Vol. 13, No. 2, June, 2006
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＜접수일：2006년 4월 17일, 심사통과일：2006년 4월 28일＞
※통신저자：송 영 욱
서울특별시 종로구 연건동 28번지 서울대학교 의과대학 내과학교실
Tel：02) 2072-2234, Fax：02) 762-9662, E-mail：[email protected]
본 연구는 서울대학교병원 연구기금(09-2001-003-0), MOST (90-J03-01-01-A-02) 및 류마티스 질환을 위한 국가지정연구실 기금을 통해 이루어졌음.
제1형 단순 헤르페스 바이러스에 의한 베체트 T 림프구의 감마 인터페론 분비능 저하
서울대학교 의과대학 내과학교실*, 미생물학과교실**, 서울대학교병원 임상의학연구소***
이은봉*
,***․김광용*
,***․김수연**․황응수**․박정규**․차창용**․송영욱*
,***
= Abstract =
Reduced Th1 Response with Herpes Simplex Virus Type 1 in Beh et's Disease
Eun Bong Lee, M.D., Ph.D.*,***, Kwang Yong Kim, Ph.D.*,***, Su Yeon Kim**
Eung-Soo Hwang, M.D., Ph.D.**, Chung-Gyu Park, M.D., Ph.D.**, Chang-Yong Cha, M.D., Ph.D.**, Yeong Wook Song, M.D., Ph.D.*,***
Departments of Internal Medicine*, Microbiology and Immunology**, Seoul National University College of Medicine, Clinical Research Institute***,
Seoul National University Hospital, Seoul, Korea
Objective: To investigate the interaction of herpes simplex virus type 1 antigen and T cells in Behçet's disease.
Methods: Intracellular interferon-γ response of T cells was measured before and after stimulation with herpes simplex virus type 1 in 17 patients with Behçet's disease and 20 healthy controls. The proliferation rate and the changes of CD4+/CD8+ T cell subsets were also mea- sured.
Results: In the basal status, the proportions of interferon-γ producing CD4+ or CD8+ T cells were higher in patients with Behçet's disease than healthy controls. The number of inter- feron-γ producing CD4+ or CD8+ T cells in patients with Behçet's disease was significantly decreased after stimulation with herpes simplex virus (mean±SD, 14.6±6.4 % vs 10.0±4.7%, p=0.0052 for CD4+ T cells; 29.5±14.2% vs 21.2±11.8%, p=0.045 for CD8+ T cells), while it
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서 론
베체트병은 반복적인 구강궤양, 성기부 궤양, 포도 막염, 피부병변 및 이상초과민 검사상 양성을 보이 는 것을 특징으로 하는 자가면역 질환이다. 베체트 병의 발병기전은 정확히 알려져 있지 않으나, HLA- B51과 같은 유전학적 요인, 바이러스 감염과 같은 환경적 요인 및 면역조절의 이상 등이 발병에 영향 을 미치는 것으로 알려져 있다 (1-5).
제1형 단순 헤르페스 바이러스(HSV-1)는 베체트 병의 바이러스 병인 중 가장 널리 알려진 바이러스 이다. HSV-1에 대한 혈청 내 항체 역가가 대조군에 비해 베체트병 환자에서는 유의하게 증가되어 있는 것으로 알려져 있으며 (6), 베체트병 환자의 점막 병변에서는 중합연쇄반응 검사를 통하여 HSV-1의 유전자를 발견할 수 있는 것으로 보고되어 있다 (7,8). 또한, 특정 생쥐를 HSV-1으로 감염시키면 베 체트병과 유사한 임상양상을 유도할 수 있음이 보 고되었다 (9).
베체트병의 발병에 있어서 T 림프구는 핵심적 역 할을 하는 것으로 알려져 있으며, 베체트병 환자에 서는 감마 인터페론(IFN-γ)으로 대표되는 Th1 면역 반응이 항진되어 있는 것으로 알려져 있다. 베체트 병 환자의 CD4+ T 림프구는 자극 시 IFN-γ를 비 롯한 Th1 사이토카인 반응을 보이며, Th1 세포에 합 당한 화학주성 수용체와 세포내 전달물질을 발현한 다 (10-17).
