제12장 현미경 관찰용
목재 시료 제작법
○ 영구프레파라트 시료 제작 순서
◦ 목재 시편 준비 → 연화처리 → 박절편 제작 → 염색 → 탈수 → 봉입 → 건조
1. 광학현미경 시료 제작법
봉입 → 건조
가. 목재 시편 준비
- 크기: 약 10(T)ｘ10(R)ｘ10(L)mm
- 3개 준비: 횡단면, 방사단면, 접선단면용 시료 제작 - 각 3단면이 정확하게 나타나도록 트리밍
나. 연화처리
- 목적: 단단한 목재조직을 연화시켜 깨끗한 면의 박절편 제작 - 용액: 물과 글리세린을 일정 배합비로 혼합한 혼합액
(물 3~4 : 글리세린 1)
- 오토클레이브 (고온멸균기) 사용하여 약 1시간 자비
다. 박절편 제작
- 슬라이딩마이크로톰 - 두께: 약 20~30 ㎛
- 횡단면, 방사단면, 접선단면 시료
라. 염색
- 염색제: Safranine
- 염색액: 1% Safranine ㆍ알콜(50%) 용액
마. 세척 및 탈수
- 세척: 수도수(과잉의 염색액 제거)
- 탈수: 에탄올 시리즈(50%-70%-90%-99.5%-100%) - 탈수 시간: 1~수분
사. 봉입
- 봉입제: Canada balsam(Xylene으로 점도 조절) - 슬라이드글라스, 커버글라스
아. 건조
- 시료를 올려놓아 봉입한 슬라이드글라스 - 세탁용 집게로 집어 1주야 방치
- 과잉의 Canada balsam 제거(여과지)
자. 관찰
- 생물현미경(광학현미경, 디지털 카메라 장착) - 3단면(횡단면, 방사단면, 접선단면)
- 각 단면의 조직특징 관찰하며 사진 촬영
○ 제작 순서
◦ 목재 시편 준비 → 연화처리 → 동결마이크로톰 절삭 → 탈수 → 임계점 건조 → 시료대 설치(마운팅) → 금 코팅
2. 주사전자현미경 시료 제작법
임계점 건조 → 시료대 설치(마운팅) → 금 코팅
가. 목재 시편 준비
- 크기: 약 50(T)ｘ50®ｘ50(L)mm
- 3개 준비: 횡단면, 방사단면, 접선단면용 시료 제작 - 각 3단면이 정확하게 나타나도록 트리밍
나. 연화처리
- 목적: 단단한 목재조직을 연화시켜 깨끗한 면의 박절편 제작 - 용액: 물과 글리세린을 일정 배합비로 혼합한 혼합액
(물 3~4 : 글리세린 1)
- 오토클레이브 (고온멸균기) 사용하여 약 1시간 자비
다. 동결마이크로톰 절삭
- 목적: 깨끗한 단면 노출
- 3단면 시료 준비: 횡단면, 방사단면, 접선단면
라. 탈수
- 탈수: 에탄올 시리즈(50%-70%-90%-99.5%-100%) - 탈수 시간: 각 단계 별로 1주야
마. 임계점 건조
- 액화이산화탄소
바. 시료 설치
- 접착제: 카본 양면테이프 - 마무리: 은 페이스트
- 알루미늄 시료대
사. 코팅
- 목적: 생물시료에 도전성 부여 - 코팅제: 금
아. 시료 장착
- 주사전자현미경 시료실
자. 관찰
- 관찰 조건
가속전압: 15~20kV
Working distance: 약 5~8mm
