대한소화기학회지 2002;40:46-52
서 론
11)B형 간염 바이러스(이하 HBV)는 우리 나라를 비롯해 전 세계적으로 급성, 만성 간염과 간경변증 그리고 간세포암 의 중요한 원인으로 알려져 있다.1 이러한 다양한 간질환의
접수: 2002년 3월 25일, 승인: 2002년 6월 4일
연락처: 황성규, 463-712, 경기도 성남시 분당구 야탑동 351 포천 중문의과대학교 분당차병원
Tel: (031)780-5220, FAX: (031) 780-5219 E-mail: sghwang@cha.ac.kr
발현은 감염시 연령, 감염 환자의 유전인자, 바이러스의 유 전적 다양성으로 인해 복합적으로 이루어진다고 알려져 있다.2 HBV는12)partially double stranded DNA 바이러스이 고,게놈(genome)은 대개 3,213개의 뉴클레오타이드로 이루 어져 있고,3 4개의 open reading frame인 C, S, X 그리고 P
Correspondence to: Seong Gyu Hwang, M.D.
Department of Internal Medicine, Pundang CHA General Hospital, Pochon CHA University College of Medicine
351 Yatap-dong, Pundang-gu, Sungnam-si, Kyonggi-do 463-712, Korea
Tel: +82-31-780-5213, 5220, Fax: +82-31-780-5219 E-mail: sghwang@cha.ac.kr
경기, 서울 지역에서 조사된 B형 간염 바이러스 유전자형
포천중문의과대학 내과학교실, 임상의학연구소*, LG화학바이오텍연구소†
오성욱·황성규*·고광현·정은미·김형태·홍성표*·박필원·임규성*·김남근*·현욱섭
†·이태규
†Hepatitis B Virus Genotype in Kyunggi and Seoul Provinces
Seong Wook Oh, M.D., Seong Gyu Hwang, M.D.*, Kwang Hyun Ko, M.D., Eun Mi Jung, M.D., Hyung Tae Kim, M.D., Sung Pyo Hong, M.D.*, Pil Won Park, M.D., Gyu Sung Rim, M.D*,
Nam Geun Kim, Ph.D.*, Wk Seop Hyun, Ph.D.†, and Tae Kyu Lee, Ph.D.†
Department of Internal Medicine, Institute for Clinical Reserch*, Pundang CHA Hospital, Pochon CHA University College of Medicine, Sungnam; Biotech Institute†, LG Chem., Daejeon, Korea
Background/Aims: Hepatitis B virus (HBV) is classified into 7 genotypes (A-G). Simple HBV genotyping system using restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis of the S gene region is cost effective compared to the classification by molecular phylogenetic analysis. The aim of this study was to investigate the distribution of HBV genotypes in Kyunggi and Seoul provinces. Methods: From 1999 to 2000, a total of 67 serum specimens were obtained from HBsAg positive patients in Kyunggi and Seoul provinces. HBV DNA was amplified by nested polymerase chain reaction (PCR), and HBV genotypes were classified with RFLP method designed by Mizokami (in FEBS Letters 450: 66-71,1999). Serum HBV DNA levels were determined with Hybrid Capture II assay.