하지만, 베체트병 환자에서 HSV-1 항원이 T 림프 구의 면역기능에 미치는 영향에 대해서는 아직 알려 져 있지 않다. 체내에 존재하는 HSV-1 항원이 T 림 프구의 면역 균형상태에 미치는 영향을 파악하기 위
하여, 저자들은 베체트병 환자와 건강 대조군의 말 초혈액 단핵구를 사멸된 HSV-1으로 자극한 후, T 림프구의 기능을 사이토카인 생산능, 세포증식능 및 림프구 아형 변화로 측정 분석하였다.
대상 및 방법 1. 대상
본 연구는 서울대학교병원 류마티스 내과에 내원 한 17명의 베체트병 환자를 대상으로 하였으며, 환 자 모두는 국제 베체트병 연구회의 진단기준을 만족 하였다 (18). 채혈 당시 구강궤양, 성기부 궤양, 피부 병변, 포도막염, 이상초과민 반응, 심부정맥 혈전증 및 관절통에 대한 평가가 이루어졌으며, 이들 평가 사항 중 채혈 당시 하나라도 양성인 경우는 활동성 베체트병으로 정의하였다. 총 20명의 건강인이 대조 군으로 선정되었다.
2. 방법
1) HSV-1 항원의 준비: Vero 세포주를 HSV-1 (Mc- Intyre)으로 3일간 감염시킨 후, 상청액을 얻고 8%
polyethylene glycol 8,000과 1.5 M NaCl로 4oC에서 18시간 반응시켰다. 침전물을 TNE 용액 (0.01 M Tris- HCl[pH 7.5], 0.5 M NaCl, 1 mM EDTA)으로 용해시 킨 후, 125,000 g (Beckman SW41 rotor)로 1시간 동안 원심하고, 20∼60% 설탕용액에 중층 분리하여 HSV- 1 항원을 준비하였다. 분리된 HSV-1을 인산완충 식 염수에서 투석한 후 사용할 때까지 -70oC에 보관하 였다. 정제 분리된 HSV-1은 자외선 조사를 이용해서 사멸시킨 후 실험에 이용하였다.
2) T 림프구 아형의 변화: 말초혈액 단핵구는 Fi- coll-Hypaque (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)를 did not change in healthy controls (11.5±7.4% vs 11.2±6.3%, p=0.88 for CD4+ T cells; 19.8±
15.2 vs 20.7±10.8, p=0.84 for CD8+ T cells). There was no difference in the proliferation rate or CD4+/CD8+ subset changes between patients with Behçet's disease and healthy controls.
Conclusion: The stimulation of peripheral blood mononuclear cells with herpes simplex virus type 1 leads to the reduction of interferon-γ producing T cells in patients with Beh- çet's disease. These findings suggest that the stimulation with herpes simplex virus type 1 antigen may reverse the interferon-γ dominant status of the Behçet's disease.
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이용하여 헤파린 처리된 전혈로부터 분리하였다. Per- CP-CD3, FITC-CD4, FITC-CD8 항체(Beckton-Dickin- son, Franklin Lakes, NJ, USA)를 이용하여 세포표면 을 염색하고, 유세포 분석기(FACS-Calibur, Beckton- Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA)를 이용하여 유세 포 분석을 실시하였다.
3) 세포내 사이토카인의 측정: 말초혈액 단핵구를 사멸된 HSV-1 (1 ug/ml)으로 5일간 자극한 후, 유세 포 분석기를 이용하여, Th1 사이토카인인 IFN-γ와 Th2 사이토카인인 인터루킨 4 (IL-4)을 측정하고, HSV-1 자극 전의 IFN-γ 및 IL-4와 비교하였다. 세 포내 사이토카인의 측정은 다음의 방법을 따랐다.
신선하게 분리된 말초혈액 단핵구에, 세포내 단백질 이동 억제제인 Golgiplug (Pharmingen, San Diego, CA, USA)를 1 ug/ml의 농도로 첨가한 후, 10 ng/ml의 phorbol myristate acetate (PMA, Sigma Aldrich)와 250 ng/ml의 ionomycin (Sigma-Aldrich)으로 4시간 동안 자 극하였다. 자극된 단핵구를 세포표면 표지자(PerCP- CD3 항체와 FITC-CD4 항체 또는 PcrCP-CD3 항체와 FITC-CD8 항체)로 염색한 후, 제작회사 (Pharmingen, San Diego, CA, USA)에서 제시한 방법대로 세포 침 투제를 처리하고, PE-IFN-γ 또는 PE-IL-4로 염색하 고 세 차례 세척하였다. 세포 내 INF-γ 또는 IL-4는 유세포 분석기를 이용하여 측정한 후 CD3+CD4+
T 림프구 또는 CD3+CD8+ T 림프구만을 선택하여 사이토카인 양성인 세포의 분율을 계산하였다.
