Spirulina sp . 대량생산 목적의 저비용 배지 적용에 관한 경제성 분석
최 낙 철
*, 김 봉 주
**, 조 강 희
*, 이 성 재
***, 박 천 영
†*서울대학교 지역시스템공학과
**고려대학교 지구환경과학과
†조선대학교 에너지자원공학과
***(주) 에이이
An Economic Analysis on the Application of Low Cost Medium for Spirulina sp.
Mass Production
Nag-Choul Choi
*, Bong-Ju Kim
**, Kang-Hee Cho
*, Sung-Jae Lee
***and Cheon-Young Park
†*Department of Rural Systems Engineering/Research Institute for Agriculture and Life Science, Seoul National University, Seoul, Korea
**Department of Earth and Enviornmental Sciences, Korea University, Seoul, Korea
†Department of Energy and Resource Engineering, Chosun University, Gwang-ju, Korea
***AE corporation, D-polis A2903-3, 606, Seobusae-gil, Geumcheon-gu, Seoul, Korea (Received : Aug. 11, 2016, Revised : Sep. 20, 2016, Accepted : Sep. 23, 2016)
Abstract : The aim of this study was to investigate the economic of a culture condition through comparative analysis to Spirulina platensis growth characteristic under various medium conditions for cost effective production of Spirulina sp.. Growth experiments were performed with S. platensis under various culture medium conditions (SOT, Zarrouk and SP) and various low cost medium conditions (N:P:K ratio).
Growth tests for culture medium demonstrated that the SP medium was effective in S. platensis with the maximum biomass (2.3g/L) and minimum medium making cost per production mass (140.44 won/g). Growth tests for low cost medium results showed that the maximum biomass and minimum medium making cost per production mass was obtained under medium A and B were maximum biomass of 1.65, 1.67 g/L and 2.12, 2.10 won/g, respectively.
Keyword :
Spirulina
, low cost medium, biomass, effective production1. 서론
*
미세조류 중 남조류에 속하는 0.5mm의 나선형 형태 인
Spirulina platensis
는 완전식품으로 50~70%의 단백 질, 10~20%의 탄수화물, 5~10%의 지질, 7~13%의 무기 질, 8~10%의 섬유질 및 비타민을 함유하고 있어 건강 보조식품으로서 많은 사람들에게 관심을 받고 있다.세포벽이 얇고 부드러워 녹조류에 속하는
Chlorella
sp.†Corresponding Author 성 명 : 박 천 영
소 속 : 조선대학교 에너지자원공학과 전 화 : 062-230-7119, 7119
E-mail : [email protected]
에 비해 식용으로 섭취시 영양분의 흡수력이 훨씬 우 수하고, 광합성 색소인 클로로필a를 함유하고 있어 식 품이나 음료의 천연색소로 이용되며, 의약품의 원료로 서도 이용 가능하다(Rangel-Yagui et al., 2004). 또한 강알칼리에 내성을 가지고 있어 폐수처리 등의 환경 분야에 적용할 수 있으며, 건강보조식품, 화장품 분야, 사료 등으로 많이 이용되고 있다(Mosulishvili et al., 2002). 그 영양학적 가치를 기반으로 건강 보조 식품 및 기능성 식품 연구(Khan et al. 2005; Kulshreshtha et al. 2008; Mazo et al. 2004), 당뇨병 개선 및 콜레스테 롤 억제(Iwata et al. 1990), 면역조절 기능 및 항산화 (Rasool and Sabina 2009; Wu et al. 2005), 항암(Akao et al. 2009; Schwartz et al. 1998), 항바이러스 효과 (Ayehunie et al. 1998; Hayashi et al. 1996) 등의 의료
