Effect of Mixed Extract of Ephedrae Sinica and Fibrosum Gypsum on Differentiation of Preadipocytes and Obesity of Rats

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麻黃과 石膏 혼합물이 지방전구세포 분화와 흰쥐의 비만에 미치는 영향

기영범⋅김대훈⋅양미성⋅강대희⋅김선종⋅최진봉

동신대학교 한의과대학 한방재활의학과교실

Young-Bum Kee, K.M.D., Dae-Hun Kim, K.M.D., Mi-Sung Yang, K.M.D., Dae-Hee Kang, K.M.D., Sun-Jong Kim, K.M.D., Jin-Bong Choi, K.M.D.

Department of Rehabilitation Medicine of Korean Medicine, College of Korean Medicine, Dong-Shin University

RECEIVED June 19, 2014 ACCEPTED July 11, 2014

CORRESPONDING TO

Mi-Sung Yang, Department of Korean Rehabilitation Medicine, Dongshin Hospital, 331, Isu-ro, Suncheon 540-978, Korea

TEL (061) 729-7114 FAX (061) 725-1717 E-mail [email protected]

Objectives This study was designed to evaluate the effects of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum extract on obesity by using 3T3-L1 cells and high fat diet rats.

Methods In vitro, Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum extract (50, 100, 200, 500 μg/

ml) were added in 3T3-L1 cells. Cytotoxicity was measured by MTT assasy. Adipocyte differentiation was measured by Oil Red O staining, GPDH activity and C/EBPα protein expression. In vivo, Sprague-Dawley rats were divided into 5 groups : Normal diet group (Normal group), taken high fat diet and no treatment group (Control group), taken high fat diet and orally administered Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum extract daily (Group I:

50 mg/kg, Group II: 100 mg/kg, Group III : 200 mg/kg, oral). For 6 weeks of administration, body weight and the amount of food intake were measured once a week. After administration, blood analysis (AST, ALT, T-Bilirubin, BUN, RBC, Hb, HCT), serum lipid level (triglyceride, Total cholesterol, HDL, LDL), serum leptin level, epididymal adipose tissue weight and histological finding of liver were estimated.

Results In vitro, The cytotoxicity was not significant. 3T3-L1 cell’s differentiation was sig- nificantly decreased in Oil Red O staining, GPDH activity and C/EBPα protein expression.

In vivo, Body weight and the amount of food intake, AST, ALT, Total cholesterol, TG, LDL, serum leptin, epididymal adipose tissue weight showed significant decrease in group I, group II and group III. There were no significant difference in T-bilirubin, BUN, RBC, Hb and HCT between all groups. HDL showed significant increase in group I, group II and group III.

In histological finding of liver tissue, there were decreased adiposity and cytopathic effect in group I, group II and group III.

Conclusions It is suggested that Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum extract can be used in the treatment of obesity. (J Korean Med Rehab 2014;24(3):11-27)

Key words Obesity, 3T3-L1 cell, Rats fed high fat diet, Ephedra Sinica, Fibrosum Gypsum

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서론»»»

비만은 에너지대사의 불균형으로 에너지 섭취가 에너 지 소비보다 클 때 일어나는 것으로¹⁾, 세계보건기구 (World Health Organization, WHO)는 건강을 해칠 정도 로 비정상적 또는 과도한 지방질이 지방조직에 축적되는 상태라고 정의하였다²⁾. 2009년에 발표 된 질병관리본부 의 국민건강영양조사에 따르면 신체질량지수(body mass index; BMI)가 25 이상인 성인의 비만 유병율이 2007년 31.7%로 1998년 26.0%에 비해 증가하였고 10년마다 5%

씩 늘어나는 추세를 보여 공중보건학적으로 중요한 문제 로 대두되고 있다³⁾.

비만의 기본적인 치료 방법은 식사, 운동 및 행동수정 요법이다⁴⁾. 하지만, 생활습관을 교정하는 일이 쉽지 않을 뿐만 아니라, 식이요법, 운동요법만으로 체중을 감량하는 데는 한계가 있어서, 많은 경우에 약물치료가 필요하게 된다⁵⁾. 그런데 비만에 사용하는 많은 약물들이 부작용을 동반하고 장기간 사용에 대한 안전성이 확보되지 않아⁶⁾, 한약을 이용한 새로운 비만 치료제 개발이 활발히 연구되 고 있다^7-9).

한의학에서 비만은 󰡔素問ㆍ通評虛實論󰡕에서 “肥貴人, 則膏粱之疾也”라고 하였고, 󰡔素問ㆍ奇病論󰡕에서 “人必數食甘味而多肥也”라고 하여 처음 언급되었고, 비만을 肥, 肥胖, 肥人, 肉人, 肥貴人 등으로 표현하고 있으며, 원인 으로는 甘味와 膏粱厚味 등을 섭취하여 발생한다고 하였 다¹⁰⁾.

이번 실험에서 사용된 麻黃과 石膏는 임상적으로 비만 에 많이 활용되며 실험적으로도 비만에 유의한 효과가 있 다고 보고된^8,9,11-13) 大靑龍湯, 越婢湯, 越婢加朮湯, 麻杏甘石湯의 주요 구성 약물이다. 麻黃은 麻黃科 (Ephedraceae)에 속한 다년생 초본인 草麻黃 또는 동속 식물의 草質莖으로, 性은 溫하고, 味는 辛微苦하고, 發汗散寒, 利水消腫, 宣肺平喘하는 효능이 있다. 石膏는 황산 염류에 속한 광물인 천연의 石膏로 주로 함수황산칼슘 (CaSO4ㆍ2H20)을 함유하는 것으로, 性은 大寒하고, 味는 辛甘하며, 淸熱瀉火, 除煩止渴의 효과로 肺胃氣分의 實熱 을 淸解하는 要藥이 된다¹⁴⁾. 비만 치료에 있어 麻黃은 개 별약물로서도 많은 연구가 이루어지고 있지만^15-18), 石膏 의 비만에 대한 연구는 아직까지 잘 이루어지지 않은 실 정이다.

이에 저자는 麻黃과 石膏 혼합물의 지방세포의 분화 억제 및 항비만에 미치는 영향을 알아보기 위해, 3T3-L1 지방전구세포를 이용하여 약물의 세포독성, 세포내 Tri- glyceride (TG)의 축적, GPDH (Glycerol-3-phosphate dehydrogenase) 활성, 유전자 발현을 분석하고, 고지방 식이로 비만이 유도된 흰쥐의 체중 및 식이섭취량, 혈액 학적 검사(AST, ALT, T-BIL, BUN, RBC factor), 혈청지질 농도(TG, Total cholesterol, LDL, HDL), 혈중 Leptin 농 도, 부고환주위지방 조직, 그리고 간의 조직학적 변화 등을 관찰하여 유의한 효과를 얻었기에 이에 보고하는 바이다.