4) 3H incorporation을 이용한 세포 증식능의 측정:
환자군과 대조군의 말초혈액 단핵구에 1μg/ml의 사 멸된 HSV-1를 첨가하거나 하지 않고 5일간 5%
CO2, 37oC 항온기에서 배양하였다. 배양이 끝나는 마 지막 6시간에 말초혈액 단핵구 세포에 1 uCi의 3H- thymidine을 첨가한 후, liquid scintillation counter로
3H-thymidine의 결합 정도를 cpm (count per minute) 단위로 측정하였다. 자극지수(stimulation index, SI)는 HSV-1로 자극된 말초혈액 단핵구의 cpm을 HSV-1으 로 자극하지 않은 말초혈액 단핵구의 cpm으로 나누 어서 얻었다. 모든 실험은 3차례 반복하여 그 평균 치를 분석에 이용하였다.
5) 통계적 분석: 연속변수의 비교를 위해서는 t-test 또는 paired t-test를 이용하였다. 세 평균 간의 비교 는 단순 분산분석법을 이용하였다. p값이 0.05보다 작은 경우 유의하다고 간주하였으며, 모든 통계분석 은 SAS 9.12 윈도우 버전을 이용하여 계산하였다.
결 과 1. 환자의 특성
환자의 평균 나이는 41.9±9.4세였으며, 남녀비는 8：9였다. 구강궤양은 모든 환자에서 관찰되었으며, 성기부 궤양은 82.4%, 피부 병변은 82.4%, 포도막염 은 41.2%, 심부정맥 혈전증은 11.8% 그리고 관절통 은 11.8%의 환자에서 관찰되었다. 이상 초과민 반응
Fig. 1. Subsets of T cells. The proportions of CD4 and CD8 T lymphocytes did not change after stimulation with HSV-1 in (A) the patients with BD (p=0.98 for CD4+ T cells and p=0.67 for CD8+ T cells), and (B) the healthy controls (p=0.87 for CD4+ T cells and p=0.33 for CD8+ T cells).
에서 양성을 보인 환자는 23.5%였다. 활동성의 환자 로 분류된 환자는 47.1%였고, 53.9%는 비활동성으로 분류되었다. 대조군의 평균 나이는 32.7±10.4세이고, 남녀비는 12：8이었다.
2. HSV-1 자극 후 T 림프구 아형의 변화
말초혈액 단핵구를 HSV-1으로 자극하였을 때, CD4/CD8 T 림프구의 아형변화는 관찰되지 않았다.
CD4+ T 림프구의 분율은 HSV-1 자극 전후에 베체 트병 환자에서는 각각 38.4±9.0%, 38.5±14.0%였고 (p=0.98), 건강 대조군에서는 36.8±8.9%, 37.3±14.0%
였다(p=0.87). CD8+ T 림프구의 분율은 HSV-1 자극 전후에 베체트병 환자에서는 22.3±6.8%, 23.1±7.4%
였고(p=0.67), 대조군에서는 21.5±6.8%, 22.8±7.6%
였다(p=0.33)(그림 1).
3. HSV-1 자극에 따른 세포증식률
HSV-1으로 자극하고 5일 후 측정한 자극지수(sti- mulation index, SI)는 베체트 환자와 건강 대조군 사 이에 유의한 차이가 없었다(베체트병의 경우 5.0±
2.2, 건강 대조군의 경우 4.2±3.1, p=0.54)(그림 2).
4. HSV-1 자극 후 INF-γ 및 IL-4 생산능의 변화
기저 상태에서, INF-γ 생산 CD4+ T 림프구는 베 체트병 환자에서 대조군에 비하여 높은 경향을 보였 다(CD4 T 림프구의 경우 14.6±6.4% 대 11.5±7.4%, p=0.19; CD8+ T 림프구의 경우 29.5±14.2% 대 19.8±
15.2%, p=0.054). 베체트병 환자에서는 비활동성 환자
Fig. 3. Changes in the proportion of IFN-γ producing T cells after stimulation with HSV-1. (A) IFN-γ producing CD3+CD4+ T lymphocytes were significantly lowered after HSV-1 stimulation in patients with BD (p=0.0052) whereas it was not changed in healthy controls (p=0.88). The change was more prominent in the patients with inactive BD. (B) IFN-γ producing CD3+CD8+ T lymphocytes were significantly lowered after the HSV-1 stimulation in patients with BD (p=0.045) whereas it was not changed in healthy controls (p=0.84). The change was more prominent in patients with inactive BD.