Sequence of S gene was analyzed in 12 serum specimens. Results: Of 67 samples, 63 (94.0%) were amplified by the nested PCR. Only one sample (1.6%) simultaneously presented genotype B and C, and all the other 62 samples (98.4%) were genotype C. Among 41 HBV DNA positive cases and 26 HBV DNA negative cases, 39 (95.1%), 24 (92.3%) samples were amplified, respectively. Conclusions: Genotype C is the most predominant HBV genotype in Kyunggi and Seoul provinces of Korea. (Korean J Gastroenterol 2002;40:46-52)
Key Words: Hepatitis B virus genotype; Hepatitis B virus; Polymorphism, restriction fragment length; Nested
polymerase chain reaction
오성욱 외 10인. 경기, 서울 지역에서 조사된 B형 간염 바이러스 유전자형
유전자(gene)로 구성되어 있는데, P유전자는 전체 HBV 유 전자의 70% 이상을 차지하고 있고, 모든 preS와 S유전자 부위와 공유되어 있다. 그리고 X와 C 유전자는 일부분 만 P와 공유되어 있다.4
사람의 HBV는 혈청형(serotype)과 유전자형(genotype)으 로 분류되어 왔다. 이중 혈청형은 HBsAg의 항원에 의해서 만 분류되기 때문에 제한점이 많으나, 유전자형 분류법은 전 HBV 게놈의 염기서열을 통하여 분류하는 방법으로 최 근 널리 인정되고 있다.5,6유전자형은 최근까지 7개의 유전 자형으로 분류하여 유전자형 A, B, C, D, E, F 그리고 G 로 나누고 있다.7 A에서 G까지의 HBV 유전자형 내에서 아 유전자형(subgenotype)간 염기서열의 차이는 8% 미만으로 보고되고 있다.5
현재까지 HBV 유전자형은 여러 가지 방법에 의해 분류 되는데, 최근의 제한효소 분절길이 다형성(restriction fragment length polymorphism, RFLP)를 이용한 방법은 고식적인 염 기서열에 따른 계통분석(phylogenetic analysis) 방법보다 비 용이 적게 들고 간편하면서 기존의 방법에 의해 분류된 유 전자형과 결과에 차이를 보이지 않아 널리 쓰이고 있다.8 한편, 각 HBV 유전자형은 지역적으로 특이도가 높게 분포 하는 것으로 알려져 있고 여러 간질환들과의 연관성도 연 구되고 있다.6 그러나 아직까지 국내에서 HBV 유전자형 분 류에 대한 보고는 없었고, 이의 분포나 간질환과의 관계에 대한 연구도 이루어지지 않은 실정이다.
이에 저자들이 근무하는 병원의 위치 특성상 경기 서울 지역에서 RFLP 방법을 이용하여 HBV 감염 환자들의 유 전자형 분포를 알아보고자 이 연구를 시작하였다.
대상 및 방법
1. 대상
1999년 5월부터 2000년 4월까지 방문한 환자 중 1년 이
Table 1. Age and Sex Distribution of the Patients Clinical
feature
Male Female Mean
age Total 10-39 40-69 70- total 10-39 40-69 70- total
HBV healthy carrier 3 6 0 9 1 0 0 1 38.9 10
Acute hepatitis B 2 0 0 2 0 0 0 0 33 2
Chronic hepatitis B 13 10 0 23 7 6 0 13 40.8 36
LC 1 8 0 9 2 4 1 7 49.9 16
HCC 0 2 0 2 0 1 0 1 48 3
Total 19 26 0 45 10 11 1 22 42.1 67
HBV, hepatitis B virus; LC, HBV related liver cirrhosis; HCC, HBV related hepatocellular carcinoma.
