Analysis of genetic characteristics and development of substrate for cultivation in brown strains of Flammulina velutipes

팽이버섯 (Flammulina velutipes)은 담자균류의 주름버 섯목 (Agaricales) 송이과 (Tricholomataceae)에 속하는 담자균류의 일종으로서 항암효과 (우, 1983) 및 비타민 B, C가 풍부함이 알려지면서 소비자들에게 건강식품으로 각 광받고 있는 버섯이다. 한국을 비롯하여 온대에서 한대에 걸쳐 세계각지에 널리 분포하고 있다. 야생에서 발생되는 팽이버섯은 팽나무, 사시나무, 뽕나무 등 활엽수의 줄기나 뿌리를 분해하여 그 주요구성물인 cellulose, lignin, monosaccharide 등의 탄소원을 이용하여 생장하는 사물 기생균이다. 인공적인 재배는 1899년 일본에서 감나무 원 목을 이용하여 자연기상 조건하에서 재배가 시작된 이래, 포자 접종방법, 톱밥을 이용한 상자재배법 등을 거쳐 1960년 이후부터는 온도, 습도, 광 등을 인공적으로 조절 한 실내에서 톱밥과 미강을 기질로 하여 Polypropylene bottle에 담아 살균 후 배양, 발이, 억제 및 생육과정을 거 쳐서 재배하게 되었다. 송 등 (1993, 1995)은 재배기질에 대한 연구로 자실체 생산과 균사 생산을 위한 화학성배지 의 최적화 등 팽나무버섯 생장에 미치는 영향을 검토하였 으며, 정 등 (1995)은 영양원 첨가에 따른 자실체 줄기성 장에 대한 연구를 행하였다. 그 후 인공재배가 확대되면서 다수확을 위한 균사생장 및 자실체 형성에 미치는 pH 등 에 관한 연구가 이루어지게 되었다 (정, 2006). 현재는 병

을 이용한 대량 인공재배법이 개발되어 팽이버섯은 모양 과 맛이 좋아서 전세계 식용버섯 생산량 가운데 양송이, 느 타리, 표고에 이어 많이 생산되고 있다. 특히 한국, 일본을 비롯한 동북아시아 여러나라에서 인공적으로 재배되어 상 품화되고 있으며 앞으로도 증가 추세에 있다. 국내에서는 초기에 고가의 설비비 및 배지재료 등의 한정된 공급으로 상당히 높은 가격으로 판매되었으나 최근에는 대량생산에 의한 가격 하락 등으로 재배농가가 어려움을 겪고 있어, 중 국, 대만 등으로 수출을 적극 추진하고 있는 실정이다. 한 편 새로운 품종을 요구하고 있는 버섯재배 농가와 소비자 를 위해 저작감과 맛이 우수한 갈색팽이버섯에 대한 연구 (공 등, 2006)를 꾸준히 진행하고 있다. 본 연구는 수집된 갈색팽이버섯 균주를 대상으로 PCR-RAPD로 균주간 유 연관계를 밝히고, 갈색계통 팽이균주의 생리적 특성 조사 와 최적배지 선발을 통하여 갈색팽이버섯의 다양한 소비 확대를 기하고자 하였다.

갈색팽이버섯 균주들의 유연관계 분석을 위하여 본 실험 에 사용한 균주는 15개로 각 균주들의 수집내역은 표 1에 요약하였다. 그 중에서 갈색팽이버섯 8개 균주는 농업과학 기술원 응용미생물과에서 분양받았다. 분자생물학적 유연

충북농업기술원 농업환경과, ¹농업과학기술원 응용미생물과

Analysis of genetic characteristics and development of substrate for cultivation in brown strains of Flammulina velutipes

Jae-Sun Choi*, Jae-Goan Noh, Who-Bong Jang, Seong-Yeol Choi, Kyoung-Beom Min and Won-Sik Kong¹

Agricultural Environment Division, Chungbuk Agricultural Research and Extension Services, Cheongwon 363-883.

