Light Microscopic and Laser Confocal Microscopic Study(III)

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노화된 마우스 피부에서 Squalene의 효과 : 광학현미경적 및 레이저 공초점 현미경적 연구(III)

광양보건대학 임상병리과

최완수

Effects of Squalene on the Skin of Aged Mice:

Light Microscopic and Laser Confocal Microscopic Study(III)

Choi, Wan Soo

Department of Clinical Pathology, Gwangyang Health College Chonnam, Korea

To evaluate the effects of squalene (SQ) on skin of aged mice, SQ was applied to the back skin of a 10 month-old ICR female mouse at 12 hour-intervals for 10 days. The expression of epidermal growth factor (EGF) and histologic alterations on the SQ-treated skin using under the of a light microscope and laser confocal microscopes were performed.

In the light microscopic observation, the development of a germ cell layer was weak in the normal aged skin, the number of the cells, however, started to increase after 2 days. The increase in the number of epidermal cells was directly proportional to the period of SQ treatment and the whole cell layers in epidermis were easily differentiated after 5 days of SQ treatment

In the laser confocal microscopic observation, the activity of EGF was increased with time after 24 hours of SQ treatment.

In summary, the application of SQ to the skin of aged mice could induce the increase in skin tissue expression of EGF, and promote germ cell differentiation. Therefore, it is suggested that SQ plays a major role in differentiation or renewal of skin tissue in aged mice.

Key Words: Squalene, Laser confocal microscope, Tissue, Light microscopic 임상병리검사과학회지 : 35권 제2호, 208-215, 2003

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I. 서 론

신체를 구성하고 있는 대부분의 장기는 나이가 증가함 에 따라 여러 가지 생리적 생화학적 기능의 변화로 인한 형태학적 변화가 수반된다. 피부의 노화과정은 노화 예정

교신저자 : 최완수, (우)361-763 전남 광양시 광양읍 덕례리 233-1 광양보건대학 임상병리과

Tel : 061-760-1443

E-mail : [email protected]

설, 유해인자에 의한 손상설로 나눌 수 있으며(Freedberg 등, 1999), 피부노화는 연령성, 내인성노화 및 태양광선에 의한 광인성 노화 등으로 대별할 수 있다고 하였다 (Oikarinen 등, 1990).

Squalene(hexamethyltetracosahexane C30H50 이하 SQ 라 함)은 6개의 이중결합을 포함하는 30개 탄화수소 사슬 로 연결되어 있으며 분자량은 410.70으로 -carotene과 구 조적으로 유사하다. SQ는 생체 내에서 cholesterol 합성과 정 중 생성되는 중간산물로 척추동물 및 식물 등에서 합

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성되며, 특히 심해상어(Centrophorusatromarginatus)의 간 에 많이 함유된 탄화수소이다(George, 1976). SQ는 cholesterol 합성과정 중 mevalonate의 인산화과정 후 farnesyl pyrophosphatase를 통과하면서 합성되고, SQ epoxidase와 lanosterol을 거쳐 cholesterol이 합성되는데 탄화수소 사 슬들이 이중결합을 갖고 있어 불안정하며, 쉽게 산화될 수 있다(Saint-Lenger 등, 1986). SQ이 식물에서는 올리브 기름에 가장 많이 함유되어 있고, 동물에서는 주로 간에 서 합성이 이루어지며 혈장을 비롯하여 피부, 피하지방조 직, 복부지방조직, 림프절, 동맥 내벽, 부신, 췌장 및 심장 근 등 신체의 광범위한 부위에 다량 포함되어 있다(Liu 등, 1976).

SQ의 정확한 작용기전은 아직 밝혀지지 않고 있으나 사람에서 식이성 SQ섭취는 cholesterol 합성과 low den- sity lipoprotein(LDL) apoB 대사의 활성을 증가시키며 (Miettinen 등, 1986), 흰쥐의 간에서는 3-hydroxy-3- methylglutaryl coenzyme A(HMG CoA) reductase활성을 감소시킨다고 하였다(Stranberg 등, 1989).

SQ의 유도물질 (2-aza-2-dihydrosqualene)이 cholesterol 합성 억제제로 작용하며, 화상으로 손상된 피부에서 기저 세포층의 세포분열 촉진이나(Rigal, 1992), 화상에서 발생 되는 유해산소의 제거로 피부재생 효과(Kohno 등, 1995) 등이 알려져 있다.

