? i ^ i r V o 1 . 23 f 5N2o ~ ? (l987)
해양 패류 렉틴성분 연구 ( V )
반 지 락 조 개 의 렉 틴 성 분 분 리 정 제 에 관 한 연구
정 시 련 • 김 장 환
•
전 경 희*
영 남대 학교 약학대 학 • 이 과대 학*
(Received January 14, 1987)
Studies on Lectins from Marine Shells ( V )
Isolation and Purification of Lectin from Tapes philippinarum .
See Ryun Chung, Jang Hwan K im and Kyung Hee Jeune-Chung College o f Pharmacy and College o f Science、Yeungnam University, Gyongsan 632，Korea
A bstract■—The result of the screening of lectins on 28 species of marine shell fishes(mollusks) showed that 10 species {Tapes philippinarum, Cyclosunetta menstrualis，Neptunea arthritica cumingii, Omphalius pfeifferi carpenteri、 Chlorostoma argyrostoma turbinatumy Chiorostoma argyrostoma lischkei, Semisulcosira corea, Neptunea polycosta, Babylonica japonica, Noverita didyma) were present hemagglutinating properties to human A, B, and O group, and animal blood erythrocytes.
A new lectin from Tapes philippinarum. was isolated and partially characterized The lectin was purified by (NH4)2SC>4 precipitation and ion exchange chromatography on DE 53 column.
Six fractions were obtained from DE 53 column by salt gradient elution but only 0. 3M, and 0. 4M NaCl fraction had strong lectin activity. On its 0. 3M NaCl fraction, purity was identified by polyacrylamide gel electrophoresis. This lectin was inhibited by N-acetyl-D-galactosamine.
It seems that two kinds of lectin react as antigen by immunochemical studies.
오래전부터 혈구세포를 응집시키는 물질이 여 러 종의 식물에서 발견되었는데 이 물질을 1954 년 Boyd11 는 lectin이라고 명명하였다.
최근 Goldstein2등은 lectin을 “당과 결합하는 단백질 또는 당단백질로서 면역적 경로에 의해 서 생기는 물질이 아닌 것으로서 적혈구， 림프 구, fibroblast, 세균，및 균류등의 세포표면에 있 는 당과 특이 적인 결 합을 함으로써 이 들 세 포를 응집시키고 당화합물을 침전시키며 적어도 두개 이 상의 당과의 결 합부위 (sugar binding site) 를 갖는 것”으로 정의하였다.
렉틴은 세포막의 구조연구， 세포분열 촉진효 과， 면역학적인 연구등에 이용되어지며 최근에 이르러서는 어떤 종류의 암이 나 종양세포의 진 단 및 치료에까지 응용되고 있다. 3)
렉틴은 자연계에 널리 분포되어 있는데 지금
까지는 주로 식물계를 대상으로 연구되어 왔으 며 무척추동물， 하등척추동물, fungi, bacteria 등에 대한 연구보고도 있으나 해양동물 중 패류 에 대한 연구보고는 1966년 Tripp4> 등의 굴(Cra- ssosterea pargvVH'a) 렉 틴과 1982년 Tatsumi5> 등의 개 조개 (iSkrzWowMw />ar보 렉 틴， 1985년 Muramoto6) 등의 삿갓조개 (A/e효 ro«z) 렉 틴, Chung7) 등의 조각매 물고둥 (ATe外tfwea sculpta) 렉틴에 대한 연구보고등의 소수가 있을 뿐이 다.
이에 본 연구에서는 해양패류 28종을 대상으 로 렉틴성분의 검색시험을 실시하여 렉틴성분의 함유 여부를 알아보고 그 중 렉틴 활성이 비교 적 높은 반지 락조개 세 ■쯔 / 로 부 터 렉틴성분을 분리정제하여 순도검정, 단백질정 량, 당류확인, pH 에 따른 활성변화등에 대하여 52
4 °} 패류 렉틴성분 연구( v ) 53 알아보고 토끼로 부터 항혈청을 얻어 면역화학
적인 시험을 실시하는등 몇가지 생물，물리, 화 학적 성상을 구명해보았다.
