대한소화기학회지 1999;34:159 - 166
3)
접수: 1999년 2월 2일, 승인: 1999년 9월 30일
연락처: 심찬섭, 140-743, 서울특별시 용산구 한남동 657번지, 순천향대학교 의과대학 내과학교실, 소화기연구소 Tel: (02) 709-9210, Fax: (02) 749-1968
H elic ob act er p y lori 박멸 판정을 위한 면역조직화학염색법의 임상적 유용성
순천향대학교 의과대학 내과학교실, 소화기연구소, 해부병리학교실*
홍수진・곽정자*・박용주・김영태・김진오 조주영・이준성・이문성・이동화*・심찬섭
Th e Im m u n o h i s t o c h e m i c a l S t a i n fo r D e t e c t i n g H el i c ob a ct er p yl or i a ft e r E r a d i c a t i o n Th e ra p y
Su Jin Hong, M.D., Je ong Ja Kw ak, M.D.*, Yong Ju P ark, M.D., Young Tae Kim, M.D., J i n O h K i m , M .D ., J o o Yo u n g C h o , M .D ., J o o n S e o n g L e e , M .D .,
Moon Sung Le e , M.D. Dong Wh a Le e , M.D.* and Chan Sup Shim , M.D.
Departments of Internal Medicine, Anatomic Pathology,* Institute for Digestive Research, Soon Chun Hyang University College of Medicine, Seoul, Korea
Background/Aims: Accurate detection of Helicobacter pylori is essential to confirm eradication of H. pylori after treatment. The purpose of this study was to evaluate usefulness of the immunohisto
chemical stain in detecting H. pylori after eradication treatment. Methods: Gastroscopy for biopsy sampling was performed on 89 patients with peptic ulcer disease. Antral biopsy specimens were taken from antrum and corpus (five specimens from each) for rapid urease test, histological examination polymerase chain reaction (PCR), and culture. All patients with H. pylori were treated with omepra zole, amoxicillin, and clarithromycin for two weeks and then, endoscopy and tests for detecting Hpylori were performed four weeks after completion of eradication therapy. Results: The H. pylori
infected patients were 65 of the 89 patients and they were treated with the eradication therapy According to repeated endoscopy for 46 of the 65 patients, H. pylori was still detected as follows 1 patient (2.2%) by CLO test; 2 (4.4%) by culture; 7 (15.2%) by PCR; 3 (6.5%) by H&E stain; 10 (21.7%) by Genta-Robason stain; 12 (26.0%) by immunohistochemical stain. Coccoid forms of Hpylori were identified in 6 cases, and all of them were detected only by immunohistochemical stain Conclusions: The immunohistochemical stain was a sensitive method for detecting H. pylori in
gastric biopsy specimens after eradication therapy, especially for detecting coccoid forms of H. pylori(Kor J Gastroenterol 1999;34:159 - 166)
Key Words: H. pylori, Eradication therapy, Immunohistochemical stain, Coccoid form
160 대한소화기학회지 : 제 34 권 제 2 호 1999
서 론
H. pylori 감염의 진단법은 조직병리학적 검사 외 에도 CLO 검사, 배양검사, 중합효소연쇄반응법에 의한 검출법, 혈청학적 검사 등이 널리 이용되고 있 다. 최근 들어 소화성 궤양 환자를 비롯한 일부 환자 들에서의 제균요법이 보편화되면서 균의 박멸 여부 를 효과적으로 알아보는 것은 매우 중요한데, 치료 효과의 판정 방법으로서 각 진단 방법들의 H. pylori 검출능에 따라 제균율 보고에 차이가 있다. 이처럼 H. pylori 제균요법 후 박멸되지 않은 예에서 H.
pylori가 검출되지 않는 이유로는 치료 후 균수의 감 소로 인한 검사 방법들의 민감도가 감소하거나, 간 균(bacillary form)에서 구균(coccoid form)으로의 형 태변화에 의한 조직병리학적 검사의 민감도 감소 등 을 들 수 있다. 면역조직화학염색법이란 조직병리학 적 검사의 일종으로 항원과 항체 간의 반응을 이용 하여 세포나 조직 내에 존재하는 물질을 확인하는 면역염색법이다. 조직절편 내의 형태학적인 소견만 으로 진단을 내리기 어려운 경우 정확한 진단을 내 릴 수 있도록 보다 객관적인 정보를 제공할 수 있다 는 장점이 있다. 이에 본 연구는 특히 제균 후 H.
pylori 진단에 있어서의 면역조직화학염색법의 유용 성을 알아보고자 시행되었다.
