돼지 위축성 비염의 국내 발생상황

(1)

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동물자원연구

11 :

170~187， 2000

Annals of Animal Resources Science

11 170~

187

^,

2000

돼지 위축성 비염의 국내 발생상황

로 승· 한정희 ·한태욱

강원대학교 동물자원과학대학 수의학과

The prevalence of swine atrophic rhinitis in Korea

Cheng Lu , Jeong Hee Han and Tae-Wook Hahn Department 01 Veterínary Medícíne

Kangwon National University

ABSTRACT

Atrophic rhinitis (AR) is one of major respiratory diseases in pigs. AR causes a great economic losses and is considered to be a multifactorial disease because herd management

^,

heredity

^,

and environment can be influenced. AR can be classified as either nonprogressive AR

,

caused by Bordetella bronchi성epti찮， or progressive AR

,

caused by toxigenic PasteurelJa multocída

,

alone or in combination with other agents such as B bronchísepti떠. Several AR vaccines have been used in Korea

^,

however

^,

AR still remains widespread in swine farms. To solve the recent problems of AR

,

we aimed to investigate the recent prevalence of AR in vaccinated swine herds.

From December 1999 to August 2000

^,

eight swine farms located in Kyunggi province area were selected and surveyed for the outbreak of A R. Pig herds in four farms (A ~ D) were vaccinated with one of commercial AR vaccines which contained inactivated B bronchíseptíca and toxigenic P multocída. The pig herds in the rest four farms

(E~H)

were vaccinated with AR vaccine which contained inactivated B bronchíseptíca and only toxoid from toxigenic P multocída. For the prevalence of AR in the farms

^,

isolation of the organisms

^,

serological tests against B bronchiseptíca

,

P multocída and other respiratory disease-related pathogens and snout lesion grading of finished pigs were performed. The seropositivity of B bronchíseptíca and P multocída in finished pigs from 8 farms was 47.2% (133/282) and 19 .1% (541282)

,

respectively. The rate of isolation of B bronchíseptíca and P mu 1t ocída was 6.7% and 12

.4%,

respectively. The average snout lesion grade was 2.2 :t 2. 1. Results indicate that both types of AR vaccines did not protect AR infection and did not prevent from the occurrence of snout lesions. In addition

^,

significant difference was shown between the seropositivity of P multocída or porcine reproductive and respiratory disease virus and the degree of snout lesion grading (P<0.05).

Key word: Atrophic rhinitis ,

B

bronchiseptic

a, P

multocida , prevalence.

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돼지 위축성 비염의 국내 발생상황

1 . 서

^료르

‘-

돼 지 의 위 축성 비 염

(atrophic rhinitis:

AR) 은 발병 초기에 재채기， 기침 등의 증상 을 유발하며 만성적으로 진행되어 버출혈，

비갑개 위축， 안면변형 등의 증상을 나타내 면서 성장 지연이나 사료 효율의 저하 등으 로 양돈 산업에 막대한 경제적 손실을 초래 하는 중요한 호흡기 질병 이다 (

D anie

^l,

1986;

Carter

등，

1995).

이 질 병 은

BordeteJJa (B)

bronchiseptica의 단 독감염에 의한 비진행성 위축성 비염

(nonprogressive atrophic rhinitis)

과

dermonecrotic toxin

(DNT) 을 생성하는

toxigenic PasteureJJa (P) m

uJtocída의 단독감염 에 의 한 진행 성 위 축성 비 염

(progressive atrophic rhinitis)

으로 분류할 수 있다 (de Jong과

Nielsen

,

1990).

특 히 진행성 위축성 비염은

B

bronchiseptica를 포함한 여러 셰균이 복합 감염되어 증상이 더욱 악화될 수 있으며 밀집사육， 연속도입，

환기불량， 낮은 습도， 스트레스 등의 환경관 리 및 위생상태 등이 발명의 복합요인으로 작용한다

(Owen

,

1982; Foged

,

1992).

B

bronchiseptica는 주로 6주령 이 하의 어 린 돼지의 비갑개 형성부전을 초래하는례 연 령에 따라 감수성이 차이가 있으며，

toxigenic P

m uJtocida는 3개월령 이상의 돼지에셔 심 한 임상증상과 성장 장애를 유발하고， 생산 하는 독소는 골아셰포의 분해를 촉진시키며，

흡수되는 독소의 양에 따라서도 발병 정도에 차 이 가 있다

(Frymus

등，

1989; Buys

등，

1990; Van D iemen

동，

1994).

P

muJtocida는 돼지의 상부 기도에 존재하 는 정상 셰균총으로서 육성 비육돈에서는 다 른 세균이나 바이러스에 의해 손상된 폐에

이차적으로 침투하여 폐렴을 유발하기도 한

다.

P m

uJtocida는 토끼 항혈청을 이용한 간 접 혈구응집반응시험

(Carter

, 1955) 이나

hyaluronidase test

(Carter와

Rundell

,

1975)

, 혹 은

acriflavine . test

(Carter와

Subronto

^,

1973)

등 의 방법으로 그 협 막혈청 형

(capsular serotype)

을 결정하며， 대부분 돼지 유래 분리주는 A형 과 D 형 이다

(Pijoan

동"

1983).

특정적인 병변으로는 비갑개의 형성부전이며 특히 비갑개의 위축은 복비갑개에서 심하고，

이러한 심한 위축이 배비갑개까지 파급되면 비 강이 공동화로 발전하며， 비중격 이 만콕됨으로 서 안면 비틀럼이 나타남과 동시에 빈번한 재 채기로 인한 비출혈 등을 관찰할 수 있다

(Nakai

동，

1984;

Dominick와

Rimler

,

1986).

이 질 병 은 1830년 독일 의 Franque에 의 해 처음 보고된 이래 전세계적으로 발생하고 있 다. 우리나라에서는 &hofield와

Chung

(1959) 이 AR의 발생을 처음 보고하였으며， 이틀은

AR

증상을 나타내는 돈군에서 Pm띠toα''da를 분리 하였다. 이것은 미국에서 도입한 종돈을 통하 여 전파된 것으로 조사되 었다.

