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대한임상병리사회지 : 제 23권 1호

1991

골수검사시 탈회용액의 조건에 관한 연구

연세대학교 영동세브란스병원 해부병리과

林 炯 善

Key words : Condition of decalcification

,

Formic acid

,

Acid modify

,

Zenker ’

S,

Rapid , Rabbit.

1 .

서 론

골수는 장골의 골수강파 해면질강을 메운 유연하 고 혈관이 풍부한 조직으로서 중요한 조혈기관이며，

그 중량은 성언에서는 체중의 3.4-5.9% 를 점하고 있고， 총 무게는

1

,

300-1

,

500g

정도이다24) 골조직 은 골세포와 골기질로 구성되고 기질은 교원 원섬유 와 무기염류(인산칼슐

85%

, 탄산칼숨 10%) 로써 구 성되어 있다. 석회화현상은 연골소강 언저리에서 무 기염류 중 칼숨염이 지방산과 결합하여 불용해성 칼 숨염이 침착되기 시작하여 점점 주위로 퍼져 나가 생기게 된다. 조직학적으로는 세망결합 조직이며 세 망세포는 식작용이 매우 강하고 그 세망은 각종 조 혈세포로 차 었다. 골수에는 척색골수와 황색골수의 구벌이 있고 전자는 조혈기능이 있으나 후자는 조혈 기능이 없는 지방조직이다3 1)

이와같은 골수는 약 절반이 조혈기능이 있는 적색 골수로서 조혈에 참여하고 있으므로， 골수검사는 조 혈기능을 평가하고 혈액질환을 진단하는데 필수적 이다. 한펀 골수는 구조적 특성으로 풍부한 혈관분 포를 가지고 있으므로， 각종 혈행성 전이암의 혼한 전이 장소가 되어 왔다. 전이성 종양 중 골수 첨습 률이 높은 것으로 위암， 폐의 이안세포암， 전립선암 퉁이 속하고， 소아종양에서는 신정아세포종 횡문근 육종， 유잉육아종이 골수전이를 잘 일으키는 것으로 알려져 있다22)

1908년 Ghedini2⁴)가 처음으로 골수의 생검을 시작 하였고， 꿀수천자첨율 사용한 것은 20년 후인

1929

년에 Arinkin이 흉콜에서 홉입한 도말표본을 Romanowsky염색올 하여 검사를 한 것이 환자의 골수검사의 시작으로 평가하고 있다. 이러한 과정은

1934년 McFarland와 D없nashek⁵)가 환자로부터 채 취 한 골수홉입 도말표본과 골수생 검 표본과의 조직 학척 성상차이를 설명하고서 비로소 인정올 받게 되 었다. 그리고 이것은 골수홉업과 골수생검시 검체를 채취하는 기술과 현미정적 검사률 위한 염색시 Romanowsky법 과 hematoxylin-eosin법 의 표본 제 작을 준비하는 기술의 장점을 상대척으로 평가하는 데 목적을 두었다.

일반적으로 골수검사의 검체는 길이가 2cm이고，

직경이 0.15-0.13cm이며 무게는 약

150mg

정도가 적당하다. 그리고 이 점체는 즉시 고정액에 넣어 두 었다가 탈회를 하고 난 후 다음단계로 진행된다l이.

조직 학적 인 절펀은 일반적 으로

hematoxylin and eosin(H&E)

염색올 하고 필요에 따라서

Giemsa

,

PAS

염색을 하며 세포내의 철성분 검출을 위해서는

Prussian blue

방법으로 철분염색을 하기도 한다.

아울러 면역학척 검사를 위해서는 면역세포화학적 검사를 시행한다.

뿐만아니라 골수홉입표본으로는 염색체 분석을 할 수 있고， 골수생검표본으로는 지방조직， 골지주，

저장세포， 조밀하게 축척되어 구성된 세포(악성 신 생물， 림프구성조직， 육아종) , 혈관 그러고 맥관주 변 조직을 관찰할 수 있다5)

그러므로 본 연구에서는 생검한 골수를 병원에서 많이 사용하고 있는 4가지 주요탈회액으로 탈 석회 화 하는 과정을 탈회액의

pH

, 탈회시간별로 조사하 여 동 과정에서 탈회액의 안정성과 이것올

H & E

,

Giemsa

,

P AS

, 철분 염색을 실시하여 염색상에서 세포내부의 물질 중 주로 철분검출에 아무런 영향올 주지 않는 가장 좋은 탈 석회화 과정의 적정조건올 찾아 골수검체 표본제작 과정의 문제점올 해결하고

-139-

더 나아가 골수검사시 진단에 도움을 줄 수 있는 방 법을 찾기 위해 본 연구를 시작하였다.