용 연구, 필수 아미노산 및 지방산(Alonso and Maroto, 2000), 베타 카로틴 및 피코시아닌 등의 색소류, 향장 품 원료 등의 다양한 천연물 연구에 활용되고 있다 (Kay 1991; Sautier 1998; Ahsan 2008). 다양한 분야에 서 최근 활발히 이용되고 있는
S. platensis
를 포함하는Spirulina
sp.는 아직 국내에서 일부 관련기업에서 생산하고는 있지만 대량 생산기술이 보급화 되지 못하고 있어 대부분 수입에 의존하고 있는 실정이다. Spirulina sp.의 성장에는 영양물질의 활용도, 배양온도 및 조도 등의 인자가 중요한 영향을 미친다(Cornet et al., 1992). 또한 다른 조류에 비하여 상대적으로 높은 pH (약 9.5~9.8)가 요구되어 배지내 타조류에 의한 오염이 쉽게 일어나지 않는 장점이 있다(Belkin and Boussiba, 1971). 이러한 장점을 이용하여 상업용으로
Spirulina
sp.를 대량 배양하기 위해서는 반드시 영향인자 공급에 대한 경제적인 부분을 고려한다. 그 중 배지에 대하여 기존 연구자들은 오랜 기간 동안Spirulina
sp.를 배양 하기 위하여 사용되었던 SOT, Zarrouk 및 SP 배지 (Spirulina medium)를 기반으로 해수(seawater), 하수 (sewage water) 및 공업폐수(industrial effluents)를 이 용하여 경제적인 배지를 개발하는 연구를 수행하였다 (Faucher et al., 1979 ; Saxena et al., 1982 ; Tanticharoen et al., 1993). 하지만 전/후처리 추가시설 의 필요 및 사용에 따른 운반비, 운전비 등의 경제적인 문제점이 발생되고 있는 실정이다. 따라서 본 연구의목적은
Spirulina
의 경제적인 생산을 위하여 실내 다양한 배지조건에서
Spirulina
의 성장특성을 비교분석함으 로써 최적 경제적인 배양 조건을 도출하고자 하였다.2. 실험 재료 및 방법 2.1. 사용균주 및 배양
본 연구에 사용된 미세조류인
Spirulina platensis
(KMMCC-56)는 한국해양미세조류은행으로부터 분양받 았으며, 균주 배양에 사용된 배지는 한국해양미세조류 은행에서 S.platensis
의 전용 성장배지로 사용된 알칼 리성 무기배지 (pH 9.37) 인 SP 배지를 사용하였다. 배 지준비는 실험에 사용된 시약은 모두 실험용(Junsei Chemical, Japan)으로 사용되는 등급으로 배지에 첨가 하였다. SP 배지의 조성은 Table 1에 나타내었으며, solution A와 solution B(PIV metal solution과 Chu micronutrient solution이 포함)를 각각 121 ℃에서 15 min간 멸균, 냉각시킨 후 혼합하여 사용하였다. 실험에 사용한 균주의 배양 조건은 0.5 L 삼각플라스크에 배 양규모 200 mL, 온도 35 ℃, 8,000 lux의 조도 및 교반 속도 120 rpm으로 수행하였다.Table 1. Composition of C SP Medium for S.
platensis. A and B S Solutions were Separately Autoclaved and Mixed Aseptically after
Medium has Stood for 24 h
Solutions Elements Amount
A (500mL of D.I. water)
NaHCO3 13.61 g Na2CO3 4.03 g K2HPO4 0.50 g
B (500mL of D.I. water)
NaNO3 2.50 g K2SO4 1.00 g
NaCl 1.00 g
MgSO4․7H2O 0.20 g CaCl2․2H2O 0.04 g PIV metal solution* 6 mL
Chu micronutrient solution** 1 mL Vitamin B12*** 1 mL
*PIV metal solution (1,000mL of D.I. water)
Na2EDTA 0.750 g FeCl3․6H2O 97 mg MnCl2․4H2O 41 mg
ZnCl2 5 mg
CoCl2․6H2O 2 mg Na2MoO4․2H2O 4 mg Distilled water 1,000 mL
**Chu micronutrient solution (1,000mL of D.I. water)
Na2EDTA 50 mg H3BO3 618.0 mg CuSO4․5H2O 19.6 mg ZnSO4․7H2O 44.0 mg CoCl2․6H2O 20.0 mg MnCl2․4H2O 12.6 mg Na2MoO4․2H2O 12.6 mg
***Vitamin B12
(100mL of D.I. water) vitamin B12 15 ㎍
2.2. 균체량 분석
균체량은 분광 광도계 UV/Vis spectrophotometer (Aquamate plus, Thermo, USA)를 이용하여 600 nm에 서 측정한 흡광도(Optical Density, OD)와 건조 균체량 (Dry Cell Weight, DCW)과의 상관관계식을 이용하여 계산하였다. 건조균체량은 항량된 종이필터를 이용하 여 여과된 균체를 열풍건조기에서 105 ℃로 2시간 동 안 건조시켜 그 무게를 측정하였다. 최종 건조 균체량 에 대한 계산은 다음의 상관관계식을 추정하여 사용하 였다.