Fig. 2. Proliferation of peripheral blood mononuclear cells after stimulation with HSV-1. Stimulation index (SI) of the patients with BD and healthy controls were not different (p=0.54).
가 활동성 환자보다 IFN-γ 생산 T 림프구의 분율이 더 높았다(CD4 T 림프구의 경우 16.4±6.0% 대 12.3±
6.4%, p=0.18; CD8+ T 림프구의 경우 31.4±12.1%
대 27.3±16.8%, p=0.57).
정상 대조군에서는 HSV-1 자극 후 IFN-γ를 생산 하는 CD4+T 림프구 분율의 변화가 없었으나(11.5±
7.4%→11.2±6.3%, p=0.88), 베체트병 환자에서는 IFN- γ를 생산하는 CD4+ T 림프구의 분율이 HSV-1 자 극 후 유의하게 감소하였다(14.6±6.4%→10.0±4.7%, p=0.0052). CD8+ T 림프구에서도, HSV-1 자극 후, IFN-γ 생산 T 림프구는 정상 대조군에서는 변화하지 않았으나(19.8±15.2%→20.7±10.8%, p=0.84), 베체트 병 환자에서는 유의하게 감소하였다(29.5±14.2%→
21.2±11.8, p=0.045)(그림 3).
베체트병 환자군을 활동성과 비활동성으로 나누었 을 때, 비활동성 환자에서는 IFN-γ를 생산하는 CD4+
T 림프구의 분율이 유의하게 감소하였으나(16.6±
6.0%→9.8±4.7%, p＜0.0001), 활동성 환자에서는 HSV- 1 자극 후 IFN-γ를 생산하는 CD4+ T 림프구의 분 율에 변화가 없었다(12.3±6.4%→10.2±4.9%, p=0.45).
CD8+ T 림프구에서도 IFN-γ를 생산하는 T 림프구 의 분율은 비활동성 환자에서는 현저하게 감소하였 으나(31.4±12.1%→21.4±12.3%, p=0.02), 활동성 환자
에서는 HSV-1 자극 후 변화가 없었다(27.3±16.8%→
20.9±12.0%, p=0.42)(그림 3).
IL-4는 기저상태에서는 CD4+, CD8+ T 림프구 모두에서 베체트병 환자와 대조군 간에 차이가 없었 다(CD4+ T림프구의 경우 3.9±2.4% 대 4.4±3.3%, p=0.59; CD8+ T 림프구의 경우 4.6±5.4% 대 5.2±
5.1%, p=0.82). IL-4 생산 T 림프구수는 HSV-1 자극 후, 베체트병 및 대조군 모두에서 현저하게 증가하 였다. CD4+ T 림프구의 경우, HSV-1 자극 후 IL-4 생산 T 림프구수는 베체트병 환자에서는 3.9±2.4%
에서 21.5±17.3%로 증가하였고(p=0.0004), 건강 대조 군에서는 4.4±3.3%에서 23.1±21.7%로 증가하였다 (p=0.0004). CD8+ T 림프구의 경우는 IL-4 생산 T 림프구가 HSV-1 자극 후, 베체트병 환자의 경우 5.6±5.4%에서 25.4±20.0%로(p=0.0002), 건강 대조 군의 경우 5.2±5.1%에서 28.7±23.2%로 증가하였다 (p=0.0001).
베체트병 환자를 활동성과 비활동성으로 나누었을 때, IL-4 생산 CD4+ T 림프구의 수는 활동성 및 비 활동성 환자 모두에서 HSV-1 자극 후 증가하였다 (활동성의 경우 3.6±3.1%→17.3±18.6%, p=0.051; 비 활동성의 경우 4.1±1.7→25.1±16.1, p=0.0044). IL-4 생산 CD8+ T 림프구의 수도 활동성 및 비활동성
Fig. 4. Changes in the proportion of IL-4 producing T cells after stimulation with HSV-1. (A) IL-4 producing CD3+CD4+ T lymphocytes were significantly increased after HSV-1 stimulation in patients with BD and controls (BD, p=0.00040; healthy controls, p=0.00040) (B) IL-4 producing CD3+CD8+ T lymphocytes were significantly increased after HSV-1 stimulation in the patients with BD and controls (BD, p=0.00020;
healthy controls, p=0.00010).
