍隔 等으로 區分하였으며 4.30)

’ R읍'Jljj 細

R힘의 樣相에 따라 ^H읍防細뼈의 크기가 勳 n 하는 nE 大

- 太陽A, 太陰A 의 盧方과 쫓 *;f 가8듭防細뼈 (3T3-L 1) 의 it 짧 分化tIn 뿜IJ에 미치는 影훌 -

型. ^{ijEim 細n힘의 數가 增加하는 增빠훨 j’} 두 가지가 같

이 일어나는 j 昆合型으로 區分하였다5,30>

四象醫學에서는 〔東醫홉世保元 며端論)12,13.19) 의

”빠以呼 맑以吸 맑뼈者 呼P及氣浪之門戶也 牌以納 賢 以出 뽑牌者 出納水設之府庫也” 라고 하여 太陽A과 太陰A의 ijI¥ 햄은 氣뻐之氣의 대사과정에서 나오는 病證이라 할 수 있다. 東醫꿇世保元의 太陽A. 太陰

A 病證論에서 ijE 滿에 대해 언급된 것은 없으나 最 近의 食生活. ⁾址會環境의 變化 및 體質的인 요인으 로 ijE 滿이 올 수 있다고 보아 太陽A과 太陰A의 處 方과 藥材가 R믿階에 미치는 영향을 검토하고자 한다 .

실험에 사용할 前81'1 助細뼈 (preadipocyte) 인

3T3- Ll 細뼈는 3T3 細뼈로부터 由來된 細뼈柱로써 그 生物學的 特性이 잘 밝혀져 있고. ^{적절한 조건아}

래에서 t 홈養하면 9읍防細^R힘(adipocyte cel!) 로 分化 하는 性質을 갖고 있어 없防細뼈의 代謝過程은 물론

RI'1JJjj 홉稍과 9읍防細9힘의 分{

갑뭘$웅을 E^{뮤究하는데 널리}

使用되고 있다 53-56)

3T3-Ll 쐐l뼈를 利用히여 實險

한 結果 retinol64) ^’ retinoic acid64). vitamin D

64 65) . . _E⁶⁵⁾ .. .

66)group'. ^{vitamin. nlcotlnaml} d^e .

67)phorbol ester ^’ dihydroteleocidin B68).

lithium 등은 前服防細뼈의 ^R읍防細^R힘로의 分化를 쉐1

制하지만 63)

’ 이와는 달리

69) .

69)ascorbate. hemin .

. 70>. 7!)

7!)cadmIUm.corticosterone.cAMP等은 順

助細뼈로의 分化를 뾰進시킨다는 사실이 밝혀져 81'1

防쩨뼈의 分{ 갑짧뭉을 f휴에하게 理解.할 수 있는 水準 까지 되었다잃-63)

木 팝俊에서는 太陽AI 꿇方의 觸쨌願植JWj 場 , 五加 皮li 홉漫과 藥M^{의 五 1m 皮 , 盧根을 선택하고}. ^太陰A

處方의 太l쏠調뽑傷

.

뽕場과 藥材의 慧m: 仁. 大흉. 훌白皮. ^{樹R8 皮}

.

뺀 . ^{海빼皮.ti 黃}.8 ^{흥;根을 선택하여 前}8읍助細뼈인

3T3- Ll 을 이용뼈 增願爛와 分{않爛에 관해 實

驗한 바 有뭘:한 結果를 얻었기에 報告하는 바이다

n.

1. 를앓材料

1) 檢波詢뽑j

본 實驗에 사용한 韓짧#는 原塵地를 확인효얘 구 입하고 엄선하여 엄격히 관리 보존하여 사용하였다.

處方은 〔東醫홉世保元〕에준하였고 그 내용은 다음 과같다 .

