Hepatoprotective Activities of Daidzin, Daidzein, Genistein and Puerarin in Primary Cultured Rat Hepatocytes

약학회 지 제 51 권 제 2 호 115-125 (2007)

Yakhak Hoeji Vol. 51, No. 2

■. 1Z..X T

흰쥐의 일차배양 간세포에서

Daidzin, Daidzein, Genistein

Puerarin

박진구 • 천호준 • 김영식* • 강삼식* • 최재수** • 이선미* 성 균관대 학교 약학대 학, *서 울대 학교 약학대 학, **부경 대 학교 수산과학대 학

(Received February 20, 2007; Revsied March 5, 2007)

Hepatoprotective Activities of Daidzin, Daidzein, Genistein and Puerarin in Primary Cultured Rat Hepatocytes

Jin-Goo Park, Ho-Joon Cheon, Yeong Shik Kim*, Sam Sik Kang*, Jae Sue Choi** and Sun-Mee Lee^

College of Pharmacy, Sungkyunkwan University, Suwon 440-746, Korea

^College of Pharmacy, Seoul National University, Seoul 110-460, Korea

^Faculiy of Food Science and Biotechnology, Pukyong National University, Busan 608-737, Korea

Abstract —— The aim of this study was to investigate the protective activities of daidzin, daidzein, genistein or puerarin, active isoflavonoids of Puerariae Radix, on the hepatocyte injury induced by carbon tetrachloride (CCI4, 10 mM), tert-h\xty\

hydroperoxide (TBH, 0.5 mM) and D-galactosamine (GaIN, 30 mM). Primary cultures of rat hepatocytes (18 hr cultured) were treated with CCI4, TBH or GaIN and various concentrations (0.1, 1, 10 and 100 fiM) of daidzin, daidzein, genistein or puerarin. CCI⁴ significantly increased the levels of lactate dehydrogenase (LDH), alanine aminotransferase (ALT) and aspar­

tate aminotransferase (AST). The increase in LDH level was attenuated by daidzein, genistein and puerarin. Puerarin also inhibited the increase in AST level induced by CCI4. The increases in LDH and ALT levels induced by TBH were sig­

nificantly attenuated by daidzin and genistein treatments. GaIN markedly increased the levels of LDH, ALT and AST. These increases were significantly attenuated by daidzein. Daidzin also inhibited the increases in LDH and AST levels induced by GalN. The increases in LDH and ALT levels were attenuated by genistein and puerarin, respectively. These results suggest that daidzin and daidzein possess hepatoprotective activities.

Keywords □ daidzin, daidzein, genistein, puerarin, hepatoprotective acivity, primary cultured hepatocyte

길 :근 (Puerariae radix)& ^콩과(Leguminosae)에속히는Pueraria

lobata ^{Bentham의주피를 제거한뿌러로서 한의학에서는해열,}

발한, 진경작용을나타내어 감기, 해열및소염진통약으로널리

쏘이고 있으녀/■기간장질환개선제로도사용되어 오고 있다.크' 같근의 생리활성성분중 daidzin은 알코올의 1차 대사산물인 acetaldehyde틀분해히는acetaldehyde dehydrogenase^- 선택적 으로억제하며,신genistein은지방간을유발시킨 생쥐의 지방조

직에서 지질 감소 및지방산의산화률통해간보호효과를나타

낸다®*^고? !:다. 또?!: puerarin은 지방간을 유도시킨 흰쥐에서

cholesterol의생성과담즙산의분비률조절하여 간보호작용을

#본논문에 관한 문의는 저자에게로 (전화) 031-290-7712 (팩스) 031-292-8800 (E-mail) sunmeeCa)skku.edu

나타내며,® 더나서■가간섬유화도억제한다고 한다. 이와같 이같근의간장보호작용이단편적으로연구발표되어지고있 으나현재까지 갈근의생리 활성성분에 대한체계적인 연구는 매우미약한실정이다.

