In Vitro Selection of MRSA Strains Resistant to Some New Fluoroquinolone Antibiotics and Characterization of their Resistance Mechanisms

새로운 플루오로 퀴놀론계 항균제에 대한 내성 MRSA 균주의 In Vitro 선발과 그 내성 기전 분석

윤은정

*

^·김현지

*

^{·이춘영·최응칠}

*

^·심미자#

서울시립대학교 생명과학과, *서울대학교 약학대학종합 약학 연구소

(Received March 27, 2008; Revised April 25, 2008)

In Vitro Selection of MRSA Strains Resistant to Some New Fluoroquinolone Antibiotics and Characterization of their Resistance Mechanisms

Eun-Jeong Yoon*, Hyunjee Kim*, Chun-Yeong Lee, Eung-Chil Choi* and Mi-Ja Shim

^#

Department of Life Science, University of Seoul, Seoul 130-743, Korea

*College of Pharmacy and Research Institute of Pharmaceutical Sciences, Seoul National University, Seoul 151-742, Korea

Abstract

— Clinically isolated methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains were exposed to subinhibitory concen- tration of DW286, DW-224a, gemifloxacin, trovafloxacin, sparfloxacin and ciprofloxacin during 26- to 39-days period. Sub- culturing led to resistance development, and most of the selected mutants were above susceptible breakpoints. Selected mutants had broad cross resistance to other quinolone antibiotics and only one mutant was completely susceptible to all flu- oroquinolones. Twenty five among 42 mutants revealed mutations on DNA gyrase and topoisomerase IV by sequencing.

Also 16 mutants had fluoroquinolones MICs that were 4-32 times lower in the presence of reserpine. In conclusion, alter- ations in DNA gyrase or topoisomerase IV and action of efflux pumping out system are the resistance mechanisms of DW- 224a.

Keywords □

quinolone, DNA gyrase, topoisomerase IV, MRSA, QRDR

플루오로퀴놀론계항균제는

, ATP

의존효소인

DNA gyrase

와

topoisomerase IV

^{의작용을방해하여}

DNA

^{이중나선구조의}

풀림과정을저지함으로써살균효과를나타낸다

.

이들플루오 로퀴놀론계항균제는본래그람양성균을포함하는항균범위를 가진다

.

^{새로이개발되는플루오로퀴놀론계항균제는원내감염}

의대표적원인균인메치실린내성황색포도상구균

(Methicillin Resistant

Staphylococcus aureus

, MRSA)

을포함하는다약제내 성그람양성균에항균력을가질수있도록지속적으로발전되 고있다

.

^1-3)그러나퀴놀론계항균제의광범위한사용으로

,

기존 에사용되고있던항균제는물론이고새로이개발되는플루오로 퀴놀론계항균제에마저내성을가지는황색포도상구균이증가 하고있어문제가되고있다

.

^4,5)퀴놀론계항균제에내성을보이 게되는기전은

DNA gyrase

의일부인 gyrA와 gyrB상의염기

변이

, topoisomerase IV

의일부인grlA와grlB상의염기변이

,

항균제유출펌프의작동으로인한약물투과력변화의

3

^가지인

것으로알려져있다

.

^6,7)이중에서도실험실이나임상에서분리 된퀴놀론계항균제내성황색포도상구균

(Quinolone Resistant

Staphylococcus aureus

, QRSA)

^{의 경우 주로}

DNA gyrase

^와

topoisomerase IV

^{의일정구간에점변이가일어남으로써내성이}

나타나는것으로보고되고있으며

,

이부분을퀴놀론내성결정 부위

(Quinolone Resistance Determining Region, QRDR)

^라고

부른다

.

