Susceptibility and Resistance of Lactobacilli and Clostridia in the Commercially Available Preparations to Antituberculosis Agents and Antibiotics

藥學會誌 제

29

권 제

3

호

159〜 164 (1985) Yakhak Hoeji Vol. 29 No. 3

市販 乳酸菌 및 酷酸菌製劑의 抗結核劑 및 抗生物質에 대한 感受性과 耐性

金 酿 禹

•

金 亨 沫

•

李 承 憲

•

崔 應 七

•

金炳

s

서울大學校 藥 學 *學

(Received May 6, 1985)

Susceptibility and Resistance of Lactobacilli and Clostridia in the Commercially Available Preparations to Antituberculosis Agents and Antibiotics

Jung W oo Kim , Hyung Soo Kim , Shung Hee Lee, Eung Chil Choi and Byong Kak Kim

College o f Pharmacy, Seoul National University, Seoul 151，Korea

A bstract—To investigate the susceptibility and resistance in case of simultaneous adm inistrations of Lactobacilli and Clostridia preparations with antituberculosis agents and antibiotics, five strains of Lactob­

acilli, i.e., Lactobacillus bulgaricus, L. casei, L. helveticus, L. acidophilus, L. sporogenes, and Clostridium butyric um were isolated from commercially available preparations. Minimal inhibitory concentrations (M IC) of nine antituberculosis agents and 21 antibiotics against these strains were determined. The results showed that these strains were very sensitive only to rifampicin among antituberculosis agents, and sensitive to other antibiotics. Since the simultaneous oral administration of rifampicin and other antibiotics with these sensitive strains is ineffective, development of new resistant mutants is desirable.

오래 전 부터 유 산 균 제 제 는 장질환에 대 한 치료외

-

예방의 정 장 효 과 를 목 직 으 로 사용되어 왔 으 며

,

이에 대 한 보 고 도 여러 편이 나와 있 다

. C lock 1)

는 유아기 설 사 증상에 유 산 균 을 투여하여 치 료 효 과 를 보 았 으 며 ，

G om pertz21

등은 설 사 증 세 로 고 통 받 는 환자의

7 0 %

를 치 료 하 였 다 고 보 고 하 였 다

.

또 한 ，

Rettger3»

등은 유 산 균 으 로 설 사 증 상 을 치료하 고 대장의 유산균의 농 도 와 그 임상적 인 치료 결 과 는 밀접 한 관 계 가 있다고 결론을 지 었 다

. Polymenakos41

는 오 레 오 마 이 신 과 테라마이 신에 의해 야기된 위 장 관 질환의 치료에 유 산 균 제 제 를 사용하여 좋 은 효 과 를 보 았 다 고 하 였 으

며 ，

W in kelstein5)

은 설 사 와 점 액성 대장염 및 항생제에 의 한 대 장염의 치료에 유 산 균 을 사 용 하

여 치료 하 였 다 고 보 고 하 였 다

. Shapiro61

는 항생제 복 용 후 생긴 설 사 증 상 을 유 산 균 제 제 로 치료 하여 좋은 효 과 를 얻 었 다 고 하 였 고

, Nechelas7>

둥 은 항생제에 의 한 설 사 및 내피성 설사에 유 산 균 으 로 모 두 치 료 하 였 다 고 보 고 하 였 다

.

또 한

Tasovac81

등 은 유아들의 대장균에 의 한 급성 대 장 염의 예방에 효 과 가 있다고 보 고 하 였 다

.

이 외 에 도 유 산 균 은 장내에서 직접

•

간 접 으 로 영 양 공 급 효 과 가 있으며 장 점막의 재생 촉진 효 과 가 있 으 며

.

장암의 예방 효 과 가 있 다 고 알 려 지 고 있 다

.

이들 유산균외에 낙산 균 도 같은 효 과 를 내 어 같은 목 적 으 로 사 용 되 고 있 다

.

항 결 핵 제 를 장기 복 용 하 거 나 항 생 제 를 복 용 하 는 환자의 경우 는 장내 균총이 파괴되어 흡 수 부 전

,

소 화 불 량 등 으 로

^

抗結核劑 및 抗生物質에 대한 乳酸菌 및 酿酸菌의 開發硏究

( 1 ) .

인하여 여러 가지 부작용이 생길 수 있으므로 항 결핵제 또는 항 생 제 와 유 산 균 및 낙산균 제제를 병 용 하 도 록 권 장 되 고 있 다

.

