사상의학회지
J of Co띠t Med
Vol. 10 뼈 2.1998
防風通聖散 혈핏楊績의헛‘癡調節作用
李 昌 쫓. . 宋 正 模*
Immunoregulative Action of Bangpoongtongsungsan
Lee Chang-kyu . Song Jeong-mo
πle p따pose of this research was to investigate effects of Bang αxmgtongsungsan water
extract(BTSE) on the immune reaction, anti-allergy action and anti-inflammatory action in BALB/c
mIce. 까le adminis 뼈ion of BTSE (500mg/kg) en 뼈nced the cell viability of thymOC) 이es and the
population of helper T cells in splenic T- 띠nphocytes. BTSE suppressed the production of nitric
oxide, but enhanced the phagocytic activity in peritoneal macrophages. BTSE enhanced
hemagglutination titer in mice. BTSE inhibited passive cutaneous anaphylaxis induCt 쳐 by 앵g albumin
in rat, the lethal anaphylaxis induced by platelet activating factor and compound 48/80 in mice, and
then inhibited the degranulation of peritoneal mast cells induced by ∞mpound 48/80. BTSE did not
inhibit Arthus r없ction, but i빼 bited the delayed type hypersensitivity induced by SRBC and contact
dermatitis induced by DNFB. BTSE inhibited the acute hind paw edema induced by histamine after
30 minutes, the permeability of evans blue into pe 꺼tone 외 cavity induced by acetic acid and the
writhing syndrome induced by acetic acid. 까lese results suggest that BTSE has an
immunopotentiative action, anti-allergy action and anti-inflammatory action via the inhibition of
histamine release.
우석대학교 한의과대학 사상의학과
- 사상의학회지 제10 권 저12 호 1998 -
I . 績 論
AI 없는 각종의 훨學的 反뺀을 유발시킬 수 있는 물질 , 즉 수많은 항원들로 충만되어 있는 환경에 노 출되어 있으며. 이러한 각종 항원들과의 끊임없는 접촉은 生體內의 免훨機햄에 의해서 효과적으로 배 제되어 생체를 방어할 뿐만 아니라 組織을 손상시킬 수 있는 더家찌훌훌원이나 알레르기 등 負의 免훌反 뺑이 야기되기도 한다
1)
*월醫적j
에서 & 의 戰念은 「훨帝內經2)J
에서부 터 유래한다고 할 수 있는데 "힌氣從之하고 精神內 守하연 1이’￡從來리오" 나 "iE 氣存內하면 %不可千이라"
고 하였듯이 .iE 氣와 氣의 관계가 직접 흉病의 發 生. 發展 , 햇化를 결정한다고 인식한 것이 기초적인
%훌의 개념과 일치한다고 할 수 있을 것이다.
없代醫행에서 연역계통은 | 까뿔와 딩E安定. 免훨
\r.i 등의 3대 기능을 갖고 있다고 인식하는 데. 웰
醫젠에서 Ir. 써가 %짜를 방어하는 것은 각종 미생물 의 감염에 저항하는 | 까쩔의 의미와 같은 것이고. 內
%를 없애고 陰陽셔i 쨌i을 유지하는 것은 자기신체의 拉댄을 제거하는 뎌己잦파의 의미와 같으며. .iE 氣가
魔째.
*'섬션. *1fll 등과 협조하고 상호 의존하며 제약
하는 기능을 통하여 樣품 J(ll 柳의 형성과 積聚의 발생 을 방지하는 것은 %활뿜視 기능과 같은 의미로 해 석할 수 있을 것이다
3)
알레르기에 대한 합}J 文없t 의 기록은 따 4)
의
「채펴1*fI'Ji 써」 에 의 폐敏反應과 밟質과의 연관성
에 대한 기술이 있어 알레르기反總에 대한 관찰이 오래 전부터 있어 왔음을 알 수 있다. 또한 역대 @파 醫건3에 수록된 |
양쐐 , 화빼 ( 멍L'뺏), 훨珍. »읍熱 (fJJj 劉)
등의 병증이 알레르기성 질환으로 추정된다. 했醫學 에서는 이들 %’,i 의 W- 을 현대의학에서처럽 항원- 항체 반웅으로 인식한 것이 아니고 風寒원따폈火의
六판이 인체에 설짧하여 IEJi{ 와 父땅하는 반응이거 나 職뻐 經絡의 쩌가 짧흉 또는 m 짧되어 발생하는 것으로 인식하여 빼證施治를 시행하였던 것을 알 수 있다.