대상 및 방법»»»

1. 재료 및 약재

1) 재료 및 시약

본 실험에 사용된 Mouse fibroblast 3T3-L1 preadi- pocyte는 한국세포주은행(Korean cell line bank, Seoul, Korea)에서 분양받았다. 지방세포의 배양에 사용된 Dul- becco’s modified Eagle’s medium (DMEM), phosphate buffered saline (PBS), penicillin-streptomycin (P/S)은 GIBCO (BRL Life Technologies, Grand Island, NY, USA)에서 구입하였고, fetal bovine serum (FBS), trypsin-EDTA, insulin, dexamethasone (DEX), isobutyl methylxanthine, Oil red O는 Sigma(Sigma chemical Co., St Louis, MI, USA) 제품을 사용하였다. C/EBPα (SC-61) primary antibody와 goat anti-mouse IgG (sc-2008) sec- ondary antibody는 Santa Cruz Biotechnology (USA)에서 구입하였고, β-actin primary antibody는 Cell signaling, goat anti-rabbit IgG (A-3937)은 Sigma (Sigma chemical Co., St Louis, MI, USA)에서 구입하여 사용하였다.

2) 3T3-L1 세포배양

3T3-L1 지방전구세포의 배양은 10% fetal bovine serum (FBS, Sigma chemical Co., St Louis, MI, USA)과 1% penicillin-streptomycin (P/S, Gibco Co., USA)이 첨 가된 Dulbecco's Modified Eagle’s medium(DMEM, Gibco Co., USA) 배지를 사용하여 37^oC, 5% CO2 조건에 서 배양하였다. 세포는 100 mm plate에 70% 정도에서

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Component Normal diet High fat diet

Beef tallow - 205.0

Casein 200.0 200.0

Methionine 3.0 3.0

Starch 150.0 150.0

Sucrose 500.0 345.0

Cellulose 50.0 50.0

Corn oil 50.0 -

Salt mixture 35.0 35.0

Vitamine mixture 10.0 10.0

Choline bitartrate 2.0 2.0

Fat%(Calories) 11.7 40.0

Table I. The Composition of Experimental Diet (g/kg) phosphate buffered saline (PBS, Gibco Co., USA)로 세 척한 후, 0.25% trypsin-EDTA (Sigma chemical Co., St Louis, MI, USA) 용액을 넣어 37^oC, 5% CO2 조건에서 5분 간 정치한 후 세포를 탈착시켜 계대 배양하여 유지하였다.

3) 3T3-L1 지방전구세포의 분화 유도

3T3-L1 지방전구세포의 분화 유도를 위해 100 mm plate에 2×10⁵ cells/plate로 분주 하고 10% FBS와 1%

P/S가 첨가된 DMEM 배지를 처리한 후 100% confluency 시점이 되기까지 4일 동안 배양하였다. Confluent 상태에 서 분화유도제인 MDI (0.5 mM isobutyl methylxanthine, 1 μM dexamethasone, 5 μg/ml insulin)와 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 처리하여 분화를 2일 동안 유도하 였다. MDI를 처리하고 2일 후에 5 μg/ml insulin (post-MDI)과 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지로 이틀 동 안 더 배양하였다. 그 후 2일마다 10% FBS와 1% P/S가 포함된 DMEM 배지로 교환하여 4일 동안 세포를 분화시 켰다. 분화 유도 동안 麻黃과 石膏 혼합물이 지방세포 분 화에 미치는 영향을 관찰하기 위해 여러 농도(50, 100, 200, 500 μg/ml)로 각 배양액에 처리하였다.

4) 동물

본 연구에서는 Sprague-Dawley계 흰쥐(수컷, 대한실험 동물, 한국)를 1주일 간 적응시킨 후 실험에 적용하였다.

사육실의 온도는 25±1^oC로 하였고, 습도는 55±10%를 유지하였으며, 명암은 12시간 주기로 조절하였다. 사료와 물은 동일조건에서 충분히 섭취하도록 공급하였다.

5) 사료

정상식이군의 식이사료는 일반사료(삼양주식회사, 한 국)를 공급하여 6주간 사육하였고, 비만 유도를 위한 식 이사료는 beef tallow를 함유한 고지방식이인 AIN-76 (high fat diet #100496, Dyets Inc., Bethlehem, PA, USA)을 사용하여 6주간 공급하여 비만 유발과 함께 각 용량에 따른 麻黃과 石膏 혼합물 분말을 투여하였다 (Table I).

6) 약재

본 실험에서 사용한 麻黃(Ephedra Sinica)과 石膏(Fibro- sum Gypsum)는 동신대학교 부속 광주한방병원에서 구 입한 후 정선하여 사용하였다. 麻黃 120 g과 石膏 120 g 을 혼합하여 총 240 g의 약물을 증류수 1,500 ml와 함께 2시간 동안 가열하여 얻어진 전탕액을 여과지로 여과한 다음, 5,000 rpm으로 30분간 원심분리 하여 상층액을 추 출하였다. 그 후 감압 농축기(Rotary vacuum evaporator, EYELA Co., Japan)에 넣어 97 ml로 감압 농축한 다음 freeze aryer (ILSHIN Co., Korea)로 동결 건조하여 최종 적으로 47.5 g (수득율 19.8%)을 얻어 검액으로 사용하였 다.

냉동 건조하여 분말로 제조한 후 麻黃과 石膏 혼합물 분말을 50, 100, 200 mg/kg씩 증류수에 용해하여 농도별 로 6주간 1일 1회 경구 투여하였다.