그 런 데 ， 이 때 사 용 되 는 항 결핵제 및 항 생 제 가 유 산 균 및 낙산균까 지 사 멸 시 킨 다 면 ， 이 제제의 복용 의 의 가 없게 된 다

.

그 러 므 로 ， 본 실 험 에 서 는 유 산 균 및 낙산 균이 항 결핵제 및 항생 제 에 대 해 감수성 인지 내 성인지 를 조사하기 위 해 시 판 중인 유산 균 제 제

6

종 및 낙산균 약제

1

종에서 각각 유 산 균 및 낙 산균 을 분 리 하 고 ，

9

종의 항 결핵제 및

21

종의 항 생제에 대 한 최 소 저지 농 도

(MIC

) 를 측정하여 그 감수성과 내성의 정 도를 검 토 하 였 다

.

그 결과 로 유 산 균 과 낙산균 제 제 를 항 결핵제 및 항 생제 와 병용하였 을 때 ， 유산 균 및 낙산균의 효 과를 기대 할 수 있는 가를 추 정 하 였 으 며 ， 적 절 한 병용 방법도 생각해 보 았 다

.

實 驗 方 法

實 驗 材 料 一

(1)

분리된 유 산 균 및 낙 산 균 一 시 판 중인 유 산 균 음 료

A

，

B , C

및 유산균 약제

D, E,

표에서 각각 유 산 균 을 ， 낙산균 약제

G

에서 낙산균을 분리하여 동 정 하 였 다

.

이 때 분리

된 균주명 은

Lactobacillus bulgaricus, L . casei, L . helveticus, L . acidophilus, L . sporogenes

및

Clostridium butyricum등。] 며，Table I

에 종 합 하 였 다

.

(2)

배지의 종류 및 조 성 ᅳ 유 산균 의 분리 를 위해서 는

MRS-Agar

배 지 를 사 용 하 였 고

MIC

측정 을 위 해 서 는

MRS

배 지 를 사 용 하 였 다

.

낙산균 분 리 를 위 해서는

Fluid thioglycollate agar

배 지를 사 용 하 였 고

MIC

측 정 용 배 지 는

agar

의 양이

0. 75g

만을 함유하는

fluid thioglycollate

배 지 를 사용 하 였 다

.

균 희 석 은

1% peptone

수를 사 용 하 였 다

.

(A ) M R S

배 지

: peptone 10. 0g, beef extract 10. Og, yeast extract 5. Og, dextrose 20. Og, twe­

en 80 1. Og, am m onium citrate 2. Og, sodium acetate 5. Og, magnesium sulfate 0. lg , dipotassium posphate 2. Og

를 증류 수

1

/에 용해 시 킨 후

pH 6. 5

로 조정 하였 다

.

(B ) F lu id thioglycollate agar

배 지

: glucose 15. 5g, casitone 15g, yeast extract 5. Og, sodium chloride 2 . 5g, sodium acetate 5. Og, am m onium citrate 2. Og, sodium thioglycollate 2. Og, L- cystine 0. 5g, agar 20. 75g, resazurin 0. OOlg, magnesium sulfate 0. lg , manganese sulfate 0. 05 g, dipotasium phosphate 2. Og, ferosulfate 0. 034g, potassium phosphate 6. Og

을 증 류 수

1

/에 용 해시킨 후

pH 7.2

로 조 정 하 였 다

.

(3)

항 결핵제 및 항 생 제 一 다 음 과 같이 분류하여 사 용 하 였 다

.

(A )

항 결핵 제

: Streptomycin, kanam ycin, rifam picin, capreomycin, etham butol, IN A H , cycl­

oserine, pyrazinamide, prothionam ide

(B) P e nicillin

계 항생 제

: A m p ic illin , bacam picillin, talam picin, penicillin V , am oxicillin, cloxacillin, m etam picillin, carbenicillin

(C) Cephalosporin

계 항생 제

: Cephalexin, cephazolin, cephaloridine, cephatrizine, ceptizoxime, cefamandole, cefadroxil, cefuroxime, moxalactam,

(D)

기 타 항생 제

: Minocyclin

，

chloramphenicol, erythromycin, gentamicin

實 驗 方 法 ᅳ

(1)

유산균의 분 리 ᅳ 유 산 균 음료의 경 우는

1ml

를 취하여

1%

무균 펩 톤 수

99ml

를

함 유 하 는 병에 넣고

waring blender

를 사용하여

1

분간 균 질 화 시 켰 다

. (10_2

희 석 액

)

유산 균 약제

경 우 는

lg

취하여

1%

무 균 펩 톤 수

99ml

를 함 유하는 병에 넣고 위 와 같이 균질화 시 킨 후

(KT2

희 석 액

)

다시

99ml

의

1%

무 균 펩 톤 수 를 함유하는 병에 이 희석액

1ml

를 가 하 고 균 질 화 시 켰 다

.