상 추적관찰이 가능했던 HBV 감염 환자를 대상으로 하였 다. 이중 현주소지가 경기와 서울 지역으로 되어 있는 환자 들을 HBV 건강보유자, 급성 간염, 만성 간염, 간경변증 그 리고 간세포암종의 질환에 따라 나누었고 이 환자들 가운 데 각 질환의 비율에 따라 총 67명의 환자를 무작위로 선출 하였다. 모든 환자는 간염 발생 전 해외여행의 기왕력은 없 었고, HBsAg검사에 양성을 보였으며, 기타 다른 간염 바이 러스가 동반된 환자는 대상에서 제외시켰다. 환자들의 과 거력상 면역조절제, 항바이러스제나 한약 등의 기타 다른 약물치료를 받은 과거력은 없었다. 평균 연령은 41.1세 (19세~75세)였고, 남자 45명, 여자 22명이었다. 이중 10명 은 HBV 건강 보유자로 생화학적 검사 수치가 연구 기간 동안 정상이었고, 36명은 간조직생검에서 만성 B형 간염으 로 진단된 환자들이었고, 모두 6개월 이상 HBsAg 양성이 었다. 16명은 HBV 관련 간경변증으로 조직학적 증명이 되 거나, 문맥압 항진의 임상 소견과 더불어 식도내시경에서 정맥류가 관찰되거나 복부 초음파 또는 전산화단층촬영에 서 경변성 변화가 관찰된 경우로 하였다. 3명은 HBV 관련 간세포암으로 조직검사상 확진되거나, 임상검사상 전이성 악성 간종양의 가능성을 배제할 수 있고, 혈청 알파 태아단 백(αFP) 수치와 복부 초음파검사, 복부 전산화단층촬영, 간동맥조영술 등의 영상진단검사에서 간세포암종의 특징적 양상을 보이는 경우로 진단하였다. 나머지 2명은 모두 anti-HBc IgM이 양성이었고, 추적검사에서 HBsAg의 소실 을 보여 급성 B형 간염으로 진단된 환자들이었다. 연구는 환자들의 챠트를 검토하는 후향적 연구 방법으로 진행하였 다(Table 1).
2. 방법
1) HBV DNA 정량 분석
67명의 환자에서 약 10 mL의 전혈을 채혈하여 원심분리 후, 즉시 -70℃의 냉동고에 보관하였다가 연구에 이용하였 다. HBV DNA 정량 분석은 Hybridization Capture II assay 47
The Korean Journal of Gastroenterology: Vol. 40, No. 1, 2002
(Digene Diagnostic Inc., Bestivelle, MD, USA)를 사용하여 측정하였으며, cut off치는 2.5 pg/mL이었다.
2) S유전자의 유전자형 결정
67예의 혈청에서 HBV DNA를 얻기 위해 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, PCR)을 시행하였다. DNA 추출물에 10x EX-Tag polymerase buffer (Takara Shuzo Co., Otsu, Shiga, Japan) 2.5 µL, 2.5 mM deoxyribonucleotide triphosphate 2.5 µL, EX-Taq (5 units. Takara Shuzo Co.) 0.1 µL를 섞고, sense primers (HBMF1: 5´-YCCTGCTGGT- GGCTCCAGTTC-3´)를 섞어 25 µL를 만들었다. PCR은 96℃ 2분, 94℃ 15초, 60℃ 45초, 72℃ 45초로 총 25사이클 을 시행하였고, 96-well cycler (Gene Amp 9600. Perkin-Elmer Cetus, Norwalk, CT, USA)를 사용하였다. PCR 추출물 1 µL 에 첫 번째 PCR시와 같은 비율로 inner sense primers (HBMF2, 5´-GTCTAGACTCGTGGTGGACTTCTCTC-3´)를 섞고, 2차 PCR을 시행하였다. PCR primers는 DDBJ/GenBank 에서 이미 알려진 염기서열 중 가장 변이가 적은 부분에서 작성하였고, DNA synthesizer (Model 394. Perkin-Elmer Cetus)를 사용하여 제조하였다.
Mizokami에 의한 유전자형 분류법9에 따라(Fig. 1), 최 종 PCR 증폭물 5 µL를 20 µL의 TE 버퍼(10 mmol/L, Tris-HCL [PH 8.0], 1 mmol/L, ethylenediamine tetra acetic acid)로 다시 용해시킨 후에, 3시간 동안 제한효소 AlwI, HphI, NciI, NlaIV, EarI (New England BioLabs, Beverly, MA, USA)의 각각 10 unit와 반응시켰다. 유전자형 B형은 EarI으로 잘려지지 않고, C형은 AlwI에 잘려지지 않음으 로써 구분하였고, E형은 여러 제한효소 중 단지 NciI에 의해서 염기서열 461번만 잘려지고, F형에서는 HphI에 의해 82번만 특이적으로 잘려지는 부분이 있는 것으로 써 구분하였다. A형은 NlaIV에 의해 299번에 잘려지는 부위가 존재하지 않았고, D는 265와 299번에 모두 작용 함으로써 구분하였다. 반응 처리된 산물은 3.0% Nusieve GTG (3:1) 아가로스 겔에서 전기영동시킨 후 ethidium bromide (0.5 mg/ml)로 염색하여, UV하에서 RFLP 양상 을 관찰하였다.