2. 방법

1) 3T3-L1 지방전구세포 분화 억제(in vitro) (1) 세포독성 측정

본 실험에서 麻黃과 石膏 혼합물 시료의 첨가 농도에 따른 세포독성을 알아보기 위해 MTT assay를 이용하여 측정하였다. 지방전구세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지로 배양한 후 96-well plate에 1×10⁴ cells/well의 농 도로 100 μl씩 분주하여 24시간동안 배양하였다. 24시간 배양 후 배지를 제거하고 DMEM 배지에 시료를 농도별로 희석하여 100 μl씩 첨가하고 24시간이 지난 후, 배지를 제거하고 MTT[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl- tetrazolium bromide]를 PBS (pH 7.4)에 5 mg/ml의 농도 로 용해시켜 각 well에 분주하고 4시간 동안 반응 시킨

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Treatment Dose (mg/kg, oral) Diet Injection vol. (ml/kg, D.W.) No. of animal

Normal - Normal diet 10 16

Control - AIN-76 diet 10 16

Group I 50 AIN-76 diet 10 16

Group II 100 AIN-76 diet 10 16

Group III 200 AIN-76 diet 10 16

Table II. Classification of Experimental Groups

후 배지를 완전히 제거하였다. DMSO를 이용하여 생성된 적자색의 formazan 결정을 용해시킨 후, ELISA reader (Bio-Rad, Hercules, Calif., USA)를 이용하여 540 nm에 서 흡광도를 측정하였으며 실험은 3번 측정한 값을 통계 학적으로 분석하였다.

(2) 지방세포 분화

① Oil Red O 염색

지방세포로의 분화 여부와 지방 축적 억제 정도를 알 아보기 위하여 Oil Red O 염색을 실시하였다. 분화 유도 가 끝나면 세포를 PBS로 2회 세척하고, 10% formalin 용 액으로 4^oC에서 1시간 동안 고정한 다음 증류수를 이용 하여 3회 세척하였다. 세척한 세포는 Oil Red O 용액으 로 1시간 동안 염색한 후, 염색액을 제거하고 증류수로 3 회 세척한 다음 증류수를 well에 채우고 현미경으로 관찰 하였다.

② GPDH(Glycerol-3-phosphate dehydrogenase) 활성 측정

분화 유도가 완료된 후, 세포를 ice-cold PBS로 2회 세 척하여 50 mM Tris, 1 mM EDTA (pH 7.5) and 1 mM β-mercaptoethanol이 첨가된 extraction buffer로 세포를 용해시켰다. 용해된 세포는 13,000 rpm, 4^oC에서 45분간 원심분리 하였다. 단백질의 농도는 Bradford¹⁹⁾ 방법을 통 해 측정하였다. 상층액에는 125 mM Triethanolamine-HCl (pH 7.5), 2.5 mM EDTA, 0.16 mM NADH, 0.36 mM dihydroxyacetone phosphate, 그리고 0.125 mM β- mercaptoethanol이 첨가된 reaction mixture를 넣어 반응 시켰다. GPDH의 활성은 dihydroxyacetone phosphate에 의한 NADH의 산화정도를 측정함으로서 확인하였다. 효 소 활성은 units of activity/mg protein으로 표현하였다.

③ Western blot 분석

실험이 종료된 세포를 PBS로 2회 세척하고 lysis buffer (Promega, Madison, WI, USA)를 넣고 4^oC에서 10분간

용해시켰다. 세포를 수거하여 13,000 rpm, 4^oC에서 15분 간 원심분리 하여 상층액을 회수하고 Bradford¹⁹⁾ 방법을 이용하여 단백질을 정량하였다. 각각의 상층액에서 단백 질 30 μg을 취하여 loading buffer (60 mM Tris, 25%

glycerol, 2% SDS, 0.5% 2-mercaptoethanol, 0.1% bro- mophenol blue)와 혼합하여 95^oC에서 10분간 가열한 후, 10% SDS-polyacrylamide (PAGE)를 이용하여 전기영동하 고 이를 nitrocellulose membrane (Bio-rad, 0.2 μm pore size, USA)에 transfer 시켰다. 이후에 membrane은 pon- ceou (Sigma) 용액과 10분간 반응시킨 후, 5% 무지분유 가 첨가된 TTBS (10 mM Tris, 150 mM NaCl, 20%

tween 20) 용액에 넣고 상온에서 1시간 동안 blocking 시켰다. TTBS 용액으로 10분간 3회 세척한 후 1차항체 C/EBPα (Santa Cruz), β-actin (Cell Signaling)은 1:1000으로 각각 1시간 동안 반응시킨 다음에 다시 TTBS 용액으로 10분간 3회 세척하였다. 그 다음 peroxidase가 포함된 2차항체 goat anti-mouse IgG (Santa Cruz), goat anti-rabbit IgG (Sigma)를 각각 1:5000으로 1시간 동안 반응시켜 enhanced chemical luminescene (RPN 2106, Amersham, Piscataway Co, USA)를 이용하여 방사선 필 름에 membrane을 노출시켜서 밴드(band)를 얻어 확인하 였다.

2) 비만 유도 흰쥐의 항비만 효과(in vivo) (1) 실험군 및 麻黃과 石膏 혼합물 투여

실험군은 정상식이군, 고지방식이군(비만 유도 대조 군), 고지방식이와 동결 건조된 麻黃과 石膏 혼합물 분말 50, 100, 200 mg/kg 투여군으로 총 다섯 개의 군으로 구 분하였다. 각 실험군은 무작위로 16마리씩 분류하여 6주 간 고지방식이를 공급하면서 시험물질을 각각 50, 100, 200 mg/kg 농도로 증류수에 용해하여 1일 1회 일정한 시 간에 경구 투여하였으며, 정상식이군과 비만 유도 대조군

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은 시험물질을 제외한 생리식염수를 투여하였다(Table II).

(2) 체중 및 식이섭취량 측정

실험기간동안 체중변화를 관찰하기 위해 체중계는 전 자저울(Dragon 204/S, Mettler Toledo, USA)을 사용하여 시험물질 투여 개시 직전 및 개시 후 실험기간인 6주 동 안 매 주마다 동일한 시간에 주 1회씩 측정하였고, 식이 섭취량을 관찰하기 위해 rat metabolic cage (정도P&P, 한국)를 사용하여 주 1회씩 6주간 측정하였다.

(3) 혈액채취

실험이 종료된 후에 흰쥐를 경추탈골 시킨 후 심장 천 자로 약 3 ㏄ 정도의 혈액을 채취한 다음 원심분리기로 3,500 rpm에서 10분간 원심 분리하여 혈청 및 혈장을 분 리한 후 분석까지 −70^oC의 냉동고에 넣어 보관하였다.

(4) 혈액학적 검사

간과 신장, 조혈 작용 등에 미치는 영향을 관찰하기 위 하여 AST (aspartate aminotransferase), ALT (alanine aminotransferase), T-BIL (total bilirubin), BUN (blood urea nitrogen)은 혈청자동분석기(RM 2060-18, Eltec Co, Italy)를 이용하여 측정하였고, 채혈한 혈액을 항응고제 EDTA-2K가 함유된 튜브에 넣어 자동혈액분석기(RM 2060-18, Eltec Co, Italy)를 이용하여 혈액학적 RBC (red blood cell), Hb (hemoglobin) 및 HCT (hematocrit)을 측정하였다.