대상 및 방법
1. 대 상
상부소화관 증상을 주소로 순천향대학병원 소화 기내과에 내원하여 상부소화관내시경검사를 시행받 고 위궤양이나 십이지장궤양으로 진단받은 89명 중 H. pylori 양성이면서 제균요법을 시행한 후 추적 검 사에 응한 46명의 환자를 대상으로 하였다. 질환별 로는 십이지장궤양 환자가 34명, 위궤양 환자가 12 명이었다.
2. 방 법
대상 환자에서 내시경 직시하에 전정부의 대만에 서 5개, 체부의 대만에서 5개의 생검조직을 얻어
CLO 검사, 중합효소연쇄반응법, 배양검사 및 H&E 염색법, Genta-Robason 염색법, 면역조직화학염색법 에 각각 이용하였다. 이들 중 H. pylori 감염이 확인 된 환자는 omeprazole 20 mg, amoxicillin 1,000 mg, clarithromycin 500 mg을 하루에 두 번, 2주간 복용 하도록 하는 제균요법을 시행하였고, 치료 종료 최 소 4주 후에 다시 내시경검사 및 H. pylori 검사를 시행하여 이들 검사에서의 H. pylori 검출률을 비교 하였다.
1) CLO 검사
전정부와 체부에서 채취한 조직절편 한 개씩을 CLO 검사 슬라이드(Delta West, Australia)에 담아 실온에서 24시간 둔 후 결과를 판정하였다. 24시간 후에도 CLO 검사 겔이 노란색을 유지하면 H. pylori 음성으로 판정하였으며, 겔이 분홍색으로 관찰되면 양성으로 판정하였다.
2) 중합효소연쇄반응법
전정부와 체부에서 얻어진 두 개의 생검조직을 바로 -70℃에 냉동 보관하였다가 중합효소연쇄반응 법을 시행하였다. DNA의 추출은 2 M Tris-HCl (pH=8.0), 5 M NaCl, 0.5 M EDTA로 tissue lysis buffer를 만들어 100 l를 조직절편에 첨가한 다음 10% sodium dodecyl sulfate (SDS) 5 l 및 proteinase K 20 mg/ml 용액 2 l를 첨가하고 37℃에 3시간 동 안 방치하였다. 이후 phenol-chlorform 방법으로 DNA 를 추출한 후 100% 에탄올을 첨가하여 침전시키고 원심분리 후 DNA pellet을 얻어 중합효소연쇄반응 법에 사용하였다. 사용된 시발체는 Valentine 등1이 개발했던 CAM-2 (5' -CATCTTGTTAGAGGGATT- GG-3' ), CAM-4 (5' -TAACAAACCGATAATGGC- GC-3' )을 이용하여 증폭하였다. 증폭된 DNA 산물 은 50 V, 25 Amp에서 2% 한천겔 전기영동(agarose gel electrophoresis)을 시행하고 자외선투조기로 203 bp에서 단일 대가 나오면 양성으로 판정하였다.
3) 배양검사
배양검사를 위하여 위 전정부와 체부에서 각각 1 개씩의 조직절편을 얻어 즉시 특수하게 제조된 배지
홍수진 외 7인. Helicobacter pylori 박멸 판정을 위한 면역조직화학염색법 161
에서 각각 배양하였다. 배지는 blood agar base (Difco, Ditroit, Mich., USA)에 적절한 양의 증류수 를 넣고 녹인 후 121℃에서 15분간 고압멸균소독을 하였고 50℃까지 온도를 낮춘 다음 복합항생제(van- comycin 10 g/ml, polymyxin B 10 g/ml, trimetho- prim 5 g/ml, amphotericin B 2.5 g/ml)와 말혈청을 5% 농도가 되도록 가하여 배지를 제작하였다. 조직 절편이 접종된 배지는 10% CO2, 37℃ 하의 미세호 기성 환경에서 3일에서 7일간 배양하였고, H. pylori 의 확인을 위해 Gram 염색, urease 검사, catalase 검 사를 이용하였다.