B

bron왜1낭eptica 에 대한 균분리 보고로서 영남지 역에서 장과 김 (988) 은

37.7%

, 김 등 (99 1)은 21.5% 의 분리율을 보고하였고， 정 등 (991) 은 경남 지역에서

28.8%

, 박 등 (995) 은 충남 서북 지역에서 34.1%의 분리율을 보고하였다.P muJtocida에 대 한 균분리 조사로서 영 남지 역 에서 조와 김 (989) 은

43

.1 %, 김 동

(991)

은

34

.1 %의 분리율을 보고한 바 있다.

현재 AR의 예방을 위해 꾸준한 위생관리 와 백신의 사용으로 AR의 발생은 상당히 감 소되어 왔으나 도체검사시 비갑개 위축변화 를 나타내는 출하돈이 여전히 많이 관찰되는 것으로 나타났다 (조와 킴，

1989;

킴 등，

199

1) . 그러나 지금까지 백신을 접종한 모돈

에서 출생한 자돈이 출하시

AR

병원균의 분

(3)

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리상황 및 비갑개의 병변지수와 다른 호흡기 질병 원인체의 혈청 항체가 사이에 대한 상 관성 연구보고는 없는 실정 이다. 따라서 본 연구에서는 최근에 AR의 발생상황을 보다 정확히 파악하기 위하여 경기지역 8개 농장을 대상으로 출하돈의

AR

원인균 분리상황을 조 사하고， 비갑개의 병변지수와 다른 호흡기질병 원인체에 대한 혈청 항체가 사이의 상관관계를 규명하고자 본 연구을 수행하였다.

1 1. 채료 및 방법

1. 공시돈 및 검사재료의 채취

출하돈의

AR

원 인균 분리 상황，

B broncln'-

septi떠 P muJt.따da， Porcine repr때uctive and respiratory syndrome virus(PRRSV)

에 대 한 혈 청 항체가 측정 빛 비갑개의 병변지수를 검사 하기 위하여 1999년 12월부터 2000년 8월까지 경기도 지역에서 모돈 100두 이상을 사육하는 양돈장 8개소를 임의로 선정하였다. 이틀 농창 의

AR

예방을 위한 백신접종 상황은

Table 1

에 나타내었다. 초산돈의 경우 A~D농장에서는

B

broncms，터ptica와

toxigenic P m uJ tocida type D

bacterin을 함유한 B사의 겔형 백신을 분만 5주 와 3주전에 접종하였으며 E~H농장은

B bronclnseptica

bacterin과

P m uJ tocida

toxoid를 함유한 오일형의 백신을 분만 6주와 3주전에 접종하였다. 경산돈의 경우 A~G농장에서는 분만 3주전 또는 2주천에 1 회 접종하였고， H 농장에서는 분만4주전에 1 회 접종하였다. 자 돈은 H농창에서만 3주와 7주령에

P multocida bacterin백신을 2회 접종하였다.

PRRS에 대한 예방캡종은 실시하지 않았다.

혈청 항체가를 측정하기 위하여 이들 농장

의 출하돈 282두에서 채혈을 실시하였고， 안 성시 소재 도축장에서 도축된 상기 농장의 돼지를 대상으로 105두의

nasal swab

재료에 서 원인균 분리， 66두에서 비갑개 검사를 실 시하였다.

Nasal swab

재료의 채취는 도축된 돼지의 비경부를 알콜솜으로 깨끗이 소독한

후 멸균면봉을 제 1견치 부근의 비갑개 부위

까지 넣어서 채취하였다.

2. B bronchiseptica으| 분리 및 돔정 B

bronchiseptica의 분리를 위해

5%

면양 혈액 한천배지와

1

%,

USA.

dextrose가 함유 된

MacConkey agar (Difco

, USA) 를 사용하 였으며 채취된 면봉을 평판배지에 도말 접종 하였다. 3Tc 에서 48시간 배양한 다음 집락

형태， Gram 염색성， 균형태 빛 용혈성을 확

인한 후 표준양성 혈청으로 평판응집반응을 실시하여 1분 이내에 양성반응을 나타나는 집락을 채취하여

10%

glycerol가 첨가된

brain heart infusion (BHD broth

(Difco) 에 접 종 배

양한 후 -70.C 에 냉동보관 하면서 표준균주

와 더불어 생화학적 성상시험， 가수분해시험，

당분해 시 험 등을 Biolog사의

Micorolog system

,

Release 4.0 (USA)

을 이 용하여 실시 하 였다(김 등，

199

1). 최종적으로

B

bronchi밟ptica 의 유전자적 동정을 위하여

polymerase chain reaction

(PCR) 을 실시 하였다 (Hozbor 등，

1999).

3. Pm띠toc/’da으| 분리 및 동정

채취한

nasal swab

재료를 혈액배지에 접

종한 후

3Tc

,

5% COz

배양조건하에서 초대 배양하였다. 24시간 배양 후 백색으로 점액 성을 띠는 비용혈성 단독 집락을 염색하여

(4)

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돼지 위축성 비염의 국내 발생상황

Table 1. History of vaccination against atrophic rhinitis in the tested farms Farms

A~D E~G

H

Weeks before farrowing.

Weeks old . ... P multocida.

Gilts twice (5 & 3)*

twice (6

&

3) twice (5

&

3)

그람음성의 단간균을 확인한 후

MacConkey

agar에 셔 의 발육능，

motility

,

urease

실 험 ,

methyl red reactio n. Voges-Proskauer

reaction에 서 음성 을 나타내 고 catalase와

indole

반응에 서 양성을 나타내는 균을 1차로 선발한 후 그 외의 생화학적 성상시험은 Biolog사의

Micorolog system

,

Release 4.0

(USA) 을 이 용하여

P

m uJtocida로 동정 한 후 협 막혈 청 형 분류 시험을 실시하였다 (김 등，

199

1).