1Applied Microbiology Division, National Institute of Agricultural Science & Technology, RDA, Suwon 441-707.

ABSTRACT : Analysis of genetic characteristics of Flammulina velutipes showed that strains have a range of 85% in genetic distribution diagram. According to this result, we divided these strains into five groups. In experiment of determinating the optimum media and condition in cultivating F. velutipes, we found the optimum temperature and pH range for hypha growth were 25℃

℃ and 6.0 to 7.0, respectively. in addition, the best media for growth of that in plate was

MCM (Mushroom Complete Media) which have a growth length from 68 to 83 mm. In vivo test, we observed that fast growth and good density of hyphae in mixture media of douglas fir sawdust, cotton seed meal and beet pulp (6:2:2 V/V).

Also when we cultivated F. velutipes in this media, we harvested high yield of fruiting body.

KEYWORDS : Flammulina velutipes, genetic relationship, substrate

*Corresponding author: <[email protected]>

관계 분석을 위한 대조균주로 CBFM-003 백색균주와 충 북농업기술원에서 보유하고 있는 7개 균주를 포함하여 총 15개 균주를 사용하였다. 수집된 균주는 Potato Dextrose Agar (PDA, Difco) 배지를 사용하여 25±1℃의 항온조 건에서 배양한 후, 4℃에서 보관하며 시험에 사용하였다.

Genomic DNA의 분리는 PDA에서 7∼10일간 자란 균사 를 막자사발과 막자를 이용해 액체질소에서 고운가루가 될 때까지 마쇄한 후 DNeasy Plant Mini Kit (Qiagen)의 방법에 따라 Genomic DNA를 순수 분리하였다. 분리된 DNA는 1% agarose gel에 50V로 1시간 전기영동한 후 EtBr (Ethidium Bromide)로 3분간 염색 후 증류수에서 30분간 탈색시켜 U·V하에서 확인하였다. 순수 분리된 DNA 100 ng에 10X buffer 5 ㎕, dNTPs (10 mM) 1 ㎕, primer (10 uM) 5 ㎕, Taq DNA polymerase (Takara) 0.5 ㎕를 첨가한 후 멸균수로 최종 양을 50 ㎕로 맞추었다.

이렇게 만들어진 혼합물을 thermocycler (Perkin Elmer GeneAmp PCR system 2400)을 사용해 94℃에서 5분간 최초 변성시킨 후 94℃ 1분, 35℃ 1분, 72℃ 2분 조건으로 40번 반복하여 PCR을 수행하였다. PCR 결과 얻어진 산물 10 ㎕를 1.5% agarose gel에서 100V로 2시간 40분 동안 전기영동 한 후 EtBr에서 3분간 염색후 증류수에서 30분 간 탈색시켜 U·V하에서 확인하였다. 각각의 Primer (OPAX7, OPAX14, OPAX19 : Operon)를 사용하여 증폭 된 PCR산물의 전기영동 사진을 Gel compar Ⅱ program 을 사용해 pearson correlation방법으로 유연관계를 분석 하였다 (공, 1997).

갈색팽이의 생리적 특성 조사를 위하여 시험 균주인 갈색 팽이버섯 7균주와 CBFM-003 (백색팽이)균주를 대조구 로 총 8개의 균주를 계대배양용 배지인 PDA 배지를 멸균 기에 121℃에 20분간 멸균 후 페트리디쉬 (Ф 87mm)에 분주하여 각각의 균주를 지름 5 mm 크기로 절단 접종후 배양기에 배양하고 7일후에 온도별로 10℃, 20℃, 25℃, 30℃

에서 균사생장을 비교하였다. 또한 pH 별 균사생장 비교를 위하여 배양온도를 25 로 PDA 배지에 pH를 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0으로 차이를 두고 배양 7일후에 균사생장을 비교 하였다. 수집 갈색팽이 균주의 최적배지 선발을 위하여 PDA, MCM (mushroom complete medium), MMM (mushroom minimal media), YM (yeast extract and malt extract medium), MEM (mushroom extract media), WA (Water agar) 배지를 사용하여 (표2), 배양 온도를 25℃, pH는 6.0으로 배지를 제조하여 각각의 패트 리디쉬에 분주하여 균주 접종후 7일후에 균사생장을 비교 조사하였다. 균사밀도는 CBFM-007균주에 대하여 + 낮 음, ++ 보통, +++ 높음 등으로 달관 조사하였으며, 각 균 주별 색깔 변이 비교를 위해 균사의 색깔부터 자실체의 갓 과 대의 색깔 등을 비교 조사하였다.