최근 알레르기 및 免훌에 관한 훌훌藥處方의效能을 관찰한 ff 驗5-깅)
및 防없 .通聖散의 效能을 중심으로 연구한 실험 둥갱-31>
이 다수 보고되었다 .
!까風i없聖散은 金元四大家의 한 사랍인 劉 32)
의
「宣明方論」 에 처음 수록된 처방으로 , 일체의 風熱 과 表꿇 및 三훨가 모두 앉해서 오는 빠끊을 치료하 는 대표적인 처방으로 高J(ll 壓. 각종 中毒i. 알레르
기tl 훌恩. 皮I협흙뽑、 .11& 耳광흉편、 등의 1훌i앞에 다양 하게 응용되고 있는 處方이다
33)
그러나 아직 防風 通떻散이 免훌謂節에 미치는 影쩔이 정확히 밝혀져 있지는 않다.
이에 협者는 생체 훌反뺑에 미치는 | 까風뼈뿐散 의 彩빨을 없↓찢하고자흉선세포와 비장세포의 生存 힘 및 subpopulation. 복강 대식세포의 n 能 및
nitric oxide 生成파을 測파하였으며. SRBC 에 대
한 적혈구 避1양素-따를 측정하였다 . 또한 | 까風뼈및散 이 알레르기반응 중 어느 멜에 영향을 미치는 가를 뼈察하고자 하였는데. 第 I 型에 미치는 영향을 관찰
하기 위뼈 PCA(passive cutaneous anaphyla-
xis) 反應. PAF(platelet activating factor) 에 의
한 anaphylaxis 의 發행. compound 48/80 에 의
한 anaphylaxis 의 發現 및 비만세포 탈과립 등을 뀔 ! 뚫하였고. 第 III 엔에 미치는 영향을 관찰하기 위 하여 Arthus 反뻔을 측정하였으며. 第 IV 엔에 미
치는 영향을 관찰하기 위하여 SRBC 에 의한 생쥐 족척종창반웅 (DTH) 및 접촉성 피부과민반응을 측 정하였다 그리고 썼 E反總에 대한 효과를 살펴 보 기 위하여 histamine 에 의한 생쥐 족척종창반웅 .
acetic acid 에 의한 모세혈관투과성반응 및 월i 체fr
91{,Õ‡T 生 훨 名 ‘Í»X(g)
f낌 石 Talcum 6.37
it 草 Glycyrrhizae Radix 4.50
;U 'Iÿå Gypsum Fibrosum 2.62
* 흑 Scutellariae Radix 2.62
*È€ *ÖÌ Platycodi Radix 2.62
防 1회‘Ledebouriellae Radix 1.68
川 흠 Cnidii Rhizoma 1.68
當 歸 Angelicae Gigantis Raidx 1.68
iff.ט·…å Paeoniae Radix 1.68
太‘윗 Rhei Rhizoma 1.68
HLIlloIU Vi Ephedrae Herba 1.68
iÿå 혜 Menthae Herba 1.68
連 題 Forsythiae Fructus 1.68
올 해 Sodii sulfas 1.68
jfij 11= Schizonepetae Herba 1.31
- 防風通聖散 뺏場;훌의 똥f훌 調 M 用 -
JTj 뀔! 앓을 실시하였던 바 줘쉰; 한 結없가 있었기에 보고하는 바이다.
ll. 實驗
*林과 및 方法
1. 훌훌훌 材함
1 ) 實驗 動物
木 얹! 짧에 사용한 생쥐는 BALBI c系 (20:t2g) 수
컷을 , 흰쥐는 SD 系050:t 109) 수컷을 대한실험동
물( 快) 에서 구입하여 온도 22:t3t. 습도 55:t5%.
dark/light ( 12 시간) 조건하에서 사육하면서 텀驗하
였다 .