P

muJtocida로 동정된 균주를 대상으로 독소생

성의 유무는

PCR

기법에 의해 확인하였다 (지 등，

2000).

4. P mu/tocida으| 협막혈청형 돔정 P muJtocida type

A는 Carter와

Rundell

(1975) 의 방법에 준하여 동정하였으며 분리 균을 혈액배지에 5~10mm 간격으로 획선도 말한 후 바로

8taphyJococcus

(8) aureus로 수직도말하여 3Tc 에서 18~24시간 배양한

후 8 aureus 집 락 주위 의 P muJtocida가 위

축 및 소실된 것을 양성으로 판정하였다.

Type

D 는 Carter와

Subronto

(973) 의 방법 에 준하여 동천되 시 4며 분리균을 3ml 의

BHI broth

(Difc이에 접종하고 3Tc 에서

18 Sows Piglets

once (3 or 2) none

once ( 4 ) 2 (3

&

t*

,

Pm*

^“

only)

시간 배양한 후 3，OOOrpm에서 30분간 원심분 리하여 염은 침전균액 0.5 매에

0 .1 % acriflavine neutral (Sigm

^a, USA) 을 동량으로 혼합하여 5~30분간 방치한 후 축모양의 침전물이 일 어냐는 것을 양성으로 판정하였다.

5. 혈청 항체가 측정

혈청 항체가 측정을 위한 혈액의 채취는 출하돈의 경정맥에서 실시하였고 실험실에서 원심 후 혈청을 분리하여 -20"c 에 보관하면 서 사용전에 56"c 에서 30분간 비동화시켰다.

1) B

brorχf7iseptA떠:>11 대한 혈 청 항체가 측정

B

bronchÍseptica에 대 한 혈 청 항체 가 측정 은 극럽수의과학검역원에서 분양받은

B bronchj-

sep띠ca 응집반응용 항원을 사용하여

microplate agglutina

tion법으로 실시하였다. 가검혈청을 생리식염수로 5배부터 2진 단계 희석한 후，

생리 식염수로 50배 희석한 항원을 동량으로 첨가한 후 잘 혼합한 다음

3Tc

배양기에서 2시간 동안 반응시켰다. 음성대조로

0 .1%

albumin (Sigma)

을 함유한 생 리 식 염 수

50

^t1^l

에 희석항원 50 t1l 를 넣어 반응시켰다. 반응

(5)

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동물자원연구 (2000)

이 끝난 다음 fc 에서 16~18 시간 방치한 후 응집상을 판정하였다.

50%

이상 응집을 보 이는 well의 혈청희석배수를 항체가로 판정

한 후 응집반응검사 지침에 따라 항체가가

80

이상되는 것을 양성으로 간주하였다 (류

등， 1997).

2) P

multocida에 대한 혈청 항체가 측정

P

multocida에 대한 항체가 측정을 위하여 ELISA를 실시하였다.

ELISA

항원은 국럽수 외과학검역원에서 분양받아 적정희석배수로 희석하여 사용하였다. 항원을

coating buffer

05.9%

NazC03

^,

29.3% NaHC03

^,

pH

9.6) 에 희 석 한 다음

ELISA plate

well당

100

^/11 씩 분 주한 후 fc 에서 24시간동안 정치시킨 다음 항원액을 제거한 후

washing buffer (0.05 % Tw een 20 phosphate buffered saline (PBS)

^,

p H7. 2)

로 3회 세척하고

blocking buffer (2 % bovine serum albumin in

PBS)를 분주한 다음

3Tc

에 서 1시 간 배 양하였다.

Bl ocking

buffer를 제 거 한 후

washing

buffer로 3회 세 척 하였다.

가검혈청의 희석을 위하여 다른

U-form

microplate를 이용하여 가검 혈청을 2진 단계 희석하여 사용하였으며 음성혈청은 100배 희 석한 후 음성대조로 삼았다. 항원이 흡착된

ELISA

plate에 2진 희석한 가검혈청과 음성

혈청을 해당되는 well에 옮긴 후 2시간 반응 시 켰다. 혈 청 을 제 거 한 후

washing

buffer로

3

회 셰 척 하고

anti-pig IgG

peroxid없e.

conjugate

(Sigma) 를 PBS에 3，000배 희석하여 각

well

당 100 /11 씩 분주한 후 3Tc 에서 1시간 반응 시 켰다. Conjugate를 제 거 한 후

washing buffer

로 다시 4회 세척 한 후 o-

phenylenediamine substrate

용액 을

100

^/11 씩 각 well에 분주한 다 음 10분간 설옴에서 반응시켰고，

stop solution

(3M

HzS04)을 각 well당

50

^/11 씩 분주한 후

ELISA reader (Molecular Device

,

USA)

를 이 용

하여

492nm

파장에서 흡광도를 측정하였다.

이때 가검혈청 흡광도를 음성혈청 흡광도로

나눈 수치가 2 이상언 혈청희석배수를 그 검

사혈청의 항체가로 판정하였고 본 실험실에 서 축적한 자료기준에 준하여 항체가가 1， 280 이상을 양성으로 판정하였다.

3) Porcine reproductive and respirato

lY

syndrome virus

(PRRSV) 에 대한 항체가 측정

PRRSV에 대한 항체가 측정은 HerdChek@

PRRS kit

(I

D EXX

, USA) 로 실시하였다.

시료희석액을 이용하여 1:40으로 희석한 가 검혈청과 음성대조 빛 양성대조 혈청

100

^/11

를 각각 PRRSV가 coating된 well (PRRS

welD과

normal host cell (NHC)

이 coating된 well에 sample당

2

well씩 분주한 뒤 질온에 서 30분간 배양한 후 모든 well의 액상성분

을 제 거 하고 1 회 에 300

^/11

washing solution으로

3~5 회 셰척하였다. 각 well에

anti-porcine horseradish peroxidase (HRPO) conjugate 100 띠

를 분주한 후 실온에서 30분간 반응시켰다.

