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책임저자: 이정균, 전북 익산시 신룡동 344-2
570-711, 원광대학교 의과대학 외과학교실 Tel: 063-859-1492, Fax: 063-855-2386
E-mail: [email protected]
접수일：2009년 11월 3일, 게재승인일：2010년 1월 25일 이 논문은 2009년도 원광대학교 교비지원에 의해 수행됨.
위암 발생의 민감성과 RNase3 유전자 다형성과의 연관성
원광대학교 의과대학 외과학교실, 1영상의학과교실, 2병리학교실, 의과학연구소
구자욱ㆍ강동백ㆍ박원철ㆍ이영환
1ㆍ강인홍
2ㆍ채수천
2ㆍ이정균
Association of RNase3 Polymorphisms with the Susceptibility of Gastric Cancer
Ja Wook Koo, M.D., Dong Baek Kang, M.D., Won Cheol Park, M.D., Young Hwan Lee, M.D.1, In Hong Kang, M.S.2, Soo Cheon Chae, Ph.D.2, Jeong Kyun Lee, M.D.
Departments of Surgery, 1Radiology, and 2Pathology, Institute of Medical Science, College of Medicine, Wonkwang University, Iksan, Korea
Purpose: RNase3 is a secretory ribonuclease, which is found in the eosinophilic leukocyte and involved in the innate immune system. Its cytotoxic activity is effective against a wide range of pathogens. We performed a case-control study to examine the relationship between RNase3 polymorphisms and the susceptibility of gastric cancer in Korean people.
Methods: Blood sampling of stomach cancer and healthy persons groups were performed, Taqman in g.-550A＞G, polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism in g.371C＞G, and high-resolution melt in g.499C＞G were analyzed. The three single nucleotide polymorphisms g.-550A＞G, g.371C＞G, and g.499C＞G in RNase3 and their haplotypes were analyzed.
Results: The genotype and allele frequencies of RNase3 g.-550A＞G and g.371C＞G were not significantly increased in susceptibility of gastric cancer than control group. But, RNase3 CC genotype was associated with a significantly increased susceptibility of gastric cancer than control group (P=0.002). Also, RNase3 CC genotype was more specifically associated with a significantly increased susceptibility of middle and lower gastric cancer than upper gastric cancer (P=0.002). In haplotype of RNase3 SNP g.-550A, g.371G, and g.499C, there was significantly susceptibility of gastric cancer (P=0.004), and more specific influence on middle and lower gastric cancer than upper gastric cancer (P=0.006 vs 0.054).
Conclusion: RNase3 g.499C＞G polymorphism may influence gastric cancers, and have a more specific influence on middle and lower gastric cancer rather than upper gastric cancer. But RNase3 g.-550A＞G, g.371C＞G poly- morphisms need careful interpretation and confirmation in more larger studies. (J Korean Surg Soc 2010;78:
283-289)
Key Words: RNase3, Polymorphism, Gastric cancer 중심 단어: RNase3, 유전자 다형성, 위암
서 론
최근 유전학의 발달과 인간 유전체 전체 염기서열이 밝 혀지면서 여러 가지 유전자 특정 부위의 다형성과 여러 질 환과의 관련성이 많은 연구에서 밝혀지고 있다.(1,2) 특히, 위암은 인종, 지역, 식생활, 유전적 요인에 따라 발생 빈도
와 유전자 다형성이 다양하고, 최근 발생 빈도가 세계적으 로 감소 추세이나 우리나라에서는 여전히 암 발생률 1위를 차지한다.(3-5)
RNase3 (eosinophil cationic protein, ECP) 유전자는 RNase 를 구성하는 유전자 중 호산구에서 발견되는 분비성 리보 핵산분해효소(ribonuclease)로서, 호산구와 관련된 기능과 선천적 면역체계에 관여하고 있으며, 이 유전자의 세포독 성 능력은 여러 병원체(pathogens)에 대한 방어적인 역할을 하고 있다.(6,7) 일반적으로 심한 천식 환자나 기타 다른 알 레르기 질환을 가지고 있는 환자에서 RNase3 유전자 발현 이 높다고 알려져 있으며,(8) 다양한 알레르기 질환과 소세 포 폐암에서 유전자 다형성이 연관성이 있다고 보고되고 있다.(9-11) 최근에는 항암제의 세포독성 부위로서 면역독 소로 이용하고자 하는 시도와 전사후 변이(posttranslational modification)에 의한 RNase3 활성 변이에 대한 보고가 있으 며, 암 발생 과정에서 방어기전으로 세포 독성분비물질의 하나로 암세포 표면에 부착하여 직접적인 암세포 억제와 고사에 있어 RNase3가 중요한 역할을 한다.(6,12)
지금까지 보고된 RNase3 유전자와 위암과 직접적으로 관 련된 연구가 없어 위암 발생과 RNase3 유전자 역할을 확인 할 수는 없지만, 직장암을 비롯한 여러 암종에서 RNase3는 세포독성물질의 하나로 설명되고 있어 암 발생 과정에서 방어기전의 유전자로 생각할 수 있다.(6,11-13)
본 연구에서는 건강한 대조군과 위암 환자에서 RNase3 g.-550A＞G (rs2284954), g.371C＞G, 그리고 g.499C＞G 유 전자 다형성과 일배체형(haplotypes)을 알아보고, 두 군 간 의 비교 분석을 통해 위암 발생의 민감성을 알아보고자 하 였다.