0) 太陽A 處方

@ 五^1Ju 皮:tI: 홉i융^9,12,13)

.hJm& Acantlx 뼈nacis Cortex 어빼απ^lIt sessi/iforum se.낌-mz) 12.0g

t1Ji. a없1 떼'des Fru:tus (OuenareJes Sinms 8.0g

松@

↑i 냉mun 뻐 뼈j Tumrisati ( 애1U5 뼈1laiforms Can: 8.( 멍

뻐휩恨 끼 as 없Jix (Vilis vinifero 4.C겉

illR 에행매tis 뻐izorrn (Plu 맹깨’tes /, 때^),때VIS 앓뼈 4않

빼없肉 furtus !JUri T,이1'I:IItffi 뼈Pnms tlm!r 따m ThrJJ. 4.0g

總 않1Hl?a 맹JyTi (Pi 앵뺑^{'UT1I esaJlen 따n Moen:h 4.0g}

TotaJ anrunt M.Og

(Z) 없狼蘇植陽場^.9,12,13)

홉없j

Actinicfia arguta 뻐ocl}(P, 뼈LS Adiniciae) 16.0g

木^1Ji. a없m 냉es Fructus (C1'aenmrJes Sinmsis) 8.맹 빼휠m Vitis R뼈x (Vilis vinifero) 8.0g 盧根 뻐행 mitis lfuimrn (Plu 맹rites lrngioolvis SteW 낭) 4.0g

離肉 ^{Pru:tus 111}미 T<JJH1IL& 뻐Pnms 따m1 κmηuiJ,) 4.0g

1i.1JI!ii A!:4 떼'qIIfOOS Cat 엉띠빼α= ^{slifCXTm seenmrJ) 4.0g}

/1';1 Fmi Po뻐1 (Pinus rr=miLro 따ril) 4.0g

T이외 amJUJ1t 48.0g

- 사상의학회지 저110 권 제2호 1998 -

* 본 處方의 휴頭觀은 정선된 藥材를 구입하는데 어려움이 있어 포항치 않았음

(2) 太陽A 鄭^.7.8.16)

五1m: Acan Catex 어뼈l:JI1IZt ^5eS! 빼.C7!8TI se뼈11) 없(\I

ita 1m 맹iris Rhizam (PIr 맹rites Qnmnis) :fH횡

(3) 太陰A 處方

@ 太l훌調몹漫^.9,12,13)

흉i1It ωas 옮m1 (Q;U La:iryr π}chi)

乾훌 Castareae Sere! (ClNaIro

"^{뻐'issirrn 8/.)}

짧짧子 빼i Sere! (RatJrros S:tivus) 五.Itt. 子 없 1izardrne FructIl<; (

없iznta cJinm<;is B띠lIen)

짧뺏 뻐따행 lis ^R<뼈x (

여^iqxJgrrI 짜)CrJ 띠.IS)

石BiiIi Aaxi 믿1!!TIirH Rhizam <Aa:n5 grrn1neus Sda 피er)

뿜훌 flatyaxJy R뼈x (P, 뼈a φ1 빼XlIn)

‘iw 생빼<Ie 버m( 댐mro siniro Stt. ￥ι

)

%얘

%째짜뺑짜뺑싸햄싸앵싸뺑싸뺑

T없1 arrnmt 51.(\1

@ 淸,e. 웰子楊^9.12,13)

;IE ￥f영 띠 i Sere! Welr.nbo rarifero )

山혔 Hatataris Rhizam (DiOSl. π'III b:zmtas cIecni.9Te)

처께 A짧행i R뼈X 띠m맹us Irxicbls L뼈잉I)

짧꺼쌍 얘j

이1 핑rnis R때x (

여icp: 갱en ja,x:rims) 훌t Poly 때aeR 뼈x (Pdy, 망later 뼈d따WIlldemv) h견1iIi Aaxi grarram 뻐ZImI 어caus grrn ψIeUS Sda 뼈er) 없짧t 11^η\i1i ^앓m1(Z 에I{fu; j_띠u/:a)

R뱉R肉 띠멍 anae 뻐hi<; (Eujiuia /CI\따II)

