Sarcoma 180 cell

(1)

대한임상병리사회지 : 제 22권 제 1호 1990

BCG의

Sarcoma 180 cell

增植柳制效果에 관한 班究

高麗大學校九老病院臨皮病理科 류 정 록

1 .

績論

항종양 작용이 있는 物質을 確認하고 그것을 실제 動物實驗에 적 용하여 항종양 效果를 증명 하는데 는 많은 노력과 시간을 要求한다. 더구나 進行中인 癡 을 억제하여 生命을 연장시키는 획기적인 치료법이 없는 現在로는 癡에 대한 生體固有의 저항기구를 밝 히고 이를 증강시키는 物質 또는 方法을 알아내는 일이 항암 연구의 중요한 方向이 되어 免俊據法이 등장하게 된다.

이러한 면역요법에 利用되는 免홈增彈物質(imm

unotherapeutic agent) 중 식 물기 원 에 는 Lentinan, Schizophyllan, Krestinl) 등이 있고 미생물 기원에 는 BCG, Yeast Glucan, Curdlan, Levan²^-³⁾ 등이 있다.

BCG (Bacille Calmette - Guérin) 는 A.Calmatt 와 C.Guérin이 우형 결 핵 균 (Mycobacterium bovis)

을 1908년부터 1921 년까지 13년동안 231번계 대 배 양 하여 약독화 시킨 生園으로 결핵예방 vaccine으로서 그 성가는 이미 世界的으로 확립된 바 있다 4-5)

一般的으로 감염에 대한 저항성은 두 가지 方法으 로 說明되는데 特異的 생체 방어기전파 非特異的 생 체 방어기전이다. 특이적 생체 방어기전은 特定한 미생물에 대해서만 저항성을 나타내는 反面 비특이 적 생체 방어기전은 특정한 미생물에 국한하지 않고 나타나는 一般的인 방어작용의다. 근래에 이러한 非特異 면역반응이 항종양 기전에 상당히 관여한다는 실험적 결과가 제시되고 있다 6-8) 즉 종양특이항원

(tumor specific antigen : TSA) 에 사전 감작없 이 自然的으로 종양세포를 파괴할 수 있는 능력을 가진 자연 살세 포 (N atural Killer cell : NK) 가 이 중의 하나이 고 대 식 세 포 (macrophage) , 활성 화된 T

lymphocyte에 서 生成되 는 각종 cytokin 등이 직 접 혹은 간접으로 판여하고 있다. BCG가 生體에 접종

되면 微生物에 감염되었을 때처럼 특히 면역반응과 비특이면역반응이 나타나 단독 혹은 서로 협조하여 종양세포의 파피와 증식 억제를 일으킨다고 보고되 어 있다 8)

BCG는 폐암，白血病，惡性黑色睡，消化器癡 등 의 악성종양의 면역요법에 광범위하게 사용되며 9) 그 항종양 作用 기전도 어느 정도 밝혀졌으나 결코 단 순한 것이 아니고 다양하고 dynamic한 기전이 동원 된다고 알려져 있다. 즉 BCG와 암세포는 복잡한 표 층 구조와 化學 조성을 갖는 生細服이므로 그 전체 作用 기전은 복합적인 양상을 나타내게 되는 것이

다 6 ， 10)

BCG의 항종양 作用의 기 전은 연구자에 따라 다양 하게 나타나고 있는데 T lymphocyte의 활성화11) 대 식세포의 활성화7， 12 ， 13) 또는 자연살세포에 의한 세포 독성 등이 보고되고 있다 14)

그러나 최근 암항원에 특이적인 immunoglobulin G가 여 러 가지 세 포와 함께 標的細뼈 (target cell) 를 파괴하는 사실이 발견되었다 6， 15-18) 이 현상을 항체 의 존 세 포매 개 성 세 포 독 성 (antibody dependent cellmediated cytotoxicity : ADCC) ^{이 라하고 作用}

方法은 특이항체 (IgG) 가 표적세포에 결합하면 Fc수 용체 (Fc receptor) 를 가진 작동세포가 세포표면에 노출된 Fc부위 에 부착함으로써 세 포 융해 작용을 일 으킨다.