Carbon tetrachloride(CCl⁴), tert-butyl hydroperoxide(TBH) 및 D-galactosamine(GalN)은대표적 간득성 유도물질로서 이들 을흰쥐의일차배양간세포에치처함으로써 간보호약물의 활

성검색에이용하고있다. CCI4는 에직접적인손상을일으키

는 대표적인물질로서 cytochrome P450 monooxygenase의농 도가높은간중심부인중심소엽에서 CClj 라디칼로활성화되어

간득성을유발한다.®^ TBH는간세포지질과산화를일으키는대

표적인물질로서 간세포내에서 radical을형성하여 간세포의 고

사나괴사를일으킨다.9 또한 GalNa：간세포의단백질및 RNA

합성을억제하셔간손상을일으키며, GaIN에의해손상된 간세

116 박진구 • 천호준 • 김영식 ■강삼식 • 최재수 • 이선미

포의 기능과 형태의 번화는 버의러스성 간염에 의한 것과 유사 하다피고 보고되고 있다.

따라서 본 연구에서는 CCI4, TBH 및 GalN으로 간득성을 유 발시킨 흰쥐의 일차 배양 간세포 모델을 이용하여 같근의 대표 적인 생리활성 물질인 daidzin, daidzein, genistein 및 puerarin 의 간세포 보호 활성을 알아보고자 하였다.

실험 방법

시약 및기기

실험에 사용한 갈근은 경상북도 영천에서 재배한 것을 구입하 여 경희대학교 이제현 교수의 감정을 받아 사용하였다. Type I collagen, collagenase type ly insulin, epidermal growth factor, hydrocortisone, glucagon, antibiotic antimycotics, trypan blue, bovine serum albumin(BSA), methylthiazolyldiphenyl- tetrazolium bromide(MTT), CCI4, TBH 및 GalN 등은 Sigma 사(St. Louis, MO., U .S A )에서, lactate dehydrogenase(LDH), alanine aminotransferase(ALT) 및 aspartate aminotrans- ferase(AST) assay kit는 (주)아이비디-랩, Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM), fetal bovine serum(FBS), phosphate buffered saline 등은 GIBCO-BRL사(GRAND Island, NY, U.S.A.)에서 구입히여 ■하였으며 기타 일반 시약둘은 특급 시 약을 구입하늬 사용하였다. *H- 및 모근C-NMR spectrum은 JEOL JNM-ECP 400('H-NMR 400 MHz; ^^C-NMR 100 MHz) spec­

trophotometer# 사용하여 즉정하였다. Chemical shift value는 parts per million(ppm) 단위로 나타내었다. 추출 및 분러용 용메 는 시익용 1급을 사 §■하였다. TLC plate는 Kieselgel 60 ?254(0.25

|im>을 사용하였으며, 발색시약은 50% sulfuric add을 사용하였 다. Column chromatography용 고정상은 silica gel(70~230 mesh, Merck), Sephadex LH-20(25~100 mm, Sigma), 그러고 Diaion HP-20(250~850 mm, Supelco)을: 사용하였다.

실험동물

본 실험은 성균관대학교의 실험동물 관리 및 용에 대한 규

정에 따라 수행되었다. 체중 180-220 요의 Sprague-Dawley계 응 성 흰쥐를 (주)현대바<>1오로부터 공급 받아 온도 23±1°C, 상대 습도 55±15% 및 300~500Lux의 조도로 12시간 간격으로 명 암이 조절되는 성균관대학교 약학대학 동물 사육실에서 일주일 이상 순화시킨 후 육안적 증상을 관찰하여 정상적인 동물만을 실

험에 사용하였으며, 고형 사료 및 물은 게 섬취시켰다.

시료의 추출 및분리

Pueraria lobataS] 분리방법은 다옴과 같다.^® 같근 12 kg옳 분 쇄하식 환류 냉각기룰 부착한 집기병에 담은 후 9 /의 MeOH을

넣은후수욕상에서 3시간추출하였다. 그리고추출액은여과하 였으며 rotary vacuum evaporator률사'용■초!여농축하였다(40°C).

위와같은방업 로 다시 2회더반복하식총 2.5 kg MeOH 농

측액을얻었다. MeOH 추출농축액을증류수에 현탁시키고, 동

량의 CH2CI2률가하여분획깔때기로 CH2CI2 층과 H；/ ) 층을분 획하는조작을 3회반복실시한후, CH2CI2 층을감압농축하며 CH2CI2 분획을얻었다. 남은 HjO 층에다시 EtOAc률동량가 해서 H2O 층과 EtOAc 층을분획하는조작을 3회반복실시한 후