II.

실험 재료 및 방법 1. 실험재료

골수 검체는 암수 구별없이 무게가 평균 2.0kg정 도 되 는 토끼 의 후장골능에 서

Jamshidi

골수 생 검 침

(16gauze)

으로 토끼 1마리 당 3-4개 의 골수를 채 취 하여 즉시

10%

formalin에 고정 한다 .

2.

실험방법

고정한 검체는 아래와 같은 네 가지 탈회용액에 각기 pH와 시간을 달리하여 골수검체의 길이가

1cm

가 되는 것은 한 가지 조건에 1개를 탈회하고，

1cm

가 안되는 검체는 2개를 탈회하였다. 시간이 되면 검 체 를 육안적 인 탈회 감지 방법

(floating , probing , bending

,

trimming

,

squeezing

,

needling)

으로 관 찰하고 탈수과정을 거쳐 파라핀으로 포매하고

3-4

마이크론 두께로 절펀 후 H&E염색을 하고， 필요 에 따라서

P AS , Giemsa ,

그러 고

Prussian blue

방 법으로 철분염색을 하였다.

3.

^시약제조

1)

F ormic acid solution Formic acid ... 5 ml 70% alcohol ... 95 ml

위 시 약을 혼합하고

10%

formalin에 고정 한 검 체 는 수세 를 하지 않고

70%

alcohol에 방치 한 후 탈 회한다.

2)

Acid modify solution

Aluminium chloride ... 70 g Hydrochloric acid , conc ... … 85ml Formic acid ... 50 ml Disti11ed water ... 1 , 000 ml

위 시 약을 혼합하고

10%

formalin에 고정 한 검 체 를 밤새 방치하여 탈회한다.

3) Zenker's solution

Potassium dichromate ... 2.5 g Sodium su

1fate ... 1.

0 g Mercuric chloride ... 5.0 g Dist

i11ed water

... 100 ml

Zenker

용액 은 일반적 으로 formalin에 1차로 고 정하고 특수염색할 때 쓰이는 2차고정액으로 세포핵 과 세포내의 파럽의 고정에 좋고 간， 비장 등의 분 비물 증명에 많이 사용된다. 그런데 Zenker용액은 사용직 전 에

Zenker

원 액 95ml에

glacial acetic acid

5ml를 첨가함으로써 염색성을 좋게 할 수 있지만 dichromate색 소가 검 체 에 침 착되 어 판독시 위 양성 을 나타낼 수 있으므로 적어도 6시간 이상은 수세하 거 나

potassium

iodine으로 처 리 하여 색 소를 제 거 하·

고 다시

potassium

iodine을 제 거 하기 위 해

hypo (sodium thiosulfate)

를 사용한다 .

4) Rapid solution

Histological decalcifying

agent 인 이 용액 은

national diagnostic NO. HS-105

제 품으로 일반적 인 탈회용액 보다 1/3가량 시간을 절약할 수 있고，

10%

formalin이나

B5 fixtive

용액에 고정한 조직 을 탈회한다.

4.

판찰내용

1) 셰포 충젤성

(Cellularity)

골수에 서 의 유핵 세 포수나

volumetric

^pattern~

양적인 평가는 골수의 처리과정이나 기술적인 변에 서 오차가 많이 발생하여 커다란 의미는 없지만 골 수기 능의 확실한 지 표로서 중요하므로 12) 여 러 가지 조건하에서 골수의 조직학적인 유핵세포수，

Myeloid-Erythroid 양 등을 비 교하였 다 . 골수의 세 포충실성의 펑가는 표 1과 같이 한국 백혈병 연구회 의 기준을 참고로 하였다.