이 에 관여 하는 주작동세 포 (effector ceH) 는 Fc 수 용체 를 갖고 있 는 T lymphocyte

,

B lymphocyte

,

대식세포， Null cell 등이다.

본 연구는 지금까지 밝혀진 BCG의 작용기전에 근 거하여 BCG에 의한 수명연장 效果， BCG 투여 후 의 lymphocyte의 변화， 면역글로부런의 변화， 자연 살세포에 의한 세포독성， 항체의존 세포매개성 세포 독성 등에 관하여 검토하였다.

(2)

II.

를驗材料 및 方法 1. 톰驗動物

本實驗에서는 JCL- ICR mouse 6주령 암컷을 서 울大學校病院動物實驗室에서 분양 받아 사용하였 다.

Guérin을 배양하여 진공하에서 냉동 건조시킨 것이 다. 매번 사용 직전에 규정된 saline에 희석 사용 하 였다. BCG 투여량은 60μg/kg을 B group에서는 1, 5, 9 일에 복강에 투여하고(총투여량 180μg/kg) , C group은 1 일에 전처리만 하고(총투여량 60μg/

kg), D group에 서 는 -1, 1, 5, 9 일에 (총투여 량

240 μg/kg) 투여 하였 다

2.

BCG(Bacille Calmette Guérin) Vaccine

대한결핵협회 결핵연구원에서 제조한 것으로

WHO 에 서 분 양 받 은 Baci1le de Calmette et

한편 E group에 서 는 240 μg/kg를 5， 9， 13 일에 (총 투여 량 720 μg/kg) , F group에 서 는 1, 5, 9, 13

일에 (총투여량 960μg/kg) BCG vaccine을 투여하 였다. 투여 方法은 그림 1과 같다

Group

A

B

C

D

E

F

G

S-180, ip

Day 0

BCG 60 μg/kg， ip

5 9

Day 0 BCG 60 μg/kg， ip •

•

-1 Day 0

BCG 60 μg/kg， ip BCG 60 ,ug/kg, ip •

• }

-1 . 1 5 9

Day 0

BCG 240 μg/kg， ip

‘

¹

’

5 9 13

Day 0 BCG 240 μg/kg， ip •

•

-1 Day 0

BCG 240 μg/kg， ip •

BCG 2400 μg/kg， ip

5 9 13

Day 0

그림 1. Schedule for immunotherapy experiments with BCG Animal : Six-weeks-old inbred JCL- ICR female mice.

• : Sarcoma 180 cells (2 x 10⁶/ml) were inoculated into the intraperitoneal of mice on day o.

• : BCG (lyophilized) were injected intraperitoneal.

15

(3)

3.

암세포

Cancer chemotheraphy screeing test 에 使用 되 는 Sarcoma 180 tumor cell을 고려 대 학교 의 파대 학 생화학교실에서 분양받아 jCL- ICR mouse 복강에 넣어 계대하여 사용하였다.

Sarcoma 180 cell 접 종 은 0.4% trypaneblue (GIBCO) 로 살아있 는 세 포만 계 산하여 O.lml의

Sarcoma 180 cell (2 x 10⁷cell/ml) 을 복강내 투여 하 였다. 각 군은 6마리로 하여 picric acid로 번호 표 시를 하고 day 0에 모든 군을 동시 투여하였다.

4.

수명연장 效果測定

수명 연장 效밍;는 BCG 투여 후 30 일간 관찰하여 대조군 mouse의 '!:'{i- II 을 합계하여 100% 로 하고 각 처리군의 '!:.仔 11 을 나누어 계산 하였다

BCG 투여 군 '1: 1￥ H 합계 수명연장 效 * LI'-"~ ^{- r}., ^I~4_;~T~J ~l _1~' " X 100

대조군 生存[J 합계

Blood (heparinized blood)

5. B c터|과 T cell으| 분석

B cell파

T

cell 측정 方法은 각각 다르다. 즉 B cell은 免훨螢光法(immunofluorescence technique)