DCW(g/L) = 1.2442 * OD600 + 0.7359 (r2 = 0.9776) 식 (1)
2.3. 성장실험
배지조성에 따른
S. platensis
성장실험에 사용된 SOT 배지의 조성은 1L의 멸균된 3차 증류수에 16.8g의 NaHCO3, 1.0g의 NaCl, 0.5g의 K2HPO4, 1.0g의 K2SO4, 0.04g의 CaCl2·2H2O, 0.2g의 MgSO4·7H2O, 0.01g의 FeSO4·7H2O, 0.08g의 Na2EDTA, 2.5g의 NaNO3, 2.86g 의 H3BO3, 2.5g의 MnSO4·7H2O, 0.22g의 ZnSO4·7H2O, 0.08g의 CuSO4·5H2O, 0.02g의 Na2MoO4·2H2O 및 0.1g 의 A5 solution 이며, Zarrouk 배지는 1L의 멸균된 3차 증류수에 6g의 NaHCO3, 1g의 Na2CO3, 1.5g의 NaCl, 0.5g의 K2HPO4, 1g의 K2SO4, 0.04g의 CaCl2·2H2O, 0.2g 의 MgSO4·7H2O, 0.01g의 FeSO4·7H2O, 0.08g의 Na2EDTA, 2g의 Soil 및 2.5g의 NaNO3로 조성되었다.배지의 경제성을 확보하기 위하여 사용된 저비용 배지 (low cost medium)는 조류성장에 있어 기초영양분인 N, P, K가 다양한 비율로 조성되어 국내에서 생산되는 복 합비료 5종을 이용하였으며, 배지제조는 1g에 1L를 첨 가하여 저비용배지를 제조하였다. 저비용배지비료의 화학적 조성을 파악하기 위하여 원자흡광분광기 (Atomic Absorption Spectrophotometer, AA-7000, Shimadzu, Japan)를 이용하여 화학 분석하였다(Table 2). Table.2의 배지 5종은 저비용배지로써 다양한 배양 조건에 따른 S. platensis 성장실험의 조건은 균주배양 조건과 동일하게 0.5L 삼각플라스크에 배양규모 200 mL, 온도 35 ℃, 8,000 lux의 조도 및 교반속도 120 rpm 이였다.
성장실험에서 성장된
Spirulina
의 특성(형태)을 파악 하기 위하여 광학 현미경 및 SEM-EDS (Scanning Electron Microscope - Energy Dispersive Spectrometer, S-4800, Hitachi, Japan) 분석을 실시하였 다. 시료는 성장실험 종료후 시료 10 mL를 채취하여 수분을 제거목적으로 여과(0.1μm)하였다. 여과된S.
platensis
의 고정을 위하여 2.5% 글루타르알데히드를 이용하였으며, 에틸알콜(75, 85, 95 및 99%)를 이용한 탈 수 후 코팅(Au, Pt)하여 SEM-EDS 분석을 수행하였다.
Table 2. Chemical composition for low cost medium(compound fertilizer) Medium NO3-
(mg/L)
PO42-
(mg/L) K+ (mg/L)
Cl- (mg/L)
Br- (mg/L) A 8,433 312,545 197,504 381,654 2,145 B 6,954 601,354 224,544 345,155 3,154 C 4,122 422,545 364,844 754,484 6,513 D 4,135 351,544 138,241 665,445 6,245 E 61,254 552,566 264,548 665,844 10,554
3. 결과 및 고찰 3.1
S. platensis
의 성장 특성SP 배지내에서 분양된
S. platensis
의 성장실험 결과 를 Fig. 1에 나타내었다. 성장실험 결과, 초기농도0.026 OD600의
S. platensis
가 접종 약 30일후 최대성장 농도인 1.21 OD600로 초기농도의 약 46.5배정도 성장 하였다. 식(1)을 이용하여S. platensis
의 최대 성장시 바이오매스는 2.3g/L가 추정되었다. 기존 선행 연구된 유사 배양규모(100mL, 본 연구 200mL)과의 비교하였을 때, 시간당 생산량(g/d, (Working volume of 100mL×Biomass)/Culture time)은 0.0096 g/d (Monica et al., 2014)와 0.0438 g/d (Bezerra et al., 2012)로 분 석되었다. 본 실험에서는 0.0077 g/d으로 약간 낮게 분 석되었는데 이는 조도 및 배지 조성의 차이로 사료된 다. 또한 배지 N.P.K 영향학적으로 비율이 최적조건이 아니라서 성장이 낮은 것으로 판단된다. 성장실험에서 성장되는S. platensis
의 성장특성을 파악하기 위하여 성장실험 4일 경과 후 시료를 채취하여 반사현미경으 로 관찰한 결과, 전형적인S. platensis
의 특징인 녹색 의 나선형 형태를 보이고 있었다. SEM-EDS 분석결과, S. platensis 표면은 C(57.35 wt.%), O(28.27 wt.%)으로 이루어져 있었고, N(7.71 wt.%), Na(4.02 wt.%), K(1.58 wt.%)는 배지내 포함되어 있는 무기성분이S. platensis
표면에 흡착된 것이다. 그리고 기존상용화 배지와 비 교하여Figure 1. Schematic diagram of 2-Bed PSA process experiment apparatus.