재료 및 시약
동물재료ᅳ살아있는 해양패류 28종을 부산 미 포해변 및 자갈치시장에서 수집하여 실험재료로 사용하였다.
시약ᅳDEAE-cellulose 53은 Whatman, Freu- nd’scomplete와 incomplete adjuvant는 Difco Lab, Aquacid JI-A는 Cal Biochem-Behring Co•의 것 을, 그리고 Tris(Tris-(hydroxymethyl) aminoet- hane), TEMED (N, N, N 7, N /-tetra-methylethlene diamine), Bis (N , N,-methy lene-bisacry lamide) ， T C A (Trichloroacetic acid), aery lamide, glucose, Coomassie brilliant blue R-250, anthrone, phenol reagent(Folin-ciocaltau reagent), Amido Black 10B, N-acetyl-D-glactosamine, N-acetyl-D- glucosamine, D-fructose, L-fucose, D-galactose, D-mannose, lactose, sucrose등은 Wako, Hayashi, Nakarai, Junsei chemical에서, bovine serum album in은 sigma의 제 품을 구입하였으며，기 타 일반시 약은 시중에서 구입한 특급 내지 일급품 을 사용하였다.
실험 방법
검색 시험一패류 28종을 대상으로 렉틴성분 검 색 시험을 사람 및 몇종의 동물혈액으로 Burger8) 등의 방법에 따라 실시 하였다.
렉틴성분의 분리一28종의 시료중 렉틴활성이 비 교적 강하게 나타난 반지 락조개 (T 강/바 ^ pinarunO 으 부터 전보7J 와 같은 방법 으로 실시 하였다.
Ion exchange chrom atography에 의한 정 제-ᅳ전항에서 얻은 crude렉틴을 상법7，9)에 따라 25mM Tris-HCl buffer (pH 7. 4) 로 평형시킨 DEAE-cellulose 53 column(1. 6 X 2 0 )에 주입 한 후 같은 buffer로 세척한 다음 0.05M，0 .1M, 0.2M, 0.3M, 0 .4M, 0 .5M NaCl를 함유한
25mM Tris-HCl buffer (p H 7.4) 를 Salt gradient method로 유출시 켰 다. 유출속도는 60ml/hr로 하 였으며 렉 틴활성 을 나타내 는 분획 은 pooling하여 증류수에 서 투석 시 켜 Aquacid n -A (Cal Bioc- hem-Behring Co. ) 로 농축시 켰 다 .
적혈구 응집력시험一Burger등8》의 방법에 따라 hum an blood A group으로부터 적혈구를 얻고 0.15M N aC l룰 가하여 3% 적혈구용액을 만든 다음 Microtiter plate (Cooke system M 2204) 를 사용하여 실시하였다. 먼저 titration plate의 각 well에 10mM CaCl2를 함유한 0 . 15M N aCl 50ᄍ/
씩 취하여 넣고 첫번 well에 sample 50/^ 씩 넣은 다음 연속 2배희 석법으로 희석한 뒤 Z% 적혈 구용액을 50j«Z씩 가한 다음 상온에서 1시 간동안 반응시킨 후 육안 또는 현미경으로 그 응집현상 을 관찰하였다.
단백질 정량ᅳ반지 락렉 틴의 단백 질정 량은 bov
ine serum album in을 표준품으로 하여 Lowry10) 둥의 방법으로 정 량하였다.
순도검정一각 단계별 반지락렉틴의 순도를 확 인하기 위해 Davisu)의 방법에 따라 7 .5 % poly
acrylamide disc gel electrophoresis룰 실 시 하였 다.
A n th ro n e 시험에 의한 당의 확인一반지 락렉 틴의 당함유여부를 알아보기 위하여 anthrone 시험을 실시하였다.