2) 試藥 및 器具
寶!앓에 { 훗JH 한 試藥은 egg albumin. trinitro-
benzene sulfonic acid (TNP) . aluminum gel.
platelet activating factor{PAF). compound
48/80. histamine. evans blue. o-toluidine
blue. dinitrofluorobenzene(DNFB). HESS.
Ca2+ -Locke solution. percoll solution. RPMI
1640 media. sulfanilamide. lucigenin. zymo-
san 은 Sigma Co.. FCS. thioglycollate 는 Difco
Co.. PE cOrUugated anti-CD4. FITC
cOrUugated anti-CD8 antibody 는 Dainippon
seiyaku Co. 를 , 기타 시약은 1급 시약 및 세포배양
용 시 약을 사용하였다. 使1M機;딩.는 culture flask
(Nunc), multi-well plate(Costar Co.). micro-
titration plate (Costar Co.), micrometer
(Mitutoyo Co.). centrifuge(VS-6000 CF). in-
verted microscope(Nikon Co.), freeze dry
apparatusOlsin Co.). C02 incubator(Vision
scientific Co.), microplate reader{Dynatech.
MRSOOO). luminometer{Berthold. 96LP). flow
cytometer (Coulter. EPICS-XL) 등을 사용하였
다
3) 檢滾의 調빼l
本 뤘驗에 사용한 防風通및散의 構成은 r)j 藥合 編34)J
에 準하였으며 , 사용한 藥材들은 又石太I 섯校 附屬 韓;치病院에서 정선하여 사용하였고 . 處方 3M
分붐022.25g) 을 증류수 1. 500 ml 로 2回 가열 추
출한 후, 廠過하여 餘被을 rotary evaporator 로 농
축한 다음. freeze dryer 로 동결건조하여 분말
29.5g( 收쩌寧 26.0%) 을 얻어( 以下 BTSE 라 청
함) . 동물실험시에는 생리식염수에 용해시켜 사용하 였다. 防風通뿔散 1貼의 處方樞成 내용은 다음과 같 다.
* 防風通뿜散의 處方構成
白 끼C Alraclylodis Rhizoma Alba 1.31
橋 子 Gardeniae Fruclus 1.31
Áp: 훌 Zingiberis Rhizoma 4.38
lolal
40.85 amount
- 사상의학회지 제 10 권 저12호 1998 -
2. 훌앓 方法
1) 免홉反廳에 대한 실험
(1) 흉선세포 및 비장세포의 生存훌 측정 생쥐의 흉선세포 및 비장세포의 분리는 Wyso-
cki35) 및 Mizel 둥36) 의 방법에 따라 , 생쥐 5마리를
1군으로 하여 BTSE 500 mg/kg 을 1 일 l 회씩 7 일 간 경구투여한 뒤. 경추탈골하여 협殺시킨 후 적출 한 흉선 및 비장을 DPBS-A 를 넣은 petri dish 에 서 잘게 분쇄하고 멸균된 stainless mesh 로 여과하 여 2회 세척한 다음 10 ml 주사기로 세포부유액을 조심스럽게 취하여 1500 rpm 에서 10 분간 원심분 리하였다. 얻어진 세포를 DPBS-A 에 재부유시켜 3
회 반복 세척한 후 흉선세포 및 비장세포를 분리하 였다 .
흉선세포 및 비장세포의 생존율 측정은 Mos-
mann37)ol 개i훤얘 Kotnik38) 이 변형시킨 M’IT
방법으로 측정하였다. 분리한 흉선세포 및 비장세포 를 RPMI 1640 배지로 세포부유액을 조제한 후,
96-well plate 의 각 well 에 세포 부유액 100 μ
I(2x 1 05 cells/mD 를 접종하고 흉선세포에는 con-
canavalin A(Con A) 5 μg/ml 를 첨가하거나 또는
첨가하지 않은 조건으로 , 비장세포에는 lipopoly-
saccharide(LPS) 10 μg/ml 를 첨가하거나 첨가하
지 않은 조건으로 37t 의 C02 incubator 에서 48 시간 배양하였다. 배양 종료 4시간 전에 5 mg/ml
농도로 DPBS-A 에 희석된 MTI 용액 20 μl를 각
well 에 첩가하고 , O.lN HCI 에 용해시킨 10%
SDS 100 μl를 각 well 에 첨가하여 차광 상태에서
18 시간 더 배양한 후 발색된 각 well 의 홉광도를
microplate ELISA reader 로 570 nm 에서 측정하
여 세포생존율을 산정하였다 .
