이나 등

： 년 월 일 ： 년 월 일 ： 년 월 일

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충남대학교 의학전문대학원 진단검사의학교실

혈액형 항원과 이에 대하여 생성되는 항체는 수혈의학에 있어 가장 주된 관심사이며 적혈구 항원과 이에 대한 항체의 존재 유무는 적혈구와 혈소판 수혈 및 일부 혈장단백 수혈의 적절성을 결정하는 중요한 요인이 된다 수혈 전 검사에서 및 혈액형검사는 가장 기본이 되는 검 사이다 혈액형 항원은 부적합 수혈 시에 급성용혈수혈부작용의 유발과 관련되므로 중요한 임상적 의의를 가지며 항원도 면역 원성이 높아 음성인 사람이 수혈 또는 임신에 의해 양성 적혈구에 노출되면 약 에서

동종항체를 생성하고 일단 생성된 항체는 오 랫동안 지속되어 심한 태아 신생아용혈질환 또는 용혈수혈부작용을 유발할 수 있어 수혈시 형 즉 항원도 맞추어 수혈이 이루어져야 한다 에 서 공식적으로 인정한 적혈구 혈액형 항원은 여개 이상 되는데 다행히 항원과 항원 을 제외한 나머지 적혈구 항원들은 면역원성이 낮아 항체 발생률이 낮은 것으로 알려져 있다 이들 항원에 대한 항체를 비예기항체라고 부르는 데 대부분 임신이나 수혈 등을 통하여 다른 항원 에 노출되어 생기는 면역항체이나 일부는 자연발 생적으로 생기는 수도 있다 빈도는 수혈예정자 의 로 보고되고 있으며 그 중에서 에서 반응하는 항체는 밖에 되지 않는다 그러 나 일부 비예기항체는 임상적으로 심각한 문제 를 유발할 수 있으며 실제로 치명적인 경우도 국 내외에 많이 보고되어 있어 비예기항체 선별검사 를 수혈전에 필수적으로 시행하고 있다

및 혈액형 검사는 비록 간단한 검사이 지만 검사의 여러 단계에서 다양한 실수가 발생 할 수 있으며 그런 실수로 인해 환자가 사망할 수

도 있어 주의가 필요하다 대부분의 임상검사가 자동화되는 추세이나 혈액은행 검사는 여전히 수 작업에 의존하고 있다 최근에

이나 등

여러 자동화장비가 국내에 소개되었고 유럽이나 미국에서는 실제로 이들 장비를 도입해 혈액은행 에서 이용하고 있다

최근 소개된

은 및 혈액형 검사 비예기항체 선별검사 교차시험이 가능하도록 개 발된 자동화 장비로 미세원주응집법을 기초로

로 구성된 를 사용하여 검사를 시행한다 미세원주응집법의 원리는

물질이 필터역할을 함 으로써 적혈구를 원심분리과정을 통해 과 사이로 통과시키는 것이다 구체적으로 설명하면

의 윗부분인 는 혈구응 집반응 또는 항온과정에서 항원 항체 결합이 일 어나는 곳이며 원추형의 은 항원 항체 반 응을 확인하는 부분이다 항원 항체 반응이 있는 경우 응집이 강한 것은 의 표면 위에 응집이 나타나고 응집이 약한 것은 의 중간부분에 응 집이 나타나며 항원 항체반응이 없는 경우에는 적혈구가 을 다 통과하여 밑바닥에 모이게 된 다 이 방법은 안에 정량의 검체 시약 항혈청을 넣어 사용하는 표준화된 검사과정으로 검사자의 기술 숙련도나 각 검사실 특성에 따른 검사과정과 주관적인 판독 등에 따라 발생할 수 있는 서로 다른 결과나 오류의 가능성을 최소화 할 수 있는 장점이 있다 그러나 현재까지 국내 에서는 장비에 대한 평가가 이루어지지 않았다