환자 모두에서 HSV-1 자극 후 증가하였다(활동성의 경우 5.3±5.8%→21.7±14.5%, p=0.0071; 비활동성의 경우 5.9±5.2%→26.5±19.5%, p=0.011)(그림 4).
고 찰
본 연구에서 저자들은 베체트병 환자의 말초혈액 내 T 림프구는 HSV-1 항원으로 자극 받으면, CD4/
CD8 T 림프구의 아형 분포나 증식능에 있어서는 변 화를 보이지 않으나, IFN-γ의 생산능은 유의하게 감 소함을 관찰하였고, 이러한 IFN-γ 생산능의 감소는 주로 비활동성 환자에서 관찰할 수 있었다. 또한 통 계적인 유의성에 도달하지는 못했으나 기저상태에서 IFN-γ의 생산능은 비활동성 베체트병 환자에서 가 장 높고, 대조군에서 가장 낮음을 확인할 수 있었다.
현재까지 보고된 다양한 증거들은 HSV-1이 베체 트병의 발병에 중요한 역할을 할 수 있을 것임을 시 사한다. 첫째, 베체트병은 선진국보다는 주로 개발도 상국에서 많이 발견된다 (19). 둘째, 베체트병의 임상 양상은 HSV-1 감염과 유사한 측면들이 많이 있다.
셋째, 베체트병의 병변에서는 HSV-1의 유전자가 발 견된다 (7,8). 넷째, HSV-1에 감염된 생쥐는 베체트 병과 유사한 임상양상을 보인다 (9). 저자들은 한국 인 베체트병 환자에서도 HSV-1에 대한 혈청내 항체 가 대조군에 비하여 유의하게 높음을 이미 보고한 바 있다 (6). 하지만 일부 다른 연구 결과에 의하면, HSV-1 유전자는 베체트병 환자의 병변에서 발견되 지 않으며, 베체트병 환자에게 HSV-1에 대한 항바 이러스 제제를 투여한 결과 치료효과를 보이지 않았 다 (20,21). 상기의 상반되는 사실들을 종합해보면, 베체트병 환자에서의 HSV-1의 역할은, 활동성 감염 자체에 의한다기보다는 만성적으로 체내에 존재하는 HSV-1의 DNA 또는 항원에 의한 면역 조절상태의 부조화에 의한 것임을 시사한다.
본 연구의 디자인은 T 림프구를 사멸된 바이러스 로 장시간(5일간) 자극함으로써, 신경절 부근에서 만 성적으로 HSV-1 항원에 노출될 수 있는 T 림프구의 상황을 반영하도록 고안되었다. 본 연구에서는 HSV- 1에 의한 자극 후 정상인 T 림프구의 IFN-γ 생산능 은 증가하지 않았다. 이러한 결과는 HSV-1 감염 후 T 림프구에서 IFN-γ의 생산능이 증가한다는 기존의
논문과 상치되나 이는 실험 방법상의 차이에 기인하 며, 기존의 연구에서는 살아있는 HSV-1으로 감염시 킨 데에 반해 본 연구에서는 사멸시킨 HSV-1을 사 용한 데 따른 차이로 보인다 (22). 또한 HSV-1 자극 후 T 림프구로부터 직접 IFN-γ 또는 IL-4를 측정한 것이 아니라, T 림프구의 가장 강력한 자극제인 PMA와 ionomycin으로 자극 후, IFN-γ 또는 IL-4를 측정함으로써, HSV-1에 의한 단순자극의 결과가 아 니라 T 림프구 자체의 최대 사이트카인 생산능력의 변화를 평가하도록 고안되었다. 따라서 본 연구의 디 자인은 HSV-1의 자극에 의해서 T 림프구의 면역균 형 상태가 어떻게 변화하는가가 연구의 초점이었다.
