약학희지제 49 권제 4 호 347~ 354 (2005)
Yakhak Hoeji Vol. 49，No. 4 藥 學 舍 확
흰쥐 뇌에서의 Lipopolysaccharide-유도 산화적 스트레스에 대한 6Q21 고!' Melatonin의 작용
배 미 경• 최 신 규•고 문 정■하 헌 주• 김화정# 이화여자대학교 약학대학
(Received August 2, 2005; Revised August 18，2005)
Effect of OQ21 and Melatonin on Lipopolysaccharide-Induced Oxidative Stress in Rat Brain
M e e K y u n g B a e , Shinkyu Choi, M oon -Jeon g K o, H un-Joo H a and H w a-Ju n g K im #
Research Institute of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, Ewha Womans University, Seoul 120-750， Korea
Abstract — Lipopolysaccharide (LPS) induces synthesis of several inflammatory cytokines and nitric oxide (NO). NO in brain is involved not only in the regulation of important metabolic pathways via intracellular cyclic GMP-dependent path
ways, but also in neurotoxic damage by reacting with superoxide ion leading to form peroxynitrite radical. Oxidative stress has suggested to be related to the inhibition of NO synthase/cyclic GMP pathway. OQ21 is a new fluorinated quinone com
pound that is recently known to have inhibitory effects on both NO synthase (NOS) and guanylyl cyclase (GC). In this study, we examined effects of OQ2 1, other known NOS or GC inhibitors, or an antioxidant, melatonin, on the oxidative stress pro
duced by LPS in rat brain. Oxidative stress was observed by using the 2',7'-dichlorofluorescin diacetate to measure intra
cellular reactive oxygen species (ROS) production and by measuring the formation of thiobarbituric acid reactive substances to measure lipid peroxidation. LPS induced significant increase in both ROS produdction and lipid peroxidation in all brain regions tested (striatum, hippocampus and cortex), which were dissected 6 hr after intraperitoneal administration of LPS to rats. Direct striatal injection of two NOS inhibitors, N-nitro-L-arginine methyl ester and diphenyleneiodonium, or a GC inhibitor, lH -[l，2 ’4]oxadiazolo[4，3-a]quinoxaline-l-one, produced no significant ROS increase. However, OQ21 enhanced ROS formation in striatal tissues from LPS-treated rats. Melatonin decreased LPS-induced ROS formation and decreased ROS formation increased by OQ21 in striatum of LPS-treated rats.
K eyw ords □ lipopolysaccharide, nitric oxide synthase, guanylyl cyclase, oxidative stress, rat brain
동물이 병원성 (pathogenic) 박테리아등의 미생물에감염되었
을때생성되는내독소(endotoxin) 횔성성분인 lipopolysaccharide
(LPS)이직접 정맥이나뇌내로투여되면 대식세포(macrophage)
등의 면역세포 및뇌의 glia 세포표면에 있는수용체와결합하
여중추신경계의활성화및다낑한행동변화나생리반응들을 나
타내게된다.1-5) LP S가수용체와결합후일어나는여러세포내
생화학적 반응들이 알려져 있는데 그중 inducible nitric oxide synthase(iNOS)의 mRNA와단백질의 합성유도에 의한 NO 생
성증가가 잘 알려져 있다.1} NO는 iNOS 이외의 다른 NOS
isoform들에 의해서도 생성되는데 NOS isoform은 NOS 1
#본 논문에 관한 문의는 저자에게로 (전화) 02-3277-3021 (팩스) 02-3277-3051 (E-mail) [email protected]
(neuronal NOS; nNOS), NOS 2(iNOS), NOS 3(endothelial
NOS; eNOS)의세종류로분류되며 이들은모두 대략 300 kDa
의 큰 protein homodimer이다. 생성된 N O는 guanylyl cylase (GC)를활성화시켜서 cGM P를증가시킴으로서 뇌및신경세포 내중요한기능을 매개할수있다.6〉
세포내 Ca2+ 증가께따른 NO S의활성화에 의해 Nᄋ가생성 될때세포내높은농도의 Ca2+에 의해 superoxide anionCOj') 과 hydrogen peroxide(H202)의 생성이 함께이루어질 수 있다.