이에 본 저자들은 장비를 이용한

및 혈액형검사 비예기항체 선별검사를 기존

의 수기법과 비교하여 장비의 수행능을 평가하고

자 하였다

년 월 일부터 일까지 충남대학교병 원 혈액은행에 의뢰된 및 혈액형 검사

건과 비예기항체 선별검사 건을 대상으로 하였다 및 혈액형 검사는 채혈후 시 간 이내에 비예기항체 선별검사는 시간 이내 에 시행되었다 을 이용한 자동화검사는

채혈관에 채혈한 혈액을 이용하여 검사하 였다

혈구형 및 혈액형 검사는 슬라이드 법과 시험관법을 동시에 실시하였고 혈청 형 검사는 시험관을 이용한 수기법으로 실시한 후 결과를 판독하였다 검사에 사용된 항혈청은

단클론성 와 및 단클론성

를 사용하였고 혈구는

과 를 사용하였

다 슬라이드법에 사용된 혈구부유액은 검체를 원심분리하여 얻은 ∼ 의 혈구부유액을 사 용하였고 시험관법에서는 생리식염수에 혼합하 여 얻은 혈구부유액을 사용하였다 혈구형 검 사와 혈청형 검사의 결과가 일치하는 경우에만 혈액형을 판정하고 불일치 하는 경우에는 판독불 가로 판정하였다 자동화장비 은

＋ 라는 혈청형 및 혈구형 검사가 동시에 이루어지는 를 사용하여 시행하였다 이 는 개의 로 구성 되었는데 처음 개는 단클론성

와 정도관리용 항체등 특이 항혈청이 포함된 특이 로 혈구형 검사에 사용되며 나머지 두 개 의 는 로서 적혈구시약 과

혈구가 들어 있어 혈청형 검사가 이루어졌다 검사과정은 먼저 혈액 검체를

가 들어있는 과 잘 혼합하여 의 혈구 부유액을 만든 후 μ 을 의 중 혈 구형 검사부분에 분주하였다 그리고

과 를 μ 씩 과 에 분주하고

환자의 혈장을 μ 씩 과 에 분주

하였다 이 모든 과정은 시스템에서 자동으로 진

행되었다 는 항원과 항체의 감작을 위하

여 분간 항온을 하고 분간의 원심분리 후 반

응결과는 내장된 카메라에 읽히고 소프트웨어에

＋ − ＋ − ＋ − ＋ − ＋ −

＋

＋

＋

＋

−

의해 자동인식되어 반응강도에 따라 음성

＋ ＋ ＋ ＋ 의 단계로 해석되어 보고되었 다

수기법으로 검사한 비예기항체 선별검사는

을 이용하여 항글로불린 단계 만을 시행하였다 제조사의 지시대로 카드에 항체선별용혈구

인 및 를 각각 μ

씩 분주하고 환자혈청 μ 를 첨가하여 에 서 분간 항온한 후 원심분리 하였다 원주의 응 집강도는 응집된 적혈구의 분포에 따라 음성

＋ ＋ ＋ ＋까지 총 단계로 해석되어

보고되었다

자동화장비 에서도 수기법과 같은 을 이용하였으며 환자 검체를 장착하면 시스템에서 다특이항글로 불린 와 이 포함되어있는

의 에 항체선별용 혈구 인 및 를 각각 μ 씩 분주하고 환자 혈장 μ 를 첨가하여 에서 분간 항온한 후 분간 원심분리 하였다 반응결과는 내장된 카메라에 읽히고 소프트웨어에 의해 자동인식되 어 반응강도에 따라 − ＋ − ＋ ＋＋ ＋＋＋

＋＋＋＋의 단계로 해석되어 보고되었다 비예기항체 선별검사에서 양성으로 나온 검 체는 비예기항체 동정검사를 시행하였다 비예기 항체 선별검사와 같은 방법으로 가지 동정혈구