( 낀 흉선세포 및 비장세포의 subpopulation 측정
분리한 흉선세포 및 비장세포를 eppendrof tube
에 I X 106 cells 씩 분주하고 흉선세포는 형광시약
인 phycoerythrin (PE) 및 fluorescein isothio-
cyanate (FITC) 로 conjugate 시킨 (PE)a-CD4,
(FITC)a-CD8 monoclonal antibody 로 이중염색
(1 : 160 dilution) 효얘 flow cytometer (exita-
tion 488 nm, emission FITC 525 nm, PE
575 nm) 로 subpopulation 을 측정하였으며. 비장
세포는 형광시약인 phycoerythrin(PE) 및 fluores-
cein isothiocyanate(FITC) 로 conjugate 시킨
(PE)a-B220, (FITC)a-Thy 1 monoclonal anti-
body 로 이중염색흩얘 flow cytometer (exitation
488 nm, emission FITC 525 nm, PE 575
nm) 로 sub-population 을 측정하였다39)
(3) 복강 대식세포의 홉食能 측정
생쥐 5마리를 l군으로 하여 BTSE 500 mg/kg
을 1일 1회씩 7 일간 경구투여하였다. 약물 투여 4
일째 멸균한 3% thioglycollate 2ml 를 복강에 투 여하고. 뿔투여 8 일째 생쥐를 경추탈골뼈 도살
시킨 후, 복강에 cold PBS 10 ml 를 주입하여 복강 세포를 수집한 뒤,4t 에서 1,300 rpm 으로 10 분간 원심분리하였다. 분리한 세포를 RPMI 배지로 2회 세척한 후. 직경 120 mm petri dish 에 분주하여
C02 incubator 에서 배양한 다음 , 2시간 후에 부착
되지 않은 세포를 제거하고. 부착한 세포를 cell
- 防風遇뿔散 ro 훌훌의 !RJi 調節作用 -
scraper 로 모아 대식세포로 사용하였다.
fli{ 能은 I ucigenin chemil umi nescence 양으로
활성을 측정하였다. Lucigenin 용액의 제조는 10
ml 의 DPBSA 에 용해한 후 여과 멸균하여 -20t 에
서 보관하면서 사용하였다 (stock solution). Luci-
genin stock solution 은 사용하기 직전에
DME(without phenol red. 0.34g/L NaHC03 ’
2.6g/L HEPES. pH 7.2) 배지에 1/10 로 희석하
여 사용하였다 Chemi luminescence 측정은
luminometer 를 이용하여 37t 에서 측정하였다
40.4 })
측정용 microplate (white) 의 각 well 에 준
비된 대식세포 부유액 50 111 와 lucigenin 용액 5011
l 및 zymosan 용액 30 111를 첨가하여 최종
vol ume 이 200 111 가 되도록한 후 넣고 37t 에서
15 분간 전처리한 후 5분 간격으로 60 분 동안
lucigenin chemiluminescence 양을 측정하였다.
(4) 목강 대식세포의 Nitric oxide 의 측정
분리한 대식세포를 24 well plate 에 well 당 1 x
106 cells 을 분주한 후 , 각 well 에 LPS 1 μg/ml
와 Y-IFN 25 units/ml 를 첨가하지 않은 군과 첨가 한 군으로 분류하여 37t C02-incubator 에서 24
시간 배양한 후 생성된 nitric oxide(NO) 양을
Griess 시약으로 측정하였다42)
즉 배지 100 μl와
Griess reagent(1% sulfanilamide+0.2% N-
Naphthylethylenediamine 2HCI +2.5% fuP04)
100 μl를 혼합하여 96 well plate 에 넣고 570 nm 에서 microplate reader 로 홉팡도를 측정하여 미리 작성한 NaN02 의 검량선에 의해 NO 양을 측 정하였다.