방 법
1) 대상
본원에서 위암으로 진단 받은 263명의 위암 환자를 실험 군으로 하였고, 대조군으로는 건강한 일반인 534명으로 하 였다. RNase3 g.371C＞G에서는 polymerase chain reaction-re- striction fragment length polymorphism (PCR-RFLP)에서 유전 자형 결과가 나온 실험군 196명, 대조군 530명을 대상으로 하였고, RNase3 g.499C＞G에서는 high resolution melting (HRM)방법에서 유전자형 결과가 나온 실험군 243명, 대조 군 469명을 대상으로 하였다. 대조군은 건강검진상 대장암 의 가족력이나 혈전 관련 질환이 없고, 음주 및 흡연의 환경
적 요인을 받을 만한 소견이 없으며, 영양 상태가 양호한 건강인을 대상으로 하였는데, 남자 340명(63.7%), 여자 194 명(36.3%)이었고, 평균 나이는 49세였다. 실험군은 남자 170 명(64.6%), 여자 93명(35.4%)이었고, 평균 나이는 62세였다.
본 연구는 병원 내 윤리위원회의 승인을 받았으며, 각 군 에서 유전자 연구 동의서를 받았다.
2) 연구 방법
각 군에서 말초혈액을 채취하여 g.-550A＞G에서는 Taq- man, g.371C＞G에서는 PCR-RFLP, 그리고 g.499C＞G에서 는 HRM 방법을 사용하였으며, 위암 환자군에서는 수술 전 에 말초혈액을 채취하였다. 이러한 방법을 통해 RNase3의 single nucleotide polymorphisms (SNPs) 및 그들의 일배체형 을 분석하였다.
3) Taq-Man 분석
한 쌍의 TaqMan probe는 다형성 부위를 포함하며, 유전자 형에 따라 상보적으로 일치하는 서열을 갖도록 하였고, TaqMan probe의 5’단말에는 reporter dye가, 3’단말에는 quencher dye가 공유 결합되게 하였다. 중합효소연쇄반응 (PCR)의 annealing 단계에서 유전자의 DNA와 상보적으로 일치하는 TaqMan probe가 다형성 부위에 결합되고, ex- tension 단계에서 Taq 중합효소의 5’nuclease 활성도에 의하 여 5’말단부가 분해되며, reporter dye가 quencher dye로부터 분리됨에 따라 각 reporter dye를 결합시킨 TaqMan probe로 형광 강도를 각각 측정하여 단일염기 유전자다형성의 유전 자형을 분석하였다.
혈액으로부터 추출한 DNA, TaqMan Genotyping Master mix (Applied Biosystems, Branchburg, NJ, USA), 그리고 TaqMan SNP genotyping assay kit (Applied Biosystems, Branchburg, NJ, USA)을 혼합한 후, Rotor-Gene thermal cycler RG6000 (Corbett Research, Sydney, Australia)을 이용하여 다음과 같 은 방법으로 반응시켰다. Predenaturation을 95oC에서 15분 반응시킨 후, denaturation은 95oC에서 10초, annealing은 60oC에서 45초로 50회 반복하였다. 그리고 software Rotor- Gene 1.7.40 (Corbett Research, Sydney, Australia)을 이용하여 분석하였다.