Neil 등(1993)은 노화지연 뿐만 아니라 조직의 회복이 나 재생과정 및 염증반응, 유사분열, 신생혈관형성, 합성 및 세포외 기질 등은 복잡한 생물학적 과정을 통해 이루 어진다고 하였다. 이런 조직의 재생에 개시와 재생 유지 에 peptide growth factor가 중요한 역할을 하는데, peptide growth factor인자는 in vitro에서는 이런 과정을 조절한다 고 알려져 있으며, in vivo에서는 상처회복에 있어서 중요 한 phase를 조절하는 peptide growth factor생성을 유도한 다고 알려져 있다. 대표적인 것으로 platelet derived growth factor(PDGF), transforming growth factor-β(TGF- β), epidermal growth factor(EGF), insulin like growth factor I(IGF-I), fibroblast growth factor(FGF) 등이 있다.

성장인자들의 작용기전은 내분비, 이소분비, 자가분비 및 수용체 결합을 통해 표적세포에 기능을 수행하고 있으며, EGF는 열에 안정하고 투석이 안되며, 생물학적 활성에 필요한 3개의 분자내 disulfide bond가 있는, 분자량이 6,045인 53개의 아미노산으로 구성된 폴리펩티드로 ala- nine, phenylalanine, lysine이 결여되어 있다(Taylor 등, 1972). 특히 표피재생과 관련된 EGF는 TGF-α, amphire-

gulin 및 heparin-binding EGF의 family를 형성하여 유사 한 구조적 기능을 가지고 있다. 그러나 SQ이 피부노화과 정에서 노화지연과정이 어떠한 과정을 통해 이루어지고 있는가에 대한 연구보고는 거의 없는 실정이다.

이에 본 실험에서는 노화된 마우스 피부 조직에 일정 기간 동안 SQ을 처리하였을 때 어떠한 변화를 보이는가 를 알아보고자, EGF의 발현정도를 파악하고 광학현미경 관찰과 Laser confocal microscope관찰을 통해 피부 노화 과정에서 SQ의 효과를 알아보고자 하였다.

II. 재료 및 방법

1. 실험동물

동물은 삼육실험동물센터에서 생산 공급하는 다산의 출산경험이 있는 10개월 정도(체중 35∼40g)의 ICR계통 의 노화된 암컷 mouse를 사용하였으며, 실험기간 중 실 내온도 20±2℃, 실내습도 60±5% 및 일주기 조명을 이용 하였고, 물과 사료(재일사료(주))를 자유롭게 공급하였 다.

2. 시약

Anti-human EGF monoclonal antibody는 R&D System (Minneapolis, USA)에서 구입하였고, horseradish per- oxidase(HRP) conjugated anibody와 enhanced chemillu- minant (ECL) kit와 nitrocellulose(NC) paper는 S&S (Schleicher & Schuell Co., Germany)와 Amersham사에서 각각 구입하였다.

Fluorescein isothiocynate(FITC)-conjugated anti-mouse IgG(Fab specific)는 Sigma사에서 구입하였다. 3-(N-mor- pholino)propanesulfonic acid(MOPS), acrylamid, bisacryl- amide, ethylene diamine teraacetic acid(EDTA), ethylene bis(oxyethylenenitrilo)-tetraacetic acid)(EGTA), bovine serum albumin(BSA), sodium dodecyl sulfate(SDS) 등의 시 약은 Sigma사와 Aldrich사로부터 구입 사용하였다.

3. 실험 동물군 및 처리방법

실험 동물군은 SQ을 처리하지 않은 정상대조군, SQ을 처리한 실험군으로 각각 분류하였다. SQ처리군은 12시간

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간격으로 10일 동안 하였고, 각 처리일군별로 5마리씩 배 정하였다. SQ처치는 실험동물을 등쪽에 3×3 cm 크기로 삭모한 후 삭모된 부위에 멸균된 면봉을 사용하여, SQ을 오전9시와 오후9시에 1일 2회 도포하였다. 각 일별로 경 추탈골로 안락사 시킨 다음 피부를 절개하여 각각 조직 처리 과정을 실시하였다.