(5) SRBC 에 대 한 적 혈구 짧集素 { 톨
생쥐 8마리를 1군으로 하여 Ha43)
의 方합에 따라
1 X 1077 의 SRBC 를 복강주사하여 연역조치하고
1일 1회씩 BTSE 500mg/kg 을 7일간 경구투여한
다음.8 일째에 생쥐를 도살하여 채혈하고 혈청을 분 리하여 56t 에서 30 분간 처리하였다 . U자형
micro titration tray 의 각 well 에 h記의 혈청을
인산완충액 (pH 7.4) 으로 20 배 희석한 다음 2배씩 단계희석을 행한 50111 와 0.5% SRBC 부유액 50111 를 混合하여 37t. 5% C02 incubator 에서 1시간 동안 배양한 후 적혈구 응집을 일으킨 혈청의 최고 희석 배수를 減集素힘로 판독하였다.
2) Allergy 反廳에 대한 실험
(1) Passwe Cutaneous Anaph 이axis(PC 매 反應
Aluminum gel 에 현탁시킨 egg albumin
(1mg/0.2 ml) 을 생쥐 복강에 1차 感作하고 4주
후에 2차 感作을 시켜. 2 주 후에 마우스를 경추탈 구하여 도살시킨 다음. 채혈하여 혈청을 분리하여
(IgE 抗Jfu 淸) 사용시까지 -80t 에서 동결 보존시켰 다.
흰쥐 5마리를 1군으로 하여 흰쥐의 등부위를 除 毛하고 회석 (1: 160. 1 :80. 1 :40) 한 IgE 항혈청
0.1 ml 를 피하주사하여 감작시킨 뒤. 3 시간 후에
BTSE 500 mg/kg 을 경구투여하고. 1 시간 후에
항원 (1% egg albumin) 과 1% Evans blue 를 1 : 1로 혼합한 용액 0.5 ml 를 정맥주사하여 PC A를 야기시켰다. 30 분 후에 도살하여 청색으로 착색된 피부를 박리하여 細切한 다음 IN KOH 용액 1 ml
에 沈秋시켜 3TC 에서 1일 동안 방치하였다 0.6N
fuP04 과 acetone 혼합액 (5:3) 9 ml 를 첨가하여
원심분리한 후 상충액을 620 nm 에서 홉광도를 측 정하였다
44)
- 사상의학회지 제10 권 저12 호 1998 -
(2) Platelet A여ivating Facto 끼P따뻐| 의 한 a 녕y1-
axiS 發現
Platelet activating factor (PAF) 에 의한
anaphylaxis 發現은 하45)
의 方法에 의해 실시하였 다. 즉. 생쥐 8 마리를 1군으로 하여 대조군에는 생 리식염수만을. 실험군에는 BTSE 500 mg/kg 을 경
구투여하고 . 1 시간 후에 생쥐 미정맥에 PAF(L 컨
-phosphatidyl ch 이ine. P-acetyl- r -o-alkyl) 용
액 25 l1g/ml 를 l 회 주사한 후 전신성 아나필락시스
에 의해 사망하는 생쥐의 수를 관찰하였다 .
