Development of External Quality Controls for Human Immunodeficiency Virus Antigen/Antibody Tests in Korea

서론

Human immunodeficiency virus (HIV) 항원·항체검사 는 HIV 감염자의 조기 발견, HIV 감염의 진단 및 치료 그리 고 안전한 혈액공급 등을 목적으로 사용되고 있다. HIV 감염 자의 조기 발견과 HIV 감염의 전파 방지를 위해서는 일선 병·

의원이나 보건소 같은 1차 검사기관에서 실시하는 혈청검사 의 정확성이 무엇보다 중요하다. 현재 HIV 항원·항체검사 법으로는 3세대 HIV enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)에 p24 항원을 결합한 4세대 ELISA검사법이 주로

사용되고 있다[1]. 항레트로바이러스제를 이용한 치료 등으로 현재 HIV 감염은 치료가 불가능한 질환이 아니라 극복 가능한 질환으로 여겨지고 있다[2]. 이러한 HIV 감염의 정확한 진단 을 위해서는 의료기관 또는 공공기관의 검사실에서 시행되고 있는 검사에 대한 결과의 정확성, 정밀성 및 재현성이 보증되 어야 한다.

국내 HIV 감염검사는 시·도 보건환경연구원, 질병관리본 부, 보건소, 혈액원, 그리고 의료기관 등에서 시행되고 있다.

검사의 신뢰성 확보를 위하여 일반적으로 검사의 내부정도관 리와 외부정도관리가 시행되고 있다. 검사의 외부정도관리는

Development of External Quality Controls for Human Immunodeficiency Virus Antigen/

Antibody Tests in Korea

Dong Hee Seo ^1,2 , Yeo Rin Choi ¹ , Won Woong Choi ¹ , Cheol Hee Yoon ³ , Byeong Sun Choi ³ , Yoon-Seok Chung ³ , and Chun Kang ³

1

WON Medical Corporation, Bucheon;

2

LabGenomics Clinical Laboratories, Seongnam;

3

Division of AIDS, Centers for Disease Control &

Prevention, Cheongju, Korea

Background: Quality control is important for accurate diagnosis of human immunodefi- ciency virus (HIV) infection, and proficiency testing with external quality controls is an important part of quality control. This study intended to develop and supply customized external quality controls for HIV antigen/antibody testing fitted with currently used reagents for standardization of HIV infection diagnosis and evaluation of HIV testing competency of laboratories in Korea.

Methods: Serological tests and inactivation were performed on the obtained HIV antibody positive plasma. To manufacture quality controls having the required antibody titers, dilution ratio was searched using VIDAS (bioMérieux, France), Architect (Abbott Laboratories, USA), and Cobas 8000 (Roche Diagnostics, Germany) analyzers. Diluted source plasma was divided into aliquots after filtering. Homogeneity and stability of the produced external quality controls were evaluated.

Results: The collected HIV antibody positive plasma was confirmed by Western blot.

Dilution ratios for source plasma were produced for each analyzer showing signal-to-cut- off 2–3, 5–7, and 15–16 reactivity. Diluted plasma was made to 1 mL aliquots and total set of 1,500 external quality controls for HIV antigen/antibody were manufactured. Produced controls satisfied the required criteria of homogeneity and showed less than 10% coefficient of variation for stability except negative controls.

Conclusions: Customized external quality controls were developed and qualified for HIV testing reagents used in Korea. Continuous external quality control assessment for HIV tests with controls would be required.