이 조 작 을 반복하여

10-6

희 석 액 을 만 들 었 다

.

유산 균 음료의 경우는

KT2

희석액 유 산 균 약제 경

J. Pharm. Soc. Korea

유산균 및 낙산균제제의 항결핵제 및 항생물질에 대한 감수성과 내성

161

Table I —Names and preparation forms of Lactobacilli and Clostridium strains isolated from commercially available preparations.

Names of Strains Preparation Forms

A Lactobacillus bulgaricus yaghurt

B L. casei yaghurt

C L. helveticus yaghurt

D L. acidophilus powder in capsule

E L. acidophilus powder in capsule

F L. sporogenes powder

G Clostridium butyricum tablet

우 는

1CT6

희 석 액 을 ， 각각

l m l

씩 취하여

Petridish

에 넣 고 ，

M RS-agar

배 지 를 멸 균 후

450C

로 냉

각 시킨 후

20m l

롤 취하여 앞의

petridish

롤 뒤집어 놓고

370C

에서

72

시 간 배 양 했 다

.

배 양 후 생

성된 독립 집 락 을 백 금 선 으 로 취하여

MRS-agar

배 지 로 된

ta ll

에서 천 자 배 양 시 켰 다

.

(2)

낙산균의 분 리 ᅳ 유 산 균 약제의 경 우 에 서 처 럼 ， 낙산 균 약제

lg

을 취하여

1

으 6희 석 액 을 만 들 었 다

.

이 희석액

lm l

를 취하여

petridish

에 넣고

fluid thioglycollate agar

배 지 를 멸 균 후

45°C

로 냉각시킨 다음

20ml

를 취하여 앞의

petridish

에 넣고 잘 혼 화 시 키 고 배 지 를 고 형 화 시 켰 다

. 370C

에서

72

시간 배 양 후 생성된 독립 집 락 을 백 금 선 으 로 취하여

fluid thioglycollate agar

배 지 로 된

tall

상에서 천자 배 양 시 켰 다

.

(3)

분리 된 유산균 및 낙산균은

Bergey’s M an u al of Determinative Bacteriology

9)에 의해 동정 하 였 다

.

(4) MIC

측 정 一 분 리 된 유 산 균 및 낙산균을

MRS

액체 배지 및

fluid thioglycollate

배 지 에 서 홉 광 도

(O.D

. ) 가

0.3

이 될 때까지 액내 배양하여

MIC

측 정 용 균 액 으 로 하 였 다

. MIC

측 정 은 액체

2

배희석법 을 사 용 하 였 다

.

먼저

. 13

개의 시 험 관에 항생 물질 용 액 을 계 열 희 석 하여 첫번째 시 험 관에

100

서

g/ml

의 농 도 가 되 게 하 고 그 이하 는

2

배씩 희석되게 하 였 다

.

마 지 막 시 험 관 은

blank

로 하 였 다

.

각 시험관에 항생물질 용액의 부 피 와 같은 균액 을 첨 가 시 키 고

370C

에서

24

시 간 배 양한 우 균의 성장이 없는 마 지 막 시험관에 든 항생물질의 농 도 를

MIC

로 하 였 다

.

사 용 된 항 결핵제 및 항생제의 용 액 은 멸균 증 류 수 를 사용하여 만들었으며 잘 안 녹 는 경 우 는 에 탄올 소량에 넣어 용해시킨 후 멸 균 증 류 수 를 가하여 만 들 었 다

.

實 驗 結 果 및 考 察

9

종의 항결핵 제 에 대 한 유 산 균 및 낙산균의

MIC

측정 결 과 를

Table

표 에 나타내 었 다

.

대 부 분

의 유 산균 및 낙산균이

rifampicin

을 제 외 한

8

종의 항결핵제에 대해 내 성 을 함 유 하 고 있 었 으 나 특

이하게

rifampicin

의 경 우 에 는 대부분이 강한 내 성 을 나 타 내 었 다

.