으로 19) T cell은 sheep 적혈구가 자연적으로 T cell

주변에 형성하는 rosette (E - rosette formation) ²⁰⁾

로 측정하였다. 여기서는 B lymphocyte 와

T

lymphocyte를 동시 에 측정 할 수 있 는 Quantigen

T

& B cell assay(Bio-Rad) 를 사용하였다 2 1) 測 파방법 은 그림 2와 같욕며 두 종류의 polyacry- lamide bead (직 경 5-10 μm) 를 사용하여 측정 한 다 . B cell은 membrane immunoglobulin에 yellow bead가 3개 이 상 붙은 젓 이 고 T cell은 무색 bead가 갖고 있는 T101 monoclonal antibody가 T cell 표 면항원인 T65에 3개 이상 붙은 것이다. 이 방법은 B cell파

T

cell 뿐만 아니 라 대 식 세 포， null cell도 구 별이 가능하다. 대식세포는 bead가 세포 내에 탐식 되 어 있 고， null cell은 bead가 붙지 않은 lymphoc-

yte이 다 . 또한 죽은 細뼈는 erythrosin B에 의 해 적 색으로 염색되므로 구별이 가능하다.

Dilution of 5 ml of heparinized blood with phosphate buffer saline

Carefully layer 5 ml of diluted blood onto the lymphocyte isolation medium

• centrifugal separation : 400 xg, 20 min

Dilution with PBS after separation of lymphocyte layer

• centrifugal separation 400 xg, 5 min

Addition of 5 ml of PBS after removal of supernatuant

• incubation for 30 min at 3TC Dilution with PBS and washing (2 times)

• centrifugal separation : 150 xg, 5 min

Adjustment of lymphocyte concentration to 0.75 -1.25 x 10⁷cells/ml after removel of supernatant Addition of 200 μ1 of bead solution to 100 μ1 of lymphocyte suspension

• centrifugal separation : 150 xg

,

3 min lncubation for 30 min at 3TC

Addition of 100 μ1 of the vital stain (Erythrosin B)

Microscopic examinatin (Leitz Laborlux 11 light microscope

,

Germany)

그림 2. Procedure of B cell and T cell assay

(4)

6.

^{廳螢光法에 의한}B Lymphocyte 確認

B cell 表面의 membrane 면역글로부런에 螢光 처리된 抗體를 붙여 8훗을 형성하여 형광현미경으로

B cell 을 確認하였 다 22) ^형^광처^{리 抗體는}anti mouse IgG(Cappel Research Products) 를 사용하 였 다 . 方法은 그림 3에 나타냈 고 lymphocyte의 분 리는 T cell파 B cell 분석의 bead 첨가전 단계와 동 일한 방법으로 하였고 형광 처리 후 phosphate 완충 액 으 로 3 回 세 척 후 7% BSA (bovine serum albumin) saline 용액을 넣고 slide에 도포 후 건조 시킨다. 95% ethanol을 건조된 위에 도포해서 완전 히 건조시킨다. PBS와 1 : 2로 희석된 glycine 완충 액을 건조된 위에 놓고 cover glass로 덮어 형광현미 경 (Leitz Wetzlar Germany) 으로 관찰하였 다 .

5 X 106 cells suspended in O. 1 ml P BS

,

^{350 xg}^,^{5 min}

Cells

addition of 0.05 ml of fluorescein conjugated IgG

Stand for 30 min at room temperature

,

washing with PBS (three times) Addition of 7% Bovine Serum Albumin Saline

•

Transfer to slide glass

~ dry and addition of glycine buffer Fluorescence microscope

그림

3.

Identification fo B cell by fluorescein conjugated IgG

7.

血淸蛋白寶 흩훌氣泳動

Corning protein Electrophoresis System²³)을 使

用하여 agarose gel 전기영동을 실시하여 y-

globulin을 gel상에 서 분리 하였 다 . 지 지 체 는 1%

agarose gel (Corning) 을 사용하였 으며 완충액 은 PHAB buffer (Corning) 를 사용하였 다 .

전개는 90V로 35분간 시켰으며， 전개가 끝난 후 5 mg/ml 농도의 Ponceau S용액 으로 15분간 염 색 시 킨 다음 5%acetic acid로 세 척 하여 densitometer

(520 nm

,

Corning) 로 scan'하여 y - globulin의 %를 구했다.