(3) Cool:xxJrd 4?J 뼈| 의한 ana 뼈a씨S 發現
생쥐 8 마리를 1군으로 하여 대조군에는 생리식 염수만을 실험군에는 BTSE 500 mg/kg 을 경구투
여하고. 1 시간 후에 Compound 48/80 10
mg/kg 을 복강에 주사하고 사망하는 생쥐의 수를 관
찰하였다 46)
(4) Compound 째뼈| 의한 비만세포 탈과립 측정
흰쥐를 ether 로 마취하여 치사시킨 다음 Ca2+ -
Locke 용액 10ml 를 복강에 주입한 다음 복벽을 2분
간 맛사지한 후 10ml 용 주사기를 이용해서 복강액 을 회수하였다. 4'C 에서 1500rpm 으로 5분간 원십 분리해서 세포를 세척. 수집한 다음 Ca2+ -Locke 용 액 2ml 를 가하여 세포부유액을 조제하였다. 다음에 별도로 준비 한 원섬 관에 isotonic percoll 용액
( 10xHank ’s sol. Iml + percoll 9ml) 3.5ml 를
가하고 I:-.c 의 세포부유액 0.75ml 를 관벽을 기울여
조심스럽게 휠햄한 다음 Hank ’s sol. 0.5ml 를 훈
A하고 10 분간 靜펀한 후 1.500rpm 으로 5분간 원 심분리해서 상층의 물층을 제거하고 세포충만을
pasteur pipet 으로 취해서 수집한 다음 Ca2+ -
Locke 용액을 가하여 세포를 2회 세정하였다 .0.5%
toluidine blue 로 염색해서 비만세포를 2 x 106 세
포!ml 의 농도로 조정한 다음 그중 100 비를
chamber 에 훈人하고 실온에서 10 분간 정치한 다음
대조군에는 Ca2+ -Locke 용액 100 뼈를 가하고 실험
군에는 BTSE 3 X 10-5 g/ml 100111 를 가한 다음
다시 10 분후에 compound 48/80 (50I1g/ml) 100 비를 가한 후 현미경으로 비만세포 탈과립현상을 관 찰하였다
47)
(5) Arthus 反應
생쥐 8 마리를 1군으로 하여 Yoshikai48) 의 方 에 따라 실험하였다 . 항원으로 사용된 SRBC(sheep
red blood cell) 는 전북대학교 수의과대학에서 사육
하고 있는 연양의 경동맥으로부터 채혈 후 Alsever ’s
solution (Dextrose 20.5g/L. sodium citrate
8.0g/L. citric acid 0.55g/L. sodium chloride
4.2g/U 을 가하여 4'C 에서 보관하면서 1주일 이내
에 사용하였다. SRBC 0.2ml(4 x 108 cells) 를 생 쥐 복강내에 투여해서 1차 감작시키고 2주후에 동일 한 방법으로 2차 감작을 실시하였다. 2 차 감작 5일
후에 BTSE 500mg/kg 을 경구투여하고 1 시간 후
에 2 x 108 개의 SRBC 0.03ml(2x107 cells) 를 우
측 후족척 피하에 투여해서 반응을 야기하였다 . 야 기직후 (To) 및 3시간 후 (T3) 에 족척의 두께를
micrometer 로 측정한 다음 족척종창의 지표를 구하
였다.
% increase=(TrTo / To) x 100
(히 SRBC 에 의한 생쥐 즉척증창반응
생쥐 8 마리를 1군으로 하여 Yoshikai48) 의 方法
에 따라 BTSE 500rng/kg 을 경구투여하고 2x 107
개의 SRBC 0.03mH2x107 cells) 를 생쥐 좌측 후
족척 피하에 주사해서 감작시키고 감작 4 일후에 다
- 防風通뿔散 漫; 夜의 f흔훌 調MfF 用 -
시 BTSE 500mg/kg 을 경구투여하고 1시간 후 우
측 후족척 피하에 SRBC 0.025mH2x108 cells) 를 투여하여 반응을 야기하였다. 야기직전 (To) 및 야기
24 시간 후 (T24) 에 족척의 두께를 micrometer
(Mitutoyo engineers Co.) 로 측정한 다음 족척종
창의 지표를 구하였다.
% increase = (T24 - To / To) x 100
(7) DNFB 에 의 한 접촉성 피부과민 반응 생쥐 8마리를 1군으로 하여 Ha49)
의 方法에 따라 생쥐의 복부를 除毛한 다음 실험 1일 및 2 일에
0.5% DNFB 용액 (acetone:olive oil =4: 1) 10 비 를 복부피부에 도포하여 감작한 다음 . 5일 후
BTSE 500mg/kg 을 경구투여하고 1시간 후 0.2%
DNFB 용액 10111 씩 꺼 내외연에 각각 도포하여 야기 조치하였다 . 귀 종창증가의 정도는 micrometer 를 사용하여 야기직전 (To). 24 시간 후 (T24) 및 48 시간 후 (T 48) 에 귀의 두께를 측정하였으며 종창증가의 정 도는 다음 공식에 따라 %로 나타내었다 .