연구 결과 베체트병 환자의 말초혈액 단핵구는 건 강대조군에 비하여 기저상태에서 IFN-γ의 생산능이 통계적 유의수준에는 이르지 못했으나 현저하게 높 음을 확인할 수 있었다. 이는 기존의 연구와 합치하 는 결과로서 본 연구가 방법론적으로 문제가 없었음 을 시사한다 (16). 또한 비활동성 베체트병 환자의 T 림프구는 대조군에 비하여 증가된 IFN-γ 생산능을 지니고 있다는 사실은 베체트병 환자와 대조군의 T 림프구는 IFN-γ의 생산능에서 근본적으로 차이를 보임을 의미한다. 이러한 차이는 다른 연구 결과에 의하면 IFN-γ의 생산에 유리한 세포내 신호전달 환 경에 기인하는 것으로 보인다 (11,14).
베체트병 환자의 T 림프구에서 HSV-1 자극 후 IFN-γ 생산능력이 저하되었다는 사실은 베체트병의 발병과 관련해서 두 가지의 상이한 해석을 가능하게 한다. 첫째는 베체트병 환자의 T 림프구는 HSV-1 항원에 장기 노출되어 IFN-γ 생산능력이 감소되고, 그 결과로 HSV-1 자체 또는 다른 미지의 바이러스 에 대한 저항력이 떨어져서, 베체트병이 발병한다고 설명할 수 있다. 헤르페스 바이러스를 비롯한 바이 러스의 방어에 있어서 IFN-γ의 중요성은 이러한 가 설을 지지한다 (23-26). 하지만 기저상태에서 베체트 병 환자의 T 림프구는 IFN-γ 생산능이 대조군에 비 해 증가되어 있었고, HSV-1 자극 후 감소된 IFN-γ 의 생산능은 대조군의 IFN-γ 생산능과 유사한 정도 라는 사실이 이 가설에 반한다. 둘째는 첫째 설명과 는 반대로 베체트병 환자에서는 HSV-1에 대한 노출 이 Th1 사이토카인이 약해지는 환경을 제공함으로 써, Th1에 의한 질병의 진행을 오히려 억제시켜주는
효과가 있을 것이라는 설명이다. 염증성 사이토카인 인 IFN-γ 생산능의 증가가 베체트병의 직접적 발병 원인이라고 한다면, HSV-1은 베체트병의 발병 원인 이라기보다는, 오히려 베체트병 환자의 내재적 IFN- γ 생산 성향을 교정시키는 역할을 한다고 추정할 수 있다. 기저상태에서 항진되어 있는 베체트병 환 자의 IFN-γ 생산능이 HSV-1 자극 후 감소하나, 대 조군의 수준까지만 감소한다는 사실은 이러한 가설 을 뒷받침한다.
본 연구에서 HSV-1에 의한 IFN-γ 생산능의 감소 는 활동성 베체트병 환자보다는 비활동성 환자에서 유의하게 감소하였다. 이러한 차이는 기저상태에서 IFN-γ의 생산능이 활동성보다는 비활동성 베체트병 에서 높기 때문에 나타난 결과이며(CD4+ T 세포의 경우, 12.3±6.4% 대 16.6±6.0%; CD8+ T 세포의 경우, 27.3±16.8% 대 31.4±12.1%), 이는 베체트병의 활성화와 더불어 말초혈액 내에서 Th1/Th2, Tc1/Tc2 의 재배치가 일어나는 것에 기인할 것으로 추정된 다. IFN-γ 생산능이 높은 T 림프구들이 병변 조직 으로 이동함에 따라 말초혈액 내에서 Th1, Tc1 세포 는 감소할 것으로 추정된다. 류마티스 관절염에서의 연구에 의하면 IFN-γ 생산능이 높은 세포는 말초혈 액보다는 병변 조직인 활막조직 또는 활액내 T 림 프구에서 높은 것으로 알려져 있어서 이러한 추론을 뒷받침한다 (27-29).
본 연구는 시험관내 실험 연구결과로서, 여러 가 지 제한점을 지니고 있다. 첫째, 말초혈액 단핵구를 사용하였다는 점이다. 이상적으로는 신경절 주위의 조직내 T 림프구를 사용하여야 하나 환자로부터 이 들 조직을 얻는다는 것은 현실적으로 불가능하였다.