(J Lab Med Qual Assur 2018;40:92-100)

Key Words: HIV, Quality control, Antibody, Proficiency test

Corresponding author:

Dong Hee Seo LabGenomics Clinical Laboratories, 700

Daewangpangyo-ro, Bundang- gu, Seongnam 13488, Korea Tel: +82-31-628-0730 Fax: +82-31-628-0701 E-mail: [email protected] pISSN: 2384-2458

eISSN: 2288-7261 Received December 15, 2017, Revision received April 3, 2018, Accepted April 11, 2018

동일한 검체를 다수의 검사기관이 측정하여 장비 또는 측정방 법에 따라 발생하는 측정값의 바이어스를 최소화하여 검사의 정확도를 유지하기 위하여 실시된다[3]. 국내의 대표적인 임 상검사 외부정도관리기관으로는 대한임상검사정도관리협회 가 있다. HIV검사에 대한 외부정도관리는 1998년 국립보건연 구원에서 시작하였으며, 외부정도관리 평가용 물질을 매년 상 반기와 하반기에 배포하고 그 결과를 분석하여 발표하고 있다 [4,5]. 수혈로 인한 HIV 감염 예방을 위해 헌혈 혈액에 대한 HIV 항원항체검사는 필수적인 선별검사이고 이러한 혈액선별 검사에 대한 품질보증프로그램도 필요하다[6]. 외부정도관리 평가에는 균질한 다량의 외부정도관리물질이 필요한데, HIV 검사용 외부정도관리물질은 HIV 항체 양성 혈액을 이용하여 만들어지고 있다. 2005년부터는 HIV검사 외부정도관리 평가 용 물질 제조가, 표준품 개발 경험과 제조에 필요한 시설을 갖 춘 민간기관에 의하여 이루어지고 있다[7]. 본 연구는 체계적 인 국가 HIV 감염진단 표준화와 국내 HIV 검사기관의 검사능 력 향상을 위하여 품질관리가 이루어진 HIV 항원·항체검사 용 맞춤형 외부정도관리 평가용 물질을 개발하여 공급하는 데 그 목적이 있다.

재료 및 방법

HIV 항원·항체검사용 맞춤형 외부정도관리물질 개발을 위 한 원료물질인 HIV 항체 양성 혈액은 “연구자원자 개발 및 지 속적인 참여를 위한 프로그램”을 통하여 자발적으로 참여한 적합자를 대상으로 확보한 성분 채혈된 혈장 중, –75 °C 이하 의 초저온 냉동고에 보관되어있던 12명의 혈장을 사용하였다.

HIV p24 항원 양성 혈장은 국내에서는 확보하기가 어려워 호 주 국립보건원로부터 20 mL를 구입하여 확보하였다. HIV 항 체 음성 혈장은 대한산업보건협회 한마음혈액원을 통하여 확 보하였다.

1. 원료물질의 혈청학적 검사 및 불활성화

원료물질의 혈청학적 검사 및 희석배수 확인에는 VIDAS (bioM érieux, Marcy-L’Etoile, France), Architect plus (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA), Cobas 8000 (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) 검사장비를 사 용하였다. 상·하반기 외부정도관리 평가용 표준품 제조에 필 요한, 양성 혈장 12개, 음성 혈장 59개, 그리고 조기 검출능 력을 보기 위한 희석한 양성 혈장으로 signal-to-cut-off (S/

CO)가 2-3, 5-7 그리고 15 이상의 3개의 혈장을 포함하여 총 74개 혈장에 대해 rapid법으로는 SD BioLine HIV 1/2 3.0

(Standard Diagnostic Inc., Yongin, Korea), enzyme-linked fluorescence assay (ELFA)법으로는 VIDAS HIV DUO Ultra (bioMérieux), 혈구응집반응법(particle agglutination) 으로는 Serodia HIV 1/2 (Fujirebio, Tokyo, Japan), CLIA (clinical laboratory improvement amendments)법으로는 Architect HIV antigen-antibody (Ag/Ab) Combo (Abbott Laboratories), HIV combi PT ARC HIV Ag/Ab (Roche Diagnostics)를 이용하여 HIV 항체검사를 진행하였다.

HIV항원검사로는 ELFA법을 이용한 VIDAS HIV p24 II (bioMérieux)로 검사를 실시하였다. HIV검사용 외부정도관리 평가용 표준품 개발에 사용되는 모든 혈액은 잠재적인 인체 감 염 가능성을 가지고 있기 때문에 사용자의 안전을 위하여 HIV 항체 양성 및 음성 원재료를 항온수조에 56 °C에서 60분간 가 열하여 병원체를 불활성화하였다.