^6,7)

DW-224a(1-cyclopropyl-6-fluoro-7-[8-(methoxyimino)-2,6dia- zaspiro[3,4]oct-6-yl]-4-oxo-1,4-dihydro[1,8]naphthyridine-3-car- boxylic acid hydrochloride)

는국내제약회사에서개발중인플루 오로퀴놀론항균제이다

(Fig. 1). DW-224a

는

MRSA, QRSA

및 폐렴쌍구균을포함하는그람양성구균에효과적인 in vitro활 성을보이는것으로알려져있으며

,

그람양성구균에의한마우 스의전신감염증에대한in vivo적용에도좋은효과를보인바

있다

.

^{8-10)본실험에서는}

,

^{퀴놀론계항균제에감수성인}

7

^개

MRSA

#본논문에관한문의는저자에게로

(

^전화

) 02-2210-2490 (

^팩스

) 02-2210-2490

(E-mail) [email protected]

균주를

DW-224a

^{및다른퀴놀론계항균제에순차적으로노출시}

켜내성을유발하고

,

¹¹⁾이들을대상으로다른퀴놀론계항균제 에대한교차내성을관찰하고

, DNA gyrase

^와

topoisomerase IV

에일어난돌연변이를관찰하여내성의분자생물학적기전을분 석함으로써감염증의치료과정에서발생할수있는내성을예측 해보고자하였다

.

실험 방법

항균물질

본실험에사용된

DW-224a

와

DW286

은동화약품주식회사

(An-Yang, Korea)

^{에서합성한것을이용하였다}

.

^{비교를위해}

,

^기

존에이용되고있던플루오로퀴놀론계항균제인

ciprofloxacin (CIP, Bayer, Inc., West Haven, Conn.), gemifloxacin(GEM, LG Biotech, Seoul, Korea), sparfloxacin(SPX, Rhone-Poulene Rorer, Collegeville, Pa.), trovafloxacin(TVA, Pfizer, Inc., New York, NY, USA)

^{을이용하였다}

.

세균균주

서울의

3

^{차의료기관에서}

1999

^년에서

2005

^{년에걸쳐임상적}

으로분리된포도상구균중옥사실린에내성

(oxacillin MIC 4

^µ

g/

m

l

)

이며

CIP

에감수성

(CIP MIC 1

µ

g/m

l

)

인

7

주의

MRSA

를선 발하여이용하였다

.

MIC의측정

실험 대상 균종에대한 항균물질에대한 최소 억제 농도

(Minimal Inhibitory Concentration, MIC)

의 측정은

, Clinical Laboratory Standard Institutes(CLSI)

의고체배지희석법에의 하여실시하였다

.

^{12)각항균제는}

,

^{최고농도가}

64

^µ

g/m

^l가되도

록하여

,

이농도에서부터

2

배계열희석하여최저농도가

0.06

µ

g/

m

l이되도록항균물질희석계열을만들었으며

,

계열희석된항균

물질의 농도는

CLSI

^{에서 권장하는}

ATCC

^{균주를 이용하여}

quality control

하였다

.

여기에전배양한균액을희석하여최종

균액 농도가

10

⁶

CFU/m

^{l가 되도록 한 뒤}

, microinoculator (Sakuma Co., Ltd, Tokyo, Japan)

를이용하여각균액을

5

µl씩 접종하였다

.

^{균의성장을관찰할수없는최소농도를}

MIC

^로

결정하였고

,

내성의 기준은

CLSI

의

breakpoint

등에 따라

CIP

^≤

2

^µ

g/m

^l

, GEM

^≤

1

^µ

g/m

^l

, SPX

^≤

0.5

^µ

g/m

^l

, TVA

^≤

1

^µ

g/m

^l

, DW286

^≤

1

^µ

g/m

^l

, DW-224a

^≤

1

^µ

g/m

^{l로하였다}

.

¹³⁾

순차계대배양

항균제가들어있지않은

MH broth

^{에모균주를접종하여}

37

^o

C

에서

18

시간동안배양하였다

.