% increase= ( T24 or T48-To / To ) x 100
3) 삿효 反應에 대한 실험
(1) Histamine 에 의한 생쥐 즉척종창반응
생쥐 8 마리를 1군으로 하여 허501
의 방법에 따라 대조군에는 생리식염수만을. 실험군에는 BTSE
500mg/kg 을 경구투여하고 1 시간 후에 좌측후족의
두께를 micrometer 로 측정한 뒤 기염물질로서
histamine-0.9% saline (30Ilg/201l]) 을 족척피하
에 20 Ill/hind paw 를 주사하였다. 주사전. 주사후
30 분 , 60 분. 120 분 및 180 분에 족의 두께를 측정하여 부종율을 산출하였다 .
심험군의 hind paw 의 두께 - 대조군의 hind paw 의 두께 우종융 (%) = h_n_n n--_hh n
X 100 대조군의 hind paw 의 두께
(2) Acetic acid 에 의한 모세혈관투과성 실 험
생쥐 8 마리를 1군으로 하여 WhittleS!) 및
ShimomuraS2} 의 방법에 따라 대조군에는 생리식염
수만을 . 실험군에는 BTSE 500 mg/kg 을 각각 경
구투여하고 , 약물대조군에는 sodium salicylate
300 mg/kg 을 경구투여하였으며. 1 시간 후에 1%
evans bl ue 5 ml/kg 을 꼬리 정맥에 주사하였다.
주사후 즉시 0.6% acetic acid 10 ml/kg 을 복강 내에 주사하고 l 시간 후에 생리식염수 5 ml 로 복 강액을 세척하여 회수한 다음 , 3.000 rpm 에서 5
분간 원심분리하였다. 상충액을 620 nm 에서 홉광 도를 측정하여 미리 작성한 검량선에 의해 복강으로 누출된 evans blue 의 양을 비색 정량하였다 .
대초군의 E.B 누출량 실험군의 E.B 누출량 억채융 (‘) : x 100
대조군의 E.B 누출량
(3) Acetic aαd에 의한 진통작용 실 험
생쥐 8마리를 1군으로 하여 WhittleS!) 의 방법에 따라. 대조군에는 생리식염수만을 , 실험군에는 BTSE
500mg/kg 을. 약물대조군에는 aminopyrine 100
mg/kg 을 각각 경구투여하고 1시간 후에 0.7%
acetic acid 10 ml/kg 을 복강내에 주사한 다음.
10 분 후부터 10 분간의 writhing synd- rome 의 횟수를 측정하였다.
4) 統計處理
통계처리는student's t-test 로 하였으며. p(
0.05 以下를 유의성 있는 것으로 판정하였다 .
Thymocytes(%) Splenocytes(%) Samples
Con A(+) Con A(-) LPS(+) LPS(-)
Control 100.0:!: 1.1 77.8:!:2.2 100.0:1: 12 82.3:1: 1.7
BTSE 113.1:!: 1.3' 915:!: 1.7' 105.3:!:13 85.2:!:l9
- 사상의학회지 저110 권 제2호 1998 -
m. 實驗結果
1. 훌훌反應메 미치는 효과
1) BTSE 가 흉선세포 및 비장세포의 生 存率에 미치는 효과
흉선세포에서concanavalin A(Con A) 를 첨가 한 대조군의 흉선세포의 생존율을 100% 로 하였을
때 , Con A를 첨가하지 않은 대조군의 세포생존율은
77.8:t2.2% 로 세포생존율이 감소되었으며. BTSE
투여군의 흉선세포에 Con A를 첨가하였을 때 세포
생존율은 113.1:t 1.3% 로 Con A를 첨가하지 않았
을 때는 91.5:t1.7% 로 대조군에 비해 세포생존율
이 증가하였다.
비장세포에서 lipopolysaccharide (LPS) 를 첨가 한 대조군의 비장세포의 생존율을 100% 로 하였을 때 , LPS 를 첨가하지 않았을 때는 82.3:t1.7% 로 세포생존율이 감소되었으며 . BTSE 투여군의 비장세
포s에 LPS 를 첨가하였을 때 세포생존율은 105.3:t
1.3% 로 , LPS 를 첨가하지 않았을 때는 85.2:t
1.9% 로 대조군과 별 차이가 없었다(Table I).
Table I. The cell viability of thymocvtes
and splenocytes in BTSE-
administered mice.