당에 의한 응집력 저해효과ᅳ당류에 의한 응 집력 저해효과를 알아보기 위해 Miller• 등 12>의 방 법을 응용하여 렉틴활성 시험때와 같은 방법으로 Sample을 희석한 뒤 N-acetyl-D-galactosamine, N-acetyl-D-glucosamine, D-fructose, L-fucose, D-galactose, D-mannose, lactose, sucrose등 8가 지 당의 lOOmM， 50mM, 25mM, 10mM, Im M , 0. 5mM, 0.25m M용 액 을 50/W씩 가한 다음 3%
적혈구용액을 50서/씩 가하여 1시간동안 반응시 킨 후 그 결과를 육안 또는 현미경으로 관찰하 였다.
p H변화에 따른 렉틴활성 조사ᅳ반지락렉틴의 pH와 렉틴활성과의 관계를 알아 보고자 pH3〜
10에서 (4 0C) 1시 간동안 투석 시 켜 적 혈구 응집 력 을 조사하였다.
Im m u n iz a tio nᅳ반지 락렉 틴을 Millipore (5.0 Vol. 31，No. 2, 1987
S4 경시련• 낌찬환•된경희
Table I-Immunization with 0. 3M NaCl fraction of DEAE cellulose 53 column.
Dates Sample Freund’s adjuvant(ml)
(day) dose (ml) (노叫노把 Incomplete Route
1 0.5 0.5 — Popliteal node 2 0.5 0.5 — Popliteal node 3 0.5 0.5 — Popliteal node
Rest, no injection
21 0.5 — 0.5 Popliteal node 22 0.5 — 0.5 Popliteal node 23 0.5 — 0.5 Popliteal node
Rest, no injection
27 Bleeding
pm Millipore C o .)을 통과시켜 불순물을 제거하 여 체중 2kg 이상되는 집토끼의 넘적다리의 lym
ph node에 Shannon13) 등의 방법 (Table I )으로 면역시켰다. 마지막 추가면역 1주일 후 토끼 귀 정맥으로 부터 혈액을 채취하여 항혈청을 분리 한 뒤 냉동보관하여 사용하였다.
ImmunodiffusionᅳAgar 분말을 barbital Bu
ffer (pH 8.2) 에서 1% agar 용액으로 만든 후 slide glass위 에 agar gel를 형성시 켜 well을 만
Table II-Blood group sepcificity of shells
들어 전항에서 얻은 항혈청과 여러가지 항원을 10/포/씩 넣은 다음 Ouchterlony 등 14}의 방법에 따 라 면역확산시험을 수행하였다.
결과 및 고찰
검색시험一해양패류 28종을 대상으로 검색시 험한 결과는 Table I I 와 같다.
28종의 시 료중 반지락(Tapes philippinarum) ， 비 단백 합 (O 난0새;I故 menstrualis) 9 갈색 며 매 물 JL둥^Neptunea arthritica cum ingii), 바다방석고 들•(Pm phalius pfe ifferi carpenterf )，구멍 밤고둥
(Chlorossoma argyrostoma turbinatum ),
(chlorostoma argyrostoma lischkei), 참다슬기 {Semisulcospira coreana) 는 사람 및 동물혈액에 대 하여 비특이 적 으로 적 혈구응집현상을 나타내 었 다. 그리 고 북방매 물고둥 (Neptunea polycostd),
수랑 (Babylonica japonica) 큰구슬우렁 이 (iWver- 化2 办 ;해 )는 동물혈액에 대해서만 특이적으로 적 혈구응집 현상을 나타내 었다.