이균액을

MIC

의전후

2

단계계 열희석항균제를포함하는

broth

에최종

10

⁴

cfu/m

l이되도록접 종하였다

. 37

^o

C

^에서

24

^{시간동안키운후}

,

^{항균제가들어있지않}

은배지와같은탁도를가지는최고농도의계열희석액을골라 같은방법으로계대배양을실시하였다

.

^{이와같은순차계대배}

양은약

40

^{일간반복하였다}

.

^{선발된돌연변이주들은항균제가들}

어있지않은

MH agar

배지에서

10

번의계대배양을거친후에

15%

^의

glycerol

^{을포함하도록하여다음과정을진행하기전까}

지

-70

^o

C

^{에보관하였다}

.

퀴놀론내성결정부위의변이분석

순차계대를통해선발된돌연변이체들의퀴놀론계항균제표 적부위에어떤변이가있었는지를확인하기위하여 grlA

,

grlB

,

gyrA와gyrB를

PCR

^{법으로증폭하였다}

.

^gyrB

-

^gyrA의

5'primer, CAGCGTTAGATGTAGCAAGC

^와

3'primer, CAGGACCTTCA- ATATCCTCC

로

1401 bp

의

PCR product

를 얻었고

,

grlB

-

grlA 의

5'primer, CGATTAAAGCACAACAAGCAAG

^와

3'primer, CTTGATGGCAATACCATTGGTTC

^로

1332 bp

^의

PCR product

를얻었다

. PCR

반응은

95

에서

5

분간초기변성후

, 97

^o

C

에서

30

^초

,

^gyrB

-

^{gyrA의 경우는}

50

^o

C,

^grlB

-

^{grlA의경우는}

54

^o

C

^에서

30

^초

, 72

^o

C

^에서

1

^{분의반응을}

30

^{회반복한뒤}

, 72

^o

C

^에서

10

^분간

최종신장및마무리하였다

.

이렇게얻어진반응산물을

PCR product purification kit(INtRON Biotechnology Inc.)

^를이용하

여정제하고

,

그정제물을

Applied Biosystems automatic DNA

Fig. 1 −

The chemical structures of DW286 and DW-224a.

sequencer

로염기서열을분석하였다

.

항균제유출펌프

일정균주의

MIC

가

reserpine

에의해

4

배이상낮아질경우 에

,

^{항균제유출펌프가작동되고있다고판단한다}

.

^{14)선발된돌}

연변이체들과모균주를

, 20

^µ

g/m

^l의

reserpine(Sigma, St Louis,

MO, USA)

이포함되어있는배지와포함되어있지않은배지에서

각각

MIC

^{를결정하여차이가생기는지를비교하였다}

.

실험결과 및 고찰

돌연변이체들은

26

^회에서

39

^{회의순차계대배양을거쳐선발}

하였다

.

순차계대배양에사용한

MRSA

모균주의

MIC

와순차 계대를통해증가된

MIC

^를

Table I

^{에나타내었다}

.

^{각각의모균}

주는

,

순차계대배양에사용했던항균제에따라서로조금씩다 른내성획득양상을보였다

. TVA

와

DW286

으로처리한경우 의

MIC

^{가가장느리게상승하였으며}

, CIP

^{로처리한경우의}

MIC

가가장빠르고높게상승하여플루오로퀴놀론계항균제의세 대별차이를확인할수있었다

.

^{돌연변이체들은모두항균제가}

들어있지않은배지에서

10

^{회의계대배양을거치며내성을안}

정화시켰다

.