선발된 갈색팽이 CBFM-007균주와 백색팽이 CBFM- 003균주 (대조구)의 배지재료들의 이화학적 특성조사를 위해 T-N은 Kjeldahl 분석법과 P

²

O

⁵

, K

²

O, CaO, MgO은 표

표 1. 수집 팽이버섯 균주 현황

No Scientific name Origin Color of mycelia Source

CBFM-001 CBFM-002 CBFM-003 CBFM-004 CBFM-005 CBFM-006 CBFM-007 CBFM-008 CBFM-009 CBFM-010 CBFM-011 CBFM-012 CBFM-013 CBFM-014 CBFM-015

Flammulina velutipes Korea Light yellow Light yellow

White Brown

- - Light yellow

White

Tissue Culture

Tissue Culture (Gyeongsangbuk-do) F. velutipes No. 2

Tissue Culture (Gangwon-do) Tissue Culture

Tissue Culture(Jeju) Tissue Culture(RDA)

Tissue Culture(chungcheongbuk-do) Tissue Culture(RDA)

Tissue Culture(RDA) Tissue Culture(RDA) Tissue Culture(RDA) Tissue Culture(RDA) Tissue Culture(RDA) Tissue Culture(RDA)

식물체 분석법을 실시하였다 (농촌진흥청, 1998). 병재배 시 주재료인 미송톱밥과 부재료인 쌀겨, 비트펄프, 면실박 등을 혼합비율에 따라 미송+쌀겨 (8:2), 미송+면실박 (8:2), 미송+비트펄프 (8:2), 미송+면실박+비트펄프 (7:2:1), 미송+면실박+비트펄프 (6:2:2), 미송+면실박+

비트펄프 (5:3:2)로 6처리를 시험관 30 Ф × 200 mm 사 용하여 25±1 의 배양조건과 수분함량은 65±1%로 균사 밀도와 균사생장을 접종 20일후에 조사하였다. Column Test에 사용한 배지별로 혼합비율을 달리하여 850 ㎖ 플 라스틱병에 배지재료를 450∼500 g씩 각각 충진 후 121℃

에서 90분간 고압멸균하였으며, 종균 접종은 톱밥 종균을 미리 준비하여 10∼15 g/병씩 접종 및 균배양 후 자실체 의 생육을 조사하였다.

각각의 Primer (OPAX7, OPAX14, OPAX19)를 사용 하여 증폭된 PCR RAPD 분석결과 프라이머에 따라 다양 한 DNA 다형성을 나타내었으며, OPAX7를 사용하였을 때는 4∼6개의 밴드를 얻을 수 있었지만, OPAX14를 사 용했을 때는 밴드가 7∼9개씩 나타났으며 갈색팽이 균주 의 유전적 계통도를 보면 85% 수준에서 5개의 그룹으로 나타났다. 이 중 1∼3 그룹과 4∼5 그룹이 크게 나누어지 는 양상을 보였으나 각 그룹에서 어떤 일정한 경향을 볼 수는 없었다.