패널로 구성된 을 이

용해서 검사를 시행하였고 결과의 판정은 비예 기항체 선별검사와 동일하였다

슬라이드나 시험관법의 수기법으로 총 건

＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋

＋

＋

＋

＋

−

에 대하여 및 혈액형을 검사한 결과 혈액형은 형 건 형 건 형 건 형 건이었으며 혈액형은 양성 검 체 음성 검체이었다 자동화장비 로 검사한 및 혈액형 검사 결과는 검 체 모두에서 수기법과 일치하였고 혈구형과 혈청 형 검사간의 불일치는 없었다 반응강도 는 혈구형 검사상 형에서 와 와의 반응은 모두 음성 소견을 보였고 형은 와 건이 ＋ 건이 ＋이었으며 형은 와 건이 ＋ 건이 ＋이었으며 형에서

와의 반응은 건이 ＋ 건이 ＋이었으며 와의 반응은 건이 ＋ 건이 ＋이었다 혈액형 검사에서 와의 반응은 건 이 ＋ 건이 ＋ 건이 음성 소견을 보였다 혈구형 검사에서 반응강도는 ＋∼ ＋로 높은 강 도를 나타내 판독이 용이하였다

혈청형 검사상 형에서 혈구와의 반응은 건이 ＋ 건이 ＋ 건이 ＋ 혈구와의 반응 은 건이 ＋ 건이 ＋ 건이 ＋이었고 형 에서 혈구와의 반응은 검체가 ＋ 검체가

＋ 검체가 ＋ 검체가 ＋이었으며 형에 서 혈구와의 반응은 검체가 ＋ 검체가

＋ 검체가 ＋이었다 형에서 및 혈구

와의 반응은 모두 음성 소견을 보였다 혈청형 검 사의 반응강도도 대부분은 ＋∼ ＋로 높은 강도 를 나타냈으나 일부 검체에서 ＋∼ ＋의 낮은 강도를 보였다 이러한 검체는 수기법에서도 비 교적 약한 반응강도를 보여 자동화법과 동일한 소견이었으며 반응강도가 약한 경우에도 판독에 는 지장이 없었다

총 검체 중

을 이용한 수기법에서 검체는 비예기항체 양 성 검체는 음성을 보인 반면 자동화장비

에서는 검체가 양성 검체가 음성을 보였다 두 방법에서 모두 양성을 나타낸 것은 검체 모두 음성을 나타낸 것은 검체 로 검체에서 두 방법간 일치된 결과를 보여 두 방법간의 일치율은 이었다 불일치를 나 타낸 검체는 총 검체이었으며 수기법에서 양성 을 보이고 에서 음성을 보인 검체는 검 체 수기법에서 음성을 보이고 에서 양성 을 보인 검체는 검체이었다 수기법 혹은

에서 양성을 보인 검체를

를 이용하여 동정검사를 실시하였다

수기법과 에서 모두 양성을 보인 검체

− ＋

− ＋

− ＋

− ＋

− ＋

− ＋

＋ ＋

− ＋

＋ ＋

− ＋

− −

− ＋

＋ ＋

− ＋

에서는 비예기항체가 동정되었으며 동정된 비예

기항체는 ＋ 건 건 건

건 건이었다 수기법에서 양성을 보였으나 에서 음성을 보인 건은

를 이용한 동정검사에 서 로 동정되어 자동화장비 의 위음 성이었다 해당 검체는 개월전부터 비 예기항체검사 양성으로 나온 환자에서 개월동 안 회에 걸쳐 농축적혈구 총 단위와 회의 농 축혈소판 단위를 투여받은 후의 검체로 항체가 희석되었을 가능성이 있는 검체였으며 주 뒤 항 체선별검사에서 음성으로 전환되었다 수기법에 서 음성을 보이고 에서만 양성을 보인 건 중 건에서는 가 동정되었으며 해당 환 자에서 재검체를 채취하여 수기법을 다시 시행한 결과 양성으로 전환되어 수기법의 위음성으로 판 단되었다 다른 건은 비예기항체가 동정되지 않

