4-NQO는 염기치환성 돌연변이원으로서 TA100과 TA102를 이용한 돌연 변이 검정시 양성반응물질로, ICR-191은 구조이동성 돌연변이원으로 TA97 를 이용한 돌연변이 검정시에 양성반응물질로, NPD는 구조이동성 돌연변 이원 TA98과 염기치환성 돌연변이원 TA100을 이용한 돌연변이 검정에 이 용되고 있는데(Maron과 Ames, 1983), 돌연변이원은 농도에 따른 revertant colony 수가 다르기 때문에 최대 저지환을 형성하기 직전의 돌연변이원의 최적농도를 결정하는 것이 중요하므로 dose-response와 spot test(Fig. 6～
15)의 결과로부터 독성이 없고, 육안으로 계수하기 용이한 최적농도를 결정 하였다.
TA97에 대한 표준돌연변이원 ICR-191의 시험균주 dose-response는 Fig. 6 에서 보는 바와 같이 50㎍/plate까지 revertants colony가 지속적으로 증가 하고 있으며, ICR-191에 대한 spot test 결과로부터 이 돌연변이원 물질이 ICR-191의 균주에 대한 세포독성을 나타내지 않고 복귀돌연변이 수를 계 수하기 용이한 최적농도를 5㎍/plate로 선정하였다.
표준돌연변이원 NPD에 대한 시험균주 TA98과 TA100에 대한 dose- response는 각각 Fig. 8 및 Fig. 10과 같다. TA98에 대한 NPD 복귀돌연 변이 수는 100㎍/plate 농도까지 직선적인 증가량을 보이고 있으며, spot test 결과로부터 TA98에 대해 독성을 보이지 않으며, 복귀돌연변이 수를 계수하기 용이한 25㎍/plate을 최적농도로 결정하였고, TA100인 경우는 농 도가 50㎍/plate까지는 복귀돌연변이 수가 증가하고 있지만, 50㎍/plate 이
상의 농도에서는 감소하고 있으며, spot test결과로부터 25㎍/plate에서 균 주에 대한 독성이 보이지 않고, 계수하기 용이하여 최적농도로 결정하였다.
표준돌연변이원 4-NQO에 대한 시험균주 TA100과 TA102의 dose- response는 각각 Fig. 12 및 Fig. 14에 나타난 바와 같다. TA100인 경우 는 4-NQO가 0.5㎍/plate까지는 복귀돌연변이 수가 증가를 보이나, 0.5㎍
/plate 이상의 농도에서는 복귀돌연변이 수가 감소하는 추세를 보이고 있다.
이는 농도의 증가에 따른 돌연변이원의 독성작용의 영향으로서 spot test 결과로부터 0.5㎍/plate에서 저해존을 형성하는 것을 볼 수 있다. 따라서 dose-response와 spot test를 통하여 독성을 나타내지 않고 계수하기 용이 한 최적농도를 0.25㎍/plate로 선택하였다. TA102에 대한 4-NQO의 dose-response로부터 1.0㎍/plate까지 계속적으로 증가를 보이는 것을 볼 수 있고,spot test 결과에서도 균주에 대한 독성을 나타내지 않아 복귀돌연 변이 수를 계수하기 용이한 0.25㎍/plate를 최적농도로 선택하였다.
0 1000 2000 3000 4000 5000
0.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0
Concentration of ICR191(ug/plate)
Revertants per plate
Fig. 6. Dose-response of ICR-191 for S. typhimurium TA97 strains (Spontaneous revertants are substracted).
Fig. 7. Spot test of ICR-191 for S. typhimurium TA97 strain.
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
0 25 50 75 100
Concentration of NPD(ug/plate)
Revertants per plate
Fig. 8. Dose-response of NPD for S. typhimurium TA98 strains (Spontaneous revertants are substracted).
Fig. 9. Spot test of NPD for S. typhimurium TA98 strain.
0 100 200 300 400 500 600 700 800
0 25 50 75 100
Concentration of NPD(ug/plate)
Revertants per plate
Fig. 10. Dose-response of NPD for S. typhimurium TA100 strains (Spontaneous revertants are substracted).
Fig. 11. Spot test of NPD for S. typhimurium TA100 strain.
0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800
0 0.25 0.5 0.75 1
Concetration of 4-NQO(ug/plate)
Revertants per plate
Fig. 12. Dose-response of 4-NQO for S. typhimurium TA100 strains (Spontaneous revertants are substracted).
Fig. 13. Spot test of 4-NQO for S. typhimurium TA100 strain.
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500
0 0.25 0.5 0.75 1
Concetration of 4-NQO(ug/plate)
Revertants per plate
Fig. 14. Dose-response of 4-NQO for S. typhimurium TA102 strains (Spontaneous revertants are substracted).
Fig. 15. Spot test of 4-NQO for S. typhimurium TA102 strain.