3) S유전자의 염기서열 결정
12예의 혈청에서 DNA 추출물을 얻어 위의 조건과 동일 한 방법으로 1,2차 PCR을 시행하였다. 1차 PCR시 sense primers (HBV11: 5´-GGGTCACCATATTCTTGGGAACA- AGAKCTAC-3´)와 antisense primers (HBV22: 5´-CAATW- CKYTGACANACTTTCCAATCARTWGG-3´)를 사용하였고, 2차 PCR시 inner sense (HBMF1: 5´-YCCTGCTGGTGG- CTCCAGTTC-3´)와 antisense (HBV 22)를 사용하였다. 모
Fig. 1. Strategy of the HBV genotyping by RFLP. The second round PCR products, which were 485bp were digested by AlwI and Ear I to find genotype C and B. HphI and NciI digested genotypes E and F. Finally, genotypes A and D were found by Nla IV.
든 PCR 추출물은 pGEM-T벡터(Promega, Madison, WI, USA)에 연결시키고, 양방향 확장 시에는 dideoxy nucleotide chain termination (Dye Terminator Cycle Sequencing FS Ready Reaction Kit. Perkin-Elmer Cetus)를 이용하였고, 염기 서열 결정은 DNAsequencer (ABI Prism 377DNA Sequencer.
Perkin-Elmer Cetus)를 사용하였다.
결 과
1. HBV DNA와 e항원 유무에 따른 PCR 증폭률 67명의 대상 환자 중 41예(61.2%)에서 HBV DNA 양성 이었고, 나머지 26예(38.8%)에서 음성이었다. DNA 양성 증례 중에서 e항원 양성은 31예(75.6%)였고, 이중 PCR에서 96.7% (30/31)가 증폭되었으며 1예에서는 증폭이 되지 않 았다. 한편, e항원 음성은 10예(24.4%)로 이중 증폭 양성률 은 90.0% (9/10)이며 전체 DNA 양성 환자 중 총 2예(4.9%) 에서 증폭이 되지 않았다.
DNA 음성인 26예 중에서는 8예(30.8%)에서 e항원 양 성이었고, 증폭 양성률은 75.0% (6/8)였다. 나머지 18예 (69.2%)에서 e항원 음성이었는데, 모든 증례에서 PCR 증폭 이 되어, 전체 DNA 음성 증례 중 총 24예(92.3%)에서 성공 적으로 증폭되었다(Table 2).
48
Oh, et al. HBV Genotype in and Kyunggi Seoul Province
Table 2. Status of HBV DNA and HBe Ag and PCR Amplification
PCR amplification
HBV DNA(+)* (n=41) HBV DNA (-) (n=26) HBeAg (+)
No. (%)
HBeAg (-) No. (%)
HBeAg (+) No. (%)
HBeAg (-) No. (%) Positive
(n=63) 30 (73.2) 9 (22.0) 6 (23.1) 18 (69.2) Negative
(n=4) 1 (2.4) 1 (2.4) 2 (7.7) 0 (0.0)
Total 31 10 8 18
* HBV DNA positive cut off value is 2.0 pg/mL.
2. B형 간염 바이러스의 유전자형
PCR 증폭된 총 63예 중 62예(98.4%)에서 유전자형 C형 으로 나타났고, 나머지 1예(1.6%)는 유전자형 B와 C형이 동시에 검출되었다(Table 3). C형은 제한효소 AlwI에 의해 처리시 잘리는 부위가 없어 485bp가 그대로 남게 되고, EarI으로 처리시에는 두 부분에서 잘리게 되어 320 과 165 bp의 lane이 관찰되었다(Fig. 2). 1예에서 B와 C형이 모두 나타났는데, 이 때 전기영동에서 165, 320, 485 bp 길이의 PCR 산물이 모두 관찰되었다.