4) 조직학적 검사 방법
전정부와 체부에서 각각 2개씩 생검하여 얻은 각 각의 조직을 10% 포르말린액에 고정한 후 파라핀 블록을 제작하고 박절하여 H&E 염색법, Genta-Ro- bason 염색법, 면역조직화학염색법을 시행하였다.
면역조직화학염색법에 사용된 H. pylori에 대한 일 차항체는 rabbit anti-Helicobacter pylori (DAKO, CA, USA)였다. 조직학적 검사에서 균밀도의 등급은 개개의 혹은 소그룹의 균체가 점막 표면의 1/3 이하 를 덮는 경우를 경도, 많은 수의 그룹이 점막 표면의 2/3 이상의 표면과 상부소와(pits)에 있는 경우를 고 도로 정하였고 그 중간을 중등도로 하였다.
5) 통계 처리
각 검사 방법별 H. pylori 양성률에 대해서 χ2 test
로 비교하였으며, p값이 0.05 미만인 경우 유의성이 있다고 판정하였다.
결 과
1. 제균요법 전 각 검사 방법에 따른 H . p y lori의 검출
H. pylori 감염은 시행된 검사 방법들 중 한 가지 라도 양성이면 감염 양성으로 판정하였고 모두 음성 인 경우를 감염 음성으로 하였다. 내시경검사를 시 행받은 89명의 소화성궤양 환자들 중 한 가지 검사 이상에서 H. pylori가 검출된 경우는 65명이었다. 각 진단 방법에서의 균 검출률을 구분하여 보면 65명의 환자중 CLO 검사에서 61명(93.8%), 중합효소연쇄반 응법에서 65명(100%), 배양검사에서 63명(96.9%), H&E 염색법에서 64명(98.5%), Genta-Robason 염색 법에서 65명(100%), 면역조직화학염색법에서 65명 (100%)으로 나타났으며 각 검사 방법들 사이의 검 출률에 대한 통계적 차이는 없었다. 조직검사 방법 들에서 균밀도에 따른 각각의 결과를 보면 H&E 염 색법에서는 경도 14명(21.9%), 증등도 24명(37.5%), 고도 26명(40.6%)으로 Genta-Robason 염색법에서는 경도 10명(15.4%), 증등도 27명(41.5%), 고도 28명 (43.1%)으로 면역조직화학염색법에서는 경도 11명 (16.9%), 증등도 25명(38.5%), 고도 29명(44.6%)으로 판정되었다(Table 1).
Table 1. Comparison of Detection Rates in Patients with H. pylori infection before Eradication Treatment
Diagnostic methods
〈 Detection of H. pylori (No. of samples (%) 〉
Total
Degree of H. pylori load
Mild Moderate Severe CLO test
Culture PCR Histology
H&E stain
Genta-Robason stain Immunohistochemical stain
61/65 (93.8%) 63/65 (96.9%) 65/65 (100%) 64/65 (98.5%) 65/65 (100%) 65/65 (100%)
14/64 (21.9%) 10/65 (15.4%) 11/65 (16.9%)
24/64 (37.5%) 27/65 (41.5%) 25/65 (38.5%)
26/64 (40.6%) 28/65 (43.1%) 29/65 (44.6%)
162 The Korean Journal of Gastroenterology : Vol. 34, No. 2, 1999
2. 제균요법 후 각 검사 방법에 따른 H . p y lori의 검출
H. pylori 감염이 확인된 65명의 소화성 궤양 환자 에서 제균요법 종료 최소 4주 이후에 추적 내시경검 사를 시행받은 환자는 46명이었는데, H. pylori 검출 양성률을 보면 CLO 검사에서는 1명(2.2%), 배양검 사에서 2명(4.4%), 중합효소연쇄반응법에서 7명 (15.2%), H&E 염색법에서 3명(6.5%), Genta-Roba- son 염색법에서 10명(21.7%)(Fig. 1A), 면역조직화학 염색법에서 12명(26.1%)(Fig. 1B)으로 나타났다.