(a)
(b)
(c)
Figure 2. Reflecting microscope image (a), SEM image (b) and EDS analysis for
S. platensis
under SP medium
3.2. 배지조성에 따른 성장실험 및 경제성 분석 배지조성에 따른
S. platensis
의 성장 특성을 파악하 기 위하여 기존에 가장 많이 적용된 SP, SOT 및 Zarrouk 배지조건에서 성장실험 결과를 비교하였다(Fig 3). 배양 40일후 성장 비교결과, SP 배지에서S.
platensis
의 성장이 좋았으며, SOT 배지는 SP 배지의 약 70%, Zarrouk 배지 조건에서는 SP 배지의 약 26%의 성장특성을 보였다. SOT와 Zarrouk 배지조건이 SP 배지조건 보다
S. platensis
의 성장이 낮은 이유는 실험 에 사용된S. platensis
의 분양배지가 SP 배지로써 SP 배지에 적응되어 있었으며, Zarrouk 배지 조성에 포함 되어 있는 soil이 규정되어있지 않음으로써 본 실험에 사용된 배지와 기존 참고문헌의 배지내 soil의 특성이 다르기 때문이라 판단된다. 일반적으로 미세조류는 배 지내 조성에 따라 성장 특성이 서로 다르게 나타나는 데, 이러한 특성을 이용하여 최적의 성장을 보이는 경 제적 배지의 조성을 확보하는 연구가 관련 연구자들에 의하여 수행중이다. Tomasz 등 (2012)은 NaHCO3의 함 량이 18.0g/L인 Zarrouk 배지와 Zarrouk 배지보다 NaHCO3 함량이 8.0g/L로 상대적으로 적은 RM6 배지조 건에서 14일간S. platensis
의 성장률을 비교한 결과, 비슷한 성장률을 보였다. Lee 등 (2013)은 미세조류의 경제적인 성장을 위하여 배지내 질소원과 탄소원의 상 관관계를 파악하는 것이 중요함을 주장하며, 질소원으 로 요소(urea)와 탄소원으로 NaHCO3를 이용하여 다양 한 요소와 중탄산나트륨 조건에서S. platensis
의 성장률을 비교분석하였다. 그 결과,
S. platensis
의 성장률은 배지 부피 20L 기준일 때, 요소 2.0g/L와 중탄산나트륨 7.5g/L조건에서 가장 높게 나타났다.사용된 배지(1L 기준)으로 배지제조 금액에 대하여 비교한 결과를 Table 3에 정리하였다. 배지 제조에 있 어 제조사 및 구입조건 등에 따라 배지제조 금액은 차 이가 있겠지만 본 연구에서는 배지 조성에 필요한 화 학물질에 대하여 국산제조사 제품을 우선으로 소매가 조건에서 산정하였다. 그 결과, 배지제조 금액은 SOT 배지에서 431.62원/L, SP 배지에서 314.58원/L 및 Zarrouk 배지에서 290.38원/L으로 산정되어 SOT 배지 가 가장 높았다. Fig. 3, Table 2 및 식(1)을 이용하여
S. platensis
단위질량 생산에 따른 배지제조 비용을 각배지별로 비교 분석한 결과, SP 배지가 가장 낮은 140.44원/g이었으며, SOT 배지는 SP 배지보다 1.72배 높은 241.13원 그리고 Zarrouk 배지는 1.83배 높은 256.97원으로 산정되어 SP 배지가 본 연구에서는 경제 적 이였다.