3. S유전자의 염기서열 분석
C형으로 판단된 증례 중 S유전자의 염기서열을 확인한 12예 모두에서 제한효소 AlwI의 인식 서열인 GGATC 대신 GGAAC로 되어 있음이 확인되었고 뉴클레오타이드 중 타
Fig. 3. Alignment of the part of the sequences of the S gene. The restriction enzyme (AlwI) recognition sites are indicated (arrow).
Nucleotide thymine (T) was substitued by adenine (A) (arrow head). Lanes 1-12 indicate genotype C. All lanes were not digestd by AlwI.
이미딘(T)이 아데닌(A)으로 되어 있어 제한효소가 작용하 지 못했음을 알 수 있었다(Fig. 3).
Table 3. Results of Genotype in Patients with PCR Amplification Genotype PCR amplification (n=63)
No. (%) C
B+C
62 (98.4) 1 (1.6)
Fig. 2. RFLP pattern of the products of the S gene. By AlwI, all lanes were not digested, resulting in fragments of 485 bp. By EarI, all lanes were digested, resulting in fragments of 320 bp and 165 bp. Lanes 1-16 indicate HBV genotype C. M, size marker.
49
대한소화기학회지: 제40권 제1호, 2002
고 찰
전세계적으로 HBV 감염자 수는 3억 명 이상으로 보고 되어 있으며, 우리 나라에서도 성인의 약 5%가 HBV 보유 자로 알려져 있고, 이는 여러 간질환들의 원인으로 작용하 는 것으로 밝혀져 있다.1,10 과거에는 HBV를 면역학적 방법 에 따라 바이러스 envelope 폴리펩타이드에 있는 항원 검출 을 통하여 분류하였다. 이러한 혈청학적 분류에는 adr, adw, ayr, ayw의 4가지가 있고, 여기에 ayw1, ayw2, ayw3, ayw4, ayr, adw2, adw4, adrq+그리고 adrq-의 9가지 아형이
있다.11,12그러나 혈청형 분류의 단점으로는 혈청검사 당시
S항원의 역가가 높아야하고, 바이러스의 지역적 특성과 잘 맞아떨어지지 않으며, HBsAg의 a determinant에 있는 아미노 산의 변화만 가지고 분류해야 한다는 제한점이 있다.6,9
HBV 게놈 각각의 염기서열 변화율은 1년당 1.4×10-5∼ 3.2×10-5이다.13이러한 변이율은 대부분의 다른 DNA 바이 러스보다 104배 높은 수치이지만, HIV (human immuno- deficiency virus)에 비해서는 102배 낮은 수치이다.14,15 한편, 항바이러스치료나, 개인의 면역반응에 의해서도 변이종이 발생될 수 있다. 그러나 이런 변이종들은 바이러스 자체의 증식과 사람들 간의 전파에 한계가 있어, 동일 지역에서 각 HBV 감염자 내의 혈중 대부분을 차지하는(dominant) 유전 자형은 염기서열에 차이가 적은 것으로 알려져 있다.16 그 러므로, HBV 의 염기 서열을 이용한 바이러스의 분류방법 인 유전자형 분류는 지역적 특성을 잘 반영한다고 생각되 고 이는 혈청형 분류와 비교를 연구한 보고에서도 잘 뒷받 침되어 있다.17