8.

免훌電氣泳動

Corning immunoeletrophoresis system을 使用하 여 agarose gel 전 기 영 동을 실시 하여 IgG, IgA, IgM을 gel상에 분리하였다.

Antiserum은 IgG, IgA, IgM 이 함께 들어 있 는

goat anti -mouse immunoglobulins(Cappel) 을 사 용하였다.

전개 는 90V로 35분간하고 antiserum을 놓은 후 24시간 동안 실온에 둔 후 2 mg/ml 농도의 Amido black 10B용액으로 5분간 염색시킨 다음 5% acetic

acid로 세척하여 건조시킨다.

9.

細脫훌性測定

1) 배지

일반적인 세포의 배양은 Eagle(1959) 의 minimu- m essential medium (MEM) 과 Moore, et al.

(1967) ^24)의 RPMI 1640을 利用하였다. MEM (GIBCO) 에 는 기 본 조성 에 10% heat - inactivated fetal bovine serum (HIFBS) 을 첨 가하였 고 RPMI 1640 (GIBCO) 에 는 기 본조성 에 10% HIFBS, 1%

nonessential amino acid, 1% L-glutamine(all from GIBCO) 와 0.5% 2-mercaptoethanol(Sigm-

a) 을 첨가하여 使用하였다. 또한 세포의 세척과 희 석 에 는 Hank’s balanced salt solution (HBSS : GIBCO) 를 사용하였 다 26)

2) Lymphocytes

정 상 JCL- ICR mouse의 spleen을 멸균 상태 로 채취하여 4.C 의 HBSS가 들어 있는 Petri dish (60 X 15mm) 에 놓고 20-23 gauge 주사바늘의 주사기 와

blunt forcep으로 spleen 세포를 單離시킨 후 nylon

mesh를 통과시켜 50ml 원섬분리 시험관에 받은 후

50 ml이 되도록 HBSS로 채운다. 냉장원심분리기

(Rotixa/Rp

,

Hettich) 로 O.C 에 서 400 Xg

,

8분 원 심 분러한 후 RPMI-1640 배지를 使用하여 세포수가 4 X 107 cell/ml이 되 도록 희 석 한다 .

3)

標的細脫

Sarcoma - 180 tumor cell을 계대 중인 JCL- ICR mouse의 복강으로부터 주사기 를 이 용하여 채 취한 후 HBSS로 세척하고 냉장원심분리기로 O.C 에 서 400Xg, 8분 원섬분리하여 MEM으로 5X 106 cell/ml으로 희석한다. 0.2 ml의 표적세포 부유액에 0.1 ml chromium (N a2 ⁵¹Cr04 1 mCi/ ml. Am얻rsh

am) 을 넣 고 3TC 에 서 45분간 incubation 한 후

(5)

111 .

톨驗樞果 및 考훌 MEM으로 3번 세 척 하여

chromium labelling

표적

세포 부유액을 조제하였다.

Day

0에

Sarcoma - 180

cell올 접종한 후 30 일간 판찰하여 A군

(control group)

의 生存日 을 합계 하여 100% 로 하고 각 군을 비교하여 보았다(표

1) .

전체 적으로 각 군의 생존율은 대조군에 비해 2배 정도 증 가하였다.

BCG를 60μg/kg， ip한 B， C， D군의 수명 연장 效果는 전처리한 군과 하지 않은 군이 비슷한 수명 연 장 效果를 보여 주고， BCG를

240

μg/kg， ip한

E

,

F

, G군은 5， 9， 13일에 접종한 군 보다는 -1 日에 전처리 한 군에서 생존율이 높고 G군은 그 생존율이 더욱 증가하는 것을 볼 수 었다.

1. 수명연장 效果

4)

抗血淸

항혈청은 S-180과 BCG투여군의 mouse에서 채 혈하여 혈청분리하였다. 혈청 중 일부는 비동화

(heat inactivated, 56

⁰

C

30분) 하여 보체

(guinea pig complement :

BBL) 와 함께 使用하여 세포특성 시험의 활성화 여부를 관찰하였다.