2. 저, 중, 고농도 표준물질 제조를 위한 희석배수 산정 HIV검사 외부정도관리 평가용 표준품 제조계획에 따라 저 농도(S/CO 2-3), 중농도(S/CO 5-7), 고농도(S/CO 15 이 상) 표준품 제조 희석배수를 찾기 위하여 VIDAS HIV DUO Ultra (bioMérieux) 시약, Serodia HIV-1/2 (Fujirebio) 시 약, Architect HIV Ag/Ab Combo (Abbott Laboratories)와 ARC HIV Ag/Ab (Roche Diagnostics) 시약, 그리고 BioLine HIV 1/2 3.0 (Standard Diagnostic Inc.) 시약을 사용하여 총 3차례에 걸쳐 희석하여 반응도를 평가하였다. 도출된 희석배 수를 제3의 기관으로 의뢰하여 희석배수를 다시 한번 확인하 였다.

3. 원료의 여과와 분주

희석한 원료 혈장을 제조지시서에 따라 각 농도별로 각 각 1,200 mL씩 멸균된 유리용기에 분주하였다. 물질 보존제 로 methyl isothiazolin (Sigma Cat＃M6045) 0.1 g, Bromo nitrodioxane (Sigma Cat＃B8791) 0.1 g, proclin 300 (supelco Cat＃48914-u) 10 μL를 각각 그 양을 칭량하여 별도로 보관 하였다. 칭량이 완료된 희석 혈장을 0.4 μm Miracloth filter와 0.2 μm 멸균된 필터로 여과하여 새로이 멸균된 용기에 분주하 고, 보존제를 첨가한 후 라벨을 부착하였다.

HIV검사 외부정도관리 평가용 표준품 분주를 위하여 공공

기관과 민간기관용 패널별로 지정된 라벨을 부착한 튜브를 준

비하였다. 음성과 양성 표준품을 조합하여 공공기관용으로 3

개(A, B, C) 패널, 민간기관용으로 3개(D, E, F) 패널을 제

조하였다. 튜브는 장기보관에 용이하며, 검체의 누출이 완전

히 차단된 기능을 가진 screw type의 2 mL cryogenic tube

(Sarstedt AG & Co., N ümbrecht, Germany)를 사용하였다.

자동분주기를 이용하여 불활성화 시켜놓은 음성 혈장을 1 mL 씩 먼저 분주하여 시료물질 용기의 마개를 닫고 수량과 용량을 확인하고 냉장상태에 보관하였다. 음성 혈장의 분주가 끝난 후 작업용 안전상자 내부를 알코올로 소독하고, 양성 혈장을 각각 1 mL씩 소분하여 외부정도관리 평가용 표준품을 제조하였다.

4. 균질성 및 안정성 평가

HIV검사 외부정도관리 평가용 표준품은 각 검사실에서 사 용하는 시약에 맞춤형으로 제조하였기 때문에 질병관리본부 에서 제시한 균질성 평가안에 따라 해당 시약에 대한 균질성 평가를 진행하였다. 제조된 표준품 10 바이얼에 대해 각 시 약별로 3회 반복 검사를 시행하였다. 결과분석은 analysis of variance (ANOVA) 분석에 의한 95% 신뢰구간에서 안정성 검증을 하여 F비가 F기각치 미만이거나 P-value가 0.05 초과 면 표준품은 균질하다고 판단하였다.

외부정도관리 평가용 표준품은 제조 후 검사기관에서의 검 사까지 최대 4주가 소요되기 때문에 운송 또는 사용기간 동안 의 표준품의 안정성을 확보하기 위하여 냉장, 실온 두 가지 조 건에서 0일, 5일, 12일, 21일에 대해 단기 안정성 평가를 진

행하였다. 검체의 흡광도를 각 날짜에 측정하여 coefficient of variation (CV)의 변화가 10% 이내일 때 표준품이 안정한 것 으로 분석하였다.