(5) 혈청 지질 농도 측정

분리한 혈청을 이용하여 Total cholesterol은 Cholesterol reagent (Bayer, USA), TG는 TG reagent (Bayer, USA), 고밀도 지단백(high density lipoprotein; HDL)은 direct HDL-Cholesterol (Bayer, USA) kit, 저밀도 지단백(low density lipoprotein; LDL)은 LDL-Cholesterol (Roche, Germany) kit를 사용하여 측정하였다.

(6) 혈중 Leptin 농도 및 지방 조직량 측정

혈청 내 Leptin 측정은 rat leptin kit (R&D System, Inc., MN, USA)로 측정하였다. 채취한 지방조직의 무게 를 조사하기 위해 혈액을 채취한 후 부고환 주위지방을 조심스럽게 적출하여 생리식염수로 세척한 다음 여과지 로 수분을 제거한 후 지방조직의 중량을 측정하였다. 지 방조직의 중량은 전자저울(Dragon 204/S, Mettler Toledo, USA)을 사용하여 0.01 ｇ까지 측정하였다.

(7) 간의 조직학적 관찰

총 6주의 실험 종료 후 산소와 질소가 각각 3:7로 혼합 된 2% 엔플루란(Isoflurane, 중외제약, 한국)을 사용하여 흡입마취 후 수술대에 고정하고 흉강을 열고, 심장의 좌 심실을 통하여 0.05 M PBS (phosphate buffered saline) 와 4% formalin으로 전고정을 실시한 후 간조직을 적출 하였다. 각 실험군 별로 적출한 조직은 10% 중성 formal- in에 48시간 고정하여 통상적인 H & E 염색을 실시하였 다. Xylene과 알코올을 이용하여 탈파라핀과 함수 과정을 거친 후 흐르는 물에 3분간 수세하였다. Hematoxylin 용 액에 5분간 핵 염색 후 다시 수세하여 Eosin 용액으로 3 분간 세포질 염색을 실시하였으며, 알코올 농도 순으로 탈수과정을 거친 후 Xylene을 이용한 청명과정을 거친 다음, 봉입을 실시하였다. 봉입한 조직을 광학현미경 (Olympus BX50, Olympus Optical Co., Japan)을 이용하 여 간 조직을 관찰하였다.

3. 통계

통계학적 분석은 SPSS 14.0 ver. for Windows^Ⓡ을 사 용하였으며, 각 실험 결과값에 대한 평균 및 표준편차를 산출하였다. 비만에 따른 麻黃과 石膏 혼합물의 효과 검 정은 측정시기에 따른 차이 비교를 위해 일원배치 분산분 석(one-way ANOVA)을 시행하였고, 사후검정(post hoc) 은 Tukey’s HSD multiple range test를 실시하였다. 분석 시 유의수준은 α=0.05로 설정하여 검정하였다.

결과»»»

1. 3T3-L1 지방전구세포 분화 억제(in vitro)

1) 세포독성 측정

麻黃과 石膏 혼합물의 농도에 따른 3T3-L1 세포의 생 존율(cell viability)은 시료를 투여하지 않은 대조군 및 각 처리 농도에 따른 비교에서 유의한 차이를 나타내지 않았 다(Table III)(Fig. 1).

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Fig. 1. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum on cytotoxicty in 3T3-L1 cells.

Values are showed mean±SD.

Tested by one-way ANOVA and Tukey’s HSD multiple range test.

Fig. 2. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum on fat accumulation in 3T3-L1 cells.

(A) Control (non-treated). (B) Addition of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum 50 μg/ml. (C) Addition of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum 100 μg/ml. (D) Addition of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum 200 μg/ml.

Control 50 μg/ml 100 μg/ml 200 μg/ml p

GPDH activity 26.93±1.06 21.34±1.93* 19.48±0.85^† 15.09±0.92^†‡§ .000^∥

Tested by one-way ANOVA (^∥p＜.001) and Tukey’s HSD multiple range test.

Statistically significant compared with control group (*p＜.01, ^†p＜.001).

Statistically significant compared with 50 μg/ml (^‡p＜.01).

Statistically significant compared with 100 μg/ml (^§p＜.05).

Table IV. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum on GPDH Activity in 3T3-L1 Cells (units of activity/mg protein)

Control 50 μg/ml 100 μg/ml 200 μg/ml 500 μg/ml p

Cell viability 100.00 99.38±0.77 99.13±1.28 98.73±0.93 98.64±0.89 .384

Table III. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum on Cytotoxicty in 3T3-L1 Cells (%)

2) 지방세포 분화에 미치는 영향 (1) Oil Red O 염색

시료를 처리하지 않은 대조군은 세포 내에 무수히 많 은 작은 지방구가 생성된 것을 확인할 수 있었다. 또한 농도별로 麻黃과 石膏 혼합물을 배양액 중에 첨가했을 때 세포의 성장 및 지방구의 생성이 농도에 의존적으로(50, 100, 200 μg/ml) 감소됨을 확인하였다(Fig. 2).

(2) GPDH 활성

분화유도 6일 후 GPDH 활성을 측정한 결과 시료를 투 여하지 않은 대조군과 비교하여 50 μg/ml 투여군(p＜

.01), 100 및 200 μg/ml 투여군(p＜.001)에서 유의한 차

이를 나타냈다(Table IV)(Fig. 3).

(3) 지방분화 관련 단백질 발현에 미치는 영향 C/EBPα의 발현에 미치는 영향을 관찰한 결과 각각의 농도에 의존적으로(50, 100, 200 μg/ml) 단백질 발현이 감소됨을 확인하였다(Fig. 4).

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* †

†‡§

Fig. 3. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum on GPDH activity in 3T3-L1 cells.

Tested by one-way ANOVA (^∥p＜.001) and Tukey’s HSD multiple range test.

Statistically significant compared with control group (*p＜.01,

†p＜.001).

Statistically significant compared with 50 μg/ml (^‡p＜.01).