쩌주i: Hict.ae 옮m1 (Bidll Chen 때IS 당riJitt6)

폈 Sc:ut 빼lae 뼈x (Scute 뼈ψb띠뼈⁵⁾

훌빼子 R혀Ja!Ii Sere! (RatJrros Sttivus)

1t훨 α rysar 띠g

미 Fb;(0ry.mJmun iI뼈m ωlie)

짜앵

%앵싸뺑싸뺑싸뺑싸빼싸뺑짜앵싸앤싸앤싸앵싸때

Taal arrnmt !il

@ 淸Jlilii 짧JJf 傷

9)

홉根 A.mriae R뼈^{X (1\6'} 며a 뻐mIugiam)

@혹 Sa! 때때iaeR 뼈x (Sa 뼈때a 뼈업Imsis) 훌本 뻐맹양 f 따뻐ssirrne R1dx (

싸빼a 떠뼈ssirm)

훌홉子 뼈^1a!11 옮m1( 뼈= ^Sarivus)

뿜훌 Ha1)mIy R뼈x (tyaxhJ 빼1.D.D11J

꺼월 Cirrici fi핑용 Rhizam (Cir빼빼때따Eifdia)

B죠 써뺑않 뼈 x (AI 빼ica 뼈M뼈)

太fij me Ur앙ulati Rhizara (RIeIm urxh 뻐따피

때뼈뼈싸뺑싸뺑싸뺑싸뺑싸뺑

T없1 armmt 4&(\1

@ _{홉根浮陣漫}^9,12,13)

흉根 IWariae R뼈x (Pueraria tlu1bergim)

縮 Sa! 빼뼈aeR 뼈x& 뼈때삐뼈띠짧⁵⁾

훌本 k빼^!Cae 떠꾀ssirrne R왜X 때쟁뼈 ) 훌뼈子 R 때때 않m1 (/4irIul5 Stivus)

rt^{챔 버}m ^{여I 뼈a 에없}r^α성P뼈tvizJ) -λ f!le Ur뻐Jlati Rhizara (RJwn II뼈J!atum) 하!’ t샘때ichia Venri( 찌us (,\ ψmn/, 띠cAJla H.)

빠째

%앵짜뺑짜뺑싸댄싸뺑빼

Tit 허 armmt 때‘.Og

(4) 太陰A 數:;t.7.8.16)

흉i1It α멍S 닮m1 (Q;U _JOOi)

大/if me Ur뼈뻐n ^에따am (RJwn II빼빼pn)

횟白& 뻐iO:rtex( 빠\IS 외뼈)

흩ta 디& ^{파π O:rtex aJ1rrus} rm:roc<II1II 벼'Ce)

하.. lllir 피뻐 V히미ruIus (

뼈뼈a h 뼈uIa)

‘i;i7 버빼<Ie 뻐m( 닮빼11 siniC3 Stai1)

i협훌않 Ka 따EmXii O:rtex (KaIqEmx 뻐^IS)

s:觸 Immtae RIizam (In1mta 때때ica)

%얘

%얘

%얘

%뺑

%땐짜얘짜얘

%뺑

- 太陽A, 太陰A의 盧方과 훌材가 8듭防細8힌 (3T3-L 1) 의 jf 핸 ^分化째힘l에 미치는 影훌 -

2) 細뼈柱 및 헬險敵物

實檢에 사용한 3T3-L1 細뼈는 일본 Nagoya ( 名

古屋) 대학 농학부 생화학제어실 Y. Kitagawa( 北

川) 로부터 분양받아 사용하였다.