결과

1. 원료 혈장의 특성

HIV 항체검사 결과를 이미 알고 있는 결과와 비교하였을 때, 항체 양성 12개의 혈장과 희석 혈장 3개는 모두 양성으 로 판정되었으며, 음성 혈장 59개는 모두 음성으로 판정되었 다(Table 1). 선별검사에서 HIV 항체 양성 반응을 보인 12 개 원료 혈장은 질병관리본부 에이즈 종양 바이러스과로 웨 스턴블롯검사를 의뢰한 결과, 모두 최종 양성으로 판정되었 다. 희석 혈장은 웨스턴블롯검사상 저농도(S/CO 2-3) 검체 는 gp160/120 밴드에서 +/- 반응을, 중농도 검체는 p24와 gp41에서 +/- 반응을 보였고 gp160/120 밴드에서는 1+ 반 응을 보였다. 고농도 검체는 p24와 gp41에서 1+ 반응을, gp160/120에서 2+ 양성 반응을 보였다. 또한 원료 혈장은 다 른 병원체의 위험성을 확인하기 위하여 hepatitis B surface antigen, anti-HCV검사를 rapid 법(Standard Diagnostic

Table 1. HIV serological test results of primary and diluted source plasma

Variable Reagent SD BioLINE HIV

1/2 3.0 VIDAS HIV

DUO Ultra Serodia HIV 1/2 Architect HIV

Ag/Ab Combo ARC HIV Ag/Ab

Plasma +/- <1 HIV 1/2 S/CO S/CO

Primary 1 + 18.65 +++/- 507.08 511.31

2 + 20.82 +++/- 849.17 848.61

3 + 17.69 ++/- 178.87 172.25

4 + 20.91 +++/- 881.23 894.14

5 + 12.05 +/- 124.97 125.72

6 + 18.97 +++/- 164.88 163.02

7 + 16.78 ++/- 148.81 149.50

8 + 19.87 ++/- 194.48 184.93

9 + 19.38 +/- 271.08 266.57

10 + 20.94 +++/- 425.45 427.95

11 + 20.70 +++/- 552.53 531.20

12 + 20.82 +++/- 760.11 787.02

Diluted S/CO 2–3 + 2.35 +/- 3.63 3.76

S/CO 5–7 + 6.73 +/- 6.26 6.73

S/CO >15 + 15.06 ++/- 15.71 17.45

The instruments used were from the following companies: SD BioLine HIV 1/2 3.0 (Standard Diagnostic Inc., Yongin, Korea), VIDAS HIV DUO Ultra (bioMérieux, Marcy-L’Etoile, France), Serodia HIV 1/2 (Fujirebio, Tokyo, Japan), Architect HIV Ag/Ab Combo (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA), and ARC HIV Ag/Ab (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany).

Abbreviations: HIV, human immunodeficiency virus; Ag/Ab, antigen-antibody; S/CO, signal-to-cut-off.

Inc.)으로 진행한 결과 모두 음성이었다.

2. 희석배수 및 표준품 제조

HIV검사 외부정도관리 평가용 표준품 제조를 위한 희석 배수 시험결과, VIDAS 시약은 1:2,000 희석에서 저농도(S/

CO 2-3)를, 1:1,000에서 중농도(S/CO 5-7)를, 1:10 희석에 서 고농도(S/CO 15-16)를 보였다. 로슈와 애보트 시약에서 는 1:150, 1:3,500, 1:6,000 희석에서 각각 고농도, 중농도, 저 농도 반응값을 보였다(Table 2). 이 희석배수를 사용하여 표 준품을 만들어 각 기관별로 음성과 양성 검체 구성을 달리하 여 2016년도 상·하반기 공공기관과 민간기관의 숙련도 평가 에 필요한 HIV 항원·항체검사 외부정도관리 평가용 표준품 을 각각 750 set씩 총 1,500 set를 제조하였다. 분주와 라벨링 을 마친 외부정도관리 평가용 표준품이 Fig. 1에 나와 있다.