,

층에동일한방법으로m-BuOH을가하식상층의m-BuOH 층과

HjO 층을분획하였다. 얻어진분획중 EtOAc 분획(43 g)을지 름 6 cm 인 silica gel column 에 loading시켜 CH2Cl2/MeOH (gradient)를용출액으로하여유출시켜분획 frl-frl4를얻었다. 분획 frlO을 MeOH로재결정화시켜 daidzein(2.4g)을얻었으며, 나머지 여액을 silica gel column에 loading시켜 CH^CyMeOH (20: 1)로용출시켜 genistein(2 g>t 얻었다. 또한 «-BuOH 분획 (400 g)을 지름 12 cm 인 Diaion HP-20 column 에 loading 시켜 HjO, HjO ; MeOH(3 : 2), H2O : MeOH(2 : 3) 그리고 MeOH 용 출액으로유출시켜분획 frl-fr4를얻었다. 분획 frl을 Sephadex LH-20 column에 loading시켜 MeOH로용출시켜분획 frl-1-frl- 10을• 얻었으며, frl-5를 silica gel column에 loading시켜 CHjCy Me0H/H20(26 :1 4 :5)로용출시켜 puerarin(12.8 g)을얻었다. 분획 fr2를 silica gel column에 loading시켜 CHgCyMeOH (10:1)로용출시켜 daidzin(3g>을얻었다(Fig. 1).

일차간세포분리 및배양

흰쥐의 간세포는 Berry와 Friend의 방법 을 변형한 2단계 collagenase 관류법을 이용하여 분리하였다. 흰쥐률 pentobarbital

D aid ze in R , = H, F^ = H, F^ = H G e n is te in R , = O H , = H, = H D a id zin R , = H, F^ = Q c , F ^ = H P u e rarin R , = H, F^ = H, F ^ = Q c

Fig. 1 - Chemical structures of daidzein, genistein, daidzin, and puerarin.

J. Pharm. Soc. Korea

흰쥐의 일차배앙 간세포에서 Daidzin, Daidzein, Genistein 및 Puerarin 의 간 보호 활성 평가 117

sodium(40 mg/kg, 복강내주사)으로마취하여복부를개복한후, 간문맥에2 1 gauge catheter틀삼관하여 CO^와0^의혼합기체 롤공급헤주면서 Krebs-Ringer-HEPES 완층용액과 collagenase 로구성된소화용액을 15m//min의속도로1 0분간재순환시켰다. 간세포가소화된후 간막을 벗겨 간세포가유리되게한다옴, nylon mesh를사용하여여과하였다. 여과액은 200 rpm에서 3분

간원심분리한후상등액을버리고침전된간세포를 BSA가함

유된완충용액에현탁시켜다시 원심분리하였다. 침전된 간세

포룰 배양액에 다시 현탁시켜 세포현탁액을얻은뒤, trypan

blue 용액으로생존율을측정히쉬, 생존fr이 90% 이상인 경우에 만실험에사용하였다. 생존율이

90%

U/1

mg/l

mg/l

mycin, 250

mg/l

알아보았다.

GalN에 의한 간세포 득성 유도

Kisoi%l 방법을일부수정하여 간세포를 18시간배양한후

배양액을 제거하고 30 mM GalN을함유한배양액으로 같아준

cf-§- daidzin, daidzein, genistein 및 puerarin# -^51'^(0.1, 1, 10 및 100 나M)로처리하여 48시간동안세포률배양한후그

배양액을취하여 포 iii호작용을 알아보았다.

LDH, ALT 및 AST 활성

세포득성이유도된간세포의 배양액을취하H LDH, ALT 및

AST의활성을아이비디-랩측정 kit인 c m , C123 및 C124률 사용하여 340nm에서 spectrophotometer로죽정하였다.

통계처리

모든측정 결과는평균±표준오차로나타내었으며, 실험군간

의차이는 Dunnett's West률사용하여 통계적유의성을나타내

었고, P<0.05인경우에통계적으로유의성이 있는것으로판정

하였다.

MTT assay를 이용한 세포득성 측정

Mossmann의방법오크널- 일부수정하여 24-well plate에간세포

률2 . 5 X1 0 5 cells/m/ 농도로 접종하여 18시간동안배양한후

daidzin, daidzein, genistein J IGIjI puerarini： 농5L별 (0.1, 1, 10, 100 및 200|aM)로처러하여 37T, 5% CO2 배양기에서 72 시간동안추가배양하였다. 이후 MTT(0.25 mg/m/)가함유된 배양액으로 교환하여 4시간동안 처리 후 생성된 formazan crystal을 dimethyl sulfoxide(300 |J/well)에 -뉴?여 540 nm에서듭 광도룰측정하였다.