Statistically significant compared with 100 μg/ml (^§p＜.05).

pre* 1 week* 2 week* 3 week* 4 week* 5 week* 6 week*

Normal 231.15±2.21 252.85±3.07 266.16±1.95 280.41±2.09 295.90±1.73 309.81±1.63 322.56±1.99 Control 312.64±2.21^c) 323.76±2.35^† 335.18±2.23^† 355.44±2.88^† 365.86±2.64^† 387.00±7.63^† 409.41±4.54^† Group I 309.93±3.95 324.64±3.36 334.86±5.52 351.75±8.78 360.75±7.46 375.75±5.68^‡ 397.00±6.85^‡ Group II 310.59±5.22 324.68±3.69 333.14±5.58 347.13±6.85 354.13±7.18^‡ 372.25±6.34^§ 390.66±8.83^§ Group III 311.25±4.95 324.13±4.71 332.50±4.93 344.00±8.11^‡ 349.46±6.37^§ 364.89±7.84^§ 381.50±8.91^§ Values are showed mean±SD.

Tested by one-way ANOVA (*p＜.001) and Tukey’s HSD multiple range test.

Statistically significant compared with normal group (^†p＜.001).

Statistically significant compared with control group (^‡p＜.01, ^§p＜.001).

Normal: Normal diet group. Control: High-fat diet group. Group I: High-fat diet with Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum 50 mg/kg. Group II: High-fat diet with Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum 100 mg/kg. Group III: High-fat diet with Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum 200 mg/kg.

Table V. Change of Body Weight (g)

Fig. 4. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum on C/EBPα protein expression in 3T3-L1 cells.

I: Control(none-treated) group. II: Ephedra Sinica and Fibro- sum Gypsum (50 μg/ml) group. III: Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum (100 μg/ml) group. IV: Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum (200 μg/ml) group.

Fig. 5. Change of body weight.

Tested by one-way ANOVA (^§p＜.001) and Tukey’s HSD multiple range test.

Statistically significant compared with normal group (*p＜.001).

Statistically significant compared with control group (^†p＜.01,

‡p＜.001).

2. 비만 유도 흰쥐의 항비만 효과(in vivo)

1) 체중 변화

각 측정시기에 따른 체중 변화 차이 비교결과, 모든 측 정시기에서 유의한 차이가 나타났다(p＜.001). 각 측정시 기에 따른 군간 차이 검정은 투여 3주차에 대조군 (control)과 실험군 III (p＜.01)의 비교에서 각각 유의한 차이를 나타냈고, 투여 4주차에는 대조군(control)과 실험 군 II (p＜.01), III (p＜.001)의 비교에서 유의한 차이를 나타냈다. 투여 5, 6주차에는 대조군(control)과 실험군 I (p＜.01), II, III (p＜.001)의 비교에서 모두 유의한 차이 를 나타냈다(Table V)(Fig. 5).

2) 식이섭취량 변화

식이섭취량 변화의 결과는와 같다. 각 측정시기에 따른

(8)

Fig. 6. Change of food intake.

Tested by one-way ANOVA (^§p＜.001) and Tukey’s HSD multiple range test.

Statistically significant compared with normal group (*p＜.001) Statistically significant compared with control group (^†p＜.01,

‡p＜.001).

1 week 2 week* 3 week* 4 week* 5 week* 6 week*

Normal 20.31±0.95 19.90±0.90 21.10±0.80 21.55±0.74 21.61±0.66 21.86±0.56

Control 21.49±1.30 25.39±1.42^† 26.06±1.09^† 27.23±1.03^† 28.54±1.62^† 30.00±1.6^†

Group I 21.53±1.08 24.25±0.85 24.81±1.05 26.06±0.94 27.39±1.16 27.94±1.21^‡

Group II 22.31±0.61 24.31±0.80 24.88±0.83 25.79±0.96 26.25±1.04^‡ 26.51±0.75^§

Group III 22.16±1.12 24.34±1.05 24.75±1.04 25.23±0.92^‡ 25.55±0.60^§ 25.51±0.49^§ Values are showed mean±SD.

Statistically significant compared with normal group (^†p＜.001)

Table VI. Change of Food Intake (g)

Group Normal High-fat Diet Intake

Control Group I Group II Group III

AST* (U/L) 134.35±8.47 203.24±5.54^† 187.63±3.81^‡ 177.50±6.12^‡ 169.25±6.86^‡ ALT* (U/L) 65.63±4.10 91.38±5.29^† 79.18±4.81^§ 73.75±6.04^‡ 65.75±6.96^‡

T-BIL* (mg/dl) 0.0585±0.01 0.0993±0.02^† 0.0935±0.01 0.0923±0.01 0.0904±0.01

BUN* (mg/dl) 12.98±1.10 11.20±0.72^† 11.71±0.54 11.98±0.72 12.23±0.59

Statistically significant compared with control group (^§p＜.01, ^‡p＜.001).

Table VII. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum Administration on Blood Biochemistry in Rat Fed High Fat Diet 식이섭취량 변화 차이 비교 결과, 모든 측정시기에서 유

의한 차이를 나타냈다(p＜.001). 각 측정시기에 따른 군 간 차이 검정에서 투여 1, 2, 3주차에는 대조군(control) 과 각 군 비교 시 유의한 차이가 없었고, 투여 4주차에 대조군(control)과 실험군 III (p＜.01), 투여 5주차에는 대조군(control)과 실험군 II (p＜.01), 실험군 III (p

＜.001), 투여 6주차에는 대조군(control)과 실험군 I (p

＜.01), 실험군 II, III (p＜.001)의 비교에서 각각 유의한 차이를 나타냈다(Table VI)(Fig. 6).

3) 혈액학적 분석

(1) 간과 신장의 주요 혈액학적 지표

간 및 신장에 대한 혈청변화 측정 항목(AST, ALT, T-BIL, BUN)에 대한 유의성 검정 결과, 각 항목 모두에서 유의성을 나타냈고(p＜.001), 각 측정항목의 군간 차이에 서 AST는 대조군(control)과 실험군 I, II, III (p＜.001)의 비교에서 각각 유의한 차이를 나타냈고, ALT는 대조군 (control)과 실험군 I (p＜.01), 실험군 II, III (p＜.001)의 비교에서 유의한 차이를 나타냈으나 T-BIL과 BUN에서는

대조군(control)과 실험군 I, II, III의 비교에서 모두 유의 한 차이를 나타내지 않았다(Table VII)(Fig. 7).

(2) RBC와 관련 인자의 변화

각 측정요소(RBC, Hb, HCT)에 대한 유의성 검정 결

(9)

Fig. 7. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum administration on blood biochemistry in rat fed high fat diet (A: AST, B: ALT, C: T-BIL, D: BUN).

Tested by one-way ANOVA (p

＜.001) and Tukey’s HSD multiple range test.

Statistically significant compared with control group (^†p＜.001).