3. 균질성 및 안정성 평가결과

분주된 외부정도관리 평가용 표준품의 균질성을 평가한 결 과 VIDAS, 로슈, 애보트 검사기기에서 모두 균질함을 보였다.

Table 3과 Table 4에 HIV 항체 양성과 음성 검체 10 바이얼에 대한 VIDAS 시약의 균질성 평가결과가 나와 있다. ANOVA 분석결과 F비가 F기각치보다 낮아 모두 병간 균질성이 확보 됨을 보였다(Tables 3, 4). 안정성 평가에서는 4 °C와 25°C 두 조건 모두에서 21일까지 안정함을 보였다. 다만 음성 검체는 S/CO 값이 매우 낮아서 S/CO 0.02의 변화가 CV 17.6%의 변 화를 유발해서 판정기준 10%를 넘었지만 음성 검체의 S/CO

값을 고려하여 안정한 것으로 평가하였다(Table 5).

고찰

전 세계적으로 HIV검사에 대한 정도관리가 매우 중요하게 여겨지고 있으며, 각 국에서는 그 나라에 적합한 물질을 확보 하여 HIV 감염검사의 정도관리에 만전을 기하고 있다[8]. 외

Table 2. Determination of dilution rates of human immunodeficiency virus antibody positive source plasma according to reagents

Reagent Dilution rates A institute B institute

1st 2nd 3rd 1st 2nd

VIDAS (S/CO) 1:10 15.54 15.36 15.44 16.12 16.24

1:1,000 5.22 5.26 5.28 5.91 5.79

1:2,000 2.82 2.91 2.90 3.04 3.18

Roche/Abbott (S/CO) 1:150 314.14 315.20 315.90 319.80 321.40

1:3,500 6.70 6.78 6.69 6.84 6.83

1:6,000 3.11 3.16 3.10 3.21 3.13

Particle agglutination 1:1,000 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++

1:8,000 ++ ++ ++ ++ ++

1:10,000 + + + + +

Rapid 1:10 + + + + +

1:90 + + + + +

1:150 + + + + +

Abbreviation: S/CO, signal-to-cut-off.

Fig. 1. External quality controls for human immunodeficiency

virus antigen/antibody tests.

부정도관리물질은 검사의 정도관리에 중요하며, 검사의 신뢰 성을 객관적으로 평가할 수 있다[9]. HIV검사용 외부정도관 리 평가 표준품은 HIV 감염자의 조기 발견 및 감염의 진단, 안 전한 혈액공급 등을 목적으로 검사장비나 진단시약을 사용하 는 검사의 질 관리에 사용되고 있다.

국내 HIV 감염의 정확한 진단을 위해서 혈액원과 의료기관 은 다양한 형태의 검사방법과 HIV 확진검사 전략을 수립하여 검사를 수행하고 있다. 특히 근래에는 기존의 진단시약보다 우 수한 성능을 가진 진단시약이 널리 보급되어 사용되고 있다 [10]. 국내 의료서비스의 특성상 외국에서 개발된 진단시약을 각 실험실 및 병원 검사실에서 선별 및 확인검사용으로 도입하 여 사용함에 따라 검사결과의 정확성, 정밀성 및 재현성이 보 장되는 검사의 품질관리시스템이 필요하다. 그러나 그동안 이 루어진 연구에서는 단순히 양성과 음성을 조합하여 평가를 진 행하고 그 결과를 공유하는 수준이었다. 이에 국내 HIV검사 에 대한 정확도와 정밀도, 그리고 재현성이 일정하게 도출될 수 있는 좀 더 체계화되고 시스템화된 국가 차원의 정도관리사 업의 필요성이 대두되었다. 이에 2005년부터는 숙련도 평가용 물질을 더 세분화하고 체계화시켜 다양한 기관들이 참여할 수 있도록 질병관리본부 국립보건연구원에서 연구전략을 수립하 여 기존에 공공기관에서만 시행하던 숙련도 평가를 민간기관 까지 확대하게 되었다. 그러나 참여기관의 증가로 인하여 소량 제조하던 숙련도 평가용 표준물질로는 더 이상의 진행이 어렵 게 되어 원료물질 제조용 혈액확보와 제조 및 품질 평가 부분 을 민간기관으로 이관하여 진행하게 되었다. 이후 매년 상·하 반기 2회의 숙련도 평가를 진행하기 위하여 양성과 음성 그리 고 약양성 물질, 항원양성 물질 등 다양한 농도의 HIV 숙련도