CLO 검사, 배양검사, H&E 염색법은 나머지 검사 방법들에 비해 낮은 검출률을 보였으며(p<0.05), 중 합효소연쇄반응법, Genta-Robason 염색법, 면역조직 화학염색법들 간에는 상호 검출률의 차이가 없었으 나 Genta-Robason 염색법을 포함한 조직검사 및 CLO 검사, 배양검사, 중합효소연쇄반응법 등에서 모두 음성이던 2예에서 면역조직화학염색에서 H.
pylori가 검출되었으며 타 검사 방법에 양성이었던 경우 모두에서 면역조직화학염색도 양성으로 나타 났다. 조직검사 방법들에서 균밀도에 따른 각각의 결과를 보면 H&E 염색법에서는 경도 3명(100%),
Fig. 1. Detection of H. pylori in post-eradication biopsy specimen. (A) Genta-Robason stain shows a few bacillary form of H. pylori (×1,000). (B) Immunohistochemical stain shows a few bacillary form and coccoid form of H. pylori (×1,000).
Table 2. Comparison of Detection Rates in Patients with H. pylori infection after Eradication Treatment
Diagnostic methods
Detection of H. pylori〈 No. of samples (%) 〉
Total
Degree of H. pylori load
Mild Moderate Severe CLO test
Culture PCR Histology
H&E stain
Genta-Robason stain Immunohistochemical stain
1/46 (2.2%) 2/46 (4.4%) 7/46 (15.2%)*
3/46 (6.5%) 10/46 (21.7%)*
12/46 (26.1%)*
3/ 3 (100%) 8/10 (80%) 10/12 (83.3%)
0/ 3 (0%) 2/10 (20%) 2/12 (16.7%)
0/ 3 (0%) 0/10 (0%) 0/12 (0%)
* p<0.05 vs. Culture, CLO test and H&E stain.
Hong, et al. Immunohistochemical Stain for Detecting Helicobacter pylori after Eradication Therapy 163
Genta-Robason 염색법에서는 경도 8명(80%), 증등도 2명(20%), 면역조직화학염색법에서는 경도 10명 (83.3%), 증등도 2명(16.7%)으로 판정되었다(Table 2).
3. 구균 형태의 H . py lori의 검출
여러 가지의 염색법 중 구균 형태의 H. pylori는 제균요법 후의 면역조직화학염색법에서만 총 6명에 서 검출되었다(Table 3,Fig. 1B). 6명의 환자는 주로 구균이 관찰되었지만 환자 모두 소수의 간균도 군집 을 이루어 공존하는 양상으로 관찰되었다.
고 찰
H. pylori 감염의 진단 및 치료는 위, 십이지장질 환들의 치료에 있어 매우 중요한 부분을 차지하고 있다. H. pylori 감염 진단에 이용되는 검사로는 혈 청학적 검사, 요소호기검사 등의 비침습적 검사 방 법과 조직절편이 필요한 조직학적 염색법, 배양검사, 신속 요소분해효소검사(rapid urease test), 중합효소 연쇄반응법 등의 침습적 검사 방법들이 있다. 일반 적으로 특이도가 가장 높다고 여겨지는 배양검사가 H. pylori 진단의 가장 좋은 방법(“gold standard")으 로 알려져있으나2,3 배양 조건이 매우 까다롭고 다른 검사 방법들에 비해 민감도가 낮은 단점이 있다.4,5 H. pylori 감염의 첫 진단에서의 이들 검사 방법에 대한 상대적인 정확성 평가에 대한 연구는 이미 보 고되어 왔지만,5-7 제균치료 후 평가에 대한 연구는 보고가 드물다.8 H. pylori에 대한 제균요법 후에는 항생제와 proton pump 억제제가 일시적인 균수의 감소 및 대사의 감소를 유발하여 검사방법들의 검출 역치 아래로 떨어뜨릴 수 있기에 치료의 성공 여부
평가의 시기는 치료 종료 후 최소 4주 이후에 시행 하는 것이 널리 권장되어 오고 있다.9,10 H. pylori 제 균요법 후에는 H. pylori가 남아 있는 경우라 하더라 도 전정부에서는 거의 사라지고 체부의 소와(pits) 및 분비선(glands) 내 깊은 곳에 소수만 존재하므로 조직생검을 이용하는 배양검사, 신속 요소분해효소 검사, 조직검사 등에서는 검사의 민감도가 감소하는 것으로 알려져 있다.11 반면 위 내 전체의 감염 상태 를 반영할 수 있는 요소호기검사는 민감도와 특이 도가 높아 제균요법 후의 검사 방법으로 가장 권장 되고 있다.4,12,13 그러나 우리 나라에서는 최근에서야 요소호기검사가 도입되었고 일부 병원에서만 시행 가능하기에 널리 이용되기에는 제한점을 갖고 있다.