표

표 2. 배양용 배지 조성표

_(g/ℓ)

Ingredient PDA* MCM MMM YM MEM WA

Potato Malt extract Yeast extract Pepton Trypton MgSO⁴

·7H

²0 KH²PO⁴ K²HPO⁴ Dextrose DL-asparagine Thiamine-HCl Agar

200

20

20

2 2

0.5 0.46

1 20

20

0.5 0.46

1 20

2 120㎍

20

3 3 5

0.5

10

20

20

5

20 20

* PDA : potato dextrose agar, MCM : mushroom complete medium, MMM : mushroom minimum media, YM : yest extract and malt extract medium, MEM : mushroom extract media, WA : water agar

OPAX7 OPAX14

그

그림 림 1. 수집 갈색팽이균주의 RAPD 분석에 의한 Band 비교

갈색팽이버섯 균주를 온도별로 10℃, 20℃, 25℃, 30℃

에서 균사생장을 비교한 결과 10℃처리구에서는 8개 균주 모두 균사생장이 18 mm∼36 mm로 생육이 저조하였으나 20℃처리구와 25℃에서는 균사생장이 양호하였으며, 30℃

에서는 10℃처리보다 균사생장이 좋았으나 20℃, 25℃처 리보다는 균사생장이 저조한 경향을 보였다. 이 결과로 볼 때 갈색 팽이버섯 균주의 균사생장을 위한 최적 온도는 25℃

로 볼 수 있었다.

pH를 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0으로 차이를 두고 배양 7일후 에 균사생장을 비교한 결과 CBFM-002 균주를 제외한 대 부분의 균주가 pH 6.0∼7.0범위에서 균사생장이 좋았으

며, CBFM-003균주와 CBFM-008균주는 pH에 따른 큰 차이가 없었다.

수집 갈색팽이 균주의 최적배지 선발을 위하여 PDA, MCM, MMM, YM, MEM, WA배지에서 배양온도를 25 , pH는 6.0으로 배지를 제조하여 균주 접종후 7일후에 균사 생장을 비교 조사한 결과 MCM배지에서 균사생장이 68.4

∼83.4 mm로 가장 좋았고, CBFM-002균주는 MCM배지 를 제외하고 전반적으로 균사생장이 저조하였다. CBFM- 007균주의 균사밀도는 WA 배지를 제외한 모든 배지에서 균사밀도가 높은 것을 알 수 있었다. 일반적으로 버들송이 는 균사생장시 glucose, peptone 배지가 적합하며, 최적배 지는 버섯종류에 따라 다르고 팽이버섯균의 균사생장은 그

그림 림 2. 수집 갈색팽이의 유전적 계통도

표

표 3. 온도별 균사생장 비교

균 주 균사생장량 (℃, mm/7days)

10 20 25 30

CBFM-001 CBFM-002 CBFM-003 CBFM-004 CBFM-005 CBFM-006 CBFM-007 CBFM-008

36.5 23.9 24.2 22.3 18.5 22.2 29.0 20.8

72.7 53.9 63.0 55.9 60.0 54.9 68.1 62.7

72.2 49.7 74.8 59.0 67.0 61.3 75.3 78.1

58.3 27.9 47.2 40.2 36.6 38.0 71.1 61.8

※

사용배지 : PDA, pH : 6.0

MCM 배지에서 가장 생장이 양호하다고 알려져 있다 (박·이. 1990).

각 균주별 색깔 변이 비교를 위해 균총의 색깔은 페트리 디쉬에서 자실체의 갓과 대의 색깔 등은 850 ㎖ 병재배 후 색을 달관 조사한 결과 CBFM-003 백색팽이 균주는 균 사, 갓, 대 모두 흰색이었으나, CBPM-007 균주는 균사의 색깔은 연노랑에서 자실체의 갓, 대 모두 연갈색으로 나타

났다. 그러나 CBPM-008에서와 같이 균총의 색이 백색이 어도 자실체의 색은 모두 갈색으로 나타나 균총의 색과 자 실체 색과는 연관이 없는 것으로 보인다. Byun 등 (1996) 은 야생 갈색균주의 자식교배에서 백색단핵균주간의 교잡 으로 백색의 자실체를 얻었다고 하였으나, 본 실험에서는 이핵의 수집균주를 비교하였기에 다른 결과를 나타낸 것 으로 사료된다.