3) 試藥 및 器具

寶驗에 사용한 시 약은 Dulbeco

’s modified

Eagle ^’s medium (DMEM, Gibco), Fetal bovin

serum (FBS, Gibco), trypsin- EDTA(Gibco},

Gentamycin(Gibco}, Phosphate buffered

saline(PBS, Sigma), Trichlo- roacetic acid

(TCA) , Acetic acid (Aldrich), Trizma base

(sigma), Sulforhodamin-B(SRB, Sigma) Dime-

thyl sulfoxide (DMSO) , Dexamethasone

(DEX, Aldrich), 1-Methyl-3-isobuty-Ixanthine

(MIX, Aldrich), Insulin(Sigma), Oil-Red-O

(Aldrich) , 사용기구는 Culture flask(Falcon),

96-Well plate(Falcon), Disposable pipette

(Falcon), ELIZA-ReadedSpectra), C02

incubatodFisher}, inverted microscope (Olim-

pus) 둥을 사용하였다.

2. 흩앓方法

1) 檢滾謝파

檢 휠행4는 購入된 韓藥材를 전탕추출과 에탄올추 출의 방법으로 만들었다.

(1) 빽傷抽出

각 處方은 1 첩분에 해당하는 정해진 量을 調製하 였고. ^{짧#는 각 韓藥材 50g 씩을 薰i잃水로 2時間}

h廳

.

rotary evaporator 로 60t 에서 減壓홈縮한 뒤 , i. 행

結乾媒하였다 . 乾操된 휠행파를 1 % Dimethyl

sulfoxide (DMSO) 에 1Omg/ 뼈로 녹여 0.45 때

membrane 필터로 除園하여 檢滾으로 使用하였다.

(2) 에탄올추출

각 處方은 1첩분에 해당하는 정해진 量을 調製하 였고 , 數1는 각 韓藥材 SOg 씩을 正確히 뼈^IJ量한 후 , 해햄機에 각각을 갈아준 후 薰끊한 에탄올(80%) 300 - ^{SOO 뼈을 넣고 3} 일간 室溫에서 放置하여 抽 出하여 No.2 필터지로 盧過하고 (1 次抽出 ), 總過

殘뺑¹¹ 1次抽出과 같은 方法으혹 4 日間 에탄올을 침 출시쳐 總에훌을 얻고 (2 次抽出 ), 餘滅을 모아 rotary

evaporator 로 減뭘힘짧혐한뒤 , vaccum dry oven

에서 40t ^{로 흉操시켰다}. 乾操된 試

*^{과를 2%}

Dimethyl sulfoxide (DMSO) 에 Smg/ 뼈로 녹여

0.45 ^때 membrane 필터로 除園히여 檢波으로 使用

하였다.

2) 細뼈 t 훌훌

3T3- L 1 細뼈를 배휩}는데 사용된 培養浪은

Dulbeco ^’s modified Eagle ^’s medium(DMEM)

이었으며 fetal bovine serum(FBS), gen-

tamycine (100 units/ 뼈), streptomycin (1 OOjJg/

뼈) 둥을 愈1m 하였다 . 3T3-L1 은 培養 3일 간격으 로 培養細뼈 表面을 phosphate buffered saline

(PBS) 溶滾으로 씻어 준 후 SOInt flask 당 lInt 의

0.2S% trypsin 溶浪을 넣고 室溫에서 1분간 處理

한 다음 trypsin 溶浪을 버리고 37t 에서 5분간 保 합하여 細뼈를 탈착하여 흉帶培養하였다. 탈착된 細 뼈는 10% FBS 가 댄^{1J[} 된} DMEM 培養滾

(DMEM/lO% FBS) 10 뼈에 i쭈游시킨 다음 새로

운 培養容器 (some culture flask) 에 옮겨 1:20 의

- 사상의학회지 저110 권 제2호 1998 -

split ratio 로 C02 l'흠養뚫 (37'C. 5% C02) 에서 培

餐하였다.

3) SRB 法에 의한 細뼈it 植效果 測定 10% DMEM 培地에서 3 日問 培養하고 培養培地 를 除去한 후. ^{PBS 로 細뼈 表面을 洗峰하고}

0.25% trypsin-EDTA 1!뼈를 i체n^하여 1 분간 反

應 후. ^0.25% trypsin-EDTA 를 除去

.