CC1.J에 의한 간세포 독성 유도

Kiso의방법 을일부수정하여간세포를배양?!:지 18시<!：후

10 mM CCI4를함유한배양액으로교체하쉬 간세포득성을유발

하였다. CCI4 처러와 동시에 daidzin, daidzein, genistein 및 puerarin을각농도별(0.1, 1, 10 및 lOO^M)로처러하여 24시간 동안세포틀배양한후그배양액을취하여간세포보호작용을 알아보았다.

TBH에 의한 간세포 득성 유도

Tseng의방법^^>을일부수정하여 간세포를배양한지 18시간

후 0.5 mM TBH률함유한배양액으로교체하식 간세포득성을

유발하였다. TBH 처리와동시에 daidzin, daidzein, genistein 및 puerarin을각농도별(0.1, 1, 1 0 및1 0 0 ^iM)로처리하여 1시간 동안세포를배양한후그배양액을취하여 간세포보호작용을

결과 및 고찰

간은물질의 대사및합성기눙, 영양소저장, 생체이물질의 생 체내 전환등다양한기눙을가진인체내가장큰장기이다.

최근현대인돌은옴주, 흡연, 약물, 환경오염이나정신적스트 레스등의여러외인적 요인들에매우노출되기 쉬우며이에 따 라간질?}이국내외적으로급격히증가하는추세이다. 간장은다 른장기와는달리재생과수복이 잘이루어지지만간손상이 심 할경우생명에 치명적영향을나타낸다. 이러한심각성에비해 현재간질환치료제는종류가많지 않을뿐아니라화학물질의 경우치료효눙에 비해부작용이 빈번히보고되고었다. 따라서 최근에는화학물질보다는부작용이 적고오래 ■선부터널러 사 용되어그임상적효능이 입증된천연물로부터유래된간질환치 료제에대한관심이집중되고있으나천연물의경우과학적인검 증없이주로민간요법내지는한약재로서사용되고었으므로보 다과학적인 접근이 필요하다. 이에본연구에서는임상적으로 간보호작용이 알려진 한약재인 같근으로부터분리된 생리활성 성분중 daidzin, daidzein, genistein 및 puerarin의간보호 활 성을일차배앙간세포률이용한급성간득성모델을이용해알 아보았다.

Daidzin, daidzein, genistein 및 puerarin의 ICjo

Daidzin, daidzein, genistein 및 puerarin의 세포득성 죽정과

더불어농도범위결정을위해 MTT assay를시행하여 일차배

118 박진구 ■천호준 • 김영식 ■ 삼식 ■최재수 ■이선미

Table I - Cytotoxicity of daidzin, daidzein, genistein and puerarin in primary cultured rat hepatocytes

Compound IC5 0 (mM)

Daidzin > 2 0 0

Daidzein > 2 0 0

Genistein > 2 0 0

Puerarin > 2 0 0

After isolation and incubation for 18 hr, hepatocytes were treated with daidzin, daidzein, genistein and puerarin in DMEM for 72 hr and then cell viability was evaluated by MTT reduction. ICjq

values were determined by viability of hepatocyte cell cultures by 50%.

앙간세포에서 대조군에 비해 생존율이 50%가되는약물의농 도를죽정하였다. Table I에서보는바와같이 daidzin, daidzein, genistein 및 puerarin의 ICjq은모두2 0 0 넘는수치를나 타내었으며, 이를바탕으로약물의처치능도는 1 0(HiM을최고 농도로 s H 10, 1 및 0.1 나보의 4가지농도로정하였다.