표

표 4. pH별 균사생장 비교

균 주 균사생장량 (pH, mm/7days)

4.0 5.0 6.0 7.0 8.0

CBFM-001 CBFM-002 CBFM-003 CBFM-004 CBFM-005 CBFM-006 CBFM-007 CBFM-008

58.0 53.6 74.0 55.1 72.9 55.5 63.0 74.7

68.6 52.2 75.8 57.2 72.7 57.6 69.4 77.4

70.2 49.7 75.3 59.0 67.0 61.3 74.8 78.1

68.7 41.1 74.2 61.8 64.7 56.7 76.3 76.0

61.3 41.0 73.7 54.5 52.9 50.7 73.2 75.1

※ 사용배지 : PDA, 배양온도 : 25 ℃

표

표 5. 수집 갈색팽이버섯별 최적 배지 선발

균주 균사생장량 (mm/7days)

PDA MCM MMM YM MEM WA

CBFM-001 CBFM-002 CBFM-003 CBFM-004 CBFM-005 CBFM-006 CBFM-007 CBFM-008

70.2 49.7 75.3 59.0 67.0 61.3 74.8 78.1

82.5 70.2 81.8 68.4 73.4 70.7 82 83.4

60.8 43.2 65.6 67.1 72.6 57.5 68.2 71.5

56.6 44.7 69.1 62.5 73.7 67.4 71.8 75.8

77.8 56.7 71.4 66.1 69.4 62.8 59.6 73.1

61.4 53.1 55.4 50.9 43.8 60.4 58 63.7

균사밀도1 ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋

※ 배양온도 : 25℃, pH : 6.0

1. CBFM-007의 균사밀도 : ＋ 낮음, ＋＋ 보통, ＋＋＋ 높음

표

표 6. 균주별 균총색과 자실체 색의 비교

균 주 균총색깔 갓 색깔 대 색깔

CBFM-001 CBFM-002 CBFM-003 CBFM-004 CBFM-007 CBFM-008

Light yellow Light yellow

White Brown Light yellow

White

Light brown Brown

White Brown Light brown

Brown

Brown Brown White Brown Light brown

Brown

갈색팽이 CBFM-007균주와 백색팽이 CBFM-003균주 의 배지재료들의 이화학적 특성조사를 위해 T-N은 Kjeldahl 분석법과 P

²

O

⁵

, K

²

O, CaO, MgO은 식물체 분석법 으로 조사한 결과 T-N은 미송+면실박+비트펄프 6:2:2 처리가 1.04%로 가장 많았고, pH는 5.6정도였으며, P2O2, K2O, MgO는 대조구인 미송+쌀겨=8:2 처리의 배 지에 가장 많이 함유되어 있었다.

갈색팽이버섯 병재배시 주재료인 미송톱밥과 부재료인 쌀겨, 비트펄프, 면실박 등을 혼합비율을 달리하여 접종 20일후에 조사한 결과는 표 8과 같다. 배지혼용 처리에 따 른 균사생장 정도는 CBFM-003, CBFM-007균주 모두 미송+면실박+비트펄프 6:2:2 처리구에서 균사생장이 97.9∼98.4 mm로 다른 배지보다 빠르고 균사밀도도 매우 높게 나타났다.

갈색팽이버섯의 배지재료 선발을 위하여 배지재료별 자 실체의 생육 및 수량을 조사한 결과는 표 9, 표 10과 같다.

배지재료별 특성비교에서 CBFM-003, CBFM-007 균주 는 모든 배지에서 갓 직경, 대 직경, 대길이 등이 큰 차이 없이 비슷한 경향을 보였다. 그리고 배지 혼합비율에 따른 자실체의 생육은 균 배양일수는 25∼27일로 큰 차이가 없 었으며, 초발이일수도 비슷한 경향을 나타내었다. 수량면 에서 대조구인 미송+쌀겨 (8:2) 처리구보다 미송+면실박 +비트펄프 (6:2:2) 배지에서 CBFM-003은 156.3 g, CBFM-007은 162.8 g으로 각각 높은 수량을 보였다. 따 라서 백색팽이와 갈색팽이 모두 병재배에서는 미송+면실 박+비트펄프 (6:2:2)가 다른 혼합배지보다 가장 우수하였 다. 배지수분함량을 65±1%로 조정한 병재배에서 생육환 경 조건을 비교하기 위하여 14℃에서 발이시킨 후 4℃로 조절하여 자실체 생육을 고르게 조절한 뒤 생육온도를 7℃