4 광학현미경 관찰

절개된 피부조직을 1×1mm 크기로 세절한 다음 2.5%

glutaraldehyde(0.1M sodium cacodylate hydrochloride buffer, pH 7.4, 온도 4℃)에서 2시간 전고정 하였다. 동일 buffer를 사용하여 15분씩 3회 세척하였다.

1% osmium tetroxide 용액에서 2시간 후 고정하고, 동 일 buffer를 사용하여 15분씩 3회 세척하였다. 저농도 50% ethanol로부터 고농도 ethanol계열하에 탈수하고 propylene oxide를 사용하여 치환하였다.

Epon mixture를 만들어 propylene oxide와 1:1, 1:2로 3 시간 침투시켰으며, Epon mixture원액에서 overnight후 포매하였다.

35℃에서 12시간, 45℃에서 12시간, 60℃에서 24시간 열중합하였다. Epon block을 1μm로 박절하여 1% toluidine blue로 염색한 후 광학현미경으로 검경하여 사진촬 영을 하였다.

5. Immunoblot analysis

Immunoblot 분석은 Newhall 등(1982)이 보고한 방법에 준하여 실시하였다. NC paper로 전이가 끝난 후 NC paper상의 excess protein 결합부위를 blocking하기 위하여 tris-buffered saline tween 20(TBS-T); 20mM tris-base, 137mM NaCl, pH 7.6, 0.1% tween 20로 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 반응 후 2시간 동안 TBS-T 1:1000으로 희석한 anti-human EGF monoclonal antibody 25mL로 반 응시켰다. 과다한 antibody를 제거하기 위하여 NC paper 를 TBS-T용액으로 3회 세척하고 25mL의 TBS-T에 1:5000으로 희석한 HRP-conjugated sheep anti-mouse IgG 에서 1시간동안 반응시켰다. 반응 후 ECL(Amersham In- ternational Plc.) detection system을 이용하여 X-ray film 에 노출시키고 EGF 활성을 확인 분석하였다.

6. Immunohistochemistry

SQ을 처치한 노화 쥐의 피부를 시간별로 절개하여 면 역형광조직염색법을 실시하였다. 절개된 피부조직은 5×5 mm 크기로 세절한 다음 4% paraformaldehyde(0.1M phosphate buffer(PB), pH 7.4)에서 1시간동안 전고정시킨 후, 30% sucrose에서 하룻밤 반응을 실시하였다. Sucrose 반응 후 피부 조직을 O.C.T. compound를 이용하여 -20℃

로 냉동시키고, 20μm 두께로 동결절편을 실시하였다. 절 편들은 0.2M PB에서 4℃로 보관하면서 면역형광조직 염 색을 실시하였다. 절단한 피부조직을 gelatin으로 coating 한 slide에 부착시킨 후 실온에서 15시간 동안 건조시켰 다. 건조된 slide prechilled aceton으로 20분간 후고정하고, PBS 완충용액으로 10분간 2회 세척하였다. 세척 후 피부 조직절편이 위로 향하게 한 후 1:500으로 PBS 완충용액 에 희석한 primary antidody(anti-EGF monoclonal antibody) 100μL(1μg/mL)를 실온에서 1시간동안 반응시 키고 PBS buffer로 10분간 2회 세척하였다. 세척 후 1:150 으로 PBS 완충용액에 희석한 FITC-conjugate anti- Mouse IgG 100μL(1μg/mL)를 더하여 37℃에서 30분간 암실에서 반응을 실시하고 다시 PBS 완충용액로 10분간 세척하였 다. 피부조직을 mounting media(Sigma Co.)를 이용하여 mounting하고, 기초과학지원연구소 광주분소에 소재한 Laser Confocal Microscopic(LCM Leica TCS NT, Leuca Lasertec, Germany)를 이용하여 조직을 관찰하였다.

III. 결 과

1. 광학현미경 관찰

정상 노화 생쥐의 등쪽에서는 각질층, 과립층, 발아층 으로 구분되었다. 발아층의 배아세포들은 1층으로 관찰 되었는데 세포들이 매우 드물게 나타났다. 진피층에서는 많은 교원섬유들과 hair bulb를 구성하는 상피세포들이 관찰되었으며, 드물게 지방적들이 존재하였다(Fig. 1).

SQ처치 후 1일 경과군에서는 정상대조군에 비하여 과립 층의 세포들이 다소 증가하였다. 진피층과 접하고 있는 발 아층의 세포들은 기저막 위쪽에 일렬로 정열되어 나타났 는데 대조군에 비하여 다소 조밀하게 관찰되었다(Fig. 2).