BTSE (SOOmg/kg) was administered p. o. once
a day for 7 days in BALB/c mice. The OD of
each well was measured at 570nm with a
micropla te reader
The data represents the mean:!: SE of 5
mice,
Significantly different from control
group(P(O.On
Con A( +): Concanavalin A treated group,
Con A( -): Concanavalin A non-treated group.
LPS( +); Lipopoly- saccharide treated group,
LPS( -): Lipopolysaccharide non-treated group
2) BTSE 가 흉선세포 및 비장세포의
subpopulation 에 미치는 효과
대조군 흉선세포의 CD4 +CD8- single positive cell 의 population 은 12.0:t1.7%. BTSE 투여군
의 CD4 +CD8' single positive cell 의 popula-
tion 은 12.9:t0.4% 로 대조군과 별 차이가 없었다.
흉선세포의 CD4'CD8+ single positive cell 의
population 은 대조군에서 3.4:t0.3%, BTSE 투여
군의 CD4'CD8+ single positive cell 의 popula- tion 은 3.5:t0.2% 로 대조군과 별 차이가 없었다.
대조군 비장세포의 B220+ 세포의 population 은
25.8:t1.6%. BTSE 투여군의 B220+ 세포의
population 은 23.5:t 1.2% 로 대조군과 별 차이가
없었으나, 대조군의 Thy 1+ 세포의 population 은
12.2:1: 1.3%. BTSE 투여군의 Thy1 + 세포의
population 은 17.0:t1.1% 로 대조군에 비해 증가
하였다. 대조군 비장세포의 CD4 +CD8' single
positive cell 의 population 은 11.5:t0.4% 로 ,
BSTE 투여군의 CD4 +CD8' single positive cell
의 population 은 14.1:t 1.0% 로 대조군에 비해 증
가하였으며. 대조군의 CD4'CD8+ single positive
cell 의 population 은 3.4:t0.2% 로. BTSE 투여군
의 CD4'CD8+ single positive cell 의 population
Thymocytes(%) Splenocytes (%) Samples
CD4+CD8- CD4-CD8+ B220 + Thy-l + CD4+CD8- CD4-CD8 +
Control 12.0:t 1.7 3.4:t0.3 2S.8:t 1.6 12.2:t 1.3 l1.S:tO.4 3.4:t0.2
BTSE 12.9:t0.4 3.S:t0.2 23.S:t 1.2 17.0:t1.1. 14.1:t1.0. 3.S:t0.3
- 防風홉 1m漫波의 헛훌 調!Ii 作用 -
Table II. The subpopulation of thymocy tes and splenocytes in BTSE-administered
mice.
BTSE(SOOmg/kg) was administered p.o. once a day for 7 days. and then the cells were
separated. The sub population was measured by a flow cytometry after staining with
monoclonal antibody.
The data represents the mean:t SE of S mice
.: Significantly different from control group(P<O.OS)
은 3.510.3% 로 대조군과 별 차이가 없었다(Table
m.
3) BTSE 가 복강 대식세포의 홈食能에 미치는 효과
Chemiluminescence 는 식작용이 진행되는 동안
생성되는 oxygen radical 에 의해 발생되며 . lucige-
nm 에 의해 증가되는 것으로 알려져 있다41) 대조군 의 대식세포에서 생성된 lucigenin chemilumi-
nescence 양보다 BTSE 투여군의 대식세포에서 생
성된 lucigenin chemiluminescence 양이 증가하 였다 (Fig. I) .
.
MmmmmmmmM O86420864 211111
=I그
@ut。 u”。
EE그
=Egzuc-c。 g
200 ...J
o,oT'
5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
TlME(mln.)
Fig. 1. Lucigenin chemiluminescence of
peritoneal macro phages in BTSE-
administered mice.
BTSE(SOOmg/kg) was administered p.o. once
a day for 7 days. and peritoneal cells were
collected. Macrophages obtained after 2 hrs.
adherence period were cultured in RPM1640
medium mixed with opsonized zymosan. The
chemiluminescence was measured at S min
Intervals for 60 minutes. Other procedures
were described as detailed materials and
method section
The data represents the mean of S experiments