와 10℃로 나누어 생육온도에 따른 수량성을 비교한 결과, 7℃는 10℃보다 약간 높은 수량을 보였으나, 발이기간 동 안 에너지 투입량 등 경제성을 고려하면 CBFM-007균주 는 발이온도 10℃가 적합한 것으로 판단되었다.

표

표 8. 배지 혼용 처리별 균사생장 비교

배지종류 혼합비율

(V/V)

균 주 균사밀도

¹

균사생장

(mm/20일)

미송 + 쌀겨

8 : 2 CBFM-003

CBFM-007

++++

++++

95.2 b² 95.6 b

미송 + 면실박

8 : 2 CBFM-003

CBFM-007

+++

+++

86.5 e 87.2 d

미송 + 비트펄프

8 : 2 CBFM-003

CBFM-007

+++

+++

88.3 d 89.2 c

미송+면실박+비트펄프

7 : 2 : 1 CBFM-003

CBFM-007

++

+++

91.2 c 89.5 c

미송+면실박+비트펄프

6 : 2 : 2 CBFM-003

CBFM-007

++++

++++

98.4 a 97.9 a

미송+면실박+비트펄프

5 : 3 : 2 CBFM-003

CBFM-007

++

+++

89.5 d 90.4 c

※ Column Test : 30 200mm사용 배양온도 : 25±1℃ 배지수분함량 : 65±1%

1. 균사밀도 : ++보통, +++높음, ++++ 매우높음 2. DMRT 5%

표

표 7. 배지별 이화학적 특성

배지종류 혼합비율

(V/V)

T-N P²O⁵ K²O CaO MgO

pH EC

(dS/m)

유기물

(%)

생물중 건물중

미송+쌀겨 미송+면실박 미송+비트펄프 미송+면실박+비트펄프 미송+면실박+비트펄프 미송+면실박+비트펄프

8:2 8:2 8:2 7:2:1 6:2:2 5:3:2

0.98 0.58 0.37 0.78 1.04 0.86

0.71 0.04 0.04 0.38 0.41 0.41

0.71 0.36 0.27 0.52 0.63 0.70

0.32 0.71 0.68 0.61 0.61 0.53

0.42 0.14 0.20 0.33 0.38 0.35

5.07 7.00 5.46 5.64 5.65 5.81

32.31 10.27 15.18 25.06 29.24 26.10

30.16 29.76 24.53 28.95 28.61 29.10

2.53 3.75 0.00 1.42 2.13 2.09

※ T-N : Kjeldahl 분석법, P²O⁵, K²O, CaO, MgO : 식물체분석법

표

표 9. 병재배시 자실체 특성 비교

배지종류 혼합비율

(V/V)

균 주 갓직경

(mm)

대직경

(mm)

대길이

(mm)

미송 + 쌀겨

8:2 CBFM-003 14.5 2.8 109.5

CBFM-007 15.1 2.8 110.4

미송 + 면실박

8:2 CBFM-003 14.6 3.0 110.2

CBFM-007 14.5 3.1 110.6

미송 + 비트펄프

8:2 CBFM-003 14.8 2.8 109.5

CBFM-007 14.6 2.9 108.4

미송+면실박+비트펄프

7:2:1 CBFM-003 14.8 3.2 107.5

CBFM-007 14.5 3.3 110.4

미송+면실박+비트펄프

6:2:2 CBFM-003 14.7 3.4 110.5

CBFM-007 15.3 3.4 112.9

미송+면실박+비트펄프

5:3:2 CBFM-003 14.5 3.1 110.6

CBFM-007 14.9 3.3 112.2

※ 배지수분함량 : 65±1%

표

표 10. 병재배시 배지별 생육 비교

배지종류 혼합비율

(V/V)