DMEM 培養뻐 5r^뼈를 t진1m 하여 점적하고 , 細뼈浮游

(cell suspension) 대 trypan blueO%) 을 1:1

로 混合하여 homocy- tometer 로 細뼈數를 計算하

여 5x 104 cells/! 뼈로 浮游시켰다 細뼈浮i홉 100

μa^씩을 96 well plate 의 각 well 에 분주하여 well

당 5X 103cells/ 뼈의 細뼈가 接種되게 한 다음 C02

incubator(5% C02. 37'C) 에서 24 시간 培養하여

細뼈를 附흙시켰다. 그후 다시 각 well 에 Mif 훌된 檢

뻐밟H 前場抽出과 에탄올抽出) 를 250mg/me 씩 爾D

하였다. 以上과 같이 處理한 다음. ^{C02 incubator}

에서 2 일간 培養하여 t'숍養이 끝난 細뼈에 TCA 를 최종농도 10% 가 되게 짜加하고

.

養하여 細뼈를 固定시켰다. 薰끊水로 5회 反復하여 細뼈를 洗練하고 . 空氣 중에서 乾操시킨 후. ^10rnM

Tri zma base 를 100 뼈를 꺼째핸얘 10 분간 팽出시

킨 후. ^{ELISA reader 564nm 에서 吸光度를 測定}

하여 細뼈의 t 홉植程度를 測定하였다 .

4) 3T3- 니 細脫의 分化에 미치는 檢滾 의 影響

SBR 檢索과 같은 方法으로 細뼈를 接種하고

.

중인 3T3-Ll 細뼈가 confluent stage 에 좋|

建하면.

初購홉養 2일간 培養 培地에 分化짧導 物質인

dexamethasone (DEX. 0.25 jJM), 1-methyl-3-

isobuty Ixanthine(MlX. 0.5 rnM), insulinOO

jJg/ 뼈) 을 i杰h햄F져 分化를 調導 ( 對1m群으로 分{ 찮 導뺑質을 1J 때지 않고 培養) 하였다( 初짧햄養). 2

일간써잖導 培養 후

.

1Jo 된 細뼈培養滾으로 교환하여 5일간 더 培養하여 服麻細뼈로 分it 시켰다( 後期培養). 對照群으로

insulino] 械^1J[J 되어 있지 않은 배지로 교환하여 培

養하였다 . 3T3-L1 細뼈의 分化에 미치는 檢滅의 效

果를 조사하기 위해서 檢 을 100 ^μg/ ^뼈

.

1^μg/ 뼈로 처리하였는데. ^{初짧#숍養부터 後購숍養까지}

처리한 것과 後期培養 때만 처리한 것으로 나누어 검색하였다. 分i 쭉導物質 처리시 동시에 짜加하거 나 또는 分{짧導 후 培養浪 교환시에 t진h밤}_였다.

5) 3T3-L 1 細뼈의 分化效果 測定

3T3-Ll 細뼈의 分{않爛는 Oil-Red-O 로 梁色

하여 뼈II定하였다. 後購흠養 후. ^{10% formalin 을}

50 ^μe씩 if.: 加 ( 최종농도 3% formalin) 하여 30 분간 細뼈를 固定시키고, 薰圖水로 3회 反復하여 洗峰하

고 , 공기 중에서 乾操한 다음 Oil-Red-O 로 2시간

동안 梁色하였다. 梁色後 薰i잃水로 3회 洗蘇하고 공 기 중에서 乾操시키고 iso-propyl alcohol 100td 씩 분주하여 1시간 동안 용출시켜 ELISA reader ^로

510nm 에서 1I&1t. 度를 없IJ定하였다.

m. ^{實 驗 結 果}

1. SRB 검색법에 의한 3T3-L 1 細뼈增種에 미치는 檢滾의 썼果

1 ) 활뿜t 숍養

R읍J!jj 細^R힘의 연구를 규영하는데 주로 이용되는

3T3- L 1 細뼈는 DMEM!FBS 배지로 통상적인 조건