Hb (g/dL) 15.00±0.76 13.6±0.89* 14.04±1.11 14.30±0.98 14.70±0.98

RBC^†(M/UL) 8.99±0.35 8.10±0.51^‡ 8.68±0.18 8.71±0.49 8.83±0.58

HCT^§ (%) 41.91±0.81 38.13±2.10^∥ 40.46±1.57 40.88±1.25 41.25±1.39

Tested by one-way ANOVA (^†p＜.05, ^§p＜.01) and Tukey’s HSD multiple range test.

Statistically significant compared with normal group (*p＜.05, ^‡p＜.01, ^∥p＜.001).

Table VIII. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum Administration on Hematological Findings in Rat Fed High Fat Diet

과, RBC항목(p＜.05), HCT (p＜.01) 항목에서만 유의한 차이를 나타냈고, 각 측정항목의 군간 차이 비교에서는 모든 측정요소에서 대조군(control)과 실험군 I, II, III의 비교에서 모두 유의한 차이를 나타내지 않았다(Table VIII)(Fig. 8).

4) 혈청 지질 농도 변화

각 측정항목(TG, Total cholesterol, LDL, HDL)에 대한 유의성 검정 결과, 각 항목 모두에서 유의성을 나타냈고 (p＜.001), 각 측정항목의 군간 차이에서 TG는 대조군 (control)과 실험군 I (p＜.01), 실험군 II (p＜.01), III (p

＜.001)의 비교에서 각각 유의한 차이를 나타냈고, Total cholesterol은 대조군(control)과 실험군 I (p＜.01), 실험 군 II (p＜.001), III (p＜.001)의 비교에서 유의한 차이를 나타냈다. 저밀도 지단백(LDL)은 대조군(control)과 실험 군 I (p＜.01), 실험군 II (p＜.001), III (p＜.001)의 비교 에서 각각 유의한 차이를 나타냈고, 고밀도 지단백(HDL) 은 대조군과 실험군 I (p＜.01), 실험군 II (p＜.001), III (p＜.001)의 비교에서 각각 유의한 차이를 나타냈다 (Table IX)(Fig. 9).

(10)

Fig. 8. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum administration on hematological findings in rat fed high fat diet (A: Hb, B: RBC, C: HCT).

Statistically significant compared with normal group (*p＜.05, ^†p＜.01, ^‡p＜.001).

TG* 104.75±6.92 137.25±8.56^† 122.88±5.46^‡ 121.88±5.25^‡ 117.25±6.88^§

Total cholesterol* 103.50±5.71 123.75±7.07^† 112.13±5.89^‡ 108.63±7.19^§ 105.00±5.37^§

LDL* 10.13±2.36 20.13±3.68^† 15.13±2.17^‡ 13.00±1.93^§ 12.63±2.07^§

HDL* 51.00±2.39 35.25±3.06^† 44.13±3.44^‡ 46.75±4.80^§ 48.13±5.30^§

Table IX. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum Administration on Serum Lipid in Rat Fed High Fat Diet (mg/dl)

5) 혈중 Leptin 및 부고환지방 조직량

각 실험군의 설정에 따라 麻黃과 石膏 혼합물 투여 6 주 후 혈중 Leptin 농도와 부고환지방 조직량 변화의 유 의성 검정 결과, 측정 항목 모두에서 유의성을 나타냈고 (p＜.001), 각 측정항목의 군간 차이에서 혈중 Leptin은 대조군(control)과 실험군 I (p＜.01), 실험군 II, III (p

＜.001)의 비교에서 각각 유의한 차이를 나타냈고, 부고 환지방 조직량은 대조군(control)과 실험군 I의 비교에서

는 차이를 나타내지 않았으나 실험군 II (p＜.01), III (p

＜.001)의 비교에서는 각각 유의한 차이를 나타냈다 (Table X)(Fig. 10).

6) 간의 조직학적 관찰

각 실험군의 설정에 따라 麻黃과 石膏 혼합물 투여 6 주 후 간의 조직학적 변화를 관찰한 결과, 정상군보다 대 조군에서 지방질의 축적이 많이 관찰되었고, 세포질안의 크고 작은 지방 공포로 인해 세포의 변성이 관찰되었다.

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Leptin* (ng/ml) 5.13±0.07 10.58±0.47^† 9.35±0.66^‡ 8.34±0.85^§ 7.63±0.54^§

Epididymal adipose tissue weight* (g) 12.69±0.50 17.09±1.03^† 16.45±0.71 15.58±0.8^‡ 14.64±0.97^§ Values are showed mean±SD.

Table X. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum Administration on Serum Leptin and Epididymal Adipose Tissue Weight in Rat Fed High Fat Diet

Fig. 9. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum administration on serum lipid in rat fed high fat diet (A: TG, B:

Total cholesterol, C: LDL, D:

HDL).

Statistically significant compared with control group (^†p＜.01, ^‡p

＜.001).

Fig. 10. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum administration on serum leptin (A) and epididymal adipose tissue weight (B) in rat fed high fat diet.

Statistically significant compared with control group (^†p＜.01, ^‡p

＜.001).

(12)

Fig. 11. Effect of Ephedra Sinica and Fibrosum Gypsum administration on liver tissue in rat fed high fat diet.

(A) Normal. (B) Control. (C) Group I. (D) Group II. (E) Group III.

또한 핵주위의 지방공포가 관찰되었고 쿠퍼세포는 현저 히 감소된 양상을 나타냈다. 실험군 I, II, III에서는 지방 질의 축적이 관찰되었으나 대조군에 비해 감소되어 있음 을 관찰할 수 있었고, 지방공포로 인한 세포변성이 감소 되어 있음을 관찰할 수 있었다(Fig. 11).

고찰»»»

비만은 체내에 필요한 에너지보다 과다 섭취되거나 섭 취된 에너지보다 소비가 부족하여 초래되는 에너지 불균 형의 상태로, 과잉체중 상태를 말하는 것이 아니라 대사 장애로 인해 체내에 지방이 과잉 축적된 상태를 말한다²⁰⁾.

체중증가 뿐 아니라 제 2형 당뇨병, 고지혈증, 고혈압 등 대사질환의 발생빈도 증가, 유방암, 대장암, 담낭암, 췌장 암, 신장암, 방광암, 자궁내막암, 전립선암, 골관절염, 담 낭 질환, 수면 무호흡증 등의 위험 증가와도 관계가 있다 고 한다⁴⁾.