Daidzin, daidzein, genistein 및puerarinO| COI4^{로유 •된}

간득성에 미치는 영함

CCI4는간세포내약물대사효소에의해서 CCI3 radical로활 성화되어 간득성을유발한다. 이렇게 생성된 free radical은인근 지질막을공격하식 지질의과산화룰일으키며/®* 세포막이나세 포소기관에존재하는단백질의구조와기능을파괴하며, ■의 항상성을깨트려세포의괴사를일으키는것으로알려져었다.오 이러한간득성에의해간세포의괴사와조직의파괴가진행됨에 따라세포질 내에존재하는효소인 LDH, ALT 및 AST가배양 액으로유리된다. 따라서 세포배양액에서 이러한효소들의농

도증가는간손상지표로사용된다.간* CCI4 처처시단득군의 경

우 LDH, ALT 및 AST의 활성이 각각 182.1소14.8%, 200.0±

35.4% 및 194.4±6.5%로대조군에비해현저한증가률나타내 어간독성이유발되었옴을알수있었다. DaidzinS：저농도인 0.1 HM의농도에서만 LDH 및 ALTSl 활성을 114.2±9.3% 및 108.3

±15.4%로 CCli 단득군에 비해 현저히 억제하였다(Fig. 2).

Daidzein은고능노인 100 nM을제외한모든농도죽, 0.1, 1 및 10|xM의농도에서 LDH의활성을 116.6±6.9%, 115.2± 6.5% 및 120.U_10.4%로 CCli 단득군에비해현저히 억제하였으며(Fig.

3), genistein은 0.1 및 1 |iM의 저능도에서 LDH의활성을각각 현저히 억제하였으나 ALT 및 AST의활성에는별다른영향을 미치지못하였다(Fig. 4). Puerarin은 1, 10 및 100 |aM의농도에 서 LDH 활성을 각각 104.9+13.4%, 93.9± 15.6% 및 135.3±

18.6%로 CCI4 단득군에비해현저히억제하였으며, AST 활성도 1 및 10|JVI의농도에서각각 255.9±18.1%, 251.3±20.4%로현 저히억제하였다(Fig. 5). 이상의결과로보아 CCI(로유도된간 득성에서갈근의 활성성분중 daidzein 및 puerarin이간보호활 성이있옴을알수있다.

XQ 00

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C o n tro l CCI4

D aidzin (나M)

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C o n tro l CCI4 ^{1 1 0 1 0 0}

D aidzin (^M)

Fig. 2 - Hepatoprotective effect of the daidzin on CCl^-induced hepatotoxicity in primary cultured rat hepatocytes. Results are given as means±S.E.M. from 6 wells each and are expressed as the percent of untreated control of respective experiment. *'** Significantly different (P<0.05, P<0.01) from control group. 하 Significantly different (P<0.05, P<().01) from CCl4-treated group.

Daidzin, daidzein, genistein 및 puerarinOI TBH로 유도된 간독성에 미처는 영향

TBH는간세포내에서두가지경로에 의해대사된다. 학과정

은 cytochrome P450에의해 peroxyl 및 alkoxyl radical 등과같 은독성물질로 ■선환되며, 이러한 radical이초기세포막의지질과

/. Pharm. Soc. Korea

G e n iste in (nM )

Fig. 4 - Hepatoprotective effect of the genistein on CCl4-induced hepatotoxicity in primary cultured rat hepatocytes. Results are given as means±S.E.M. from 6 wells each and are expressed as the percent of untreated control of respective experiment. *'** Significantly different (P<0.05, P<0.()1) from control group. 와하 Significantly different (P<0.05, P<0.01) from CCl-treated group.

C o n tro l CCI

G e n is te in (uM ) C o n tro l CCI

IIU8%>

lal

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H H II I

-

텔

I

D aidzein (^M ) C o n tro l CCL 1 10

G e n is te in (f^M)

C o n tro l CCL

D aidzein {\xM)

Fig. 3 - Hepatoprotective effect of the daidzein on CCl4-induced hepatotoxicity in primary cultured rat hepatocytes. Results are given as means±S.E.M. from 6 wells each and are expressed as the percent of untreated control of respective experiment. Significantly different (P<0.05, P<0.01) from control group. Significantly different (PcO.Ol) from CCL-treated group.