따라서 유 산 균 제 제 와 낙 산 균 제 제 를

rifampicin

을 제 외 한 항 결 핵 제 와 는 병용이 가 능 하 다 고 생 각 되 나

rifampicin

의 경 우 는 병 용 하여 사 용 해 도 효 과 를 기 대 할 수 없 다

. rifampicin

에 대해 감수성인 유 산 균 들 과 낙 산 균 은 돌 연 변 이 등 여 러 가지 방법 을 이 용하여

rifampicin

에 대 한 내 성 균 으 로 변화시 켜 사 용 한 다 면 좋 은 효 과 를 얻을 수 있을 것 으 로 생 각 된 다

.

항 결 핵 제 들 은 주로 경 구 로 장기 복 용 하 는 것 들 이 므 로 특히 생 각을 해 야 한 다

. 8

종의 페니실린에 대한

MIC

측정 결 과 는

Table DI

에 나 타 냈 다

.

균 종 류 및 페

，

Table I I

ᅳ

MICs(/wg/ml) of antituberculosis agents against Lactobacilli and Clostridium strains of commercial preparations.

V Lactic Acid Preparations

Antituberculosis Agents A B C D E F G

Streptomycin 100 12.5 25 100 25 12.5 100<

Kanamycin 100< 1.56 3.12 100 100< 6. 25 100<

Rifampicin 3.12 1.56 0. 39 0. 09 0. 39 0. 09 0. 048

Capreomycin 100< 100 100< 100< 100< 12.5 50

Ethambutol 100< 100< 100< 100< 100< 0. 39 100<

IN A H 100< 25 100< 100< 100< 3.12 100<

Cycloserine 100< 100< 100 100 6. 25 0. 28 100<

Pyrazinamide 100< 100< 100< 100< 100< 100< 100<

Prothionamide 100< 100< 100< 100< 100< 100< 100<

Table I I I ■—M ICs(^g/m l) of penicillins against Lactobacilli and Clostridium strains of commercial preparations.

\Lactic Acid Preparations

Penicillins

A B c

D E F G

Ampicillin 0. 09 6. 25 0. 09 1.56 3.12 0. 39 0.048

B a c a m p ic illin

1.56

6. 25 0.19

50 25

0.19 1.56

Talampicillin 0. 09

50 100

3.12 12.5 6. 25 0.19

Penicillin V 0. 78 0. 78 0.78

50 50

0. 09 0.19

Amoxicillin 6. 25 6. 25 0. 78

12.5 12.5 0. 09 0. 09

Cloxacillin

6. 25 25 3.12 100 50 0. 78 3.12

Mefampicillin

1. 56 6. 25 1.56 3.12 25 1.56

0. 05

C a r b e n ic illin 25 100 50 100 100 100 1.56

Table IV —MICs(/wg/ml) of cephalosporins against Lactobacilli and Clostridium strains of commercial preparations.

V Lactic Acid Preparations

Cephalosporins A B C D E F G

Cephalexin 1.56 100< 6.2 100 25 12.5 3.12

Cephazoline 0. 78 0. 39 0. 09 0. 09 0. 09 0. 09 0. 39

Cephaloridine 0. 09 25 1.56 100< 0. 78 0. 09 6.25

Cephatridine 1.56 3.12 0. 09 3.12 0. 78 0. 09 1.56

Ceptizoxime 0. 09 12.5 0. 09 25 6. 25 0. 09 1.56

Cefamandole 25 25 100 100 100 25 0. 78

Cefadroxil 6.25 100 12.5 100 100 12.5 3.12

Cefuroxime 0. 78 25 0.78 50 100 50 3.12

Moxalactam 100 100 100 100 100 100 3.12

니실린 종류에 따라 차이가 있으나 많은 경우에서 감 수성을 나타내 었으며 특히 낙 산 균 과 유산균 일 부 는 거의 대부분의 페니실린계 항생제에 대해 감수성을 나 타 내 었 다

.

따라서 이 계열 항생제

J. Pharm. Soc. Korea

유산균 및 낙산균제제의 항결핵제 및 항생물질에 대한 감수성과 내성

163

Table V—MICs(/L<g/ml) of general antibiotics against Lactobacilli and Clostridium strains of commercial preparations.