안정화과정을거치면서

, 42

개의돌연변이체중

24

개 돌연변이체들의

MIC

^{가소폭하락하였으며}

(Table I),

^이렇게얻

어진값을최종

MIC

^{로결정하였다}

. CIP

^의

MIC

^{는순차계대후}

에

0.25~0.5

µ

g/m

l에서

16~128

µ

g/m

l로

6

에서

11

단계상승하 였고

, SPX

^의

MIC

^는

0.03~0.06

^µ

g/m

^l에서

1~2

^µ

g/m

^l로

4

^에서

6

^{단계상승하였다}

. TVA

^의

MIC

^는

0.03~0.06

^µ

g/m

^l에서

0.25~

8

µ

g/m

l로

2

에서

6

단계상승하였으며

, 7

개대상균주중

3

개돌 연변이체만

breakpoint

^{이상으로올라가고나머지는순차계대}

가끝날때까지감수성을유지하였다

. GEM

^의

MIC

^는

0.03~0.06

µ

g/m

l에서

4~128

µ

g/m

l로

6

에서

11

단계상승하였고

, DW-224a

는

0.004~0.03

^µ

g/m

^l에서

2~32

^µ

g/m

^l로

7

^에서

10

^{단계상승하}

였다

. DW286

^{은모든대상균주들에대해초기}

MIC

^가가장낮

았으며

,

순차계대배양을실시한

7

개의대상균주중

2

개균주 만

breakpoint

^{이상으로올라갔다}

.

^{얻어진최종의}

MIC

^값과그

Table I −

Initial and final MICs of strains for the serial passages and MICs of stabilized strains

Strain

　

Selecting agents MIC (

^µ

g/m l )

DW286 DW-224a GEM TVA SPX CIP

SA1 MIC (

^µ

g/m l ) Initial 0.008 0.03 0.03 0.03 0.06 0.5

Final 0.25 32 128 0.5 4 128

Stabilized**

^0.25*

8 4

^0.5

2 128

No. of passages 32 38 38 32 32 32

SA2 MIC (

^µ

g/m l ) Initial 0.008 0.03 0.03 0.06 0.06 0.25

Final 8 32 32 1 2 256

Stabilized 2 8 4

^0.25

2 32

No. of passages 29 29 29 29 29 29

SA3 MIC (

^µ

g/m l ) Initial 0.008 0.03 0.03 0.03 0.06 0.25

Final 0.25 4 64 8 2 512

Stabilized

^0.25

4 64 8 2 16

No. of passages 26 26 26 26 26 26

SA4 MIC (

^µ

g/m l ) Initial 0.008 0.03 0.03 0.06 0.06 0.25

Final 16 64 128 0.5 4 256

Stabilized 4 8 128

^0.5

2 128

No. of passages 39 39 39 33 33 35

SA5 MIC (

^µ

g/m l ) Initial 0.008 0.03 0.03 0.03 0.06 0.25

Final 1 32 32 4 2 128

Stabilized

¹

32 4 2

¹

64

No. of passages 29 29 29 29 29 29

SA6 MIC (

^µ

g/m l ) Initial 0.25 0.004 0.06 0.03 0.03 0.015

Final 0.12 4 4 4 4 128

Stabilized

^0.12

2 4 2 2 32

No. of passages 26 26 26 26 26 26

SA7 MIC (

^µ

g/m l ) Initial 0.008 0.015 0.03 0.03 0.06 0.5

Final 0.25 32 8 4 2 512

Stabilized

^0.12

4 8

^{1 1}

128

No. of passages 29 29 29 29 29 29

*Bold numbers mean under the breakpoint.

**All the mutants were stabilized by 10 antibiotic-free subcultures.

에대한

susceptibility

는플루오로퀴놀론계항생제의세대에따 라차이를보였다

.

^{이에따라신규플루오로퀴놀론계항균제}

, DW286

^{은최상위단계의세대로}

, DW-224a

^는

GEM

^과같은

4

^세

대로판단하였다

.