SQ처치 후 5일 경과군부터 실험군의 피부는 각질층, 투명층, 과립층 그리고 발아층의 형태가 뚜렷이 관찰되기

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Fig. 1. The control group. Light micrograph of epidermis and dermis. Toluidine blue stain. X200

Fig. 2. The 2day group. Light micrograph of epidermis and dermis. Toluidine blue stain. X200

시작하였다. 과립층과 가시층은 2∼3 세포층으로 나타났 으며, 세포 수는 SQ 처치 시간이 경과함에 따라 두꺼워 져 7∼11층을 형성하고 있었다(Fig 3).

SQ처치 후 10일 경과군에서도 전형적인 각질층, 과립 층, 발아층들이 구분되었다. 가시층의 세포들도 3∼4층을 형성하였고, SQ처치 시간이 경과함에 따라 모든 층에서

세포의 수가 조밀하게 나타났다. 기저막 위에서는 다수의 배아세포들이 조밀하게 관찰되었다(Fig. 4).

2. 레이저 공초점 현미경적 관찰

EGF의 발현이 피부조직 중 어느 부분에서 발현되는지 확인하기 위하여 레이저 공초점 현미경으로 관찰한 결과 정상군에서는 EGF의 발현을 관찰할 수 없었으나(Fig. 5), SQ 처치후 24시간경과군에서는 정상대조군에 비하여 EGF의 발현이 서서히 나타나기 시작하였고(Fig. 6), 120 시간이 지난 피부조직부터 EGF의 발현이 더욱 더 증가하 였으며(Fig 7), 230시간 경과에서는 EGF의 발현 정도가 피부조직까지 강하게 발현됨을 확인할 수 있었다(Fig. 8).

IV. 고 찰

체벽을 덮고 있는 피부는 체액손실이나 물리적 손상에 대한 수동적 장벽으로서 역할뿐만 아니라 미생물에 대한 방어기능, 체온조절, 면역조절 및 표피의 항상성 유지에 도 중요한 역할을 하고 있다.

노화과정을 설명하는 가설들로는 유전자에 의해 생명 체의 노화와 수명이 예정되어 있다는 노화 예정설, 여러 가지 해로운 인자들에 의한 생체본질의 손상이 축적되어 노화에 이른 다는 유해인자에 의한 손상설로 나눌 수 있 다. 그중 유전자 가설과 유해인자에 의한 원인설이 가장 유력한 노화의 과정으로 받아들여지고 있다(Freedberg 등, 1999).

Oikarinen 등(1990)은 피부노화를 원인성에 따라 연령 성 또는 내인성 노화와 태양광선에 의한 광인성 노화로

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Fig. 5. Normal mouse skin. Laser confocal microscopic observation of immunofluorescence labelling with anti-EGF monoclonal antibody and FITC-conjugated anti-IgG. E, Epidermis, D, Dermis. X 100

Fig. 7. Squalene-treated mouse skin for 120 hrs. Laser confocal microscopic observation of immunofluorescence labelling with anti-EGF monoclonal antibody and FITC-conjugated anti-IgG.

E, Epidermis, D, Dermis. X 100

Fig. 6. Squalene-treated mouse skin for 24 hrs. Laser confocal microscopic observation of immunofluorescence labelling with anti-EGF monoclonal antibody and FITC-conjugated anti-IgG.

E, Epidermis, D, Dermis. X 100

Fig. 8. Squalene-treated mouse skin for 230 hrs. Laser confocal microscopic observation of immunofluorescence labelling with anti-EGF monoclonal antibody and FITC- conjugated anti-IgG. E, Epidermis, D, Dermis. X 100

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대별할 수 있다고 하였다.

피부노화는 내인성인자와 외인성인자로 나눌 수 있는 데 내인성인자로는 free radical, DNA 수복능의 변화, DNA복제 및 단백합성의 오류 등이 있으며, 외인성인자 에 의한 자외선 및 방사선, 돌연변이, 유발물질과 자극 등 으로 나눌 수 있다. 이러한 인자들에 의해 DNA, 단백질, 지질 같은 세포성분에 손상이 일어나고 시간이 지남에 따라 손상이 축적되어 세포기능이 떨어지며, 그 결과 노 화현상이 유발되기도 하며, 햇빛과 같은 만성적 노출에서 도 조기노화가 일어나기도 한다.