\ Lactic Acid Preparations a d ^ u 17 ^

General Antibiotics "\___ ___________ _____________________________ ___ __________________________ _

Minocyclin 0.09 0.39 0.09 0.78 0.78 0.09 0.05

Chloramphenicol 3.12 3.12 0.09 50 1.56 0.09 0.09

Erythromycin 0.09 12.5 100 0.09 0.09 0.09 0.05

Gentamicin 12.5 25 6.25 1.56 0.39 1.56 100

와 낙산균 및 유 산 균 을 병 용 했 을 때는 그 효 과 를 기 대 할 수 없 으 므 로 사 용 시 기 를 질병 치 료 후 로 하는 것이 바 람 직 하 다

.

다만

carbenicillin

경우처럼 주 사 제 로 사 용 할 경 우 는 장내 균총에 영 향을 적게 미 치 므 로 상 관 없 다

. 9

종의 세 파 로스포 린 계 항생물질에 대 한

M IC

측 정 결 과 를

T a b le d

에 나 타 냈 다

.

이 중 경구 투 여 로 많이 사 용 되 는

cephalexin, cephatrizine, cefadroxil

을 비교해 보 면 ，

cephatrizine

경 우 가 강 한 감수성을 나 타 내 고 있 으 므 로 이 경 우 도 역시 유 산 균 및 낙산 균 을 병용해 도 그 효 과 를 기 대 할 수 없 다

.

그 러 나 ， 주 사 제 로 쓰 이 는 세 파 로 스 포 린 계 항 생 물 질 경 우는 예 외 로 간주할 수 있 다

. Table V

에는

chloram phenicol

과

tetracycline

계 ，

m acrolide

계 ，

a m ­

inoglycoside

계 항생제에서 각각 하나씩의 항 생 제 를 선택하여 유 산 균 및 낙산균에 대 한

M IC

의 측

정 결 과 를 나 타 냈 다

.

이 경우에 있어서도 균주에 따 라 차 이 는 있 으나 대 체 로 감 수 성 을 나 타 냈 으 므로 경구 투여 시에 유 산 균 및 낙산균의 병 용은 불 필 요 한 일로 생 각 된 다

.

유 산 균 제 제 가 처 음 시판되어 사용될 당시 는 많은 항생제에 대해 내 성 을 나 타 내 고 있 다고 보 고 하 고 있 었 으 나

,

새 로 운 항생물질이 많이 개발되어 널리 쓰이게 됨에 따 라 이런 보 고 는 무 의 미 한 것이 되 었 으 므 로 항 생 제 와 유 산 균 및 낙산균의 병용을 적절하게 결 정 해 야 하 며 ， 또는 시 판 중인 유 산 균 제제 및 낙 산균 제제 를 개량하여 항 결 핵 제 나 항생제에 내 성 을 갖게 하여 사 용한 다 면 좋 은 효 과 를 얻 을 수 있다고 생 각 된 다

.

특히 경구 로 장기 복 용 하 는 항결핵제의 경 우 는 장내 세균의 파 괴 와 같은 부 작 용을 줄이기 위 해 서 라 도 사 용 되 는 항 결핵제에 내 성 을 갖는 유 산 균 이 나 낙 산 균 을 병 용 하 는 것이 바 람 직 하 므 로 이들에 내 성 을 나 타 내는 유 산 균 이 나 낙산균의 개 발 은 시 급 한 것 으 로 사 료 된 다

.

±±

5

스

•PP 6冊

시판 중인 유 산 균 제제

6

종 및 낙산균 제제

1

종에서 각각 유 산 균 및 낙 산 균 을 분 리 하 였 다

.

분

리한 유산균 및 낙산균의 항 결핵제 및 항생 물질에 대 한

M IC

측정 결 과

,

항 결핵제 경 우 는 이

들 균주들이 리팜피신에 대 해 서 만 특 이 적 으 로 감 수 성 을 나 타 냈 고 페 니 실 린 계 ，세 파 로 스 포 린 계 및 기타 항생물질 경우 는 상당수에 대해 감수성을 나 타 냈 다

.

이들 항 결핵제 및 항생 물질에 대해 감수성을 나 타 내 는 유 산 균 및 낙 산 균 들 은 내성 균 주 로 변이 시 키 는 것이 필 요 하 다

.

文 献

1. R.O. Clock, 117 Cases of infantile diarrhea treated by intestinal implantation of the Bacillus lactic bulgaricus at the Babies Hospital of the City of New York, J.A .M .A . 61, 164 (1913).

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