총 polyphenol 함량은 Folin-Denis (89)법 에 따라 측정하였다. Test tube에 시료 1 mL와 Folin reagent 2 mL을 넣은 후 실온에서 3분간 정치한 다음 10% Na2CO3 2 mL을 첨가하였고 이를 혼합한 후 30℃에서 40분간 정치하였으며, UV-spectrophotometer(Shimadzu UV-1601PC, Kyoto,
를 사용하여 에서 흡광도를 측정하였다 표준곡선은
Japan) 760 nm . tannic
를 이용하여 최종농도가 가 되도록
acid 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 mg/mL 작성하였으며 이 검량곡선으로부터 시료중의 폴리페놀 함량을 구했다, .
총 함량 3. flavonoid
총 flavonoid 함량은 Davis법을 변형한 방법(90)에 따라 측정하였다 시료.
에 를 첨가한 다음 을 넣고
1 mL diethylene glycol 2 mL 1N NaOH 20 μL
에서 시간 동안 반응시킨 후 로
37℃ water bath 1 UV-spectrophotometer 에서 흡광도를 측정하였다 표준곡선은 을 이용하여 최종 농도가
420 nm . rutin
및 가 되도록 조제하였으며 이
0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 1.0 mg/mL , 검량곡선으로부터 시료중의 총 flavonoid 함량을 구했다.
소거능 4. DPPH radical
보리순 분말 추출물의 DPPH radical 소거능은 Blois의 방법(91)을 이용하여 측정하였다. 보리순 분말 추출물 1mL와 0.2 mM
를 에 취한 후
2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH) 1 mL test tube
혼합하여 37℃에서 30분간 반응시켜 UV-spectrophotometer를 사용하여 에서 흡광도를 측정하였다 이때 활성의 비교를 위하여 합성
517 nm . ,
항산화제인 BHA, BHT를 이용하여 동일한 방법으로 측정하였다. 보리순 추출물의 라디칼 소거능은 (1-시료첨가구의 흡광도 무첨가구의/ 흡광도)×100에 의하여 계산하여 나타냈다.
에 의한 항산화능 측정 5. Rancimat
보리순 분말 추출물에 포함된 용매를 완전히 제거한 함량이 600 ppm이 되도록 soybean oil(Sigma co., USA)에 첨가하고, 초음파(Ultrasonic
를 이용하여 시료 추출물과 유지가 잘
processor, UCX-750, USA)
혼합되도록 하였다. Rancimat의 측정 조건은 시료 3.0 g을 반응용기(reaction vessel)에 취하고 증류수 70 mL을 측정용기(measuring
에 넣은 후 에서 로 하여 산화안정성을
vessel) 110℃ air flow rate 20 L/h
비교하였다(65). 모든 측정치는 3회 반복 실험하여 얻은 값의 평균치로 표시하였다 기존의 상업용 항산화제인. BHT를 유지에 대해 첨가하여 양성 대조군으로 비교 실험하였다.
제 절 4 In vivo 에서 지질대사 개선 및 비만억제효능
실험동물의 사육 및 식이 1.
실험동물은 Sprague Dawley계 5주령 웅성 흰쥐 32마리를 중앙실험동물 주 에서 구입하여 조선대학교 실험동물센터에서( ) 1주일 동안 고형 배합사료 삼양사료 와 물로 적응시킨 후 평균체중( ) 155~160 g인 것을 난괴법에 따라 각 처리구당 8마리씩 4군으로 나누어 임의배치하고 stainless steel cage에 1마리씩 분리하여 4주간 사육하였다. 실험군(Table 8)은 정상식이군(ND), 고지방식이군 대조군( , HF), 고지방식이와 5% 보리순 분말 첨가군(HF-BL), 고지방식이와 10% 보리순 분말 첨가군(HF-BH)으로 나누어 실시하였다 실험에 사용된 식이는. AIN-93을 기준(92)으로 Table 9와 같이 조제하였다. 정상식이군은 식이무게의 10%의 라아드를 지방 급원으로 사용하였고, 고지방식이군은 식이무게의 20%의 라아드를 함유한 식이를 공급하였다. 보리순 분말 첨가량은 식이 무게의 5%와 10%로 하여 첨가하였다. 물과 식이는 제한 없이 공급하였고 사육실 온도는 18±2℃로 유지하였으며 조명은 12시간 주기(08:00~20:00)로 조절하였다. 최종 체중에서 실험개시 전의 체중을 감하여 체중증가량으로 표시하였고,
체중증가량을 동일 기간의 식이섭취량으로 나누어 각 실험군의
식이효율(FER)을 구하였다.
Table 8. Experimental design
Groups Diet composition
ND1) Basal diet
HF2) High fat diet
HF-BL High fat diet + 5% of Barley Leaf powder HF-BH High fat diet + 10% of Barley Leaf powder
1),2)
Modified AIN-93 diet(92).
Table 9. Composition of experimental diet
(g/kg diet)
Diet composition ND HF HF-BL HF-BH
Casein 200.0 200.0 200.0 200.0
L-cystine 1.8 1.8 1.8 1.8
Corn starch 501.2 451.2 351.2 301.2
Sucrose 100.0 100.0 100.0 100.0
Cellulose 50.0 - 50.0 50.0
Barley Leaf
powder - - 50.0 100.0
Lard 100.0 200.0 200.0 200.0
Mineral mix1) 35.0 35.0 35.0 35.0
Vitamin mix2) 10.2 10.0 10.0 10.0
Choline bitartate 2.0 2.0 2.0 2.0
1),2)
AIN-93-MX mineral mixture and AIN-93-VX vitamin mixture(91).
실험동물의 처리 2.
실험동물은 사양시험 종료 후 12시간 절식시킨 후 CO2로 가볍게 마취한 다음 단두 절단하여 혈액을 채취하고 1,150 ×g, 5℃에서 20분간 원심분리 시킨 후 혈청을 분리하여 혈청 지질 함량 및 효소 활성 측정용 시료로 사용하였다. 그리고 간과 지방조직을 적출하여 0.9% 생리식염수로 남아 있는 혈액 및 기타 부착물질을 제거하고 여지로 수분을 제거한 후 중량을 측정한 다음 효소 활성 저하를 예방하기 위해 급속 동결하여 -70℃의
에 보관하였다 deep freezer (MDF-U52V, Sanyo, Japan) .