7

개모균주로부터

6

가지의퀴놀론계항생제로순차계대배양 하여선발한

42

^{개돌연변이체들에대해퀴놀론계항균제에대한}

교차내성을확인한결과

, SA2

^에서

TVA

^{로선발한돌연변이를}

제외한모든균주가순차계대배양이전에비해다양한플루오

Table II −

Cross resistance and alterations in DNA gyrase and topoisomerase IV of selected mutants

Strain Selecting agents MIC (

^µ

g/m l ) Alterations on enzymes of:

DW286 DW-224a GEM TVA SPX CIP GyrA GyrB GrlA GrlB

SA1

DW286 0.25

^{4 4}

0.5

^{2 32}

DW-224a 0.5

8 4

0.5

2 32

GEM

^{4 64 64 8 64 >64}

G82C S80F

TVA 0.06 0.5 0.5 0.5

^{1 8}

E590K

SPX 0.12 0.5 0.5 0.5

^{2 4}

M86I

CIP 0.25

^{4 4 2 2 >64}

S84del E84G S80F

SA2

DW286

2 32 16

1

8 >64

E84K L515F

DW-224a 0.25

^{8 4}

0.5 0.5

³²

E472K

GEM 0.5

^{8 4}

1

^{2 >64}

TVA 0.06 0.06 0.12 0.25 0.25 1 ND ND ND ND

SPX 0.25

2 2 2 2 16

CIP 0.06 1 0.5 0.5 0.5

³²

SA3

DW286 0.25 1 1 0.5

^{1 8}

DW-224a 0.06

⁴

2 0.25

^{1 16}

GEM

2 64 64 8 64 >64

S84L E84K N584K

TVA

^{16 16 8 8 4 32}

SPX 0.25 1 1

^{8 2 8}

CIP 0.06 1 0.5 0.25 0.5

¹⁶

S80F

SA4

DW286

4 64 64 16 64 >64

S84L S80F H633R

DW-224a 0.5

^{8 8 4 8 >64}

E88G W592R D79N

GEM

^{8 >64 >64 32 64 >64}

S84L A116L

TVA 0.06 1 1 0.5

^{1 16}

W592R D79N

M86I

SPX 0.12 0.5 0.5 0.5

^{2 8}

E84G V87F

CIP 1

^{8 16 4 8 >64}

S84L A116E M86I

SA5

DW 286 1

^{32 16}

1

^{2 >64}

DW-224a 1

^{32 16}

1

^{2 >64}

S84L P585T

GEM 0.5

^{8 4}

1

^{1 >64}

A116P

TVA 0.5 1 1

^{2 2 32}

S84A A116P T557R

SPX 0.12 1 1 0.5

^{1 4}

E84G

CIP 0.12 1 1 0.5 0.12

⁶⁴

M86I

SA6

DW 286 0.12

4 8

1

1 32

G623D D79N

DW-224a 0.12

²

1 0.5 0.5

³²

GEM 1

^{64 4}

1

^{2 32}

TVA 0.12 0.5 0.5

²

0.5

⁸

A120E S80F

SPX 1

4 2

1

2 8

S84L

S85P E84V

CIP 0.06

4

1 0.5 0.12

32

SA7

DW 286 0.12 1 1 1 0.5

⁸

S80F

DW-224a 0.5

^{4 2}

0.5

^{1 32}

E88G A588E S108N

GEM 1

^{8 8}

1

^{1 64}

TVA 0.06 0.12 0.25 1 0.5

16

S80F

SPX 0.5

²

1 1

^{1 4}

CIP 1

^{64 32 2 64 >64}

S84L E84K

*Bold numbers mean cross resistance.

로퀴놀론계항균제에교차내성을가지게되었음을확인하였다

(Table II).

^{이후의돌연변이주에대한통계는이}

1

^{개균주를제}

외한나머지를

41

^{개주를대상으로하였다}

. 41

^{개돌연변이주모}

두

CIP

에내성이었고

, 32

주

(78.0%)

는

SPX

에교차내성이었다

. TVA

^는

13

^주

(31.7%)

^{에서 교차내성을가지고있었으며}

, 27

^주

(65.9%)

^{에서교차내성을보였던}

DW-224a

^는

24

^주

(58.5%)

^에서

교차내성이나타난

GEM

과비슷한정도였다

. DW286

은교차내 성정도가 가장낮아서

, 6

^주

(14.6%)

^{에서만교차내성이발견되}

었다

.