비만 치료는 식사, 운동, 행동 요법으로 3~6개월간 시 도해 보았으나 충분한 체중 감량(원래 체중의 10% 이하 또는 1주에 0.5 kg의 체중 감량)이 없을 경우 약물치료를 고려하도록 권장하고 있다⁶⁾. 그러나 서양의학적 비만 치 료제는 현재 종류도 제한적이고 효과면에서도 크게 만족 스럽지 못하며, 두통, 입마름, 변비, 수면장애 어지러움과 불면증, 식욕부진 등의 교감신경계의 자극으로 인한 증상 이나 지방변, 변실금 등의 소화기계 관련 부작용이 많다

(13)

고 한다⁵⁾. 따라서 효율성과 안전성을 갖춘 비만 치료제 연구가 요구된다.

한의학에서는 비만을《素問ㆍ通評虛實論》⁸⁾에 “肥貴人則膏梁之疾也”라 처음 언급되었으며, 비만의 변증을 脾虛形, 痰飮形, 陽虛形, 食積形, 肝鬱形, 瘀血形 등으로 분류 하여 원인에 따라 健脾, 利濕, 疏肝, 理氣, 活血, 化痰, 溫陽 등의 治法을 활용하고 있다²⁰⁾.

麻黃은 味辛性溫하고 發汗解表, 平喘止咳, 溫散寒邪의 효능으로 여러 병증에 응용할 수 있는 약으로 肺氣를 開宣하여 發汗하고 水道를 通調케 하여 膀胱으로 利水케 하 는 효능이 있어¹⁴⁾ 개별 약물로도 비만 치료에 대한 연구 가 많이 이루어지고 있으며^15-18), 水濕이나 痰의 제거 효 과로서 비만의 치료에 효과적인 약물일 것으로 생각된다.

石膏는 辛甘, 大寒 하며 肺胃氣分의 熱을 淸解하고 凉血解毒하는 효능이 있으다¹⁴⁾. 지금까지 단일약물로서의 연 구는 신부전²¹⁾, 당뇨병성 신증²²⁾에 관한 것이 있었으나 비만 치료 효과에 관한 연구는 거의 없었다. 하지만 비만 의 원인이 膏梁厚味 등의 섭취로 인한 脾胃의 濕熱로 발 생되는 것을 고려하였을 때 비만치료에도 응용이 가능할 것으로 생각된다. 麻黃과 石膏는 大靑龍湯, 越婢湯, 越婢加朮湯 등의 처방에서 주요약물로 구성되며 이들 처방은 임상에서 비만치료에 사용되고 있다. 따라서 본 연구에서 는 麻黃과 石膏 혼합물을 사용하여 지방세포의 분화 및 흰쥐의 비만 억제효능에 대해 알아보고자 하였다.

3T3-L1 지방전구세포는 생쥐의 섬유아세포에서 유래된 세포주로서 지방세포로의 분화를 위하여 3T3-L1 지방전 구세포에 분화 유도물질(dexamethasone, 3-isobutyl-1- methylxanthine, insulin)을 처리하면, 지방세포에서는 특 징적으로 지방구를 형성하며, 분화과정은 초기와 중기, 후기로 나뉜다²³⁾. 분화 초기에는 CCAAT/enhancer binding protein (C/EBP)β, C/EBP를 활성화시키고, 중기에 peroxisome proliferator actived receptor (PPAR)γ, C/

EBPα, 후기에는 Fatty acid binding protein(FABP)4의 활성화로 분화를 유도하여 성숙한 지방세포로 분화하게 된다^24,25).

본 연구에서는 먼저 3T3-L1 지방전구세포에서 麻黃과 石膏 혼합물의 첨가농도에 따른 세포독성을 알아보기 위 해 MTT assay를 수행하였다. 3T3-L1 지방전구세포에 분 화유도제를 처리하여 성숙한 지방세포로 분화를 유도시 킨 후 시료를 처리하고 MTT assay를 수행한 결과 처리

농도인 50 μg/ml, 100 μg/ml, 200 μg/ml, 500 μg/ml 에서 대조군에 비해 세포생존율은 모두 유의한 차이를 나 타내지 않았다. 이는 500 μg/ml 까지의 麻黃과 石膏 혼 합물은 분화한 3T3-L1 지방전구세포에 대해 독성을 나타 내지 않는 것으로 확인된다.

지방전구세포의 지방세포로의 분화 과정에서 지방 세 포는 TG를 축적한다²⁶⁾. 본 실험에서 사용한 Oil Red O solution은 TG와 cholesterol ester만을 염색하고²⁷⁾ 유리 지방산과 인지질은 염색 되지 않는다²⁸⁾. 麻黃과 石膏 혼 합물의 첨가에 따른 지방세포로의 분화와 지방 축적 억제 에 대하여 알아보기 위하여 Oil Red O 염색을 실시하였 다. 3T3-L1 지방전구세포에 분화유도제를 처리하여 성숙 한 지방세포로 분화를 유도시킨 후 시료를 농도별로 처리 하고 현미경 및 육안으로 관찰한 결과, 시료를 처리하지 않은 대조군에 비하여 각각의 처리농도(50, 100, 200 μg/

ml)에 따라 지방세포의 분화 및 지방생성이 억제되는 것 을 관찰하였다. 따라서 麻黃과 石膏 혼합물이 지방 세포 로의 분화 후에 세포 내 지방 축적을 저해하는 효과를 나 타내는 것을 확인할 수 있었다.

TG를 생성하는 glycerol-3-phosphate는 지방조직에서 dihydroxyaceton phosphate로부터 glycerol-3-phosphate dehydrogenase (GPDH)에 의해 glycerol-3-phosphate이 가역적으로 생성되어 TG를 형성하게 된다²⁹⁾. 본 연구에 서는 지방세포에서 활성이 증가되는 GPDH의 활성을 측 정하기 위하여 MDI를 처리하여 분화 유도 6일후에 麻黃 과 石膏 혼합물을 50, 100, 200 μg/ml의 농도로 처리하 였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군에 비하여 50 μg/ml 투여군에서 유의하게 감소하였고, 각 군간에서도 100 μg/

ml 투여군과 200 μg/ml 투여군에서 유의하게 감소하였 다. 이는 麻黃과 石膏 혼합물의 처리에 의해 3T3-L1 지방 전구세포의 분화 후기에 증가하는 GPDH의 활성이 억제 된 것으로 판단된다.

또한 3T3-L1 지방전구세포에 분화를 유도하고 麻黃과 石膏 혼합물을 농도별로 처리하여 초기 전사인자인 C/

EBPα의 발현을 관찰한 결과, 비처리군을 기준으로 각각 의 농도 의존적으로 발현이 감소되는 유의한 효과를 관찰 하였다. 이런 결과로 보아 麻黃과 石膏 혼합물이 3T3-L1 지방전구세포의 분화 억제와 관련한 항비만 작용이 있는 것으로 생각된다.