렉틴성분의 분리ᅳ강한 적혈구응집력이 있는 반지 락(Tapes philippinarum) crude extract의 0
Shells Blood
Family
Scientific name Common name Human
A B O ABRabbit Pig Cattle Rat
Veneridae Tapes philippinarum 반 지 락 8 4 8 8 4 16 0 0
Cyclina sinensis 가 무 락 조 개 0 0 0 0 0 2Ha 0 64
M eretrix petachiails 말 백 합 1H 2H 2H 2H 2 1H 1H 2
Cyclosunetta menstrualis 비 단 백 합 16 8 16 32 0 0 0 2
M eretrix lusoria 백 합 2 2 0 0 0 0 2
Acmaeidae Patelloida pygmaea 애 기 배 말 0 0 0 0 0 0 0 0
Colli sella heroldi 애기두드럭배말 0 0 0 0 0 0 0 0
Buccinidae Neptunea arthritica 갈색띠매물고둥 근육 0 4 8 4 0 0 32
cumingii 내장 3H 3H 3H 5H 4H 4H 3H
Babylonia japonica 수 랑 근 육 0 0 0 0 4 0 0 2
내장 0 0 0 0 0 3H 0 2H
Neptunea poly cost a 북방매물고둥 근육 0 0 0 0 16 16 0 16
내장 0 0 0 0 0 3H 0 2H
Busyconidae Hemifusus ternatanus 털 탑 고 둥 근육 0 0 0 0 0 0 0
내장 4H 4H 4H 5H 4H 4H 4H
J. Pharm. Soc. Korea
히] 양피j류 태틴정분 연누( V ) gg
Fasciolariidae Fusinus forceps 큰 긴 뿔 고 등 근육 0 내장 4H
0 3H
0 5H
0 6H
0 4H
0 4H
0 4H
Muricidae Rapana venosa 피 뿔 고 둥 근육 0 0 0 0 0 0 0
내 장 3H 4H 4H 4H 0 0 2H
Ceratostoma rorifluum 맵 사 리 0 0 0 0 0 0 0
Naticidae Neverita didyma 큰구슬 우렁 이 근육 0 0 0 0 0 0 0
내장 0 0 0 0 8 2 32
Turbinidae Batillus cornutus 소 라 근육 2H 2H 2H 3H 1H 2H 0 내 장 3H 4H 4H 5H 3H 2H 3H
Arcidae Scapharca broughtonii 피 조 개 0 0 0 0 0 0 2
Mytilidae M ytilus coruscus 홍 합 3H 3H 3H 4H 4H 3H 2
Pinnidae Atrina pectinata japonica 키 조 개 0 0 0 0 4 1H 0
Trochidae Omphalius pfeifferi 바다 방 석 고 둥 근육 4 2 8 4 0 3H 4H
capenteri 내장 0 0 0 0 4 0 4
Chlorostoma argyrostoma 구 멍 밤 고 둥 근육 0 2 0 0 0 0 2
turbinatum 내장 32 8 64 64 32 0 2
Chlorostoma argyrostoma 밤 고 16 16 16 16 NDb 2 16
lischkei
Monodonta labio 울 타리 고 rz_ 0 0 0 0 0 0 0
Pleuroceridae Semisulospira coreana 참 다 슬 기 16 32 16 16 5H 32 4 16
Semisulcospira bensoni 다 슬 기 1H 4 2H 2H 2 2H 0
Loricidae Lepidozona coreanica 줄 군 부 4H 4H 4H 6H 2H 2H 3H
Lepidozona fu lig inatu s 등 꼬 부 리 1H 1H 1H 2H 0 2H 0
a. H: Hemolysis. b. ND: Not detected.
〜 30%, 0〜 60%, 0〜 90%，30〜 60%, 60〜 90%
(N H 4) 2S 0 4 포화침전 중 0〜 60% (N H 4) 2S 0 4 포 화침전물이 강한 적혈구응집 현상을 나타내었다.
그래서 이 분획을 취하여 25mM Tris-HCl buff
ered saline 용액 에 투석 시 켜 crude렉 틴 으로 하 였다.
Ion exchange chrom atography에 의한 정 제 一Crude렉 틴을 DE53 column에 주입 하여 0. 05 M , 0 . 1M, 0 .2M, 0. 3M, 0. 4M, 0. 5M N aCl을 함 유한 25mM Tris-HCl bu£fer(pH 7.4) 로 유출 시킨 결과는 Fig. 2와 같았다. 이들 6개의 분획 중 0 .3M, 0. 4M NaCl 유출 분획 에 서 렉 틴 활성 을 나타내었다.
단백질 정량一각 단계별 단백질함량은 crude extract 29. 4mg/ml, crude렉 틴 17. 4mg/ml, DE53 column의 0 .3M NaCl 분획 은 0.24m g/m l의 단 백질을 함유하고 있었다.