피부 노화과정에서 볼 수 있는 변화들로는 상피세포의 형태학적 변화와 더불어 각질층에서는 습윤 감소로 인한 거칠어짐과 주름 등이 두드러진다(Freedberg 등, 1981).

나이의 증가에 따라 각질세포와 기저세포의 형태학적 변 화와 함께 세포 수 및 상피층의 높이가 감소되는 것으로 알려져 있으며(Marks, 1981), 또 나이의 증가와 더불어 피부조직의 변화는 표피층의 두께가 점차 감소하며, 표피 -진피연접부위, 유두상진피, 망상진피 및 피하지방조직을 포함하는 피부의 모든 부분에서 구조적인 변화와 함께 기계적, 생화학적, 생리학적 변화가 일어난다고 하였다 (Smith, 1989).

Murai 등(1975).,은 사람과 흰쥐의 피부에서 나이에 따 른 노화과정에서 세포외 기질물질의 변화를 관찰한 결과 노화에 따라 감소가 됨으로서 피부의 두께가 전체적으로 얇아지고 탄력성 소실이 함께 온다고 하였으며, 피부상피 조직은 세포의 위축과 더불어 세포소기관의 형태학적 변 화로 상피층이 얇아진다고 하였다.

피부노화는 단순한 상피층의 변화에만 국한되는 것이 아니라 노화와 관련한 진피층의 변화에서도 교원섬유와 탄력섬유의 합성이 나이와 더불어 감소되고 특히 교원섬 유의 경우 피부전체 양의 약 1%정도가 감소한다고 하였 다(Miyahara, 1978). George 등(1976)은 SQ은 30개의 탄 소와 6개의 이중결합으로 된 β-carotene과 유사한 구조를 하는 isoprenoid compound로서 cholesterol합성 과정중 mevalonate의 인산화 과정후 farnselyl pyrophophatase를 통과하면서 합성되고 squalene epoxidase와 lanosterol을 거쳐 cholesterol 합성에 중간 생성물로 만들어지며 사람 에서는, 지방조직, 간, 소장, 골격근, 심근 및 동맥성 혈관 등 여러 조직에서 분포하고 있다고 하였으며, 특히 농도 가 높은 곳은 피부로 건조중량 1g당 475μg이고 지방조직 은 275μg정도이며, cholesterol 합성이 활발하게 일어나는 장소는 간에서 75μg, 소장에서도 42μg정도 분포되어 있

다고 하였으며, 또 동,식물에서 널리 분포하고 있는 불포 화지방산으로 식물에서는 SQ이 가장 풍부한 것은 olive 기름으로 1g당 7㎎정도이며, 동물에서는 심해상어의 간 에 많이 포함되어 있으며, 식품내에도 포함되어 있다고 하였다. 흰쥐의 경우 SQ 합성과 합성효소의 위치는 간세 포내 소포체와 microsome에서 이루어지며, 소수의 저지 방성 약물이나 식이요법에 따라 다양성을 보인다고 하였 다(Stamellous 등, 1993).

사람에게 SQ를 하루에 300 mg씩 3번 총 900 mg를 4 주동안 섭취 하였을 때 sterol balance 연구와 serum level 을 통하여 혈중 SQ, cholesterol level 및 cholesterol 합성 을 연구한 결과 섭취를 통한 SQ의 경우 60%가 흡수되었 으며, serum SQ level은 17배 증가되었지만, serum trigly- ceride과 cholesterol은 변하지 않았다고 하였으며(Stran- berg 등, 1990), SQ를 섭취하였을 때 cholesterol 합성과 LDL apoB대사의 활성을 증가시키며(Miettine 등, 1986), 흰쥐의 간에서는 HMG CoA reductase활성을 감소시킨다 고 하였다(Stranberg 등, 1990).

Kelly(1999)는 SQ이 피부의 기능적 측면에서 볼 때 과 산화에는 아주 민감하지 않으나, 자외선이나 기타 이온화 된 방사선에 노출되면서 만들어지는 지질과산화로부터 피부를 보호한다고 하였으며, 생쥐에서 충분한 SQ공급은 투여량에 따라서 세포성과 비특이성 면역반응이 크게 증 가한다고 하였다. 또한 식이로 충분한 공급이 이루어질 경우 cholesterol과 중성지방치를 감소시킨다고 하였다.