장기간의 고지방식이는 에너지 과잉을 초래하며 동물

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의 비만을 유도하는 것으로 보고되고 있다³⁰⁾. 본 연구에 서도 고지방식이 사료의 섭취로 비만을 유도하였을 때 혈 청 중 TG와 Total cholesterol의 함량이 증가하였고, 매 1 주일 간격으로 체중의 변화를 관찰한 결과, 대조군은 정 상군에 비하여 체중이 유의하게 증가하여 비만이 유도되 었음을 확인하였다. 6주간의 실험기간동안 실험군 I은 대 조군에 비해 5주차부터 유의한 체중감소를 나타냈고, 실 험군 II는 대조군에 비하여 4주차부터 유의한 체중감소를 나타냈다. 또한 실험군 III는 3주차부터 유의한 체중감소 를 나타냈다. 이상의 결과는 고지방식이로 비만이 유도된 상태에서 麻黃과 石膏 혼합물의 투여가 체중이 증가하는 동안 체중감소 효과를 나타내는 것으로 보이며, 6주간의 고지방식이 사료 섭취량의 변화를 관찰한 결과에서도 대 조군에 비하여 농도 의존적으로 실험군 I, II, III에서 모두 섭취량이 유의한 감소를 보여 麻黃과 石膏 혼합물의 투여 가 식욕을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.

麻黃과 石膏 혼합물의 농도별 투여 시 혈중 지질농도 에 미치는 영향을 알아보기 위하여 TG, Total cholesterol, LDL 및 HDL의 농도를 측정하였다.

Cholesterol은 인지질과 더불어 세포의 막계를 구성하 는 주요 성분³¹⁾으로 담즙산의 원료물질, 부신피질 호르몬, 프로게스테론, 에스트로겐, 테스토스테론 호르몬을 합성 하는 중요한 성분이지만³²⁾, 지방, 콜레스테롤 수치가 높 은 음식의 섭취는 혈장 콜레스테롤 농도의 증가를 유발하 며, 비만에서도 이러한 지질대사의 이상이 관찰된다³³⁾.

TG는 대사 에너지의 공급원으로 중요한 역할을 하며 대부분 음식물로 섭취된 지방산이 산화되며 발생하는 과 잉의 지방산이 지방조직에 TG로 저장된다. 저장된 TG는 공복시 당이 에너지원으로 부족하게 될 때 에너지 공급원 으로 분해되어 사용 된다^34,35). 비만지수가 높아지면 혈청 중 TG의 함량은 증가한다³³⁾.

혈청 중 TG와 Total cholesterol의 농도는 정상군에 비 해 대조군이 유의한 증가를 나타냈다. 麻黃과 石膏 혼합 물을 농도별로 투여한 실험군 I, II, III은 대조군에 비하여 TG와 Total cholesterol의 농도를 유의하게 감소시켰으며 이는 농도의존적으로 효과가 큰 것으로 나타났으며, 특히 고농도(200 mg/kg) 투여군에서는 Total cholesterol의 농 도가 정상군과 비슷한 수준으로 나타났다. 이와 같은 결 과로 보았을 때 麻黃과 石膏 혼합물의 투여가 비만 및 고 지혈증의 대사질환을 개선시킬 수 있을 것으로 사료된다.

LDL-cholesterol은 저밀도 저단백 콜레스테롤이며³⁴⁾ 비 만도가 커질수록 혈중 LDL-cholesterol 함량 또한 높아지 는데³⁶⁾ 본 연구에서도 혈중 LDL-cholesterol의 변화는 정 상군에 비해 대조군은 뚜렷하게 증가하였다. 麻黃과 石膏 혼합물을 농도별로 투여한 실험군 I (50 mg/kg), II (100 mg/kg), III (200 mg/kg)은 대조군에 비해 유의한 감소를 보였으며, 麻黃과 石膏 혼합물 함량이 증가할수록 농도 의존적으로 LDL-cholesterol 함량의 감소효과가 큰 것으 로 나타났다.

HDL-cholesterol은 주요 지단백의 하나로 말초조직으 로부터 cholesterol을 간으로 운반하여 세포내 축적된 cholesterol의 제거작용에 관여한다³¹⁾. 비만은 HDL-cholesterol 감소의 요인이다^33,34). 본 연구에서도 HDL-cholesterol 변화는 정상군에 비해 대조군은 유의한 감소를 나타냈고, 麻黃과 石膏 혼합물을 농도별로 투여한 실험군 I (50 mg/kg), II (100 mg/kg), III (200 mg/kg)은 대조군 에 비해 유의한 증가효과를 보였으며, 麻黃과 石膏 혼합 물 함량이 증가할수록 농도 의존적으로 HDL-cholesterol 함량의 증가효과가 큰 것으로 나타났다. 따라서 본 연구 결과 麻黃과 石膏 혼합물 투여로 인해 고지방식이로 증가 된 LDL-cholesterol 함량은 낮추고, 감소된 혈중 HDL- cholesterol 함량은 증가를 시키는 것으로 나타나 혈청 지 질대사를 개선시키는 예방효과가 있는 것으로 사료된다.

Leptin은 지방조직에서 생성되는 비만유전자단백질로 체지방에 의해서 분비량이 영향을 받으며 중추신경에 작 용하여 음식물 섭취를 감소시키고 에너지소모를 증가 시 켜 체지방량을 조절하는 것으로 보고되었다³⁷⁾. Leptin은 체지방을 일정하게 유지시키는 feedback의 한 부분으로 작용한다³⁸⁾. 비만인 사람에게 Leptin 투여는 대부분 뚜렷 한 체중 감소의 효과가 나타나지만, 비만인 사람의 대부 분에서 Leptin의 농도는 증가하였고, Leptin이 결핍된 사 람에서는 적은 수에서 비만이 나타났다. 이는 비만인 사 람에서는 Leptin의 저항성이 있다는 것을 나타내고 있 다³⁹⁾. 이번 연구의 결과에서의 Leptin 농도는 정상식이군 에 비해 고지방식이 대조군의 농도가 매우 증가되어 나타 났고, 麻黃과 石膏 혼합물을 투여한 실험군 I (50 mg/

kg), II (100 mg/kg), III (200 mg/kg)은 유의한 감소가 나타났고, 특히 실험군 III (200 mg/kg)에서 현저한 감소 가 나타났다.

한편, 내장지방량을 측정함에 있어 대표적인 부고환지