DNA gyrase

와

topoisomerase IV

에서발견된변이는

Table II

에정리하였다

.

^{모균주는모두이들효소에아무런변이도가지}

고있지않음을미리확인하였다

. DNA gyrase

^{의gyrA유전자에}

서는

,

총

6

가지의점돌연변이와

1

가지의결손돌연변이가발견 되었다

. 22.0%

^{에해당하는돌연변이가}

S84

^{에서일어난변이였}

으며

,

^{그중하나는}

S84

^{의결손돌연변이였다}

. E88

^{에서일어난}

변이는

4.9%

에달했으며

, S84

와

E88

에서일어나는변이는이미 gyrA에서가장많이보고된바있다

.

^이밖에도

A120E, G82C, S85P

^{의점돌연변이가발견되었다}

.

^{이전의발표에따르면}

,

^gyrA

유전자에일어난변이는대부분의균주에서내성발전의주요한 요인이나

,

^{gyrB는그렇지않다고알려져있다}

.

^{15)하지만이번실}

험에서는전체분석균주중

9.8%

에서 gyrB의변이가발견되었

다

.

모든 변이는처음 발견된변이였으며

, A588E, G623D

와

W592R

^{로다양하였다}

. DNA topoisomerase IV

^에서는

L124

^의

silent mutation

을포함하여

14

가지의점돌연변이가발견되었다

. S80F

의점돌연변이와

E84

에서일어난변이가

17.1%

씩으로가 장많았으며

,

^{그뒤를이어}

A116

^과

M86I, D79, S108

^에서일어

난변이가각

9.8%, 9.8%, 7.3%, 2.4%

로나타났다

.

grlA에는

, 2

가지또는

, 3

^{가지의점돌연변이를함께가지고있는균주도각}

7.3%, 2.4%

^{씩발견되었다}

.

^{grlB에서는}

E472K, E590K, H633R, L515F, N584K, P585T

와

T557R

의변이가각

1

건씩

(2.4%)

발견 되었다

.

^{임상에서분리된퀴놀론내성폐렴쌍구균에서도이와같}

은분석이시도된바있으며

,

^{16)본실험에서나타난결과와같이}

그작용부위로보여지는

DNA gyrase

및

DNA topoisomerase IV

^{에서다양한변이가발견되었음이보고되었다}

.

DNA gyrase

^와

topoisomerase IV

^{의 gyrA}

,

^grlA

,

^gyrB

,

^grlB

에서아무런변이도발견되지않은돌연변이체는

41

개돌연변이 주중

16

^주였다

.

^{이들에대해항생제유출펌프의작동으로인}

한내성의발전을확인하고자

reserpine

^{이함유된배지에서플}

루오로퀴놀론계항균제에대한

MIC

에차이가생기는지를확인 하였고 그 결과를

Table III

^{에 표시하였다}

.

^이들

16

^{주 모두}

reserpine

^{에의해플루오로퀴놀론계항균제일부에대해}

4

^단계

이상의

MIC

하강이관찰되었다

.

이를통해항균제유출펌프의

작용으로인해내성이발전되었다는것을예측할수있었다

.

^막

결합단백질인

NorA

는세균안으로들어온항균제를구조적유

사성과관계없이세균막밖으로유출시켜세균안에유효농도 이상의항균제가축적되지않게함으로써내성을유발한다

.

^14)이

유전자에의해 일어나는 항균제내성은식물알칼로이드인

reserpine

에의해저해되므로

reserpine

에의해

MIC

가하강하면

NorA

^{에의해내성이발전되었다고생각할수있다}

.

^즉이들

16

개돌연변이체들은

DNA gyrase

및

topoisomerase IV

의변이가

아닌

NorA

에의해내성이발전된것으로볼수있었다

.