Added (Nil, )t SO,, 602 ： 8,000rpm x 30min
Tris-HCl buffered saline 25mH Tris-HCl bilffer(pH 7.A)
Fig. 1 Extraction and isolation of crude lectin.
순도검정一각 단계 별 반지락렉 틴의 순도를 7.
5% polyacrylamide disc gel electrophoresis로 확인한 결과는 Fig. 3과 같았다. crude extract 는 13개의 band, crude렉틴은 11개의 band, DE53
column의 0. 3M N aC l분획 은 4개 의 band를 나타 Vol. 31，No. 2, 1987
§6 ^ 시€ • 낌판환•진경희
Fig. 3—Polyacrylamide gel electrophoresis lippinarum lectin.
A : Crude extract B •• Crude lectin C : 0. 3M NaCl fraction
of T. phi 내어 정제단계에 따라 점차 정제되어 짐을 나타
내주었다.
A n th r o n e 시험에 의한 당의 확인ᅳ반지락렉 틴의 당 함량을 anthrone 시험으로 측정한 결과 표준당으로 사용한 glucose 0.001% 보다 미 약한 비색을 나타내므로 이 렉틴은 당이 함유되지 않 았거 나 또는 지극히 미 량을 함유한 것으로 추정 된다.
당에 의한 응집력 저해효과ᅳ실험방법에서 언 급된 6가지 당을 농도별로 inhibition test룰 실 시 한 결과는 Table I I I 과 같았다. 여기서 반지 락 렉 틴은 N-acetyl-D-galactosamine에 대 해서 Im M 이 상에 서 는 100%, 0. 5mM에 서 는 83%, 0. 25mM 에서는 50% 의 inhibition이 일어났다. 이로서 반 지 락렉 틴 은 N-acetyl-D-galactosamine 특이 성 이
있음을 확인할 수 있었다. N-acetyl-D-galactos
amine 특이성을 나타내는 렉틴을 살펴보면 식물 렉 틴 으로는 제 비 콩 (Polichos biflorus) 렉 틴， 대 두 (Glycine max), 붉은 강남콩(PA빠 vulgaris) 렉 틴이 있으며， 동물렉 틴으로는 달팽 이 (H d f工
ᄋ;해느신)렉틴，chicken heparin렉틴，Ratheparin 렉틴등이 있 다. 15，16>
Fraction No.
F ig . 2—Elution profiles of Tapes phi I ippinar u m crude lectins on DEAE cellulose 53 column (1.6 x 20cm) chromatography.
Absorbance at 280nm, ---; lectin activity, salt gradient, ...； flow rate, 60ml/hr.
X3TA
-H
33V
oo
u-nBU-pnxsselnaH
(
5:
) uo-nswuauuoo
rHNoB
5543210
UE S 3
.a:>UBq.aosq<
J . Pharm. Soc. Korea
해양 패류 렉틴성분 연 구(V ) 57 Table I I I —Inhibition of Tapes philippinarum lectin human A erythrocyte by carbohydrates {% inhibition)
Carbohydrate Concentrations, mM
100 50 25 10 1 0. 5 0. 25
N-Acetyl-D-galactosamine 100 100 100 100 100 83 50
N-Acetyl-D-glucosamine 0 0 0 0 0 0 0
D-Fructose 0 0 0 0 0 0 0
L-Fucose 0 0 0 0 0 0 0
D-Mannose 0 0 0 0 0 0 0
D-Galactose 0 0 0 0 0 0 0
Lactose 0 0 0 0 0 0 0
Sucrose 0 0 0 0 0 0 0
* inliihitinn (°/^ = agglutination with Tapes philippinarum lectin plus carbohydrate x agglutination with Tapes philippinarum lectin alone
p H변 화에 대 한 렉 틴 활성 조사ᅳ반지락렉틴의 p H변화에 대한 안정성을 알아본 결과는 Fig. 4 와 같았다. 반지 락렉틴은 pH 3〜 7에서는 pH 증 가에 따라 적혈구 응집 력도 증가하였으며 pH 7
〜 10에서 가장 높은 렉틴활성이 나타났다.