또한 위궤양 환자에서는 궤양의 치유 여부 확인을 위해 내시경검사를 다시 시행해야 하므로 생검조직 을 이용한 H. pylori 검사 방법이 보다 보편적으로 적용되고 있다. 본 연구는 우리 나라에서 흔히 적용 되고 있는 생검조직을 이용한 H. pylori 진단 방법들 에서의 제균요법 시행 후 H. pylori 검출률을 조사하 고 비교하고자 시행되었다.
생검조직을 이용하는 검사 방법 중 가장 널리 이 용되고 있는 검사 방법 중의 하나인 조직학적 검사 는 그 염색 방법에 따라 민감도의 차이가 큰 것으로 알려져 있다. 또한 앞서 언급한 바와 같이 제균요법 후나 proton pump 억제제를 복용한 환자들에서의 H.
pylori 균주 분포의 특성 때문에 내시경검사시의 조 직 채취 부위가 감염 진단의 정확도에 영향을 줄 수 있다. 제균요법 후 첫 추적 검사에서 H. pylori 검출 의 민감도 차이는 결국 국소적으로 소수에서 남아 있는 H. pylori 균주를 간과하는 위음성의 오류를 범 하여 제균요법의 성공을 과대 평가하게 하는 것으로 인식된다. 본 연구에서는 이런 표본추출오차(sam- pling error)를 줄이기 위하여 조직학적 검사시 유문 부에 가까운 전정부에서 2개, 체부에서 2개 등 모두 4개의 검체를 얻어 염색을 시행하였다. 또한 배양검 사, 신속 요소분해효소검사, 중합효소연쇄반응법에 도 각각 전정부와 체부에서 1개씩의 조직 검체를 채 취하여 검사에 이용하였다.
제균요법 전에는 H. pylori 감염 진단에 이용되는 조직학적 검사 중 주로 많이 이용되는 H&E 염색법 Table 3. Comparison of Detecting Coccoid H.
pylori after Eradication Treatment
Coccoid H. pylori H&E stain
Genta-Robason stain Immunohistochemical stain
0/3 (0%) 0/10 (0%) 6/12 (50%)
164 대한소화기학회지 : 제 34 권 제 2 호 1999
이나 Wright-Giemsa 염색법의 민감도가 각각 85.0%, 87.0%로 비교적 낮은 반면, Warthin-Starry 염색법이 나 Genta-Robason 염색법은 99%의 높은 민감도를 보이는 것으로 보고되었다.14 그러나 본 연구에서는 통상적인 H&E 염색법과 특수염색법 중 Genta- Robason 염색법을 선택하여 H. pylori에 대한 특수 면역항체를 이용한 면역조직화학염색법과 비교한 결과, 제균요법 전 H. pylori 양성으로 확인된 65명 중 H&E 염색법은 98.5%(64명), Genta-Robason 염 색법과 면역조직화학염색법은 100%(65명)의 검출 률을 보여 H&E 염색법에 의한 진단이 H. pylori 치 료 전에는 다른 염색법들에 비해 뒤지지 않음을 볼 수 있었다. H&E 염색법의 H. pylori 진단율에는 병 리의의 숙련도가 영향을 주는 것으로 알려져 있으 며 본 연구에서의 결과처럼 경험이 많은 병리의가 판독할 경우 제균요법 전에는 H&E 염색법만으로도 충분히 H. pylori의 진단이 가능하다고 생각되었다.