평가용 표준물질을 개발하여 전국 대학병원과 종합병원을 포 함하여 시·도 보건환경연구원과 보건소, 검역소는 물론 병무 청까지 참여하는 대단위의 숙련도 평가가 이루어지게 되었으 며 그 결과 국내 HIV검사실의 신뢰도를 한 단계 높이고, 정부 에서는 국내 HIV검사실 관리에 대한 정도관리자료를 축적하 고 있다[11,12].

국제적으로 HIV 진단을 위한 다양한 진단시약과 장비가 개 발되고 도입됨에 따라 사용장비와 시약별로 차이를 최대한으로 줄이기 위하여 각각에 적합한 맞춤형 표준물질이 필요하게 되 었고, 본 연구를 통하여 이를 개발하기에 이르렀다. 공공기관의 경우 설문을 통하여 사용장비와 시약에 대하여 전수조사를 실 시하여 분석하였고, 민간기관의 경우 대한임상검사정도관리협 회를 통하여 사용장비와 시약을 조사하였다. 조사결과 공공기 관에서 사용하는 장비와 시약은 약 5종으로 다양하였으며, 민간 기관은 로슈와 애보트 2종의 장비와 시약을 주로 사용하고 있었 다. 공공기관과 민간기관에서 사용하는 장비와 시약은 서로 상 이하여, 각 장비와 시약에 적합하도록 질병관리본부 표준물질 제조 권고안과 KS A ISO guide를 기준으로 표준물질을 제조하 고 균질성과 안정성 평가를 진행하였다. 최종적으로 HIV검사 용 숙련도 평가에 필요한 한국형 맞춤형 표준물질을 개발하였 으며 이를 통하여 더 세분화되고 다양한 숙련도 평가용 맞춤형 표준물질을 개발할 수 있는 기초자료를 확보하였다[13,14]. 한 국산업규격에서 라벨에 표시되는 정보는 생산기관명, 물질명, 생산기관의 코드, 배치번호, 안전 경고에 한정하라고 규정하고 있으며 이는 인증서에 있는 정보를 이해하지 않고 물질을 사용 하는 것을 방지하기 위한 조치이다[14]. 이에 따라 본 연구의 제 조물질에도 최소한의 정보만 라벨링하였다(Fig. 1).

Table 3. Homogeneity evaluation of ten aliquots of candidate external quality controls with human immunodeficiency virus antibody positive reaction by VIDAS reagent

Vial trial 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1 18.65 18.65 18.64 18.68 18.59 18.64 18.61 18.63 18.65 18.61

2 18.66 18.65 18.65 18.65 18.62 18.65 18.65 18.64 18.65 18.65

3 18.66 18.67 18.64 18.65 18.64 18.67 18.62 18.66 18.58 18.64

Analysis of variance: F ratio=1.68, F rejection value=2.39, and P-value=0.15.

Table 4. Homogeneity evaluation of ten aliquots of candidate external quality controls with human immunodeficiency virus antibody negative reaction by VIDAS reagent

Vial trial 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08

2 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08

3 0.07 0.08 0.07 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 0.07 0.08

Analysis of variance: F ratio=0.77, F rejection value=2.39, P-value=0.63.