아 의 위양성으로 판단되었으며 그 중 한

건은 급성백혈병 환자의 용혈성 검체이었고 다

른 건은 당화혈색소가 인 고혈당환자의 검

체이었다 항체선별검사에서 의

민감도와 특이도는 각각 와 이었다

현재 국내 혈액은행에서 검사 업무의 대부분 은 수기법으로 이루어지고 있으며 이로 인해 검 사과정 중 오류의 가능성이 존재하고 있다 자동 화 장비는 신속한 검사결과와 함께 필요인력과 검사시간을 경감시킬 수 있다는 장점이 있으며 수기법에서 발생할 수 있는 오류의 가능성을 현 저히 줄일 수 있으므로 예민도가 높고 정확한 자 동화 장비의 도입이 요구되는 추세이다 또한 자동화 장비의 도입은 혈액은행 업무에서 검사 방법의 표준화에도 기여할 수 있다 최근 여러 자 동화장비가 소개되었는데 미세원주응집법을 이

용한 사의 전통적인

혈구응집반응 을 이용한

법과 법

을 함께 사용하는 사의 그

리고 를

이용한 사의 등이 그 대표

적인 예이다 그중에서 은 첨가과정이 추가 되어 있어서 한랭항체를 보다 민감하게 검출하나 등 에 의하면

이 비예기항체 양성검체에서 약한 반응강 도를 보이는 경향이 있어 ＋ − 반응을 보 이는 빈도가 상대적으로 높았다고 보고하였다

의 장점으로는 사용된 패널 혈구에 항원이 추가로 더 구성되어 다른 자동화장비에 비해 비예기항체 동정률이 높다는 것이다 특히 항원은 아시아인과 미국 인디 언에 비교적 흔하여 한국인에서의 빈도는 ∼ 로 알려져 있으며 항체에 의한 신생 아용혈성질환 및 용혈성수혈부작용이 나타날 수 있어 임상적으로 중요한 항체이나 현재까지 수입 되어 사용되는 항체선별용 혹은 동정용 혈구에는

항원 양성 혈구가 포함되어 있는 경우가 거의

없었다 반면 은 혈액형

검사에서 재검이 필요한 경우가 에서 나타 났으며 이는 검체문제 미세응괴 피브린층 용혈 고지질 가 가장 흔한 원인이었고 혈구형 및 혈청 형의 불일치로 인한 혈액형 판정불가도 주요한 원인이었다 이는 이 검체상태에 따라 보다 큰 영향을 받으며 약한 항원성 및 혼합 반응에 민감하게 이상 반응을 보인다는 것을 반 영하였다 는 원심분리 과정이 생략 되면서 장비유지보수 및 영구적 사용이 가능해졌 다는 점과 세척 단계의 생략이 가능해서 더욱 편 리해졌다는 장점이 있지만 아직도 와 같 은 형태의 비예기항체에 대해 여전히 위음성 결과를 나타내어 제한점이 완전히 개선되지는 않 았다

이번 연구에서 평가된 의 장점은 현재 국내에서 가장 많이 사용되고 있는 미세원주응집 법을 자동화한 장비로 기존에 사용하던

사의 시약을 그대로 사용하였다는 것이며 기존의 수기법에 비하여 표준화된 절차 및 방법에 의해 검사가 진행되어 검사과정이 안정되어 있고 검사 진행뿐만 아니라 정도관리와 장비점검 등의 장비 유지관리과정도 완전 자동화 되어있다는 것이다 이번 연구결과에서 및 혈액형 검사의 수

기법과 간의 일치율은 로

우수하였으며 이는 이전 연구에서 보고된 다른 자동화장비인 의

의 일치율과 비교하여 유사하였다 비 예기항체 선별검사에서도

의 수기법과 의 일치도는

로 이는 의 의

의 와 비교하여 유사한 우수한 결과 이었다 하지만 본 연구의 제한점은 및

혈액형 검사의 경우 연구대상에 아형

이 포함되지 않았고 음성이 단 건만 포함이

된 점과 비예기항체 검사의 경우 연구대상에 양 성검체가 여개만 포함된 점이다 이런 점을 보 완하기 위하여 앞으로 좀 더 다양한 항체를 가진 검체들이 포함된 연구가 필요할 것으로 생각되었 다