Figure 3. Growth curve of S.
platensis
under various culture mediumTable 3. The summary of making cost for S.
platensis
medium (1L)Medium element
Cost (won/g)
SP SOT Zarrouk
Consumption (g)
Cost (won)
Consum- ption
(g) cost (won)
Consum- ption
(g) cost (won)
NaHCO3 9 13.6100 122.49 16.8000 151.20 6.0000 54.00 Na2CO3 21 4.0300 84.63 - - 1.0000 21.00 NaCl 10 - - 1.0000 10.00 1.5000 15.00 K2HPO4 20 0.5000 10.00 0.5000 10.00 0.5000 10.00 K2SO4 25 1.0000 25.00 1.0000 25.00 1.0000 25.00 CaCl2·2H2O 28 0.0400 1.12 0.0400 1.12 0.0400 1.12 MgSO4·7H2O 14 0.2000 2.80 0.2000 2.80 0.2000 2.80 FeSO4·7H2O 28 0.0100 0.28 0.0100 0.28 0.0100 0.28 Na2EDTA 46 0.0800 3.68 0.0800 3.68 0.0800 3.68
Soil 60 - - - - 2.0000 120.00
NaNO3 15 2.5000 37.50 2.5000 37.50 2.5000 37.50
Medium element
Cost (won/g)
SP SOT Zarrouk
Consumption (g) Cost
(won) Consum-
ption (g)
cost (won)
Consum- ption
(g) cost (won)
H3BO3 16 0.6200 9.92 2.8600 45.76 - - MnSO4·7H2O 50 - - 2.5000 125.00 - - ZnSO4·7H2O 14 0.0400 0.56 0.2200 3.08 - - CuSO4·5H2O 25 0.0200 0.50 0.0800 2.00 - - Na2MoO4·2H2O 110 0.0100 1.10 0.0200 2.20 - - A5 solution 120 - - 0.1000 12.00 - - vitamin B12 10,000 0.0015 15.00 - - - -
Total 314.58 431.62 290.38
3.3 저비용 배지를 이용한
S
.platensis
성장 실험 및 경제성 분석경제적인
S. platensis
의 배지조성을 목적으로 국내에 서 생산되는 복합비료를 이용하여S. platensis
의 성장 실험을 수행한 결과, 배양 34일후에 medium A와 B에 서 최대 바이오매스가 1.65, 1.67gL로 SP 배지조건 대 비 가장S. platensis
의 성장이 좋았으며, medium C, D 및 E에서는 각각 1.27, 1.03 그리고 0.96g/L로 A와 B보 다 상대적으로 낮은 성장을 보였다. 이는 medium C, D 및 E조건의 복합비료내 미생물이나 조류 등에 살균 특 성을 보이는 Cl 이나 Br 이온의 함량이 A와 B조건보다 높았기 때문으로 사료된다. Table 4는 Fig. 4와 식(1)을 이용하여S. platensis
단위질량 생산에 따른 저비용 배 지제조 비용을 비교 분석하였다. 배지제조 비용이 3.5 원/L인 저비용 배지 중 가장S. platensis
의 성장이 좋 았던 medium A와 B조건에서S. platensis
단위질량 생 산에 따른 저비용 배지제조 비용은 2.21원/g과 2.10원/g 으로 분석되었다. 이는 140.44원/g의 SP 배지에 약 1.5%정도 밖에 차지하지 않았으므로 본 연구에 사용된 복합비료인 medium A와 B는S. platensis
를 대량으로 생산함에 있어 경제적인 배지로 활용 가능하다 판단되 어 진다.Spirulina
생산시설 운영비용 중 약 21%정도 차지하는 배양액 조성비용을 절감하기 위하여 많은 연 구가 수행되었다. Basirath 등 (2006) 은Spirulina
의 저 비용 생산을 위하여 상업용 액체비료와 화학약품을 배 합한 배지와 기존의Spirulina
배지 (Zarrouk 배지) 조건에서
Spirulina
의 성장률과 배지제조단가를 비교분석한 결과, 배양 18일 경과시 바이오매스는 Zarrouk 배지 조건에서 0.582g/L, 저비용배지조건에서 0.565g/L로 유 사한 성장특성을 보였으나 배지 재조단가는 배지 1L제 조 기준으로 Zarrouk 배지는 USD 79.5$ 이였으나 저비 용배지는 Zarrouk 배지단가의 약 20%정도인 USD 16$
이였다. Affan 등 (2015)은
S. maxima