4) PCR-RFLP 방법
혈액으로부터 추출한 DNA, primer (SE3-PF1, AGGGAA- GCTGGGTTTCTCCTGGGCA and SE3-HR1, AGAGTACAT-
Fig. 1. RNase3 g.371C＞G genotyping RFLP result. After re- striction enzyme digestion, the PCR products for g.371C＞
G (1,249 bp) took the form of two fragments, of 1,050 bp and 199 bp.
Table 1. Genotype and allele frequencies of the RNase3 poly- morphisms between gastric cancer case and control with the susceptibility of gastric cancer
Position* Genotype/
Allele
Frequency (%)
P-value
Control GC†
g.-550A＞G AA 239 (44.8) 118 (44.9) 0.519
(rs2284954) AG 215 (40.2) 113 (43.0) GG 80 (15.0) 32 (12.1)
A 693 (64.9) 349 (66.4) 0.576
G 375 (35.1) 177 (33.6)
g. 371C＞G GG 302 (57.0) 116 (59.2) 0.166 GC 199 (37.5) 63 (32.1)
CC 29 (5.5) 17 (8.7)
G 803 (75.8) 295 (75.3) 0.836
C 257 (24.2) 97 (24.7)
g. 499C＞G GG 346 (73.8) 182 (74.9) 0.002 GC 121 (25.8) 52 (21.4)
CC 2 (0.4) 9 (3.7)
G 813 (86.7) 416 (85.6) 0.57 C 125 (13.3) 70 (14.4)
*Calculated from the translation start site; †GC = gastric cancer.
GGAGGGATGGGAT), 10 mM dNTP, Taq-polymerase (Sol- gentbio, Daejeon, Korea), buffer를 혼합한 후 TaKaRa PCR Thermal Cycler에서 PCR을 시행하였다. Predenaturation을 95oC에서 5분 반응시킨 후, denaturation은 98oC에서 10초, annealing은 68oC에서 15초, extension은 72oC에서 1분으로 30회 반복한 후 72oC에서 10분간 최종연장반응을 하였다.
증폭된 1,249 bp PCR 생성물을 4 U의 Pst I (NEB, Lpswich, MA, USA) 제한효소를 이용하여 37oC에서 12시간 동안 처 리하여 분해하였다. C 대립유전자는 분해되지 않고, G 대립 유전자는 1,050 bp와 199 bp 단편으로 분해된다. 이후 Pst I으로 처리한 단편을 1.5% 마가로스겔에 전기영동한 후 ethidium bromide (Sigma, St. Louis, MO, USA)로 염색하여 자외선 아래에서 유전자 다형성을 검사하였다(Fig. 1).
5) HRM 분석
HRM은 PCR을 응용한 방법이다. PCR이 진행되는 동안 fluorescently labeled dye가 끼어 들어가게 되고, melting 과정 에서 dsDNA가 ssDNA로 변화할 때 빠져 나온 fluorescently labeled dye를 감지하여 단일염기 유전자다형성의 유전자형 을 분석하였다.
혈액으로부터 추출한 DNA, primer, EvaGreen solution (Biotium, Hayward, CA, USA), QuantiTect Probe PCR Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA)을 혼합한 후, Rotor-Gene ther- mal cycler RG6000 (Corbett Research, Australia)을 이용하여 다음과 같은 방법으로 반응시켰다. Predenaturation을 95oC
에서 15분 반응시킨 후, denaturation은 95oC에서 15초, an- nealing은 55oC에서 20초, extension은 72oC에서 30초로 45회 반복하였다. 이 반응이 끝난 후 75oC에서 92oC까지 서서히 온도를 증가시키면서 빠져 나온 Evagreen을 감지하여 soft- ware Rotor-Gene 1.7.40 (Corbett Research, Australia)을 이용 하여 분석하였다.
6) 통계 분석
유전자 다형성의 유전형 분포의 적합성은 Hardy-Wein- berg equilibrium을 이용하였고, 상관관계는 Chi-square test로 검증하였다. 여러 자리에 해당하는 유전자형의 반수체 (haplotype) 빈도는 expectation maximization (EM) 알고리즘 에 토대를 둔 SNPAlyze software (DYNACOM, Mobara, Japan)를 이용하여 분석하였고, 상관관계는 permutation test 로 분석하였다. 양측검정의 P값이 0.05 미만인 경우를 의미 있는 것으로 간주하였다.