둘째, 실제 체내 상황에서는 HSV-1 항원의 제공이 신경절 세포에 의할 것으로 추정되나, 본 연구에서 는 말초혈액 단핵구의 20∼30%를 차지하는 B 림프 구에 의해서 이루어졌다. 환자나 대조군으로부터 신 경절 세포를 직접 얻는 것은 현실적으로 불가능하였 고, 신경세포주는 환자 개개인과 주조직 적합 항원 이 상이하여 사용할 수 없었다. 셋째, 환자군과 대조 군에서 과거 HSV-1의 감염이 있었는지가 조사되지 않았다. 하지만 저자들은 기존의 연구 (6)에서 한국 인 건강 성인에서 HSV-1의 IgG 혈청 양성률은 90%, 베체트병 환자에서는 100%임을 이미 확인한 바 있
다(비출간 자료). 이러한 결과는 아시아에서 실시된 기존의 혈청 양성률 연구 결과와도 일치한다 (30).
따라서 본 연구에 참여한 환자군 및 대조군은 대부분 이미 HSV-1에 노출된 적이 있다고 가정할 수 있다.
결 론
저자들은 베체트병 환자의 말초혈액 내 T 림프구 는 IFN-γ 생산능이 항진되어 있으며, 항진된 생산능 은 HSV-1 자극에 의해 유의하게 감소함을 확인하였 다. 이러한 연구 결과는 베체트병 환자에서 HSV-1 은 베체트병의 직접적 원인이라기보다는 오히려 베 체트병 환자에 내재되어 있는 면역 조절 이상 상태 를 개선시키는 방향으로 작용할 수 있음을 시사한다.
향후 베체트병 환자의 T 림프구에서 보이는 IFN-γ 생산능의 증가가 어떤 기전을 통해 일어나며, HSV- 1은 어떤 기전을 통해 이러한 생산능의 증가를 정상 화시키는가에 대한 연구가 필요할 것이다.
REFERENCES
1) Sakane T, Takeno M, Suzuki N, Inaba G. Behçet's disease. N Engl J Med 1999;21:1284-91.
2) Kaklamani VG, Vaiopoulos G, Kaklamanis PG. Beh- çet's disease. Semin Arthrtis Rheum 1998;27:197- 212.
3) Verity DH, Wallace GR, Vaughan RW, Stanford MR.
Behçet's disease: from Hippocrates to the third mil- lennium. Br J Ophthalmol 2003;87:1175-83.
4) Arayssi T, Hamdan A. New insights into the patho- genesis and therapy of Behçet's disease. Curr Opin Pharmacol 2004;4:183-8.
5) Lehner T. The role of heat shock protein, microbial and autoimmune agents in the aetiology of Behçet's disease. Int Rev Immunol 1997;14:21-32.
6) Lee EB, Kwon YJ, Shin KC, Song YW, Park CG, Hwang ES, et al. Decreased serum level of antibody against human cytomegalovirus in patients with Beh- çet's disease. Rheumatol Int 2005;25:33-6.
7) Lee S, Bang D, Cho YH, Lee ES, Sohn S. Polymerase chain reaction reveals herpes simplex virus DNA in saliva of patients with Behçet's disease. Arch Der- matol Res 1996;288:179-83.
8) Studd M, McCance DJ, Lehner T. Detection of HSV-1 DNA in patients with Behçet's syndrome and in
patients with recurrent oral ulcers by the polymerase chain reaction. J Med Microbiol 1991;34:39-43.
9) Sohn S, Lee ES, Bang D, Lee S. Behçet's disease-like symptoms induced by the herpes simplex virus in ICR mice. Eur J Dermatol 1998;8:21-3.
10) Imamura Y, Kurokawa MS, Yoshikawa H, Nara K, Takada E, Masuda C, et al. Involvement of Th1 cells and heat shock protein 60 in the pathogenesis of intestinal Behçet's disease. Clin Exp Immunol 2005;
139:371-8.
11) Nagafuchi H, Takeno M, Yoshikawa H, Kurokawa MS, Nara K, Takada E, et al. Excessive expression of Txk, a member of the Tec family of tyrosine kinases, contributes to excessive Th1 cytokine pro- duction by T lymphocytes in patients with Behçet's disease. Clin Exp Immunol 2005;139:363-70.
12) Houman H, Hamzaoui A, Ben Ghorbal I, Khanfir M, Feki M, Hamzaoui K. Abnormal expression of che- mokine receptors in Behçet's disease: relationship to intracellular Th1/Th2 cytokines and to clinical man- ifestations. J Autoimmun 2004;23:267-73.