5) 細뼈毒性爛定

세포독성을 측정하기 위해 2단계 실험을 하였는데 첫 번째 는 그림 4에 서 처 럼

spleen lymphocyte

^(주로

NK

cell)를 작동세포로 하고 정상 mouse의 비동화 안한 혈청， S-180만 접종한 혈청， S-180파

BCG

처리군의 비동화 안한 혈청을 넣어 標的細8包인 S-

180 chromium -labelled tumor

cell의 파괴 정 도를

gamma

couter로

(Multi - PRIAS, PACKARD)

측 정하였다.

표

1. Antitumor activity of BCG against Sarcoma 180

⁽ⁱ

p-ip)

매 -，잉

빼 -따

없 -m

m -r mω V- 껴“ 」u

m

T/C(%) of the dead

100 200 203 199 190 198 200 Group

A B C D E F G

Remove spleens from ICR mouse

4 Prepare single cell suspensions in HBSS

4 Filter through a nylon mesh

centrifugal separation (400 xg , 8 min un- der refrigeration)

Sarcoma 180 cells(2 x

10⁶⁾

were inoculated into the ip of mice on day

^O.

2.

8 Iymphocyte와 T Iymphocyte의 분석 면역요법에 관여하는 세포 중에

B cell

,

T cell

,

Null cell

, 대 식 세 포의 수를 측정 함으로써

S-180

cell을 투여 후

BCG

접종에 따른 각 세포의 증감을 7일과 14 일째 관찰하여 보았다(표

2) .

B， C， D군에서는 7일째

B

cell이 정상군에 비해 크 게 증가한 후 14 일째는 증가폭이 둔화되는 경향을 보인반면

T

cell은 정상문에 비해 커다란 증캄 현상 은 보이지 않았다. 대식세포는 7일째 정상군에 비해 5배 정도 증가한 후 14 일째 감소하는 정향올 보이고 있다.

Null

cell은 7일째와 14 일째에 정상군에 비해 1/2로 감소되어 있다.

E， F， G군에서는 7일째는

B

cell이 정상군과 비슷

l Count viable cells by Trypan blue

• Plate 1 ml of cell suspension and 1 ml of stim- ulator serum

4 Culture for 2 days at 3

^7"

C with 5.0% CO2

4 Prepare 51Cr-labeled(Na2 51Cr0

4

1 mCi/m

l)

target cells(S-180)

4 Effect - target cell mix

4 Cover and incubate at 31C 4 hrs with 5.0%

CO

2

• Count radioactivity in a gamma counter

0/6 1/6 1/6 2/6 2/6 2/6 2/6

그림 4.

Procedure of 51Cr release assay of

activity of cytotoxicity.

(6)

표 2. Effect of BCG sensitization on the proliferation of the cells involved in the immuneresponse in S-180 tumor- bearing mice.

B-ceH T-cell N ull- cell Macrophage

(%) (%) (%) (%)

day day day day

7 14 14 7 14 7 14

Normal 38 5 55 2

A 44 50 2 3 42 40 14 7

B 52 59 4 28 37 16 2

C 55 60 7 23 26 15 8

D 60 66 5 4 25 20 10 10

E 35 74 3 55 23 7 2

F 36 60 2 52 36 10 2

G 35 62 6 60 28 3 4

한 경향을 보이다가 14 일째에 2배 정도 증가하는 것 을 볼 수 있다. T cell은 거의 B， C， D군파 같다 Null cell은 7일째는 정상군과 비슷한 경향을 보이다 가 14 일째는 1/2로 감소되어 있다

표 2에 나타난 결과는 BCG가 B cell 증식 에 관여 하는 免띤공增彈物質일 가능성을 제시하므로 그 여부 를 알기 위 해 購螢光法에 의 해 B cell을 確쇄하고，

혈청 단백질 전기영동파 면역전기영동을 실시하고，

細뼈毒性 측정을 하였다.

3. 體螢光法에 의한 B Iymphocyte 確認

B cell은 면역글로부런을 生屋하는 기능이 있으므

4.