결 과
1) RNase3 g.-550A＞G, g.371C＞G, 그리고 g.499C＞
G 유전자 다형성과 위암 발생의 민감성
RNase3 g.-550A＞G 유전자 다형성 빈도는 위암 환자군에
Table 2. Genotype and allele frequencies of the RNase3 polymorphisms among upper gastric cancer, middle and lower gastric cancer cases, and control with the susceptibility of gastric cancer
Position* Genotype/Allele Frequency (%) P-value§
Control U† M and L‡ U M and L
g.-550A＞G AA 239 (44.8) 11 (37.9) 107 (45.7) 0.771 0.436
AG 215 (40.2) 13 (44.8) 100 (42.7)
GG 80 (15.0) 5 (17.3) 27 (11.6)
A 693 (64.9) 35 (60.3) 314 (67.1) 0.483 0.414
G 375 (35.1) 23 (39.7) 154 (32.9)
g. 371C＞G GG 302 (57.0) 14 (58.3) 102 (59.3) 0.301 0.283
GC 199 (37.5) 7 (29.2) 56 (32.6)
CC 29 (5.5) 3 (12.5) 14 (8.1)
G 803 (75.7) 35 (72.92) 260 (75.6) 0.610 0.885
C 257 (24.3) 13 (27.08) 84 (24.4)
g. 499C＞G GG 346 (73.8) 18 (69.3) 164 (75.6) 0.089 0.002
GC 121 (25.8) 7 (26.9) 45 (20.7)
CC 2 (0.4) 1 (3.8) 8 (3.7)
G 813 (86.7) 43 (82.7) 373 (85.9) 0.450 0.734
C 125 (13.3) 9 (17.3) 61 (14.1)
*Calculated from the translation start site; †U = upper gastric cancer; ‡M and L = middle and lower gastric cancer; §Values were analyzed between control and upper gastric cancer, and control and middle and lower gastric cancer by Chi-square test.
Table 3. Haplotype frequencies of the RNase3 polymorphisms be- tween gastric cancer case and control with the suscepti- bility of gastric cancer
Haplotype Frequency*
P-value† g.-550A＞G g.371C＞G g.499C＞G Control GC‡
A G G 0.624 0.640 0.569
G C C 0.125 0.113 0.541
G G G 0.138 0.087 0.018
G C G 0.092 0.127 0.106
A G C 0.004 0.032 0.004
Others 0.017 −
*Values were constructed using the expectation maximization algo- rithm with genotyped SNPs. †Values were analyzed by permuta- tion test; ‡GC = gastric cancer.
서 AA 44.9%, AG 43.0%, GG 12.1%로 대립형질의 빈도는 A 66.4%, G 33.6%였으며, 대조군에서는 AA 44.8%, AG 40.2%, GG 15.0%로 분포되었고, 대립형질의 빈도는 A 64.9%, G 35.1%였다. RNase3 g.371C＞G 유전자 다형성 빈 도는 위암 환자군에서 GG 59.2%, GC 32.1%, CC 8.7%로 분 포되었고, 대립형질의 빈도는 G 75.3%, C 24.7%였으며, 대 조군에서는 GG 57.0%, GC 37.5%, CC 5.5%로 분포되었고, 대립형질의 빈도는 G 75.8%, C 24.2%였다. RNase3 g.499 C＞
G 유전자 다형성 빈도는 GG 74.9%, GC 21.4%, CC 3.7%로 분포되었고, 대립형질의 빈도는 G 85.6%, C 14.4%였으며, 대조군에서는 GG 73.8%, GC 25.8%, CC 0.4%로 분포되었 고, 대립형질의 빈도는 G 86.7%, C 13.3%였다. RNase3 g.-550A＞G와 g.371C＞G에서는 대조군에 대한 위암 발생 의 민감성이 통계적 의의가 없었지만, RNase3 g.499C＞G에 서는 위암 발생의 민감성이 CC 유전자형에서 의미 있게 높 았다(P=0.002) (Table 1).