Ta bl e 5. S ta bi lit y e va lu at io n o f a c an did at e p an el u sin g VID A S HIV D UO U ltra r ea gen t Pa ne l* Tr ia l 0 d ay 5 d ay 12 d ay 21 d ay 4°C 25°C Me an CV 4°C 25°C Me an CV 4°C 25°C Me an CV 4°C 25°C Me an CV

A1 1 18.65 18.66 18.65 0.038 18.66 18.92 18.79 0.978 18.99 18.86 18.92 0.486 18.96 18.95 18.95 0.037 2 18.66 18.68 18.67 0.076 18.69 18.82 18.75 0.490 18.67 18.79 18.73 0.453 18.88 18.65 18.76 0.867 3 18.66 18.66 18.60 0.000 18.69 18.88 18.78 0.715 18.67 18.88 18.77 0.791 18.94 18.79 18.86 0.562 A2 1 0.08 0.08 0.080 0.000 0.08 0.09 0.085 8.319 0.07 0.09 0.080 17.68 0.08 0.09 0.085 8.319 2 0.08 0.08 0.080 0.000 0.09 0.08 0.085 8.319 0.08 0.08 0.080 0.000 0.07 0.09 0.080 17.68 3 0.09 0.08 0.085 8.319 0.08 0.09 0.085 8.319 0.08 0.09 0.085 8.319 0.07 0.09 0.080 17.68 A3 1 0.08 0.09 0.085 8.319 0.08 0.08 0.080 0.000 0.08 0.07 0.075 9.428 0.08 0.08 0.080 0.000 2 0.08 0.09 0.085 8.319 0.08 0.07 0.075 9.428 0.08 0.09 0.085 8.319 0.09 0.08 0.085 8.319 3 0.08 0.08 0.080 0.000 0.08 0.08 0.080 0.000 0.09 0.09 0.090 0.000 0.09 0.08 0.085 8.319 A4 1 16.69 16.69 16.69 0.000 16.72 16.68 16.70 0.169 16.78 16.92 16.85 0.588 16.87 16.55 16.71 1.354 2 16.65 16.67 16.66 0.085 16.71 16.70 16.70 0.042 16.42 16.75 16.58 1.407 16.75 16.81 16.78 0.253 3 16.66 16.68 16.67 0.085 16.69 16.68 16.65 0.042 16.94 17.16 17.05 0.912 16.59 16.75 16.67 0.679 A5 1 6.73 6.75 6.740 0.210 6.76 6.81 6.785 0.521 6.78 6.82 6.800 0.416 6.88 6.82 6.850 0.619 2 6.75 6.75 6.750 0.000 6.77 6.79 6.780 0.209 6.69 6.88 6.785 1.980 6.64 6.59 6.615 0.534 3 6.75 6.73 6.740 0.210 6.73 6.78 6.755 0.523 6.75 6.83 6.790 0.833 6.81 6.66 6.735 1.575 A6 1 2.35 2.34 2.345 0.302 2.36 2.39 2.375 0.893 2.41 2.36 2.385 1.482 2.44 2.46 2.450 0.577 2 2.33 2.35 2.340 0.604 2.38 2.36 2.370 0.597 2.43 2.33 2.380 2.971 2.46 2.48 2.470 0.573 3 2.35 2.35 2.350 0.000 2.29 2.32 2.305 0.920 2.42 2.45 2.435 0.871 2.39 2.45 2.420 1.753 Ab br ev ia tio ns: HIV , h um an imm un odef icien cy v iru s; CV , co ef ficien t va ria tio n. *A1, A4, A5, A6: HIV a nt ib od y p osi tiv e co nt ro ls; A2, A3: HIV a nt ib od y n ega tiv e co nt ro ls.

Accep ta ble cr iter ia o f s ta bi lit y i s CV 10%, ex cep tio n i s a llo w ed t o n ega tiv e co nt ro ls.

본 연구과제 수행결과로 각 시약별 맞춤형 표준물질의 제조 와 품질의 확보가 가능하게 되었으며, 이로 인하여 우리나라에 서도 HIV검사 외부정도관리 평가용 표준품을 생산할 수 있는 시스템이 마련되었다. 향후에도 국내에서 제조된 표준품을 이 용한 지속적인 HIV검사에 대한 외부정도관리가 필요하다고 본다.