수기법에서 음성이지만 에서 양성인 검체 중 한 검체는 항체동정 검사결과 가 검출되어 수기법의 위음성으로 판단되었는데 환 자는 단클론항체가 인 다발성골수병 환 자의 검체이었다 나머지 두 검체는 항체동정검 사에서 비예기항체가 동정되지 않아 의 위양성이었는데 한 검체는 당화혈색소가 이고 혈당이 인 고혈당환자의 검체이 었으며 다른 검체는 망상적혈구 인 급성골 수구성 백혈병환자의 용혈성 검체이었다 지금까 지 알려진 적혈구 항원 항체 반응에 영향을 주는 대표적인 원인들은 용혈 고섬유소원혈증 고지 혈증 검체가 있으며 이들은 검사 결과에 영향을 주어 위양성 결과를 초래한다고 한다 이번 연구에서도 에서 위양성을 보인 두 검체 중 하나는 용혈성 검체로 카메라에 읽힌 이미지 에서 용혈된 검체가 일반적인 항원 항체반응에 서 보여주는 양상과는 다른 진한 색상의 띠를

의 밑부분에 형성함으로써 ＋로 판독되 어 위양성을 초래함을 확인할 수 있었다 그러나 고혈당검체에서 위양성이 초래된 원인은 알 수 없었다 검체 이상으로 에서도 위양성을 초래할 수 있음을 알 수 있었고 위양성 결과 발생 을 최소화 하기 위해서는 검사의 부적합 기준이 규정되어야 하며 검사 전 육안으로 검체이상 검 체량 고지질 용혈 응고 여부를 판별해야 할 것 으로 생각되었다 수기법에서 양성이지만

에서 음성으로 나온 검체는 항체 동정결 과 가 동정되어 의 위음성으로 판단 되었다 해당 검체는 개월간 회에 걸쳐 농축적

혈구 총 단위와 농축혈소판 단위를 투여받은 환자의 검체로 항체가 희석되었을 가능성이 있는 검체이었으며 수기법에서의 반응강도도 ＋로 약하였다

결론적으로 자동화장비 은 기존에 사 용하던 수기법과 비교하여 혈액형검 사와 비예기항체 선별검사에서 높은 일치율을 보 여주어 신뢰할 만한 것으로 사료되었다 따라서 혈액은행에서의 수혈전 검사인 및 혈액 형 검사와 비예기항체 선별검사에 자동화 장비인

을 수기법을 대체하여 사용할 수 있을 것 으로 생각된다

대부분의 임상검사가 자동화되는 추세 이나 혈액은행 검사는 여전히 수작업에 의존하고 있다 여러 자동화장비가 개발되어 활용되고 있 으며 최근 면역혈액검사를 위한 자동화장비인

이 소개되었다 이번 연구에서는 장 비의 및 혈액형 검사와 비예기항체 선별 검사에 대한 성능을 평가하려고 한다

년 월에 의뢰된 건의 및 혈액형 검사와 건의 비예기항체 선별검 사를 대상으로 하였다 및 혈액형 검사 는 슬라이드법과 시험관법을 사용하였고 비예기 항체검사는 미세원주응집법

을 사용하여 의 결과와 비교하였다 및 혈액형 검사에서는 두 방법 간 의 높은 일치율을 보였고 비예기항체 선 별검사에서는 두 방법에서 모두 양성을 보인 검

체가 건 ＋ 건 건 건

건 건 이었고 모두 음성을 보인

검체는 건으로 의 일치율을 보였다

의 민감도 및 특이도는 각각 였다

은 기존에 사용하던 수기법과 비 교하여 및 혈액형 검사와 비예기항체 선 별검사에서 높은 일치도를 보였다 따라서 혈액 은행에서의 수혈 전 일상검사에 자동화 장비인

을 사용할 수 있을 것으로 생각된다