면 액 화학적 시 험 ᅳ DE53 column 0. 3M N aCl 분획 의 antiserum과 각 단계 별 반지 락렉 틴 성 분을 immunodiffusion한 결과는 Fig. 5와 같았다. Fig.
5-A 는 중앙 well에 preimmuneserum을 넣 고 바깥 well에 는 반지 락 crude extract, crude렉 틴，DE53 column의 0. 3M, 0. 4M NaCl 분획, 구멍 밤고둥，
참다 슬기 의 crude extract를 차례 로 넣은 다음 370C에서 24시 간동안 immunodiffusion한 결과이 다 . Fig. 5-A 와 같이 preimmuneserum은 어느 것 과도 precipitin band를 형성하지 않았다. 이로서 실험에 사용한 토끼는 순수한 토끼임을 확인할 수 있었다. Fig. 5-B는 중앙 well에 반지락렉 틴 의 항혈청을， 바깥 well에는 Fig. 5-A와 같은 시료를 넣은 다음 immunodiffusion한 결과이다.
여기서 반지락렉틴의 항혈청은 crude extract, crude 렉 틴, DE53 column의 0. 3M NaCl 분획 과 는 서로 이어지는 굵은 precipitin band를 형성 하였으며 0 .4 M N a C l 분획은 이어지지 않은 2개 의 precipitin band를 형 성 하였다. 이 로서 0. 3M N aCl 유출분획 은 두 종류의 antigen으로 작용하 였음을 알 수 있었으며 0.4M NaCl 유출분획과 는 서로 다른 종류의 렉틴성분임을 알 수 있었
Vol. 31, No. 2，1987
다. 한편 구멍밤고둥과 참다슬기 렉 틴성 분과는 아무런 반응이 일어 나지 않았으므로 반지락 렉
64
32
pH
Fig. 4ᅳStability at different pH of the purified Tapes p h i lippinarum lectin. The purified lectin was preincubated in buffers, with different pH (pH 3 to 10) for lhr at 4°C and remaining activity was determined in saline containing 10M CaCl2 by the serial 2-fold dilution method.
pH 3-5 : Citrate buffer.
pH 6-7 I Phosphate buffer.
pH 8-9 •• Tris-HCl buffer.
pH 10 ： Carbonate-Bicarbonate buffer.
58 정 시 련•김 장 환 •전 경 희
^ P 2
趟 3
Figf. 5一Immunodiffusion precipitin patterns by 丁. philippinarum lectin.
p :： Preimmuneserum 1 :: Crude extract 2 ：： Crude lectin 3 ：： 0. 3M NaCl fraction 4 ：： 0. 4M NaCl fraction
5 ：Chlorostoma argyrostoma turbinatum
crude extract
6 ：Semisulcospira coreana crude extract T ： T. philippinarum antiserum
1 ： Crude extract 2 ： Crude lectin 3 ： 0. 3M NaCl fraction 4 ： 0. 4M NaCl fraction
5 ：Chlorostoma argyrostoma turbinatum
crude extract
6 ：Semisulcospira coreana crude extract N ：N. intersculpta antiserum
1 ： Crude extract 2 : Crude lectin 3 ： 0. 3M NaCl fraction 4 : 0. 4M NaCl fraction
5 ：Chlorostoma argyrostoma turbinatum
crude extract 6 ： Crude NI extract
틴과는 면역화학적 인 상관관계가 없음을 알 수 있었다. Fig. 5-C는 반지 락 렉틴과 본 실험실 에서 분리정제된 조 각 매 물 고 둥 inters-
렉틴과의 상관성을 알아보기 위하여 중앙 well에 N I렉틴 항혈청을 넣고 바깥 well에는 Fig. 5-A 의 ⑥번 대신 crude N I렉틴을 넣어 immunodiffusion한 결과이다. 여기서 N I 렉틴의 항혈청은 crude N I 렉틴과만 하나의 precipitin band를 형성하였으며 다른 항원과는 아무런 precipitin band 를 형성하지 않았다. 이로서 반 지락렉틴은 N I 렉틴과 면역학적으로 상관성이 없음이 확인되었다.