또한

reserpine

^{을처리했을경우그}

MIC

^{에영향을가장많이받는것}

Table III −

MIC determination with or without reserpine for the mutants having no alterations in DNA gyrase or topoisomerase IV

　 　

DW286 DW224a GMFX TVFX SPFX CPFX

　

reserpine (-) (+)

^R*

(-) (+)

^R

(-) (+)

^R

(-) (+)

^R

(-) (+)

^R

(-) (+)

^R

SA1 DW286 - -

^-

4 0.5

⁸

4 0.5

⁸

- -

^-

- -

^-

32 4

⁸

DW-224a 0.5 0.12

⁴

8 0.5

¹⁶

4 0.5

⁸

- -

^-

- -

^-

32 4

⁸

SA2 GEM - -

-

8 2

4

4 1

4

1 0.25

4

- -

-

>64 16

>8

SPX - -

^-

2 0.5

⁴

- -

^-

- -

^-

- -

^-

- -

^-

CIP - -

^-

1 0.25

⁴

- -

^-

- -

^-

- -

^-

32 4

⁸

SA3 DW286 - -

^-

1 0.12

⁸

1 0.12

⁸

- -

^-

- -

^-

8 2

⁴

DW-224a - -

^-

4 0.25

¹⁶

2 0.25

⁸

- -

^-

- -

^-

16 4

⁴

TVA 16 0.5

³²

16 0.5

³²

8 1

⁸

- -

^-

- -

^-

32 4

⁸

SPX - -

^-

1 0.25

⁴

1 0.12

⁸

8 0.5

¹⁶

- -

^-

8 2

⁴

SA5 DW 286 - -

^-

32 2

¹⁶

16 0.5

³²

- -

^-

- -

^-

>64 4

^>16

CIP - -

^-

1 0.25

⁴

1 0.12

⁸

- -

^-

- -

^-

64 4

¹⁶

SA6 DW-224a - -

-

2 0.25

8

1 0.25

4

- -

-

- -

-

32 1

32

GEM - -

^-

64 1

⁶⁴

4 1

⁴

1 0.25

⁴

- -

^-

32 4

⁸

CIP - -

^-

4 0.06

⁶⁴

1 0.12

⁸

- -

^-

- -

^-

32 2

¹⁶

SA7 GEM 1 0.25

⁴

8 0.5

¹⁶

8 0.5

¹⁶

1 0.25

⁴

- -

^-

64 4

¹⁶

SPX - -

^-

2 0.5

⁴

- -

^-

- -

^-

- -

^-

- -

^-

*R means ratios MIC without reserpine/with reserpine

^.

이

DW-224a

인것으로보여져이에대한후속연구가필요할것 으로보인다

.

결 론

DW-224a

^는

MRSA

^{에대해효과가좋은플루오로퀴놀론계항}

균제이다

.

하지만

MRSA

가

DW-224a

에여러계대에걸쳐노출 되면

, DW286

^이나

TVA

^{등의플루오로퀴놀론계항균제들에비}

해빠르게내성을획득하였다

.

^다만

DW286

^{은in vivo실험후}

에그개발이중단된상태이며

TVA

는임상적용이중단된상태 임을감안한다면

, GEM

^{과비슷한정도의내성발전정도를가지}

는

,

^{임상에서사용될수있는가장효과적인플루오로퀴놀론계}

항균제라고할수있겠다

. DW-224a

내성돌연변이주들은

DNA gyrase

^{의일부인gyrA와}

topoisomerase IV

^{의일부인grlA의변이}

가확인되었다

.

^{이와같은결과는}

DNA gyrase

^와

topoisomerase IV

가

DW-224a

의이중작용점을가지고있음을증명하는것이라 고할수있다

.

감사의 말씀

이논문은서울시립대학교

2007

년도학술연구조성비에의하 여연구되었습니다

.

이에서울시립대학교에감사하는바입니다

.

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