HIV검사용 외부정도관리 평가용 맞춤형 표준물질 개발에서 제일 어려운 부분은 HIV 항체 양성 원료 혈장의 확보이다. 에 이즈 환자의 치료 성적이 좋아지면서 고역가의 항체를 가진 혈 장을 구하기 어렵게 되고 있다. 해외에서도 이러한 자원 확보 가 어려워지고 있는 상황을 극복하는 방안들이 모색되고 있다 [15]. 본 연구에서는 기존 연구에서 형성된 HIV 감염자 네트 워크를 이용하여 항체 양성 혈액을 확보하였고, 혈액원을 통 해 음성 혈액을 구입하여 연구를 수행하였다. 본 과제와 유사 한 타 연구를 위해서도 이러한 HIV 감염자 및 음성 혈액의 수 요는 점점 증가되고 있다. 그러나 이러한 혈액의 확보를 위해 서는 여러 절차가 필요하며, 이러한 절차는 일반화되어있지 않 다. 앞으로 생명윤리 및 안전에 관한 법률에 적합하게 다량의 원료물질 확보가 가능하게 된다면 다양한 성능과 농도를 가진 혈청전환패널, 저역가 항체 패널, 고역가 항체 패널 등 다양한 패널 개발을 통해 향후 HIV검사 수행기관의 외부정도관리와 진단시약 평가 등 다양한 목적으로 사용이 가능할 것으로 여겨 진다.

감사의 글

이 논문은 질병관리본부의 2016년 정책연구용역사업의

“HIV 항원·항체검사용 표준품 개발” 연구비 지원으로 이루 어진 것이다.

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국내 HIV 항원 • 항체검사용 외부정도관리물질의 개발

서동희 ^1,2 • 최여린 ¹ • 최원웅 ¹ • 윤철희 ³ • 최병선 ³ • 정윤석 ³ • 강 춘 ³

1

㈜원메디컬 진단시약연구소,

랩지노믹스 의학연구소,

질병관리본부 에이즈 • 종양바이러스과

배경: Human immunodeficiency virus (HIV) 감염의 정확한 진단을 위해 HIV검사에 대한 정도관리 는 중요하며, 외부정도관리물질을 이용한 신뢰도 평가가 정도관리에 중요한 부분이다. 국내 HIV 감 염진단의 표준화와 국내 HIV 검사기관이 사용하는 시약에 적합한 HIV 항원·항체검사용 맞춤형 외 부정도관리물질을 개발하여 공급하는 것이 본 연구의 목적이었다.

방법: HIV 항체 양성 혈장을 확보하여 혈청학적 검사와 불활성화를 시행하였다. 일정 농도를 가진 외부정도관리물질을 생산하기 위하여 VIDAS (bioMérieux, France), Architect (Abbott Laboratories, USA), Cobas 8000 (Roche Diagnostics, Germany) 검사장비를 이용하여 희석배수를 구하였다. 제 조된 외부정도관리 평가 표준품에 대해 균질성은 analysis of variance로 안정성은 변이계수로 평가 하였다.

결과: HIV 항체 양성 원료 혈장은 웨스턴블롯 확인검사에서도 양성을 보였다. 각 검사장비에 대해 흡광도비가 2-3, 5-7, 그리고 15-16의 값에 해당하는 원료 혈장의 희석배수를 산출하였다. 여과 된 희석 혈장을 1 mL씩 분주하여 HIV 항원·항체검사용 외부정도관리물질을 공공기관용과 민간기 관용으로 각각 750 set씩 총 1,500 set를 생산하였다. 제조된 외부정도관리물질의 균질성은 요구되 는 기준을 만족하였고, 안정성은 음성 물질을 제외하고 10% 미만의 CV를 보였다.

결론: 국내에서 사용하는 HIV 진단시약별로 맞춤형 외부정도관리물질의 제조와 품질의 확보가 가 능하게 되었다. 향후에도 외부정도관리물질을 이용한 HIV검사에 대한 지속적인 정도관리가 필요하 다고 본다.

(J Lab Med Qual Assur 2018;40:92-100)

교신저자: 서동희

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