2) 위암 발생 부위에 따른 RNase3 유전자 다형성과 위암 발생의 민감성
위암 환자군 내에서 종양 발생 위치에 따라 상부와 중부 및 하부로 구분하여 RNase3 유전자 다형성 분포를 비교한 결과, RNase3 g.-550A＞G와 g.371C＞G에서는 대조군에 대
한 상부와 중부 및 하부 위암 발생의 민감성의 차이가 보이 지 않았지만, RNase3 g.499C＞G에서는 중부 및 하부 위암 이 상부 위암보다 유전자형에서 암 발생의 민감성이 의미 있게 높았다(P=0.089 vs. 0.002) (Table 2).
3) RNase3 SNP의 일배체형과 위암 발생의 민감성
RNase3 g.-550A＞G, g.371C＞G, 그리고 g.499C＞G의 주 요 일배체형은 (−550)-(＋371)-(＋499) 순서로 분석했을 때 A-G-G, G-C-C, G-G-G, G-C-G, 그리고 A-G-C의 5개의 일배
Table 4. Haplotype frequencies of the RNase3 polymorphisms among upper gastric cancer, middle and lower gastric cancer cases, and control with the susceptibility of gastric cancer
Haplotype Frequency* P-value†
g.-550A＞G g.371C＞G g.499C＞G Control U‡ M and L§ U M and L
A G G 0.624 0.605 0.645 0.805 0.542
G C C 0.125 0.128 0.111 0.991 0.502
G G G 0.138 0.068 0.09 0.206 0.037
G C G 0.092 0.144 0.125 0.357 0.144
A G C 0.004 0.084 0.029 0.054 0.006
Others 0.017 − − − −
*Values were constructed using the expectation maximization algorithm with genotyped SNPs; †Values were analyzed between control and upper gastric cancer, and control and middle and lower gastric cancer by permutation test; ‡U = upper gastric cancer; §M and L
= middle and lower gastric cancer.
체형으로 주로 보였으며, 대조군에 대한 위암 발생의 민감 성에서 A-G-C 일배체형에서 의미 있게 높았다(P=0.004) (Table 3).
4) 위암 발생 부위에 따른 RNase3 SNP의 일배체형과 위암 발생의 민감성
위암 환자군 내에서 종양 발생 위치에 따라 상부와 중부 및 하부로 구분하여 RNase3 g.-550A＞G, g.371C＞G, 그리 고 g.499C＞G의 일배체형의 분포를 비교한 결과 대조군에 비해 A-G-C 일배체형은 중부 및 하부에서 위암 발생의 민 감성이 의미 있게 높았다(P=0.006) (Table 4).
고 찰
위암은 우리나라에서 가장 많이 발생하는 악성 종양으로 암 사망 원인 중 폐암 다음을 차지한다. 인간 유전체 전체 염기서열이 밝혀지면서 여러 가지 유전자 특정 부위의 다 형성과 여러 질환과의 관련성이 많은 연구에서 밝혀지고 있으며, 위암은 인종, 지역, 식생활, 유전적 요인에 따라 발 생 빈도가 다양하고, 종족간, 지역간의 차이에 따른 다양한 유전자 다형성이 있음이 보고되고 있다.(3,4)
DNA 염기서열 변이는 발생 빈도와 질병을 유발하는 정 도에 따라 구분되는데 빈도가 정상 일반 대조군의 1% 이하 이며 뚜렷한 기능적 이상이나 질병을 유발하는 유전자 변 이를 돌연변이(mutation)라고 하며, 빈도가 1% 이상일 때 다 형성(polymorphism)이라 정의한다. 다형성도 몇 가지로 대 분하는데 그 중, 하나의 뉴클레오타이드에 변화가 있을 때 SNP라고 하며, SNP의 차이에 의해 인류 집단 간에 있어서