Conjugate를 제 거 한 후

washing

solution으로 3~5 회 세 척 하였다. 각

test plate

well에

100

/11 의

tetramethylbenzidine (TMB) substrate

solutiorr을 챔가하고 설온에서 15분간 반응시

켰다. 반응을 끝내기 위하여 각 well에 100

^/11 의

stop solution

^(0.1

25%

HCl)을 첨가한 후

ELISA

reader를 이용하여

650nm

파장에서 흡광도를 측정 한 다음

sample/positive (SIP)

ratio를 구하여 항체 생성여부를 확인하였다.

Kit

내 사용 설 명 셔 에 따라

S/P

ratio가

0

^.4

또는 그 이상이면 PRRSV에 대한 항체 양성 으로 판정하였다.

(6)

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돼지 위축성 비엽의 국내 발생상황

6. 비갑개 병번검사

육안적인 비갑개병변은 두부를 상악의 제 1 구치와 견치의 중간에서 구강변에 수직으로 절단하여 관찰하였으며， 비갑개 위축지수는

Runnels

(1982)의

snout lesion

grading에 따라 위축의 정도를 분류하였다. 정상적인 비갑개 는

0

, 복측비갑개가 부분적으로 가볍게 위축 되고 배측비갑개는 정상인 것은

1.

복측비갑 개가 부분적으로 위축되어 나선이

1/2

이상 육안적으로 변화되었으며 배측비갑개의 나선 에 경미한 위축이 있는 것은

2

, 복측비갑개가 현저히 위축되었고 비중격에 육안적인 변화 가 나타나기 시작하며 배측비갑개도 위축을 시작한 것은

3

, 복측비갑개가 거의 완전히 위 축되어 끝부분에 부착되었고 비중격에도 약 간의 변형이 있는 것은

4

, 복측비갑개 및 배 측비갑개가 완전히 위축되 어 비강에 구멍 이 뚫어져 있고 비중격이 심하게 변형 만콕된 것은 5로 구분하여 판정하였다

(Fig

1).

7. 통계분석

본 연구에서 얻어진 결과는

PC SAS package (Ve r. 6 .1 2

, USA) 를 이용한

Pearson correlation

방법 에 의 하여

B

bronchi닝eptíca，

P multoci

^’

da

, PRRSV에 대한 혈청 항체 양 성율 빛

nasal swab

재료에서의 세균분리율 과 비갑개 병변지수간의 상관관계를 분석하 였다 (박 동，

1999).

11 1. 결 과

극내 양돈산업에 막대한 경제적 손실을 주 고 있는 호흡기 천염병인 AR 에 대한 백신을 접종한 모돈에서 출생한 자돈이 출하시

AR

의 발생상황을 조사하기 위하여 세균분리，

혈청 항체가 측정과 비갑개의 병변정도를 관 찰하였던 다음과 같은 결과를 얻었다.

1. B bronchiseptica와 P mu/tocida의 분리

경기도 지역 8개 양돈장 출하돈에서 ‘채취 한

nasal swab

재 료로부터

B

broncJúseptica와 Pm띠toα，'da-를 분리 한 결과는

Table

2와 같다.

총 105예 중 7예

(6.7%)

에 서

B

bron때l낭eptl떠 가 분리되었고， 13예 02.4%)에서

P multocida

가 분리되었다.

B

bronchiseptica와

P

multoci떠 가 동일한 개체에서 분리된 것은 2예 0.9%) 뿐이였다. 농장에 따른

B

bronchi낭eptica와

P

mu1tocida의 농장간의 분리건수는 3 또는 5

예였다.

2. B bronchiseptica와 P mu/tocida의 동정

Nasal swab

재료에서 분리한 7주의

B bronchisep

tíca는 모두 용혈성을 보였으며

catalase

,

urease

,

citrate

,

mono-methylsuccinate

,

succinic acid

^,

L-alanine

^,

L-proline

시 험 에 서 는 모든 균주가 양성반응을 나타낸 반면

챙훨 짧횟 옐솔 좋없 i훌

Grade 0 2 3

4

5 Fig

1.

Diagrammatic sections and lesion scoring of pig snouts (Runnels

^,1982).

(7)

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동물자원연구 (2000)

Table 2. The isolation of B bronchiseptica and P mu/tocida from nasal swabs of slaughtered pigs

No. of pigs Farms

examined

^B

bronchiseptica isolated

A 15

B

15 0

C 15

D

15 1

E 15 NT

F 15 2

G

15 3

H

15 0

Total 105 7 (6.

7)

Not tested.

**Rate of isolation

(%).

MR-VP

시 험 ,

Tween

40과

80

가수분해 시 험 ,

L-ornithine

,

urocanic acid

,

inosine

,

unidine

,

thymidine

,

phenylethylamine

,

utrescine

,

iactulose

,

maltose

,

sucrose

,

xylito

l, a

-D -glucose

,

glycerol

동 시 험 에 서 모든 균주 가 음성반응을 나타내였다.

L-fucose

시험에 서는 85.7%가 양성을 나타내었고

acetic acid

,

pormic acid

,

alanianmide

,

serine

,

D

, L-carnitine에서는 각각

7 1. 4%

,

85

.7%,

85.7%

,

7 1. 4%

,

28.6% 의 균주가 양성을 나타내였다.

PCR

기법으로 유전자적 동정을 실시한 결과 분리 된 균주는 모두

B

bronchi낭eptíca로 확인 되었다

(Table 3).

혈액배지 상에서의 용혈성，

집락형태，

capsule

유무 등의 결과를 토대로

N akase

(1957) 의 분류방법에 따라 분류한 결 과 분리 된 7주는 모두

phase 1

에 속하였다.