표

1. Scoring of BM cellularity

o : Aplastic BM 1 + : Hypocellular BM 2+ : Normocellular BM 3+ : Hypercellular BM 4 + : Packed BM

2)

플수구계 쩨포와 척혈구계 세포 비율 (M:

E

ratio)

3)

철훈

(Hemosiderin)

우리 체내의 저장철은

hemosiderin

또는

ferritin

의 형태로 유핵적혈구내 또는 골수의 망상내피계세 포에 존재하나 엉성하게 결함된 상태이므로 말초혈

액 또는 골수표본을 약산성으로 처리시키면 이들 철 이 온이 유리 되 어

ferric

ferrocyanide를 형 성 하므로 서 청색 색소를 나타내게 되므로 이 원리를 이용하 여 염색하였다 20) 주로 양， 형태 등을 관찰하며 유 기 철을 증명 하는데 는

Prussian blue

방법 으로 염 색 하며 Beutler의 분류에 의 하면 표 2와 같다

표

2. Beutler

’

s classification for iron stain

²⁹)

o : ^N

⁰

iron was seen in 50 or more oil immer- sion fields of marrow

Trace : Only very rare intracellular iron granules or blue-s taining reticulum cells were seen on the examination of 50 or more oil immersion fields.

1 + : Intracellular iron granules or blue-staini- ng reticulum cells were seen occasionally-

’

but the amount of iron appeared to be distinctly less than normal.

2 + : Iron granules present in 10% or more , but not in every oil imersion field examined

(N

ormal amount of iron)

3 + : Considerable amounts of iron in virtually every oil immersion field (Moderate incre- ase)

4 + : Most spectacular degree of iron excess in the marrow

4)

Periodic Acid-Schiff stain (P AS)

Periodic

acid는

1-2 glycol

group을 산화시 켜 dialdehyde를 형 성 하고 이 는 Schiff의

leucobasic

fuchsin파 결합하여 홍색을 나타내게 된다. 이 홍색 은 dialdehyde와

fuchsin-sulfurous

acid의 결함으 로 이루어진 새로운 구조물이므로 반응을 일으킨 glyc이구조물의 양파 일치한다. 양성반응은 단당류，

다당류

glycoprotein

,

mucoprotein

및

cerebroside

존재시 관찰되며 혈액세포 중에는 glycogen을 함유 하고 있는 세포들에서 양성반응을 보이는데 고분자 물질이 므로

diastase

처 리 하면 소실된다 20,27)

III.

실험성적

1) 육안척 소견

일반적으로 구입이 용이하고 단순한 시약으로 많 이 쓰이고 있는

formic acid

용액을 pH 에 따라 산

성파 알칼리성으로 구분하여 탈회해 본 결파， 알칼 리 용액에서는 3-4 일 정도 되어야 탈회가 되어 진 단에 도움이 될 수 없으므로， 산성용액을 강산， 약 산， 중간으로 구분하여 각각에 시 간을 달리 하여 탈 회 해 본 결과， 조직에 따라 약간의 차이는 있지만 강산 용액 중 pH=3.0-4.0의 약산쪽에서는 심한 경우는 밤새 방치 해도 탈회가 되지 않았고， 대체적 으로 7-10시간 정도 탈회를 해야 된다. 이와같은 것은 마이크로톰으로 박절시에도 조직이 찢어져 탈 회가 되지 않았다. 그리고 pH= 1. 0-2.0의 강한 산 에서는 1시간 후에는 탈회가 전혀 안되고 3시간 정 도 고정해야 탈회가 되었다. 한편

acid modify

solution은 농 염 산이 혼합되 어

formic

acid보다는 강산이므로 쉽게 탈회할 수 있다. 앞서와 같이

pH

를 3단계로 구분하여 시행해 본 결과

pH=

1.

0-2.

0에서는 대체적으로 3시간 가량에서 탈회가 되었고 pH=3.0-4.0에서는 5시간까지도 탈회가 되지 않는 검체가 있고 7시간에서는 탈회가 되어 적어도 6시간 이상은 탈회를 해야 한다.