개인 간의 형태나 질환에 대한 감수성에 차이가 생길 수 있으며, 인간의 유전자 변이의 90%를 차지하며 1,600만개 의 SNP가 있을 것을 추정하고 있다.(14,15)
RNaes3 유전자는 활성화된 호산구성 백혈구에서 분비하 는 독성 단백질의 하나로서, 다양한 면역질환에 관여되고 있으며, 이 유전자의 세포독성 능력은 다양한 병원체에 대 한 방어적인 역할을 하고 있어, 세포독성 능력의 변이와 면 역체계의 감소는 신호전달체계에 변화를 비롯한 다양한 기 전에 의해 세포성장을 억제함으로써 여러 알레르기 질환을 일으키고 생체 내 발암성 변이를 일으킬 수 있다고 생각되 고 있다.(6,7,12,13) 여러 연구에서 기관지 천식을 비롯한 알 레르기 질환에서 RNase3는 면역 병태생리에 있어 중요한 독성 분비 단백질의 역할을 담당하여, 호산구 활성도의 중 요한 지표 및 알레르기 환자의 염증 정도를 예측하는 도구 로 사용 될 뿐만 아니라, 유전자 다형성과의 연관성을 보고 하고 있다.(9-11) 최근에는 알레르기 질환 뿐만 아니라, 소 화기 염증성 질환, 바이러스 감염, 그리고 암 발생과 관련된 면역 조절 역할에 대한 RNase3의 광범위의 역할에 대해 보 고되어 있으며,(6,7,16-18) 특히 암 발생과 RNase3 유전자의 연관성에 대한 연구는 현재까지 연구된 결과가 드물어 아 직 정립되지 않았지만, 몇 개의 암종에서는 암 발생 과정에 서 억제적인 역할을 한다고 설명하였지만, Hodgkins 림프종 에서는 발암과정에 있어 촉진적인 역할을 한다고 보고되고 있다.(19,20)
Trulson 등(21)은 신장암에서 면역치료 전후로 지속적으 로 높은 RNase3 분비를 보고하였는데, 이는 암세포 대한 방 어적인 기전으로 세포독성의 역할을 하는 RNase3을 분비하 여 암세포를 고사하는데 기여한다고 설명하였으며, 이러한
종양세포에 대한 RNase3의 세포독성 능력의 변이는 다양한 기전에 의해 세포성장을 억제함으로써 생체 내의 암 발생 과정에 관련이 있을 것으로 생각되고 있으며, 그 후 Trulson 등(22)은 신장암에서 IL-2와 IFN-α로 면역치료 전후로 호 산구 독성분비물질의 양을 분석하여, RNase3를 포함한 호 산구성 독성분비물질이 지속적으로 높은 분비를 보고하였 는데, 이는 암세포에 대한 방어적인 기전으로 암세포가 성 장함에 따라 호산구성 독성분비물질들이 세포독성 산물을 분비하여 암세포를 고사(cancer cell killing)하는데 기여한다 고 설명하였다.
Tajima 등(13)은 직장암과 호산구 증가증 환자에서 IL-5 의 발현에 대한 연구에서 수술 전후에 혈청 IL-5의 양의 현 격한 차이가 있음을 보고하였고, 이는 IL-5에 의한 활성화 된 호산구가 근접해 있는 종양에 대해 호산구성 독성 분비 물을 분비함으로써 호산구성 독성 분비물질이 암세포 고사 와 관련하여 암 발생기전에 대한 방어기전에 중요한 역할 을 함을 주장하였다. 이와는 반대로, Enblad 등(23)은 Hodgkin’s 림프종에서는 혈청 RNase3 양이 Hodgkin’s 림프 종의 진행 정도가 심할수록 증가하는 상관관계를 보고하였 으며, 이는 암 발생 과정에서 RNase3 유전자가 암 발생을 촉진하는 역할을 할 수 있다고 설명하였다. 본 연구에서는 초기에 유전자 다형성에 초점을 맞추어 연구가 진행되어 혈청 RNase3 양이 측정되지 못했으며, 향후 연구에서 이러 한 점이 고려되어 연구가 진행되어야 할 것이다.
위암에서 혈청 RNase3 양과의 관계 및 암 발생과 연관된 연구가 없어 위암 발생과 RNase3 유전자 역할에 대해서는 단정 내릴 수는 없지만, 지금까지의 연구된 결과를 종합해 보면 Hodgkin’s 림프종을 제외한 다른 암종에서는 암 발생 과정에서 방어기전으로 세포 독성분비물질의 하나로 암세 포 표면에 부착하여 직접적인 암세포 억제와 고사에 있어 RNase3가 중요한 역할을 한다고 설명되고 있으며,(6,7,12, 13,19,20) 향후 다양한 암종에서 많은 연구가 진행되어야 할 것으로 보인다.