King 등(1983), 피부와 관련된 EGF에 대한 연구로 EGF 가 직접 각질형성세포를 자극하는지 혹은 기저세포들의 증식을 통하여 효과를 나타내는지는 확실하지 않으나 표 피의 증식과 비대를 일으키고, 유사 분열시 세포의 수와 DNA, RNA의 양, ornithine decarboxylase와 같은 표피효 소의 활성을 증가시켜 사람의 머리피부, 병아리의 배아 피부 및 토끼의 손상된 각막상피를 회복시킨다고 하였다.

Danilenko 등(1995),은 화상에 의한 피부손상에서 EGF, PDGF- BB, KGF 등은 화상치유 과정에서 재생인자로 관 여한다고 하였다.

곽 등(1992),은 생후 16∼18주된 백서의 등쪽 3㎝에 해 당되는 표피에 10초간 화상을 입힌 후 TGF-α가 표피재생 에 얼마나 영향을 미치는가를 알아보고자 EGF를 화상부 위에 도포하여 12시간마다 14일 동안 화상에 도포한 결 과 TGF-α군과 EGF군에서는 3일째부터 육아조직과 신생 혈관이 관찰되었으며, 10일째에는 표피재생이 완전히 이 루어졌다고 하였다.

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본 실험에서도 EGF의 발현이 피부조직 중 어느 부분 에서 발현되었는지 확인하기 위하여 LCM을 이용하여 면 역조직 형광염색을 실시한 결과 24시간 때에 이미 EGF 가 발현됨을 확인할 수 있었으며, Wenczak 등(1992),은 EGF와 TFG-α가 각질형성 세포들의 증식에 관여하고, 분 화를 촉진시킨다는 결론과 Rheinwald 등(1977),의 각질세 포의 유사분열을 촉진한다는 결론은 본 실험에서도 노화 된 피부 즉, 거의 휴지상태의 피부를 분열기 상태의 피부 로 바꾸어 활성화되는 점은 거의 유사하였다.

King 등(1983),과 Byyny 등(1972),은 EGF인자가 피부 조직이나 기타조직에서 대사에 단백질과 RNA합성을 촉 진하고 리보솜에 단백질 합성을 증가시켜 세포분열을 촉 진시킨다고 하였으며, 본 실험에서 나타난 노화된 마우스 피부에 SQ처치시 피부내 EGF발현 증가와 함께 상피조직 의 기저층에서 배아세포의 분열증식 증가 등의 광학현미 경 관찰과 LCM의 선행연구자들의 결과를 종합하여 볼 때 여러 피부재생인자 중 하나인 SQ이 EGF를 활성화시 키고, EGF등의 활성화에 의해 세포증식을 활성화시켜 노 화된 피부를 재생하는 것으로 사료된다.

그러나 SQ이 표피의 화상치유나 피부노화과정을 실제 로 지연시키고 있는지 또 피부에서의 표피재생 및 세포 증식에 관여하는 여러 인자에 대해 보다 폭 넓은 연구가 있어야 한다고 사료된다.

V. 결 론

노화된 생쥐 피부조직에 SQ이 미치는 영향을 알아보 고자 10개월 된 ICR계통 암컷 생쥐의 등쪽에 3×3cm 크 기로 삭모한 후 SQ을 12시간 간격으로 10일간 처리하여, 피부조직 내 광학현미경과 Laser Confocal Microscopic을 통한 조직의 변화를 관찰한 결과 다음과 같은 결론을 얻 었다.

광학현미경 관찰 결과, 노화된 생쥐의 상피조직은 발아 층의 배아세포들이 성글게 나타났으나, SQ 처치 후 2일 경과군부터 세포의 수가 증가하기 시작하였으며, 5일 경 과군부터 표피조직의 모든 세포층이 구분되었다.

Laser confocal microsocpic 관찰결과, EGF 활성은 대 조군에서는 발현되지 않았으나, SQ 처리 후 24시간 경과 군부터 발현되기 시작하여 처리기간에 비례하여 증가하 였다.