Zenker

용액에서는 10시간에서 24시간까지 실시

해 본 결과， pH= 1. 0-2.0에서는 15시간 정도변 충 분히 탈회가 되었고

pH=2.0-3.0

이상에서도 같은 결과를 보였고， pH=3.0-4.0에서는 적어도 20시간 이 되어야 탈회가 되었다. 그리고 최근에 국내에 수 입 되 어 점 차 이 용이 늘고 있 는

rapid

solution은 농 염산이 혼합되어 있어 pH=0.96을 나타내고 있었고 이 용액에서는 20분 후에 탈회가 되었다.

2) 현미청척 소견

CD4가지 탈회 용액 중

formic

caid용액 에 서 나타 난 세포충실성，

M: E ratio

및 철분 염색의 결과는 표 3파 같다.

표 3에서 보듯이 세포충실성이나

M : E

ratio는 커다란 차이가 없이 비슷하게 나타나 세포충실성은 탈회용액의 화학적인 변화보다는 주로 나이와 관계 가 있다

그러나 철분 염색에서는 pH= 1. 0-2.0에서

3-7

시간， pH=3.0-4.0에서는 3시간 탈회에서 trace로 나타났고， 7시간 탈회 한 검체에서 1+ 로 나타났다 PAS 양성에 대한 분포 양상은 정상세포에서는 모든 중성구에서 유사하게 자색을 띠고있어 골수생검에 서는 커다란 의의를 찾을 수 없었다.

@ 강산인

acid modify

solution에 서 는 표 4와 같 이 나타났다. 이 용액에서도 세포충실성이나 M:E ratio에서는

formic acid

용액과 별 차이는 없고， 철 분염색은 pH=2.0-3.0에서 3시간 탈회하였을 때

-141-

표

3. Results from the formic acid decalcification solution

pH Duration Cellularity M : E ratio Iron

1.

0-2.0 1 hrs 2+ 6-7:1

3 hrs 2+ 3 : 1 trace

5 hrs 2+ 4 : 1 trace

7 hrs 2+ 3 : 1 trace

2.0-3.0 1 hrs 0 1 : 1

3 hrs 2+ 2 : 1

5 hrs 2+ 5 : 1

7 hrs 2+ 10 : 1

3.0-4.0 1 hrs 2+ 4 : 1

3 hrs 3+ 5 : 1 trace

5 hrs 3+ 3 : 1

7 hrs 3+ 3 : 1 +

overnight 2+ 4 : 1

표

4. Results from the acid modify decalcification solution

pH Duration Cellularity M : E ratio Iron

1.

0-2.0 1 hrs 4+ 3 : 1

3 hrs 4+ 4 : 1

5 hrs 2+ 3 : 1

7 hrs 1+ 4-5 : 1

2.0-3.0 1 hrs 1+ 3 : 1

3 hrs 3+ 2 : 1 +

5 hrs 3+ 3 : 1

7 hrs 2+ 3 : 1

3.0-4.0 1 hrs 2+ 3 : 1

3 hrs 2+ 3 : 1

5 hrs 1+ 3 : 1 +

7 hrs 3+ 3 : 1 +

1+ 로 나타났고， pH=3.0-4.0에서는 5시간과 7시 간에서 1+ 로 나타났다.

@ 지금까지의 용액과는 다른

Zenker

용액은 원 래 고정액으로 많이 사용하고 있었다. 그러나 실험 후 나타난 결과 표 5와 같다. 철분염색이

pH=2.

0-3.0

사이에서 15시간 탈희한 결과 2+ 로 나타나

다른 용액 보다 좋게 나타났고， 20시 간 탈회 하여 도 1+ 로 나타났고， 섬지어 48시간에서도 1+ 로 나타났 다. 그리고

pH=3.0-4.0

사이에서는 20시간 탈회

했을 때 1+ 로 나타났다.

@ 지금까지는 현재 사용하고 있는 여러 가지 시 약을 혼합하여 탈회용액을 만들었으나 최근에 수입 되 기 시 작한

rapid decalcification

solution은 kit화 되어 있고 pH는 0.96으로 매우 강한 산으로 나타났 다. 이 용액으로 실험한 결과는 표 6파 같다. 특히 철분검출은 매 10분 마다 조사한 결파 20분정도 탈 회한 표본에서 약하게 검출되었다.