血淸蛋면質電氣泳動

B cell증가에 따른 y-globulin의 증가 여 부를 보 기 위해 단백질 전기영동을 실시하여 y-globulin 분획을 비교하여 보았다.

Mouse 혈청 단백 전 기 영 동 분획 은 albumin, t r l -

globulin, tr2 - globulin, β globulin, y - globulin 으로 분리된다. y-globulin 분획은 一般的으로 10 0-19.8% (0.62-1.60 gm/dl) (B.M.Mitruka

&

H . M . Rownsley) 로 나타나고 있 다 26-28) 본 實驗에 使用된 JCL-- ICR mouse의 y --globulin분획의 비 율과 각 군의 변화는 표 3에 表까한 바와 같다.

정상군의 y-globulin분획은 7일째는 낮은 농도를 보이다가 14 일째 문헌치에 이르는 것을 볼 수 있다.

S-180 cell만 접종한 군은 7 일째 y-globulin이 정 상군의 2배 이상 증가하였다가 14 일파 21 일째 다시 2배 이 하로 감소함을 보였 다 . S-180 cell파 BCG 접종 group에서는 7 일째 y-globulin이 정상군 보 다 높은 상태에서 출발하나 14 일과 21 일에 정상 수 준에는 도달하지 못하는 것을 볼 수 있다. 그러나 S-180 cell만 접종한 군에 비하면 y-globulin 이 증 가하였고 특히 14 일째 감소한 y-globulin이 21 일째 다시 증가하는 것을 볼 수 있었다.

따라서 표 3에 나타난 결파는 S-180 cell 만 투여 된 군은 면역글로부런이 급격히

't:

IJx된 후 감소하

나， S-180 cell파 BCG가 투여된 군은 면역글로부

런이 급격히 生成된 후 감소는 하나 S-180 cell만 투여한 군에 비해 높은 면역글로부런 함량을 유지하 는 것을 볼 수 있었다.

5.

免훌電氣泳動

로 증가된 B cell이 갖는 면역글로부런 가운데 IgG 혈청 y-globulin 중 면역글로부런 분획인 IgG, 를 형광처리하여 B cell의 증가를 확인하여 보았다 IgA， IgM 분획을 정상 mouse 血淸의 면역글로부런

표 3. Effect of BCG sensitization on the serum y - globulin amounts in sarcoma -180 tumor - bearing mice

Normal S-180

S-180 : BCG 60μg/kg， ip S-180 : BCG 240μg/kg， ip

Serum y-globulin(%, mean::tSD)

day 7 day 14 day 21

4. O::tO. 64 9.6::t0.17 9.3::t1.01 9

.o

::t

o.

64 4. 3::t0. 28 4.

o

::t

o.

92 6.3::t0.38 5.4:t 1. 30 5.9:t1.57 8.8::t0.61 6.

o

^:t

o.

95 6.2:t0.87

(7)

N

E

N

F

N

G

‘-

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N

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Assays were performed with Corning immunoelectro phoresis system at 0.05 M Barbital buffer pH 8.6

그림 5. Immunolobulin electrophoresis with anti- mouse IgG.A.M

과 비교하여 증감 여부를 관찰하였다. 면역글로부런 은 抗原에 의한 자극 후 1주일 정도에 IgM이 증가 하고 2주일 후 IgG가 증가하는 형태를 보이는데 그 림 5에 서 는 14 일째 E， F， G군의 IgA, IgM 분획 이 정 상군과 비슷한 형태를 보이고 특히 IgG 분획은 정상 군보다 증가한 경향을 보여 주고 있다. 즉 B cell파 T cell의 분석 에 서 14 일째 B cell이 증가한 사실파 E， F， G군의 IgG가 14 일째 정상군보다 증가한 것은 B cell 증가에 따른 면역글로부런의 증가로 볼 수 있 다

6.

Chromium-release assay어| 의한 細脫毒性測定

Sarcoma 180 cell 을 표적 세 포로 하고 mouse spleen의 natural killer cell을29-3 1) 주작동세 포로 하 여 대조군에는 51Cr label한 S-180과 NK cell만 작 용시키고， 다음 군에는 S-180 cell과 정상혈청，

BCG접종 혈청을 작용시켜 51Cr의 release를 측정하 였다. 여기서 대조군에 비해 BCG접종 혈청에 의한 NK cell의 activation효과는 미 미 했 다 .