그러나 제균요법 후에서는 Genta-Robason 염색법과 면역조직화학염색법에 의한 균 검출이 총 46명 중 각각 21.7% (10명)과 26.1% (12명)으로서 H&E 염 색법의 6.5%(3명)에 비해 월등하였다. 이는 제균요 법 후에는 특수염색법이 H&E 염색법에 비해 훨씬 민감하다는 것을 보여준 결과라 여겨진다. 특수염색 법 중 Genta-Robason 염색법은 Warhin-Starry 염색 법보다 시간과 경비가 절약되고, H&E 염색표본이 없어도 조직학적 소견을 볼 수 있으며 장상피화생 을 쉽게 찾을 수 있는 장점이 있다. 또한 치료 후의 생검조직을 관찰하거나 점액 성분이 많은 조직에도 유용하게 이용할 수 있으며 그 정확도도 Warthin-Starry 염색법과 대등하여 최근 많이 사용 되고 있다.14
H. pylori를 배양해 보면 서로 다른 두 가지 형태 의 세균들을 관찰할 수 있다. 나선형 간균의 형태와 구균의 형태가 그것인데 그 중 구균은 생존하나 배 양은 불가능한 형태로 알려져있다.15,16 구균의 형태 가 되면 배양이 되지 않지만 간균과 동일한 항원적 특성을 지니며 실험적인 동물모델에서 구균 형태의 H. pylori가 간균 형태로 다시 전환이 가능하며 위염 과 궤양을 발생시킨다고 한다.16 또한 구균 형태는 생체에서 삼제병합요법을 시행한 환자에서도 관찰
되는데, 이는 omeprazole이나 항생제와 같은 생존에 부적절한 환경에서의 세균의 일시적인 적응기전으 로 여겨진다. 구균 형태의 H. pylori는 H&E 등의 통 상적인 염색법으로는 관찰할 수 없는 경우가 대부 분이고 다른 구균이나 진균류의 포자 등과 감별이 어려워서 면역조직화학염색법이나 전자현미경을 이 용하여야 정확하게 관찰할 수 있다.17 본 연구에서도 제균요법 이전에는 구균 형태의 H. pylori가 관찰되 지 않았지만, 제균요법 후 일부 환자에서 면역조직 화학염색법으로 확인할 수 있었다.
본 연구에서는 조직학적 검사시 간균 또는 구균 이 검출되는 경우 제균요법의 실패로 정의하였지만 실제 구균은 면역조직화학염색법에서만 관찰되었 고, 구균 형태의 H. pylori가 보였던 경우 모두 소수 의 간균 형태의 균체들이 동시에 관찰되어 구균 형 태만으로 균 존재를 진단한 경우는 없었다. H. pylori 제균요법 후 조직학적 검사에서 균 검출시 검출된 균주들이 모두 살아 있는 것이라고는 할 수 없으나 조직학적 검사에서 검출될 정도의 군집을 보이는 균 체들의 일부는 살아 있는 균일 가능성이 매우 높으 며, 면역조직화학염색에서 양성을 보이는 항원성을 유지하는 것 또한 살아있는 것임을 간접적으로 증명 한다고 보여지기 때문이다. 또한 제균요법 후 균 박 멸 여부를 조직학적 검사로 판정하였던 많은 다른 연구들에서도 제균요법 후 균 검출은 곧 균 박멸 실 패로 간주하여 보고된 바 있다.8,18
최근의 한 연구18에서는 H. pylori 제균 치료 후 조 직에서 배양 및 신속 요소분해효소검사와 H&E 염 색, Wright-Giemsa 염색, Periodic-Acid-Schiff 염색 을 통해 모두 음성이었던 환자 32명 중 면역조직화 학염색을 시행하여 12명(37.5%)에서 간균 형태의 세 균 군집을 관찰하였고, 이들 중 5명에서 H. pylori의 지속적 감염을 의미하는 구균의 군집을 관찰함으로 써 면역조직화학염색은 민감도가 높으므로 특히 제 균치료 후 균 박멸 여부 판정을 위해 면역조직화학 염색을 권장하였다. 본 연구에서도 다른 염색법을 이용한 조직학적 검사 및 신속 요소분해효소검사, 배양, 중합효소연쇄반응법 등에서 모두 음성이던 2 예가 면역조직화학염색에서 H. pylori의 군집을 보 였다. 또한 한 가지 검사 방법에서라도 양성이었던
홍수진 외 7인. Helicobacter pylori 박멸 판정을 위한 면역조직화학염색법 165
경우 모두 면역조직화학염색검사에서 양성으로 나 타나, 면역조직화학염색이 H. pylori를 검출하는 데 민감하다는 것을 알 수 있었다. 균체의 밀도에 따른 검출률을 보았을 때 면역조직화학염색에서만 H.