표

5. Results from the Zenker

’

s solution

pH Duration Cellularity M : E ratio Iron

1.

0-2.0 10 hrs 3+

15 hrs 0

20 hrs 1+

24 hrs 1+

2.0-3.0 15 hrs

^{2 十}

20 hrs 2+

24 hrs 1+

48 hrs 0

3.0-4.0 10 hrs 1+

15 hrs UN

20 hrs 1+

24 hrs 2+

UN : U ncertain

6-7:1 5 : 1 UN 5 : 1 5 : 1 4 : 1 7 : 1 4-5:1

UN UN

5 : 1 5 : 1

++

十

trace

+

표

6. Results from the rapid decalcification solution

pH Duration Cellularity M : E ratio Iron

10min 20 min 30min 40min

0.96 50 min

60min 90min 120 min 150 min UN : U ncertain

IV.

고 찰

Adaba와

Cavill

(1983) 에 의하면 정상성인의 골수 세포충실도는 40%-60% 라고 하였으며

Hartsock

(1965) 은 연령에 따라 10세까지는

79%

, 30세까지는

50%

이상이며 70세 이후는

29%

정도라고 하였다.

그러나 각종 질환을 치료하는데 사용되는 약제들 이 조혈계 장기에 손상올 초래하여 약물로 인해 골 수의 세포충쉰성이 다양하게 나타나는 것윤 질환별 분류에서 볼 수 있었고21) , 본 실험에서는 탈회용액 의 화학적인 작용에 의한 변화를 관찰하였으나 정상 적인 골수검체에서는 주목할만한 의의는 찾을 수 없 었다. 그러므로 세포충질성은 주로 나이와 관련이 있는 것으로 나타났다.

1+

3+

2+

2+

2+

0 1+

0 1+

2:1

3:1 trace

3 : 1 3 : 1 4:1 2 : 1 2:1 UN 3 : 1

이러한 세포충실성이나， 과립， 봉입체 등을 잘 보 존하면서， 칼숨이나 무기물이 심하게 침착되어 있는 조직 으로 파라핀이 나

celloidin

block을 만들어 서 만족할 만한 표본을 얻기 위해서는 무기물을 제거하 여 조직을 부드렵게 하는 것이 중요하다. 탈회란 기 관이나 조직내에 칼숨염이 침착되어 매우 단단해진 조직을 산파 작용하여 용해성 칼숨염 형태나 또는 칼숨이온을 흡수하는 착화용액의 칼숨과 반응하여 칼숨이온을 유러시키는 것을 말한다23)

찰 중화된 산은 조직의 염색성에 약간의 영향을 미치지만 용액의 산도와 탈회시간의 길이에 따라 증 가한다.

Formic

acid와 같은 약한 산 중에서도 pH=3.0을 기준으로 하여 조직에 따라 약간의 차이 는 있지만 대체로

pH=2.0

이하인 강한 산 쪽으로

-143-

갈수록 시간이 1-3시간 사이에서도 탈회가 되어 마 이크로톰으로 박절하는 가운데도 절편의 커다란 손 상은 없었고

pH=3.0

가까이에서는 1시간에서 3시 간까지도 심한 절편의 손상을 가져왔고

pH=3.0

이 상에서는 5시간 탈회한 경우에 절펀이 찢어져 탈회 가 되지 않았다. 그리고 pH=4.0에서는 밤새 방치 하여 20시간을 탈회하여도 절편이 찢어져 염색상에 도 거의 판독을 할 수가 없었다

조직내의 파립이나 봉입체를 검출하기 위한 철분 검출에서는 산도와 시간에 따라 차이는 있지만 대체 적으로 pH를 조절한

pH=

1.

0-2.0

사이의 3시간에 서 7시간 사이에 약하게 나타났고

pH=3.0-4.0

사 이에서 7시간 정도 탈회했을 때 철분은 검출되었다.

그리고

PAS

양성에 3) 대한 분포양상은 진단적 가 치가 없다고도 하였으나 그후 양성반응의 구별이 골 수성과 림프구성 백혈병의 구분에 유용하다고 시사 되어 왔는데 본 연구에서 염색한 결과 정상적인 골 수생검에서는 커다란 의의가 없이 모든 중성구에서 양성으로 염색이 되었다.