의 경제적인 생산 을 위하여 배지를 천연해수내 존재하는 Ca2+와 Mg2+ 등 의 불순물을 처리 목적으로 역청탄과 수산화나트륨을 이용한 전처리를 통하여 경제적인 배지를 개발하는 연 구를 수행하였다. 그 결과, 저비용 배지와 기존배지 (SOT)의S
.maxima
성장율은 유사하였으나, 배지제조 단가는 1L 제조 기준으로 SOT 배지는 USD 170.15$이였으며, 저비용 배지 는 USD 57.6$로 SOT 배지보다 약 2.95배 적었다. Fedekar 등 (2012) 는
S. platensis
배지 로 가장 많이 사용되는 Zarrouk 배지보다 더 경제적인 배지를 만들기 위해서 Zarrouk 배지의 질소원인 29.42mM(2.5g/L)의 NaNO3 대신 2가지의 질소원으로 NH4NO3 과 urea (CO·(NH2)2)을 10%, 20%, 30%, 40%조건에서
S. platensis
의 성장실험을 수행한 결과, NH4NO3 기반의 30% 배지조건에서 Zarrouk 배지와 유 사한 바이오 매스값을 획득하였다.Table 4. The summary of S.
platensis
production cost using various low cost mediumMedium Biomass, A Cost, B Production cost, B/A (g/L) (won/L) (won/g)
SP 2.24 314.58 140.44
A 1.65 3.50 2.12
B 1.67 3.50 2.10
C 1.27 3.50 2.76
D 1.03 3.50 3.40
E 0.96 3.50 3.65
Figure 4. Growth curve of S.
platensis
under various low cost medium4. 결론
Spirulina
의 경제적인 생산을 위하여 다양한 배지 조건에서
S. platensis
의 성장특성과 경제성을 비교분석한결과, SP 배지에서 접종 약 30일후 초기농도의 약 46.5 배정도 성장하여 시간당 생산량은 0.0077 g/d로 나타 났다. 배지조성에 따른
S. platensis
의 성장 특성을 파 악한 결과, SP 배지조건에서 가장 높은 성장을 보였으 며, SOT 배지는 SP 배지의 약 70%, Zarrouk 배지 조건 에서는 SP 배지의 약 26%의 성장특성을 보였다. 단위 질량 생산에 따른 배지제조 비용은 SP 배지조건에서 140.44원/g, SOT 배지는 241.13원 그리고 Zarrouk 배지 는 256.97원으로 산정되었다. 저비용 배지를 이용하여S. platensis
의 성장실험을 수행한 결과, Cl 이나 Br 이 온의 함량이 상대적으로 낮은 medium A와 B에서 가장성장이 좋았다. 단위질량 생산에 따른 저비용 배지제 조 비용을 비교 분석한 결과, medium A와 B에서 2.21 원/g과 2.10원/g으로 분석되어 SP 배지에 약 1.5%정도 밖에 차지하지 않았다. 따라서 본 연구에 사용된 복합 비료인 medium A와 B는
S. platensis
를 대량으로 생산 함에 있어 경제적인 배지로 활용 가능하다 판단되어 진다.사 사
본 연구는 중소기업청에서 지원하는 2014년도 창업 성장기술개발사업(과제번호: S2155851)의 지원을 받아 수행된 연구입니다.
참고문헌
1. Affan, M.A., Lee, D.W., Jeon, S.M., Noh, J.H, Heo, S.J., Oh, C., Park, H.S., Khomayis, S.A. and Kang, D.H., Bituminous coal and sodium hydroxide-pretreated seawater stimulates
Spirulina (Arthrospira) maxima
growth with decreased production costs, Aquaculture, 436, 121-126 (2015).2. Ahsan, MB., Mashuda, P., Tim, CH., and Mohammad, RH., A review on culture, production and use of Spirulina as food for humans and feeds for domestic animals and fish. FAO Fisheries and Aquaculture Circular, 1034, 4-7 (2008).
3. Akao, Y., Ebihara, T., Masuda, H., Saeki, Y., Akazawa, T., Hazeki, K., Hazeki, O., Matsumoto, M., and Seya, T., Enhancement of antitumor natural killer cell activation by orally administered Spirulina extract in mice. Cancer Science, 100, 1494-1501 (2009).
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