여러 문헌을 고찰해 보아도 위암 발생과 연관된 RNase3 유전자 다형성에 관련된 연구는 본 연구를 제외하고는 찾 기 힘들었으며, 본 연구의 결과로 RNase3 g.499C＞G 유전 자 다형성은 위암 발생과 관련이 있을 것으로 보이며, 본 연구를 토대로 하여 RNase3 유전자와 위암과의 관계 및 다 른 염기 서열에 대한 유전자 다형성에 대한 많은 연구를 통해 위암 발생 기전에 중요한 정보를 줄 것으로 생각한다.
최근 다양한 유전자에서 단일 염기다형성의 집합체인 일 배체형에 대한 연구가 여러 질환에 대해 시행되고 있는데, 이는 이러한 집합을 구성하는 것이 유전자형 결정이나 단 일염기다형성에 대한 연구보다는 어렵지만 한 유전자 내에 서 가까운 거리에서 존재하며 유전되는 경향을 가지며 단 일 염기다형성의 연구보다 더 질환 특이적일 수 있는 등 많은 정보를 주고 있다.(2,24) 본 연구에서도 RNase3 g.-550A＞G, g.371C＞G, g.499C＞G의 일배체형 분석을 통 해 AGC형이 위암 발생의 민감성과 관련이 있을 것으로 보 이며, 다양한 인종간 민족간의 많은 증례를 통해 연구되어 야 할 것으로 생각된다.
성별, 나이, Lauren 유형, 발생 위치에 따른 조직학적 분류 에 따른 RNase3 유전자 다형성의 유의성을 살펴보았을 때, 발생 위치에 따라서 의미 있는 유전자 다형성이 있었다. 즉, RNase3 g.499C＞G에서 중부 및 하부 위암이 상부 위암보다 유전자형에서 위암 발생의 민감성이 의미 있게 높았고 (P=0.089 vs. 0.002), RNase3 g.-550A＞G, g.371C＞G, 그리고 g.499C＞G의 일배체형의 분포에서는 대조군에 비해 A-G-C 일배체형은 중부 및 하부에서 위암 발생의 민감성이 의미 있게 높았다(P=0.006). 이는 위암의 발생부위에 따라 RNase3 유전자 다형성이 있으며, 중부 및 하부의 위암은 상부의 위 암과 비교했을 때 여러 임상병리학적 차이가 있음을 유전 자적 면에서 차이가 있음을 보여주고 있다고 생각되며, 더 많은 증례를 대상으로 연구해야 할 것으로 생각한다.
결 론
RNase3 g.499C＞G 유전자 다형성은 위암 발생의 민감성 과 관련이 있고, 특히 상부 위암보다는 중부 및 하부위암이 더 위암 발생의 민감성과 관련이 있으며, RNase3 g.-550A＞
G와 g.371C＞G 유전자 다형성은 위암 발생의 민감성과 관 련이 적은 것으로 보인다. 또한 RNase3 g.-550A＞G, g.371 C＞G, g.499C＞G의 일배체형에서 AGC형은 위암 발생의 민감성과 관련이 있으며, 중부 및 하부위암이 상부위암보 다 더 관련이 있다고 생각된다. 즉, RNase3 유전자 다형성 에 따라 위암의 발생의 민감성과 위암의 발생부위의 민감 성이 다를 수 있음을 보여주고 있다고 볼 수 있으며, 더 많 은 증례를 대상으로 연구해야 할 것으로 생각한다.
REFERENCES
1) Hood L, Galas D. The digital code of DNA. Nature 2003;421:
444-8.
2) Salisbury BA, Pungliya M, Choi JY, Jiang R, Sun XJ, Stephens JC. SNP and haplotype variation in the human genome. Mutat Res 2003;526:53-61.
3) Gianfagna F, De Feo E, van Duijn CM, Ricciardi G, Boccia S. A systematic review of meta-analyses on gene poly- morphisms and gastric cancer risk. Curr Genomics 2008;
9:361-74.
4) Hartgrink HH, Jansen EP, van Grieken NC, van de Velde CJ.
Gastric cancer. Lancet 2009;374:477-90.
5) The Information Committee of the Korean Gastric Cancer Association. 2004 Nationwide gastric cancer report in Korea.
J Korean Gastric Cancer Assoc 2007;7:47-54.
6) Boix E, Torrent M, Sanchez D, Nogues MV. The antipathogen activities of eosinophil cationic protein. Curr Pharm Biotech- nol 2008;9:141-52.