Nasal swab

재 료에 서 분리 한

P muJtocída

13주는

MacConkey

agar에 서 성 장하지 않았

No. of pigs

P

multocida

^B

bronchiseptica an d

P

m ultocida isolated isolated concurrently

3 3 0

2 0

3 NT NT

0 0

2 0

13 02

.4)

2

(1.

9)

으며， 운동성도 없고 적혈구 용해능도 없었 다.

Catalase

,

indol

e,

inosine

,

unidine

,

thymidin

e,

sucrose

시험에서 모두 양성반응을 나타냈으

며 ,

urease

,

MR -VP

,

Tween 40

,

Tween 80

,

glycero

l,

bromosuccinic acid

,

uccinamic acid

,

alaninamide

,

L-lautamic acid

,

propionic acid

,

2

,3

-butanedio

l,

sebacic acid

,

lactulose

,

glycogen

,

mono-methylsuccinate

시 험 에 서 모두 음성 반

응을 나타냈다. D -trehalose

^,

maltose

^,

lactic

acid에서는 각각

92.3%

,

30.8%

,

23 .1

%의 균 주가 양성반응을 나타냈다. 동정 된 13주의

P

muJtocída

분리주를 대상으로 DNT를 검출

하는 PCR을 실시 한 결과 2주가

toxigenic

P m띠tocída로 동정되 었다

(Table 4). P

muJtocída의 협막혈청형 분류 결과 공시균 13주중

type

A가 9주

(69.2%)

^,

type

D 는 4주 (30.8%) 로

type

A의 분리 율이

type D

보다 높았다.

(8)

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돼지 위축성 비염의 국내 발생상황

Table

3.

Biochemical properties of B bronchiseotíca isolates from slaughtered pigs

Properties No. of positive Percentage Reference strain

cultures (n =7)

(%)

(ATCC 31437)

Hemolysis of blood agar 7 100

+ ^*

Catalase 7 100

+

Urease 7 100

+

Citrate reduction 7 100

+

Mono-methylsuccinate 7 100

+

Succinic acid 7 100

+

Methyl red reaction 0 0

V oges-proskauer reaction 0 0

Hydrolysis of Tween 40 0 0

Hydrolysis of Tween 80 0 0

L-fucose 6 85

.7 +

L-ornithine 0 0

Urocanic acid 0 0

Inosine 0 0

Unidine 0 0

Thymidine 0 0

Phenylethylamine 0 0

Utrescine 0 0

Iactulose 0 0

Maltose 0 0

Sucrose 0 0

Xylitol 0 0

a -

D -glucose 0 0

Gl

ycerol 0 0

Acetic acid 5 7

^1.

4 Pormic acid 6 85

.7 +

Alanianmide 6 85.7

L-alanine 7 100

+

L-proline 7 100

⁺

Serine 5 7

1.

4

⁺

D. L-carnitine 2 28.6

PCR 7 100

+

Positive .

.. _Negative.

(9)

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동물자원 연구 (2000)

Table 4. Biochemical properties of P mu/tocida isolates from slaughtered pigs

No. of positive Percentage Reference strain Properties

cultures (n = 13)

^(%)

(ATCC 8747)

Growth on MeConkey agar 0 0

Motility 0 0

Hemolysis of blood agar 0 0

Catalase 13 100

+

Urease 0 0

Indole production 13 100

+

Methyl red reaction 0 0

V oges-Proska uer reaction 0 0

Hydrolysis of Tween 40 0 0

Hydrolysis of Tween 80 0 0

Gl

ycerol 0 0

Bromosuccinic acid 0 0

U ccinamic acid 0 0

Alaninamide 0 0

L-lautamic acid 0 0

Propionic acid 0 0

2

,

3-butanediol 0 0

Sebacic acid 0 0

Iactulose 0 0

Gl

ycogen 0 0

Mono-methylsuccina te 0 0

Inosine 13 100

+

Undine 13 100

+

Thymidine 13 100

+

D -trehalose 12 92.3

+

Maltose 4 30.8

Sucrose 13 100

+

Lactic acid 3 23

.1

DNT (PCR) 2 15

.4

D ermonecrotic toxin.

Positive.

***

Negative.

(10)

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돼지 위축성 비염의 국내 발생상황

Table 5. Antibody titers against B bronchíseptíca in slaughtered pigs

No.of An tibody titer Seropositi vity

Farms staens1tpe1des

_~10

20-79 80-160 161-640 (%)

A 18 0 5 11 2 13 (72.2)

B 47 5 23 15 4 19 (40

.4)

C 57 2 25 16 14 30 (52.6)

D 30 4 15 7 4 11 (36.

7)

E

22 0 12 10 0 10 (45.5)

F

31 0 10 16 5 21 (67.

7)

G

27 0 15 12 0 12 (44

.4)

H

50 9 24 13 4 17 (34.0)

Total 282 20 129 100 33 133 (47.2)

The titer over 80 was seropositive.

Table 6. Antibody titers against P mu/tocída in slaughtered pigs

No.of Antibody titer Seropositivity -

Farms satemstpe1des

_~10

20-80

A 18 0 10

B 47 4 8

C 57

1'1

9 D 30 2 5

E

22 0 3

F

31 0 4

G

27 0 6

H

50 9 25

Total 282 32 70

The titer over

1.

280 was seropositive.

3. 혈청 항체가

B

bronchl낭eptica，

P muJtocida

벚

PRRSV

에 대한 감염을 검사하기 위하여 전술한 농 장의 출하돈 282두를 대상으로 혈청 항체가 를 측정하였다.

160-640

~1280

(%)

8 0 o (0/18)

27 8 17.0 (8/4

7)

17 14 24.6 (4/57)

15 8 26.7 (8/30)

12. 7 3

1.