또

acid modify

solution과 같은 강한 산에 서 는 pH=3.0에서 1시간 동안 탈회시 박절할 때 약간의 절펀에 손상이 있었고

pH=3.0

이하에서는 대체적 으로 잘 탈회가 되어 박절시 만족할 만한 절펀을 얻 을 수 있었다. 그리고 세포내 물질 중 철분 검출-을 위해서는 원래 강한 산이므로

pH=

1.

0-2.0

사이에 서는 1시간에서도 철분검출은 없었는데 이것은 검체 에 따라 탈회가 덜 되어 절펀이 찢어지면서 세포내 물질이 많이 유리되었음을 알 수 있고， pH가 높을 수록 (pH=3.0-4. 이 5시간파 7시간에서도 철분은 검출할 수 있었다.

Orth

’

s , Kose

’S 그리 고

Moller

’

s potassium dich- romate formalin

혼합물23) ，

formalin-Zenker

혼합 물과 같은 2차고정액은 세포내 물질을 안정시켜주므 로 세포연구에 많이 이용되고 있고， 이 가운데 여러 학자들이 1,2,3,4,5,6,8,14 ) 주장하는

Zenker

’

s

solution은

mercuric

chloride가 있 어 2차 고정 액 으로 산에 의 한 해로운 영향을 중화시켜 탈회용액으로 쓰이고 있 다

(Wallington

,

1955).

학자들 간의 시 간에 약간의 차이 는 있 어

J amshidi. Bryness , McFarland and Dameshek

¹,2,3) 등에 의하면 15-24시간까지 탈회하 였고，

Krause

(l

979)

등은 15-18시간까지 탈회하고 있다. 본 연구에서는 10시간에서 대체적으로 24시간 까지 탈회를 하였고， 처음 제조한 용액의 pH 는

2

8을 나타내고 있어 이것을 기준으로 하여

pH=l.

0-2.0사이에서 15시간 정도에서도 박절상 절펀의 손상은 별로 없어 박절상의 문제는 없으나 철분 검 출은 볼 수 없었다. 한펀， pH=2.0-3.0에서는 박

절상 뿐 아니라 철분검출에서도 15시간에서 가장 좋 은

(2+

)상태로 나타났고， 시간이 지날수록 철분검 출은 서서히 줄어 24시간 넘어서는 검출되지 않았 다. 그러나 Krause²⁸)은 3 -，.- 4day까지도 철분이 안정 하다고 하여 48시간을 실험해 본 결과 철분이 검출 되었다.

pH=3.0-4.0

사이에서는 24시간까지도 박 절시 절편의 손상은 있지만 20시간에서 철분은 검출 되었다.

한편

rapid

solution에서는 일반적인 탈회용액의

1/3

가량의 시간이 소요된다하여 처음 1시간 동안 탈회를 하였더니 쉽게 탈회가 되어 조직이 용액 위 로 떠오르는 현상이 생겨 최소 10분에서 2시간 30분 까지 탈회한 결파 박절상에서는 30분 이후부터는 커 다란 차이는 없었고， 철분검출에 있어서는 20분 탈 회시킨 용액에서 약하게 나타났다. 위 용액에 비하 여 시간이 절약되기는 하지만 자칫 잘못하면 시간을 초과하는 경우가 생길 수 있다.

Fig

1. Hypercellular BM of formic acid solution (Deca

l.

5hrs. pH 3.0-4.0 , x400)

Fig

2. Aplatic BM of Zenker

’

s solution

(Deca

l.

15hrs. pH

1.

0-2.0 , x400)

Fig 3. Trace reaction of iron containing intracell- ular in contrast with surrounding cells by prussian blue staining.

(Formic acid. 3hrs. pH

1.

0-2.0 , x400)

Fig 4. One positive reaction of iron containing intracellular in contrast with surrounding cells by prussian blue staining

(Acid modify. 7hrs. pH 3.0-4.0 , x400)

Fig 5. Two positive reaction of iron containing intracellular in contrast with surrounding cells by prussian blue staining.