7) Navarro S, Aleu J, Jimenez M, Boix E, Cuchillo CM, Nogues MV. The cytotoxicity of eosinophil cationic protein/ribonu- clease 3 on eukaryotic cell lines takes place through its ag- gregation on the cell membrane. Cell Mol Life Sci 2008;65:
324-37.
8) Amin K, Ludviksdottir D, Janson C, Nettelbladt O, Bjornsson E, Roomans GM, et al. Inflammation and structural changes in the airways of patients with atopic and nonatopic asthma.
BHR Group. Am J Respir Crit Care Med 2000;162:2295-301.
9) Jonsson UB, Bystrom J, Stalenheim G, Venge P. Polymor- phism of the eosinophil cationic protein-gene is related to the expression of allergic symptoms. Clin Exp Allergy 2002;32:
1092-5.
10) Munthe-Kaas MC, Gerritsen J, Carlsen KH, Undlien D, Egeland T, Skinningsrud B, et al. Eosinophil cationic protein (ECP) polymorphisms and association with asthma, s-ECP lev- els and related phenotypes. Allergy 2007;62:429-36.
11) Rubin J, Zagai U, Blom K, Trulson A, Engstrom A, Venge P. The coding ECP 434(G>C) gene polymorphism determines the cytotoxicity of ECP but has minor effects on fibro- blast-mediated gel contraction and no effect on RNase activity.
J Immunol 2009;183:445-51.
12) Maeda T, Mahara K, Kitazoe M, Futami J, Takidani A, Kosaka M, et al. RNase 3 (ECP) is an extraordinarily stable
protein among human pancreatic-type RNases. J Biochem 2002;132:737-42.
13) Tajima K, Yamakawa M, Inaba Y, Katagiri T, Sasaki H.
Cellular localization of interleukin-5 expression in rectal carci- noma with eosinophilia. Hum Pathol 1998;29:1024-8.
14) Balasubramanian SP, Cox A, Brown NJ, Reed MW. Candidate gene polymorphisms in solid cancers. Eur J Surg Oncol 2004;30:593-601.
15) Stephens JC. Single-nucleotide polymorphisms, haplotypes, and their relevance to pharmacogenetics. Mol Diagn 1999;
4:309-17.
16) Kreuze JF, Savenkov EI, Cuellar W, Li X, Valkonen JP. Viral class 1 RNase III involved in suppression of RNA silencing.
J Virol 2005;79:7227-38.
17) Taha Y, Raab Y, Carlson M, Larsson A, Lordal M, Loof L, et al. Steroids reduce local inflammatory mediator secretion and mucosal permeability in collagenous colitis patients.
World J Gastroenterol 2006;12:7012-8.
18) Shichijo K, Makiyama K, Wen CY, Matsuu M, Nakayama T, Nakashima M, et al. Antibody to eosinophil cationic protein suppresses dextran sulfate sodium-induced colitis in rats.
World J Gastroenterol 2005;11:4505-10.
19) von Wasielewski R, Seth S, Franklin J, Fischer R, Hubner K, Hansmann ML, et al. Tissue eosinophilia correlates strongly with poor prognosis in nodular sclerosing Hodgkin's disease, allowing for known prognostic factors. Blood 2000;95:1207- 13.
20) Molin D, Glimelius B, Sundstrom C, Venge P, Enblad G. The serum levels of eosinophil cationic protein (ECP) are related to the infiltration of eosinophils in the tumours of patients with Hodgkin's disease. Leuk Lymphoma 2001;42:457-65.
21) Trulson A, Nilsson S, Venge P. The eosinophil granule pro- teins in serum, but not the oxidative metabolism of the blood eosinophils, are increased in cancer. Br J Haematol 1997;98:
312-4.
22) Trulson A, Bystrom J, Engstrom A, Larsson R, Venge P. The functional heterogeneity of eosinophil cationic protein is de- termined by a gene polymorphism and post-translational modi- fications. Clin Exp Allergy 2007;37:208-18.
23) Enblad G, Sundstrom C, Glimelius B. Infiltration of eosino- phils in Hodgkin's disease involved lymph nodes predicts prognosis. Hematol Oncol 1993;11:187-93.
24) Stephens JC, Schneider JA, Tanguay DA, Choi J, Acharya T, Stanley SE, et al. Haplotype variation and linkage dis- equilibrium in 313 human genes. Science 2001;293:489-93.