8 (7122)

19 8 25.8 (8/30

14 7 25.9 (7/2

7)

14 2 4.0 (2/50)

126 54 19

.1

(54/280)

1) B

bronchíseotíca와

P

mu/tocída에 대한 혈청 항체가

B

bronchisepûca과 대 한 항체 가는

Table 5

에서 나타낸 바와 같이

B

bronchiseptica에 대한 항체 양성을 보이는 것은 282예 중

133

예 (47.2%) 였다.

P

muJtocida에 대한 혈청

(11)

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동물자원연구 (2000)

Table 7. Correlation of seropositivity against B bronchiseotica

,

P multocida and PRRSV with snout lesion scores in slaughterd pigs

Seropositivity

(%)

against

Farms Snout lesion score

B

bronchiseptic a.

P

multocid a. PRRSV

A

77.2 (13/18) o ^(0/18) 77.8 (4/18)

1.

0

:t

0.5 (5)

B

40

.4

1 (9/4

7)

17.0 (8/4

7)

93.6 (44/4

7) 1.

8

:t

0.9 (9) C 52.6 (30/5

7)

24.6 (4/57) 43.9 (25/5

7)

0.9

:t1.

0

(7)

D 36.7 (1130) 26.7 (8/30) 83.3 (25130) 3

.1:t 1.

2 (7)

E 45.5 (10/22) 3

1.

8 (7122) 90.9 (20/22) 2.6

:t 1.

4 (12)

F

67.7 (2113

1)

25.8 (8/31) 74.2 (23/3

1) 1.

8

:t

0.8 (6) G 44

.4

02

/2

7) 25.9 (7/27) 55.6 (1512

7)

0.9

:t1.

3 (0)

H

34.0

(1

7150) 4.0 (2150) 56.0 (28/50)

1.

0

:t1.

2

(1

0) Total 47.2 (33/282) 19

.1

(54/282f 68.8 (194/282f 2.2

:t

2

.1

(66) **.

Percentage of seropositivity (No. of positive samples/No. of tested samples).

Mean

:t

SD (No. of tested samples).

**Significant differences (P<0.05) were sho때 between seropositivity against

P

multocida (or PRRSV) and snout lesion score but were not shown between seropositivity against B

brol1chi농ep쉴캅a

and snout lesion score.

항체가 측정결과 1， 280배 이상의 혈청 항체 가를 나타내는 것은 282예 중 54예

(19

.1%) 였다

(Table 6).

2) B bronchíseptíca , P multocída

및 PRRSV어| 대한 항체 양성율과 비갑개 병번지수지간의 관계

B bronchiseptic a., P multocida

빛

PRRSV

에 대한 항체 양성율과 비갑개 병변지수는

Table

7과 같다. 282예 중

B

bronchi닝eptica 의 항체 양성 율은

47.2%

⁽¹

33/282)

,

P

multocida에 대 한 항체 양성 율은

19

^.1%

(54/282)

, PRRSV에 대한 항체 양성율은

68.8%

(1 94/282) 였으며， 평균 비갑개 병변지

수는 2.2 :t 2.1로 나타났다. 각 농장에서 출하

된 돼지에서

B

bronchiseptica에 대한 항체 양성율과 평균 비갑개 병변지수간의 상관관 계를 조사한 결과 상관관계가 나타나지 않았 다. 그러나

P

multocida에 대한 항체 양성율 과 비갑개 병변지수， PRRSV에 대한 항체 양성율과 평균 비갑개 병변지수와는 유의성 있는 상관관계가 나타났다 (P<0.05).

IV. 고 찰

AR은 전염성이 매우 강하나 치사율은 낮 은 질병으로 감염된 돼지가 폐사하는 예는

(12)

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돼지 위축성 비염의 국내 발생상황

드물지만， 일단 감염이 되면 사료효율 빛 증 체율이 감소되어 성창이 크게 지연되면서 출 하일령 이 건강돈에 비해 약 1 개월 정도 늦어 져 막대한 경제적 손실을 초래한다

(Young

등，

1959; U nderdahl

등，

1982).

AR의 발생율은 나라 또는 지역에 따라 다 르며 동일한 지역이라 하더라도 검사시기에 따라서 상당한 차이가 있음이 알려져 있다.

미국， 캐나다 벚 스웨덴에서는 대개 20~40%

의 돈군이 감염된 것으로 보고된 바 있다

(

Cross와

Claflin

,

1962).

영 숙의 경 우는 돼 지 의 약 40%가 AR 에 감염되었다고 보고되었 으며

(Nielsen

,

1983)

, 일본의 경우도 약

25%

의 돼지가 AR 에 감염되었다고 보고되었다

(Hasebe

,

197

1). 우리 나라에 서 는 박 등 (976) 은 경기도 지방의 돼지의 약 20% 가 AR 에 감염되었다고 보고하였으며， 장과 김

(988) 은 영남지방 돼지의

AR

감염율은 돈 군별로는 92.3% 였으며， 개체별로는 44.9% 나 된다고 보고하였다. 이런 보고에 의하면 국 내에서도 돼지사육두수외 증가와 사육이 밀 집화됨에 따라 AR의 발생율이 지속적으로 증가될 것으로 예측된다. 그러므로 실제 농 장에서 AR의 발생실태를 정확히 파악하여 종합적인 호흡기 천염병의 방역대책을 마련 해야할 펼요성이 제기되고 있다. 본 연구에 콩시된 8개 농장에서

AR

예방을 위한 백신 접종 상황은

Table

1에 나타난 바와 같이 A~D 농장에서는 모돈에

B

bronchi낭eptica와

toxigenic P multocida type D

bacterin을， E~H 농장은 모돈에

B bronchiseptica

bacterin과

P

multocida에서 추출한 toxoid를 함유한 백 신을 접종하였으며 자돈에서는 예방접종을 실시하지 않았다. 한편 PRRS 에 대한 백신접 종은 하지 않은 것으로 알려 져 PRRSV에 대 한 항체 양성인 개체는 백신접종이 아넌 감

염으로 생성된 항체임을 알 수 있었다.