각 유전자형의 세계적 지역 분포를 살펴보면, A형은 전 세계적으로 분포하고 있고, B와 C형은 아시아, D형은 남유 럽, E형은 아프리카, F형은 미국 원주민과 폴리네시아, G형 은 미국과 유럽에 분포하고 있는 것으로 알려졌다.17 한편, 최근에는 각 유전자형에 대한 임상적 의미도 연구되어져 왔는데, A형은 precore 변이종 환자에서 인터페론에 반응이 좋은 것으로 알려졌고,18B형은 50세 이하의 성인에서 간세 포암의 발병률을 높이는 것으로 보고된 바 있다.19 C형은 다른 군에 비해 DNA 역가가 높고, 이는 e항원 양성의 건강 보유자들의 비율이 높다는 것을 의미한다는 보고도 있었으 며, 또 다른 군보다 좀더 광범위한 간 손상이 발견된다는 연구 결과20와 core promotor의 변이로 인해 인터페론에 덜 반응한다는 보고도 있었고,21D군은 급성 간염 환자에서 많 이 발견되었다.22
최근 들어 아시아 지역에서도 HBV 감염자를 대상으로 유전자형의 분포에 대한 결과가 보고되었다. 이를 살펴보 면 중국 상하이 지역에서는 A가 1.4%, B가 17.2%, C가 81.4%였으며, 여기서 C형은 심한 간질환과 의미 있는 관계
를 보이고, B형은 상대적으로 좋은 예후를 갖는다고 보고 하였다.23 일본의 경우에는 731명의 환자를 대상으로 역시 RFLP 방법으로 조사한 결과, A가 1.7%, B가 12.2%, C가 84.7%, D가 0.4%, 혼합형이 1.0%였고, 이들 유전자형은 지 역적으로 의미 있게 분포하고 있다고 발표하였다.24
본 연구 결과에서는 대상군 중 94%에서 PCR 증폭이 되 었고, 이들 모두에서 C형 유전자가 나타나 간질환들 간에 서 유전자형에 따르는 발생의 차이를 비교할 수는 없었지 만, 일반적으로 아시아 지역에 C형 유전자형이 많다는 연 구 결과는 일치하는 것을 알 수 있었다. 본 연구 대상 중 한 명에서 B와 C형 유전자가 동시에 검출되었는데, 이 환자는 37세 여자 환자로 e항원, 항체가 모두 음성이고, HBV DNA 수치가 측정되지 않았으며, 연구 기간 동안 생화학적 검사 수치가 정상인 건강 보유자였다.
염기서열을 이용한 유전자형 분류는 주로 계통적 분석 방법에 의해 시행되었는데, 현재까지 A에서 G 까지 7가지 유전자형이 알려져 있고, 각 형들 간에서 전체 염기서열 상 이율은 8.0% 이상이고, 각 형들 내에서 아형들 간의 상이율 은 5∼8% 미만이다. 한편, 각 형들 간의 S유전자의 염기서 열 상이율은 4.1% 미만인 것으로 알려져 있다.5,25 HBV 유전자형 분류는 기존의 고식적인 Neighbor-Joining 방법 을 사용한 계통적 분석 외에도, 제한효소 분절길이 다형 성 방법, 중합효소 연쇄반응 방법, 그리고 differential hybridization 등으로 시도되었다.9,26-28이중 RFLP를 이용한 방법은 서론에서도 언급하였듯이, 고식적인 계통적 분석에 비해 가격이 저렴하고, 시간이 적게 드는 장점이 있어, 대 량 선별검사시 비용 효과면에서 유리한 방법이다. 과거에 는 pre-S유전자를 사용한 RFLP 방법도 시행되었으나,29,30 S유전자 부위가 p유전자의 역전사 효소 유전자 부위와 공 유되는 부분으로 Pre-S부위보다 염기서열의 변이가 적어 더욱 안정적이기 때문에 유전자형 분류에 좀더 적절한 부 위로 생각된다.31 본 연구에서는 Mizokami 등의 유전자형 분류법을 이용하여 분류를 시행하였는데,9 5가지 제한효소 를 이용하여 HBV DNA의 S유전자를 반응시켰고, 각 유전 자형의 특성에 따라 나타나는 RFLP로써 구분을 하였다. 