결 론
해 양패류 28종을 대 상으로 렉틴검색시험을 실 시 한 바 10종의 패 류에 서 적 혈구응집현상을 나 타내었다.
이 중 반지락렉틴을 부분정제하여 몇가지 특 성 을 알아본 결과 반지 락렉 틴은 N-acetyl-D- galactosamine 특이성이 있었으며 미량의 당이
함유되었거나 함유하지 않은 것으로 추정되었다 또한 pH 7〜 10에서 가장 활성이 높았으며 면역 화학적 인 시 험 결과 N I 렉 틴과는 상관성 이 없음 이 확인되었다.
감사의 말씀
본 연 구는 1986년도 영 남대 학교 교비연 구비 의 지원으로 이 루어 졌기 에 감사를 표하는 바입 니 다.
문 헌
1) Sharon, N.; Lectins. Sci. Am. 6, 108 (1977).
2) Goldstein, I.J., Hugis, R.C., Monsigny, M., Osawa, T. and Sharon, N .: What should be called a lectin? Nature 285, 66 (1982).
3) Lis, H. and Sharon, N .: Lectins: Their chemistry and application, in The Antigens, Academic Press, pp. 429-529 (1977).
4) Acton, R.T., Weinheimer, P.F., and Niedermeir, W .; The carbohydrate composition of invertebrate hemagglutinin subunits isolated from the lobster
Panulirus argus and the oyster Crassostrea virg- intca. Comp. Biochem. Physiol. 44B, 185 (1973).
5) Tatsumi, M.，Arai, Y. and Itoh, T.; Purification J. Pharm. Soc. Korea
해양 패류 렉틴성분 연구(V ) 59 and characterization of a lectin from the shellfish,
Saxidomus purpuratus. J. Biochem. 91, 1139 (1982).
6) Muramoto, K., Ogata, K. and Kamiya, H., Com
parison of the multiple agglutinins of the acorn barnacle, Megabalanus rosa. Agric. Biol. Chem.
49， 85 (1985).
7) Chung, S.R., Kim, J.H. and Jeune-Chung. K.H.;
Isolation, purification and characterization of lectin from shellfish, Neptunea intersculpta. Korean Biochem. J. 18, 429 (1985).
8) Burger, M.M.: Assay for agglutinating and lectins,
in Method in Enzymology, Academic Press, 32， pp. 615-621 (1974).
9) Monsigny，M. and Jeune-Chung, K.H.; Separation and biological properties of Pkaseolus vulgaris isolectins. Biochemie 60, 1315 (1978).
10) Lowry, O.H., Rosebrough, N .J., Farr, A.L. and
Randall, R. J.; Protein measurement with the folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 193，265 (1951).
11) Davis, B.J.; Disc electrophoresis. Ann. N. Y. Acad.
Sci.t 121, 720 (1972).
12) Miller, R.L., Collawn, J. F. and Fish, W .W .;
Purification and macromolecular properties of a sialic acid-speciffic lectin from the slug Lim ax flavus. J. Biol. Chem. 257, 2574 (1982).
13) Shannon, L.M. and Mills, S.E.; Purification of immunoadsorption chromatography of the normal and a mutant form of the B2 subunit of E. colt tryptophan synthase. Eur. J. Biochem. 63, 563 (1976).
14) Ouchterlony, O. and Nilsson, L.A.: Immunodiff
usion and immunoelectrophoresis. in Handbook
of Experimental Immunology, Blackwell Scientific Publication. 19, pp. 1-19 (1973).
15) Sharon, N. and Lis, H.: Lectins; Cell-agglutina
ting and sugar-specific proteins. Science 177, 949
(1972).
16) Barondes, S.H.; Soluble Lectins: A new class of extracellular proteins. Science 223, 259 (1984).
Vol. 31，No. 2, 1987