본 연구에서 출하돈의 nasal swab 재료에

서

B

bronchi닙eptica와

P

multocida의 분리 율 은 각각

6.7%

, 12.4%로

P

muJtocida의 분리 율이 높았고， 동시에 분리된 예는 1.9% 였다.

박 동 (995) 은 충남지 역 도축돈중 43.5% 에 서

B

bronchiseptica가 분리되었으며 모돈과 자돈에 AR 백신을 실시한 돈군에서는

12.6%

, 모돈만 2회 실시한 돈군에서는

34

.1 %, 비접 종 돈군에서는 45.7% 의 균분리율을 보였다 고 보고하였다. 午島짧大 등 (994) 의 보고 에 의하면 면역된 모돈에서 출생한 6개 농장 의 8~12주령 자돈 48예 중에서

B bronchisep

tica가 15 예 (37.5%) 에서 분리되 었 다. 이 중 12예 는

B

bronchi능eptica의 응집 항 체가가

20

이하에서 분리되었고 응집항체가 80에셔는 3 예 (6 .3%)가 분리되었으며， 응집 항체가 160~ 1.280에서는

B

bronchiseptica가 분리되지 않았다. 조 등 (989) 은 영남지방 돼지의

nasal swab

재료 중 43.1% 에서

P

multocida가 분리되었다고 보고한 바 있다.

본 연구에서 조사된

B

bronchi닝eptica의 분리 율은

6.7%

,

P

multocida의 분리율은 12.4%로 서 기존의 보고와는 상당한 차이가 있었다.

이것은 공시돈군이 비록 혈청검사과 세균분 리는 동일한 개체가 아니지만 전반적으로 각 돈군이

B

bronchiseptica와

P

multocida의 혈 중 항체가가 비교적 높았고， 출하돈에서는 자돈이나 육성돈 보다는 상대적으로 균분리 가 되지 않은 점 등으로 인해 두 종의 세균 분리율이 낮은 것으로 사료된다. 일반적으로

B

bronchiseptica와

P

multocida에 대한 분리 율은 일령이 증가함에 따라 낮아지는 것으로 보고되고 있지만， 이들 세균은 비강내에서 존재하는 것으로 알려져 있다 ( Kobisch와

Pennings 1989).

(13)

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동물자원연구 (2000)

P

multocída의 협막혈청형 동정시험은 Carter와

Rundell (975)

벚 Carter와

Subronto

(973) 의 방법에 따라 수행하였다.

분리동정된 13주의

P multocída

분리주중

type

A는 9주，

type

D 는 4주였다.

Type

D 는 D 농장에서 3주， B농장에서는 l주가 분리되 어 한 농장에서 여러 가지 type 이 혼합되어 분포하지 않고 특정한 type 이 농장 전체에 상재되어 있는 것으로 추측되었다. PCR에 의해 DNT의 생성유무를 검사한 결과 2주

이외는 DNT를 생성하지 않은

P multocída

로 나타났다. 이는 진행성 위축성 비염에 관 여 하는 것보다는 pasteurella성 폐 렴 에 관여 하는 원인체라고 추측되었다.

경기지역 8개 농장의 출하톤에 대한 혈청검 사를 질시한 결과 282예 중

B

bronchísepti찮에 대한 혈청 항체 양성율은

47.2%

(33/282) 였 다. 또한

P

multocida에 대한 혈청 항체가 측정결과 1，280배 이상의 혈청 향체가를 나

타내는 것은 282예 중 54예

(1

9

.1 %)였다.

이와 같은 높은 항체 역가의 분포는 모체이 행항체의 지속기간을 고려할 때 육성기간중 AR 에 감염되어 형성된 항체로 간주되었다.

따라서 모톤에

B

bronchiseptica와

toxigenic P multocída type D bacterin 또는 B

bronchi낭eptica bacterin과

P m ultocída toxoid

를 함유한 백신을 1 회 또는 2회 접종하였음 에도 불구하고

Jenkins

동 (1 997)이 보고한

52%

,

Nilelsen (1983)

이 보고한 약

40%

, 박 동 (1 976) 이 보고한 경기도 지방 돼지 중 52.4%의 항체 양성율과 유사하였다. 이러한 높은 항체 양성율과 출하돈

nasal swab

재료 에서의 균분리율을 종합하여 볼 때 육성기간 또는 비 육기 간 중

B

bronchi낭eptica와

P

multocída가 감염되고 있었으며 이는 현재의 백신접종에 문제가 있음을 보여주고 있었다.

PRRS는 임신모돈에서 다양한 양상의 번 식장애와 자돈에서 호흡기 질병을 초래하여 양돈업에 막대한 경제적 손실을 초래하는 바 이러스성 질명 이다

(Benfield

등，

1992;

Albina

등，

1994;

Christianson과

Joo

,

1994).

국내에서 PRRS의 처음 보고시 항체 양성율 은

12.7%

이 었으나

(Shin

등，

1993)

, 1999년 박 동은 59.0% 의 항체 양성율을 보고하였고 경기도에서는

20.7%

^,강원도에서는 29.2%의 항체 양성율을 나타났다. 이런 결과는 본 연 구에서 나타난 68.8%보다 낮은 양성율을 보 였다. 이러한 차이를 나타내는 이유는 기존 의 보고에서는 간접형광항체법에 의해 혈청검 사를 실시했고 본 연구에서는

ELISA

방법으로 실시하여 검사방법의 차이에 따른 것과

(Cho

등，

1993; Nodelijk

등，

1996; Takikawa

동，

1996)

과거보다는 최근에 PRRSV의 감염율이

증가되었기 때문으로 사료된다.

비갑개의 육안적 병변검사 결과 비갑개 병 변의 발생율은

72.2 % (48/66)

, 평균 비갑개 병변지수는

2.2 :t

2.1이였다

(Table 7).