(Zenker ’ s. 15hrs. pH 2.0-3.0 , x400)

Fig 6. Trace reaction of iron containing intracell- ular in contrast with surrounding cells by prussian blue staining.

(Rapid. 20min. pH 0.96 , x200)

V. 결 론

혈액학적 질환의 진단과 치료의 지침으로서 골수 도말표본 검사와 골수생검 검사가 많이 시행되고 있 으나 이에 도움을 줄 수 있는 정확하고 세심한 골수 검사의 전처리 파정은 환자의 예후 판정에도 도움을 주게 된다. 그러므로 본 연구에서는 골수내의 물질 을 잘 보존하면서 가장 좋은 탈회조건을 찾기 위하 여 토끼의 골수를 채취하여 각각의 탈회용액에 대하 여 실험한 결과 다음과 같은 성적을 얻었다.

1. 5% Formic acid solution

@ 박절시 가장 좋은 탈회 조건은

pH 4.0

이하에 서 7시간은 충분히 탈회해야 한다.

@ 세포 내 파럽이나 봉입체 중 iron은

pH=3.

0-4.0에서 7시간 탈회 시 양성으로 나타났다.

2. Acid modify solution

박절이나 세포 내 파럽， 몽입체 검출을 위해서는

pH:= 3.

0-4.0 에서 양성으로 나타났다.

3. Zenker ’ s solution

(Î) 박절은

pH4.0

이하에서는 최소한 10시간 이상 에서는 용이하다.

￠ 철분 검출을 위해서는

pH

2.0-3.0에서 15-20시간， pH=3.0-4.0에서 20시간에서 양성으 로 나타났다

-145-

@ Ol %

⁰

.1Jotl

~~~ ~~1~ ~o-1.£. 6~1~ ⁰

1.-(J-

9-~l -5}/l

'-l. potassium

iodine~i

e.l

"5}..Jl t:t~l

hypo (sodium

thiosulfate)~ ~1

e.l

^<5~

ol=

~q.

4.

Rapid decalcification solution

CD

lit~

.g. 30*

⁰

1.-(J-

⁰

1 t7J %ol

"5}..Jl ~

*

~*.g.

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oi .£.

20*-¥-t:-~ ~~ <5~

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A Study on Condition of Decalcification Solution in Examination of Marrow

Lim, H.S.

Dept. of Anatomical Path, Yongdong Severance Hosp, Yonsei Univ. College of Medicine

ABSTRACT

Examination of marrow helps diagnosis of blood disease, inflammatory disease, transfer of malig- nant tumor to the marrow, and determination of their curing methods, judgement of convalescence and post curing course. It is very important that decalcification process for making the marrow soft by removal of calcification due to calcium salt in the marrow does not affect other intracellular materials in the examination of marrow. And therefore, in this study, experiments were made on stability and proper condition of decalcification solution during decalcification processes with marrow of rabgbit using four types of decalcificat- ion solution such as formic acid solution, acid modify solution, Zenker's solution, and rapid solution during different time at different pH, respectively, in order to solve problems in produc- tion of specimen of marrow by determination of stability and proper condition of decalcification solution in decalcification process and furthermor- e to seek methods to help the examination of marrow.

The results are as follows though ther are some differences depending upon the type of decalcifica-

tion solution ;

1. 5% Formic acid solution

Seven (7) hours decalcificaiton at pH 4. 0 was proper for cutting. Intracellular iron was detected to be positive in seven hours decalcification at pH 3.0-4.0

2. Acid modify solution

Cutting and/ or dyeing of iron was good in case of five(5) to seven(7) hours decalcifcation at pH 3.0-4.0

3. Zenker's solution

At least ten (10) hours or more decalcification was good for cutting at pH 4. 0, and iron was detected to be positive in fifteen (15) to twenty (20)

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decalcification at pH 2. 0- 3. 0 or that at pH 3.0-4.0.

4. Rapid decalcifcaiton solution

More than thirty (30) minutes process is good for cutting and for detection of iron, at least twenty minutes or more is required.

Thus, it is thought that Zenker's solution which

stabilizes intracellular material shows less fluctua-

tion according to time change and relatively much

iron detecting property according to time and

variation of pH, for examination of marrow in

rabbit.

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