또한 Interlukin - 2 에 의한 NK cell의 activation 효과 역시 관찰할 수 없었다.

Sarcoma 180 cell에 BCG에 의 해 生成된 物質을 갖고 있는 혈청만 작용시켰을 때 51Cr release %가 높게 나타난 것이 관찰되어 모든 실험을 NK cell을 제외시킨 가운데 실시하였으나 처음과 같은 效果를 볼 수 없었다. 이에 혈청을 비동화하고 guinea pig complement를 넣어 작용시켰을 때 표 4와 같은 결 과를 보여주고 있다.

표 4에서는 血淸을 비동화하고 complement를 넣 어 반응을 활성화 시켰을 때 정상군파 S-180 투여 군에 비해 BCG 투여군의

%

specific 51Cr-release

가 증가하고 있는 것을 볼 수 었다.

이상의 결과로부터 BCG에 의해 mouse 血淸內에 는 B cell에 대한 특이항체의 생산량이 증가한 것으 로 사료된다.

IV.

要約

미생물 기원 免훨增彈物質언 BCG 에 의한 5arcoma -180 tumor cell에 대한 항종양 效果를 알 아보기 위해 JCL- ICR mouse 복강에 5-180 종양 세 포를 접 종하여 대 조군으로 하고 BCG를 60 μg/

kg, ip로 -1, 1, 5, 9일에 접종한 군을 비교했을 때

BCG 접종군의 약 2배의 수명연장 效果가 있음이 관 찰되었다.

BCG 접종군에서는 B cell이 시일 경파에 따라 현 저히 증가하였으며 면역글로부런의 증가를 혈청 단

표 4. Antibody - complement - mediated cytotoxicity

Normal S-180

S-180: BCG 60μg/kg， ip S-180 : BCG 240μg/kg， ip

specific 51Cr-release(%, mean::1::SD)

2.2::1::0.42

3.9::1:: 1. 20

4.8::1::0.42

9.3::1::2.30

(8)

,tiJl~ ~71'8%~ ~~if~-¥-tB ~71'8%e>ilA~ ~oJ

<5}~t:-}.

-q}~ ⁵¹Cr-release assaye>il .Q.l-q}

*I!Jij@:flt£

Al~

Oil A~ NK cell.Q.l _{~~.g. ~}

4-

~ ~ .£.

o:l

~

xJ%

1:11%

~<5}.JI. complement~~~ 9-~ ~

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Studies on the Efficacy of BCG Against Sarcoma 180 cell Suppression

Ryu, J ung Rok

Department of Clinical Pathology, Gu Ro Hospital, Korea University Medical Center

ABSTRACT

The study reported here was designed to deter- mine the efficacy of Bacilli Calmette- Guerin

(BCG) treatment against sarcoma 180 tumor cells suppression in JCL- ICR mice.

The results were as follows :

1. A group of mice previously injected with BCG 60 ,ug/kg mouse on day-1 (injected intrap- eritoneally on day -1, 1, 5 and 9) is the most effective and its mean survival period have two folds longer than that of non- injected control.

2. 240 ,ug/kg mouse of BCG previously injected group on day -1, 5, 9 and 13 is most effective and mean survial peried have two folds longer.

3. The amount of B lymphocyte were markedly increased in BCG sensitized mice.

4. The observation of apparent changes from serum protein electrophoresis and immunoel- ectrophoresis as an increase of immunoglobulins.

5. NK cell activity was measured by a standa- rded 4hrs ⁵¹Cr-release assay with Sarcoma 180 used as targets. NK cell were not or, if anythin- g ; were far less cytotoxic against the target cells.

6. By the heat- inactivated antiserum with complement cell assay, it was shown that the percent specific ⁵¹Cr-release was increased.

The results suggest that the efficacy of BCG against S- 180 cells suppression were antibody- complement-mediated cytotoxicity.

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