13) Koarada S, Haruta Y, Tada Y, Ushiyama O, Morito F, Ohta A, et al. Increased entry of CD4+ T cells into the Th1 cytokine effecter pathway during T-cell division following stimulation in Behçet's disease.
Rheumatology (Oxford) 2004;43:843-51.
14) Li B, Yang P, Zhou H, Zhang Z, Xie C, Lin X, et al. T-bet expression is upregulated in active Behçet's disease. Br J Ophthalmol 2003;87:1264-7.
15) Ben Ahmed M, Houman H, Ben Ghorbel I, Braham- Sfaxi A, Miled M, Dellagi K, et al. Cytokine ex- pression within mucocutaneous lesions of Behçet's disease: involvement of proinflammatory and Th1 cytokines. Adv Exp Med Biol 2003;528:343-6.
16) Frassanito MA, Dammacco R, Cafforio P, Dammacco F. Th1 polarization of the immune response in Beh- çet's disease: a putative pathogenetic role of interleu- kin-12. Arthritis Rheum 1999;42:1967-74.
17) Raziuddin S, al-Dalaan A, Bahabri S, Siraj AK, al- Sedairy S. Divergent cytokine production profile in Behçet's disease. Altered Th1/Th2 cell cytokine pat- tern. J Rheumatol 1998;25:329-33.
18) International study group for Behçet's disease. Cri- teria for diagnosis of Behçet's disease. Lancet 1990;
335:1076.
19) Zouboulis CC. Epidemiology of adamantiades-Beh- çet's disease. Ann Med Interne (Paris) 1999;150:488- 98.
20) Tojo M, Zheng X, Yanagihori H, Oyama N, Takahashi K, Nakamura K, et al. Detection of herpes virus genomes in skin lesions from patients with Behçet's disease and other related inflammatory diseases. Acta Derm Venereol 2003;83:124-7.
21) Nomura Y, Kitteringham N, Shiba K, Goseki M, Kimura A, Mineshita S. Use of the highly sensitive PCR method to detect the herpes simplex virus type 1 genome and its expression in samples from Behçet disease patients. J Med Dent Sci 1998;45:51-8.
22) Ito M, Kode W, Sakurai M. Changes in intracellular cytokine levels in newborn and adult lymphocytes induced by HSV-1. J Med Virol 1998;56:145-50.
23) Koelle DM, Corey L. Recent progress in herpes sim- plex virus immunobiology and vaccine research. Clin Microbiol Rev 2003;16:96-113.
24) Dobbs ME, Strasser JE, Chu CF, Chalk C, Milligan GN. Clearance of herpes simplex virus type 2 by CD- 8+ T cells requires gamma interferon and either perforin- or Fas-mediated cytolytic mechanisms. J Virol 2005;79:14546-54.
25) Decman V, Kinchington PR, Harvey SA, Hendricks RL. Gamma interferon can block herpes simplex virus type 1 reactivation from latency, even in the presence of late gene expression. J Virol 2005;79:10339-47.
26) Liu T, Khanna KM, Carriere BN, Hendricks RL.
Gamma interferon can prevent herpes simplex virus type 1 reactivation from latency in sensory neurons.
J Virol 2001;75:11178-84.
27) Berner B, Akca D, Jung T, Muller GA, Reuss-Borst MA. Analysis of Th1 and Th2 cytokines expressing CD4+ and CD8+ T cells in rheumatoid arthritis by flow cytometry. J Rheumatol 2000;27:1128-35.
28) van der Graaff WL, Prins AP, Niers TM, Dijkmans BA, van Lier RA. Quantitation of interferon gamma- and interleukin-4-producing T cells in synovial fluid and peripheral blood of arthritis patients. Rheuma- tology (Oxford) 1999;38:214-20.
29) Morita Y, Yamamura M, Kawashima M, Harada S, Tsuji K, Shibuya K, et al. Flow cytometric single-cell analysis of cytokine production by CD4+ T cells in synovial tissue and peripheral blood from patients with rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 1998;41:
1669-76.
30) Li YY, Hidaka Y, Kino Y, Mori R. Seroepidemiology of herpes simplex virus type 1 in Yanji, Jilin, China.
Microbiol Immunol 1990;34:551-5.