일반적 으로

B

bronchisepti삶의 단독감염의 경우

1

주령 이하의 돼지에서 비갑개의 병변이 심하 게 나타나며 (牛島짧大，

1994)

, 비갑개의 손 상은 재생 이 가능하나

(Van Diemen

동，

1994)

,

toxigenic P

multocída에 의 해 발생 하 는 비갑개 병변은 재생이 불가능하다고

(Frymus

등，

1989)

보고되었다. 따라서 본 연구의 출하돈에서 비갑개 병변은 재생이 불 가능한 상태로 남아 있기에 주로

P

multocída의 감염에 의해 나타난 것으로 추 측되었다. 분만전에 백신접종을 한 모돈에서 태어난 자돈의 경우 초유를 통해 모체이행 항체를 얻게 되지만 모체이행항체는 비강내

B

bronchi낭eptica의 제거는 할 수 없고 단지 증상과 병변의 정도만은 감소시키는 역할을

(14)

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돼지 위축성 비엽의 국내 발생상황

하는 것으로 알려졌다 ( Kobisch와

Pennings

,

1989) .

따라서 본 연구에서 나타난 비갑개의

위축병변은 모체이행항체의 소설 후

B

bronchiseptica와 P multocida의 자 연 감 염 이

이루어져 형성된 것으로 생각되었다. 이로 미루어 모돈에 대한 백신접종 효과는 어느 정도 인정할 수 있었지만 모돈만의 예방접종 으로는 충분치 못하였기 때문에 자돈에도 백 신을 접종해야 한다고 사료되었으며 자돈의 백신접종 프로그램을 극내 농장실정에 맞게 조정할 필요가 있다고 판단되었다.

각 농장별로

B

bronchisepψ떠 Pm띠tocida 및 PRRSV에 대한 항체 양성율과 비갑개 병 변지수와의 상관관계를 조사한 결과，

P

multoα;da와 PRRSV 에 대한 항체가가 높은 농장은 비갑개의 병변지수도 높게 나타나는 것을 확인할 수 있었다

(P<0.05) .

그러나

B

bronchiseptica에 대 한 항체 양성 율， 세 균분리 율과 비갑개의 병변지수와는 상관관계가 없 었다. PRRSV가

B

bronchi낭eptica의 감염에 관여하는지에 대하여는 정확히 밝혀지지 않 았으나 일반적으로 PRRSV는 폐포탐식세포에 서 증식하기 때문에 폐의 방어기전을 약화시키 는 것으로 알려져 있다. 최근의 한 연구는 PRRSV의 감염 이

B

bronchiseptica의 감 염 을 촉발시키는 것으로 보고하였다 (

Brockmeier

등，， 2000). 이는 PRRSV에 대한 항체 양성율 과 비갑개 병변지수 사이에 유의성 있는 상 관관계를 설명할 수 있는 곤거라고 할 수 있 었다.

Toxigenic P

multocida의 감 염 은

B bronchísep

tica의 단독 감염보다 비갑개병변 지수를 높힌다

(Kielstein

,

1986; Rutter

등，

1984) .

본 연구에서도 D 농장은 비갑개 병변

지수가

3

.1 :1: 1. 2로서 가장 높게 나타났으며

toxigenic P m

ultocida의 분리 도 전체 15 예 에

셔 2주가 분리되었다.

본 연구는 백신을 실시하고 있는 야외농장 에서 AR의 최근발생상황을 정확히 알고자 시도하였다. 향후 모돈 빛 자돈을 대상으로

AR

예방접종을 실시한 후 성창단계별로 지 속적인 셰균학적， 혈청학적 검사 빛 비갑개 병변검사를 통하여 백신접종한 모돈으로부터 생산된 자돈에서 위축성 비염의 역학을 정확 히 규명해야 할 것으로 생각된다.

V. 적 요

백신을 접종한 모돈에서 분만된 자돈이 출 하시 AR의 발생 상황조사，

B

bronchi낭eptíca，

P multocida

및 PRRSV에 대 한 항체 양성 율 과 비갑개 병변지수지간의 상관관계를 규명 하기 위하여 임의로 선정한 경기지역 8개 농 장에 대한 AR의 원인균분리， 혈청 항체가 측정 및 비갑개 병변검사 등 일련의 연구를 통하여 다음과 같은 결론을 얻 었다.

1. 출하돈에서

B

bronchiseptl;αa와

P

multocida에 대한 항체 양성율은 각각

47.2%

(1

33/282)

와

19

.1

%

(54/282) 였고， 평균 비갑개 병변지 수는

2.2

:1:

2

.1 이 었다 B bronchiseptíca와

toxigenic P

multocída의 분리 율 각각 6.7%와 12.4%로 매 우 낮았고， 주로

nontoxigenic P

multocída가 많이 분리되었다.

2. P

multocida와 PRRSV에 대 한 항체 양성 율과 비갑개 병변지수 사이에는 상관관계 를 나타났지 만

(P< 0.05)

,

B

bronchi낭eptíca 에 대한 항체 양성율 빛 세균분리율과 비 갑개 병변지수간에는 상관관계가 나타니

지 않았다.

(15)

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동물자원연구 (2000)

3.

국내 양돈장에서 사용하고 있는

B bronch-

ísepti찮와

toxigenic P

m띠toα'.da

type D

bacterin과

B

bronchisepti찮 bacterin과

p

m띠'tocida에서 추출한 toxoid를 함유한 백신 을 분만전 1회 또는 2회

AR

백신을 접종한 모돈에서 출생펀 자돈은 비육 또는 육성기 간 중

B

bronc.파eptica와

P

muJtocida의 감 염을 방어하지 못하였으며 비갑개의 병변발 생율도 감소시키지 못하였다.

4.

따라서 모돈에만 실시하는 백신접종 프로 그램과 백신성분에 대한 재검토가 필요하 며 PRRSV의 감염이

AR

발생과의 연관성 에 대한 보다 면밀한 연구가 요구되었다.

V I. 참 고 문 헌

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