산화률 일으킨다. 또 다른 대사과정은 글루타치온 과산화효소가 TBH와 결합하셔 ^-butyl alcoh이파 산화형 글루타처온으로 견환 됨으로써 해득되는 과 정 이 다 이 러 한 대사과정을 통하식 간세 포 내에서 TBH는 radio® 생성하게 되고, 이렇게 생성된 radical 이 세포막을 구성하는 불포화 지방산과 직접 및 간접적으로 반응

하여 파산화 과정을 통해 간세포의 고사나 괴사를 일으킨다.^'™

TBH 단득군의 경우 LDH, ALT 및 AST 활성은 대조군에 비해 각각 291.2±85.8%, 607.1 ±18.1% 및 314.7±22.2%로 현저한 활성 증가를 나타내 었다. Daidzin은 1 및 100 nM 의 농도에서 LDH 활성이 각각 198.0± 11.5% 및 321.4± 10.4%로 TBH 단득 흰쥐의 일차배앙 간세포에서 Daidzin, Daidzein, Genistein 및 Puerarin 의 간 보호 활성 평가 119

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Control CCI^ — --------!? ? _ Puerarin (uM)

C o n tro l TBH

D aidzin(uM )

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C o n tro l TBH — - 4 ——

Fig. 5 - Hepatoprotective effect of the puerarin on CC^-induced hepatotoxicity in primary cultured rat hepatocytes. Results are given as means±S.E.M. from 6 wells each and are expressed as the percent of untreated control of respective experiment. *'** Significantly different (P<0.05, PcO.Ol) from control group. 끓 Significantly different (P<0.05, PcO.Ol) from CC^-treated group.

Fig. 6 - Hepatoprotective effect of the daidzin on TBH-induced hepatotoxicity in primary cultured rat hepatocytes. Results are given as means ± S.E.M. from 6 wells each and are expressed as the percent of untreated control of respective experiment. *'** Significantly different (P<0.05, P<0.01) from control group. * '참화 Significantly different (P<0.05, PcO.Ol) from TBH-treated group.

군에버해현저히억제되었으며, 0.1 및 1 의농도에서는ALT 의활성을각각391.0±18.3% 및467.8±49.9%로 억제하였다 (Fig. 6). Genistein은1, 10 및 lOOialV[의능도에서 각각209.8

±19.4%, 203.9±22.3% 및 125.7흐 15.1%로LDH 활성을현저 허 억제하였으며, ALT 활성도 같은능도에서 각각415.7±

32.2%, 432.1±50.5% 및219.2±26.9%로TBH 단득처리군에 비해현저허 억제하였다(Fig. 8). 그러나이와는달러daidzein파 puerarin은TBH로유도된LDH, ALT 및AST 활성증가에별 다른영향을미처지못하였다(Fig. 7 및Fig. 9). 이상의 결과률 종합하여볼때daidzin과genistein은TBH로유도된간득성에

J. Pharm. Soc. Korea

P uerarin (fiM) C o n tro l TBH

D aidzin(uM )

120 박진구 • 천호준 • 김영식 • 강삼식 • 최재수 • 이선미

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D aidzein(uM )

Fig. 7 - Hepatoprotective effect of the daidzein on TBH-induced hepatotoxicity in primary cultured rat hepatocytes. Results are given as means±S.E.M. from 6 wells each and are expressed as the percent of untreated control of respective experiment. Significantly different (P<0.01) from con­

trol group.

탁월한간보호활성을나타냄을알수있다.

Daidzin, daidzein, genistein 및 puerarirDl GaIN으로 유도

된간득성에 미치는영향

아미노당인 GaIN은galactose의대사장애를통한UTR UDP

및UMP 등의 능도 감소로RNA 합성이저해되어지질축적을

C o n tro l TBH ^{0.1 1 10 100}

G en iste in (fxM )

C o n tro l TBH ¹⁰⁰

G e n is te in(나 M)

Fig. 8 - Hepatoprotective effect of the genistein on TBH-induced hepatotoxicity in primary cultured rat hepatocytes. Results are given as means±S.E.M. from 6 wells each and are expressed as the percent of untreated control of respective experiment. Significantly different (P<0.01) from con­

trol group, 하'하차 Significantly different (P<0.05, P<0.01) from TBH-txeated group.

유 도 하 고 , 또 한 세포막성분인탄수화물의 조성과 세포내 Ca^ 농도룰번동시켜 간손상을유발한다2 5 고 알려져 있다. GaIN 단득군은대조군에비해각각LDH, ALT 및AST 활성을 288.9± 17.7%, 343.3±21.6% 및410.0±23.9%로현저히증가시 켰다. Daidzin은LDH 활성을저농도인0.1 nM을제외하고모든

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흰쥐의 일차배앙 간세포에서 Daidzin, Daidzein, Genistein 및 Puerarin 의 ?!: 보호 활성 평가 121

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