이와 같은 결과는 SQ 처리가 노화된 생쥐의 피부에서

조직내 EGF의 발현을 증가시켰으며, 조직학적 결과 발아 세포의 증가 및 분화가 활성되는 것으로 보아 노화된 생 쥐의 피부 분화 또는 재생에 영향을 미치는 것으로 사료 된다.

참 고 문 헌

1. Freedberg IM, Eisen AZ, Wolff K, Austen KF, Goldsmith LA, Katz SI. Aging of skin. Fitzpatrick's Dermatology in General Medicine. 5th McGraw Hill, New York. p1697-1706, 1999

2. Oikarinen A. The aging of skin, chronoaging versus photoaging. photoimmunol Photomed 7: 3-4, 1990 3. Saint-Lenger D, Bague A, Coheu E, Chivot, M. A

possible role for squalene in the pathogenesis of acne I. In vitro study of squalene oxidation. Br J Der- matol 114: 535-542, 1986

4. Liu GCK Ahrens Jr EH, Screibman PH, Crouse JR.

Measurement of squalene in human tissues and plasma. J Lipid Res 17(1):38-45 1976

5. Miettinen TA, Kesaniemi YA. Cholestrol balance and lipoprotein metabolismin man. In bile acids and atherosclerosis. p113-155, Raven Press, New York 1986

6. Strandberg TE, Tilvis RS, Miettinen TA. Variations of hepaticcholesterol precursors during altered flows of endogenous and exogenous squalene in the rat.

Biochem Biophy Acta 1001: 150-156, 1989

7. Rigal C, Pieraggi MT, Serre G, Bouissou H.

Optimization of a model of full-thickness epidermal burns in the pig and immunohistochemical study of epidermodermal junction regeneration during burn healing. Dermatology 184: 103-110, 1992

8. Kohno Y, Egawa Y, Itoh S, Nagaoka S, Takahashi M, Mukai K. Kinetic study of quenching reaction of singlet oxygen and scavenging reaction of free radical by squalene in n-butanol. Biochim Biophys Acta 1256(1): 52-56, 1995

9. Neil T, Bennett Gregory, Schultz S. Growth Factors and Wound Healing: Biochemical Properties of Growth Factors. Am J Surgery 165: 728-737, 1993

(8)

10. Taylor JM, Mitchell WM, Cohen S. Epidermal growth factor physical and chemical properties. J Biol Chem 247:5928, 1972

11. Marks R. Measurement of biological aging in human epidermis. Bri J Dermatol 104: 627-633, 1981 12. Smith L. Histopathologic characteristics and ultra-

structure of aging skin. Cutis 43: 414-424, 1989 13. Murai A, Miyahara J, Schiozqwa S. Age-related

variations in glycosylation ofhydroxylysine in human and rat skin collagens. Biochim Biophys Acta 404:

345-348, 1975

14. Miyahara T, Shiozawa S, Murai A. The effect of age on amino acid composition of human skin collagen. J Gerontol 33: 498-503, 1978

15. George CK, Liu EH, Ahrens Jr, Paul H, Schreibman, Crouse John. R. Measurement of Squalene in human tissues and plasma : Validation and application. J Lipid Res 17: 38-45, 1976

16. Stamellos KD, Shackelford JE, Shechter I, Jiang G, Conrad D, Keller GA, Krisans SK. Subcellular localization of squaline synthase in rat hepatic cells.

Biochemical and immunochemical wvidence. J Bio Chem 268: 12825-12836, 1993

17. Kelly GS. Squalene and its potential clinical uses.

Altern med Rev 1: 29-36, 1999

18. King LE, Carpenter GF. Epidermal growth factor. In Biochemistry and Physiology of the Skin. Vol. 1.

Goldsmith, L.A. : Press, Oxford Univ 269-281, 1983 19. Danilenko DM, Ring BD, Tarpley JE, Morris B, Van

GW, Morawiecki A. Growth factors in porcine full and partial thichness burn repair Am J pathol 147:

1261-1277. 1995

20. Wencxak BA, Lynch JB, Nanney LB. Epidermal growth Factor receptor distribution in burn wounds J Clin Invest 90: 2392-2401. 1992

21. Rheinwald JG, Green H. Epidermal growth factor and multiplication of culture human epidermal keratinocytes. Nature 265: 421, 1977

22. Byyny R, Orth DN, Cohen S. Radioimmunoassy of epidermal growth factor. Endocrinol 90: 1261-1266, 1972