pylori를 관찰할 수 있었던 2예 모두 경도의 균밀도 를 나타내어, Genta-Robason 염색법과 중합효소연 쇄반응법과 통계학적인 검출률의 차이는 없었지만 균체 수가 적은 경우에 면역조직화학염색이 더욱 유용함을 보여주었다. 이러한 결과는 H. pylori 균체 밀도가 낮을 때 가음성으로 판독될 수 있음을 의미 하는데, 한 보고에서 H. pylori 균체들을 희석하여 양성으로 검출되는 균밀도를 조사하였을 때 CLO 검사는 1.5×107/mL, 중합효소연쇄반응법은 5×
104/mL, 조직학적 검사는 4.4×105/mL 이상에서 양 성으로 나타나 이런 기준 이하의 균밀도에서는 음 성으로 나타남을 증명한 바 있다.19 이는 제균요법 후의 H. pylori검사에서 음성이라도 균 재발의 가능 성이 있음을 시사하며 가장 낮은 균밀도에서 검출 할 수 있는 검사 방법이 제균요법 후 가장 이상적임 을 말해준다.
본 연구에서는 제균 후의 생검조직에서 면역조직 화학염색법에서만 6예에서 구균 형태의 H. pylori가 관찰되었으며 타 검사 방법에서 모두 음성이었던 2 예에서 항 H. pylori 항체에 반응을 보이는 균체가 발견되어, Genta-Robason 염색법 및 중합효소연쇄반 응법과 의미 있는 검출률의 차이는 없지만 숫적으로 보다 높은 검출률을 보였다. 이상의 결과로 보아 소 수의 균체가 존재하는 제균요법 후에 있어서 일반적 인 염색검사에서 H. pylori가 검출되지 않은 환자들 에게 면역조직화학염색법을 선별적으로 시행하는 것이 균 박멸 평가를 위하여 적절하리라 생각되며, 특히 성공적인 H. pylori 박멸 후에는 추적 조직검사 상 위염의 정도가 감소됨을 관찰할 수 있으므로 제 균요법 후 H. pylori가 검출되지 않음에도 조직학적 염증이 지속되는 경우에 면역조직화학염색법을 시 행하는 것이 좋으리라 여겨진다.
요 약
목적: H. pylori 감염의 정확한 진단은 환자의 적
절한 치료를 위해 필수적이며 특히 제균치료 후 H.
pylori 박멸의 확인은 추후의 치료 방침을 결정하는 데 있어 매우 중요하다고 할 수 있다. 이에 저자들 은 제균치료 후 H. pylori 검출에 있어 면역조직화학 염색법의 유용성을 알아보고자 CLO 검사, 중합효 소연쇄반응법, 배양검사 및 H&E 염색법, Genta-Robason 염색법 등과 비교하였다. 대상 및 방 법: 89명의 소화성 궤양 환자들에서 H. pylori 진단 목적으로 전정부에서 5개, 체부에서 5개의 생검조직 을 얻어 CLO 검사, 중합효소연쇄반응법, 배양검사 및 H&E 염색법, Genta-Robason 염색법, 면역조직화 학염색법을 시행하였다. H. pylori 감염이 확인된 65 명의 환자에서 omeprazole, amoxicillin, clarithromycin의 2주 제균요법을 시행하였고 치료 종료 최소 4주 후에 다시 내시경검사 및 H. pylori 검사를 시행하였다. 결과: H. pylori 제균요법을 시 행한 소화성 궤양 환자에서 치료 종료 4주 후 추적 내시경검사를 시행받은 환자는 46명이었다. 이들의 H. pylori 검출률은 CLO 검사에서는 2.2%(1명), 배 양검사에서 4.4%(2명), 중합효소연쇄반응법에서 15.2%(7명), H&E 염색법에서 6.5%(3명), Genta-Robason 염색법에서 21.7%(10명), 면역조직 화학염색법에서 구균 형태가 주로 보였던 6명을 포 함하여 26.1%(12명)로 나타났다. 구균 형태의 H.
pylori는 제균요법 후의 면역조직화학염색법에서만 검출되었으며 총 6명에서 관찰되었다. 결론: 면역조 직화학염색법은 제균요법 후 균 검출에 우수한 진단 방법으로 여겨지며, 특히 구균 형태의 H. pylori의 검 출에 매우 민감한 진단 방법으로 생각된다.
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