본 연구에서는 직접 전 염기서열을 통한 계통 분석은 시행하지 않았으나, 두 방법을 이용하여 동일률을 확인한 다른 연구 를 참조해보면 A형은 98.7%, B형은 100%, C형은 98.2%, D형은 93.0%, E형은 100%, F형은 100%로 RFLP 방법이 매우 높은 정확도를 가지고 있는 것으로 알려져 있다.26 따 라서 본 연구에서 나타난 C형 증례인 63예 중 1.8% 미만의 오차는 있을 것으로 판단된다. 한편, 상기 분류법에는 G군 을 분류하는 방법이 포함되어 있지 않으나, G군은 최근 주 로 미국과 유럽에서만 보고되며, 유병률이 11% 가량으로 보고되고 있고, 계통 분석상 E와 F군과의 상이도에 대해서 50
오성욱 외 10인. 경기, 서울 지역에서 조사된 B형 간염 바이러스 유전자형
만 연구되고있어, 본 연구의 결과에는 큰 영향을 미치지는 못할 것으로 생각되나 이에 대해서는 좀더 많은 연구가 필 요할 것으로 생각된다.7
결론적으로 본 연구에서는 처음으로 대량 선별검사에 유 리한 방법인 RFLP를 이용하여 우리 나라 일정 지역인 경 기, 서울 지역의 B형 간염 바이러스의 유전자형 분포 양상 에 대해 연구하였다. 그 결과 대상군의 대부분에서 유전자 형 C형인 것으로 나타났다. 이 연구를 바탕으로 좀더 넓은 지역의 대량 선별검사를 통한 유전자형 분포 양상과 이와 관련된 바이러스학적 임상적 의미는 앞으로의 연구 과제일 것으로 생각된다.
요 약
목적: B형 간염 바이러스(HBV)의 유전자형(genotype)은 A, B, C, D, E, F 그리고 G의 7가지로 알려져 있다. 유전 자형 분류 방법 중의 하나인 제한효소 분절길이 다형성 (restirction fragment length polypmorphism, RFLP) 방법은 고식적인 계통 분석 방법보다 간편하고, 비용이 저렴한 반면, 결과의 차이는 적다는 장점이 있다. 유전자형 분류 는 혈청형(serotype)분류에 비해 지역적 특이도가 높고, 각 질환과의 연관성도 높은 것으로 알려져 있으나, 아직 까지 우리 나라에서 유전자형의 분포에 대한 보고는 없는 실정이다. 이에 저자들은 RFLP를 이용하여 경기, 서울 지역에서 B형 간염 유전자형의 분포를 알아보고자 하였다.
대상 및 방법: 1999년부터 2000년까지 HBV 감염 환자 67명 을 대상으로 nested PCR을 이용하여 HBV DNA를 증폭 후 RFLP에 의해 HBV 유전자형을 분류하였다. 결과: 총 67예 중 63예(94.0%)에서 PCR 증폭이 되었고, 이중 62예(98.4%) 에서 유전자형 C형으로 나타났고, 나머지 1예(1.6%)는 B와 C형이 동시에 나타났다. HBV DNA 양성인 41예 중 2예 (4.9%)에서 증폭에 실패하였고, 음성인 26예 중 24예(92.3%) 에서 증폭에 성공하였다. 결론: 경기, 서울 지역에서는 HBV 감염 환자 중 C형 유전자형이 가장 많게 나타났다. 그러나 우리 나라의 전체적인 HBV 유전자형의 분포 양상과 이와 관련된 바이러스학적, 임상적 의미는 앞으로의 연구 과제 로 남아있다.
색인단어: B형 간염 바이러스 유전자형, 분절길이 다형성, 중합효소 연쇄반응
ACKNOWLEDGEMENTS
The author deeply thanks prof. Mizokami M. for confirming the HBV genotype which were uncertain by our test.
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