균 주 균배양일수

(일)

초발이소요 일수(일)

생육일수

(일)

유효경수

(개/병)

수량

(g/병)

미송 + 쌀겨

8:2 CBFM-003 26 11 6 125.4 129.5 d1

CBFM-007 26 11 6 132.2 137.6 c

미송+면실박

8:2 CBFM-003 25 10 7 114.3 115.2 e

CBFM-007 25 10 7 125.6 131.5 d

미송+비트펄프

8:2 CBFM-003 26 11 7 132.5 136.5 c

CBFM-007 26 11 7 134.2 138.6 c

미송+면실박+비트펄프

7:2:1 CBFM-003 27 11 6 140.2 148.6 b

CBFM-007 27 11 6 145.1 150.2 b

미송+면실박+비트펄프

6:2:2 CBFM-003 26 11 6 150.3 156.3 a

CBFM-007 26 11 6 156.4 162.8 a

미송+면실박+비트펄프

5:3:2 CBFM-003 27 11 6 140.1 147.3 b

CBFM-007 27 11 6 138.9 148.7 b

※ 1 DMRT 5% 배지수분함량 : 65±1%

표

표 11. 버섯 생육온도에 따른 수량성 비교

배지종류 혼합비율

(V/V)

균 주 온 도(℃)

10 7

미송 + 쌀겨

8:2 CBFM-003 112.5 b 129.5 a1

CBFM-007 135.2 a 137.6 a

미송+면실박+비트펄프

6:2:2 CBFM-003 148.9 b 156.3 a

CBFM-007 161.5 a 162.8 a

※ 배지수분함량 : 65±1%, 발이온도 : 14℃, 억제실 : 4℃

1 DMRT 5%

갈색 팽이균주간의 유전적 특성을 보기 위하여 RAPD를 수행하여 유전적 계통도를 본 결과 85% 수준에서 5개의 그룹으로 구분되었다. 생리적 특성으로는 최적 온도는 25℃

이고, CBFM-002를 제외한 모든 균주가 pH 6.0∼7.0 범 위에서 균사 생장이 양호하였다. 균사생장은 MCM 배지에 서 68.4∼83.4 mm로 가장 좋았고 균사밀도는 WA배지를 제외한 모든 배지에서 균사밀도가 높았다. 균총과 자실체 간의 색깔 간에는 일정한 경향을 찾을 수 없었다. 갈색팽이 버섯 재배에 적당한 배지 재료를 선발하기 위하여 검토한 결과, 배지별 이화학적 성분 분석에서 T-N은 미송+면실 박+비트펄프 (6:2:2)가 가장 많았고, P

²

O

²

, K

²

O, MgO는 미송+쌀겨(8:2)배지에서 가장 많이 함유되어 있었다. 배 지혼용 처리에 따른 균사생장 정도는 CBFM-003, CBFM-007균주 모두 미송+면실박+비트펄프 (6:2:2) 배지에서 균사생장이 빠르고 균사밀도가 높았다. 혼용된 배지로 병재배시 자실체의 갓 직경, 대 직경, 대 길이는 CBFM-003, CBFM-007 균주는 모든 배지에서 비슷한 경향을 보였다. 병버섯 재배에서 배지 혼합비율에 따른 균 주간 균사 및 자실체의 생육은 미송+쌀겨 (8:2)보다 미송 +면실박+비트펄프 (6:2:2)배지에서 CBFM-003은 156.3 g, CBFM-007은 162.8 g으로 가장 좋은 수량을 보였다. 병재배에서 생육온도에 따른 수량은 7℃에서 약간 높은 수량을 보였으나, 발이기간 동안 에너지 투입량 등 경 제성을 고려하면 CBFM-007은 발이온도 10℃가 적합한

것으로 판단되었다.

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