H202와 예 는 반응하여 매우 반응성이 강한 hydroxyl free
radical( • OH)을 형성하게 된다. Nᄋ는생성된 예 와 반응해서 peroxynitrite anion(ONOO ) 산소 유리기도형성하게 되고이것 은 강력한산화제이므로 protonation되어 . OH와 . 1나ᄋ2로 전 환된다. 과량생성된0; 는 항산화효소인 superoxide dismutase (SOD), catalase및 glutathion peroxidase 등에 의해 H202를 거
348 배미경 ■ 최신규 • 고문정 • 하헌주 • 김화정
쳐무해한 H2ᄋ로변화되어 제거되는데 이과정에서 유독한반 응성산소유리기들( • OH, R 0 0 •，R 0 ■)이부생하여 생체내 조직에독성을나타내게 되며, 특히 여러신경계의 질병들의 직 접, 간접적인 원인이되어 궁극적으로노화및신경계질환들의 기전과연결되어지기도한다.7’8) 특히 뇌는반응성 산소유리기 에의한손상이 신체의 다른어느기관보다크게 나타나는데그 이유는순환하는 02의20%가뇌에 집중되어 있고, 세포막에는 불포화지방산즉쇄 (polyunsaturated fatty acid side chain)가풍 부하며, 반응성 산소유리기 반응의촉매인 철이풍부하기 때문 이다. 특히중추신경계에서의 NO가매개하는신경독성은ᄋNOCT 와관련된신경세포사멸이 원인이 된다고알려져 있으며그기 전으로서 지질 과산화(lipid peroxidation) 가유도됨으로써 생체 막의 기능이 상실되거나, 또는 DNA가손상되어 DNA 치유효 소인 poly(ADP-ribose)polymerase(PARP)가활성화되고이어서 에너지가고갈됨으로서 세포사멸이유도되어 일어난다고제시되 어왔다.9) 따라서 L P S 혹은 cytokine이작용하면 glial cell에서 NO가생성되므로뇌손상시 nNOS과 iNOS의억제혹은불활성 화가신경보호 작용을 일으킬수 있다고 가정할수있으나이
pathway를차단시켰을 때뇌에서 산화적스트레스에 어떤영향
을나타내는 지에 대한연구는 많지 않다.1M2) NOS 저해제인
N-methyl-L-arginine methyl ester(N AM E)를쥐에경구:투여시 뇌에서 항산화효소인 glutathione peroxidase의활성이증가되고 간에서도 전체 glutatione 농도가 중가되었고,13) N A M E를 in w'fro에서간조직에 처리하였을 때 NO와 superoxide 형성이감 소됨14비 보고된 바있다. 앞에서 언급한대로 NOS에의해 과 도하게 생성된 NO는ᄋNOCT를형성하나적당히 생성된 NO는 G C를 활성화하여 cGM P를형성한다. GC 억제 및그에 따른
cG M P 감소효과가뇌의산화적 스트레스에 미칠수있는영향
에대해서도많은보고가없다.
Melatonin은 serotonin을전구물질로하여 합성되어포유동물
의송과체에서 분비되는호르몬으로외부의 빛을생체내의 신 호로전환시켜포유동물의 계절과밤낮을주기로변화하는행동 과신체의변화를나타내도록역할을지닌내분비성물질로서 알
려졌지만15ᅵ17) melatonin의강력한 항산화작용에 대한연구결과
들이 많이보고되었다. Melatonin의강력한항산화효과에 의해 빈응성산소유리기로부터 DN A，단백질과세포막지질등이보 호되고,11’18) 최근에는산화적 스트레스를유발하는 safrol, kainic acid, 방사선(radiation) 및 L P S 둥에 의한독성이 억제된다고보 고되었으며，19-23) 또한 glutamate 수용체활성에의한세포내로
의 Ca2+의과도한유입이 억제되며, NOS가 저해됨으로서 NO
의형성이 억제된다는것이 알려진 바있다.24) Poeggeler 등25>
에 의하면 중추 흥분성 아미노산 수용체의 활성화에 의해
melatonin의합성이 억제되어 • ᄋH의해독의 속도가감소되고，
노화가 진행되면서신체내의 melatonin의농도가점점감소되는
것과여러산화적 스트레스에 의한질병에 점점취약해지는 현 상과는무관하지않을.것이라는의견을제시하였다.
본연구에서는 L P S의복강내투여에 의한뇌부위(선조체，
해마, 대뇌피질)의 ROS 생성및지질과산화등의산화적스트
레스의 변화를조사하고 L P S로유도되는산화적 스트레스 변
화에 대한 NOS 저해제, GC 저해제 및 새로운 fluorinated- phenylamino-quinone 합성체로서 GC억제및 NOS 억제작용을 모두나타내는것으로밝혀진 O Q 2126) 화합물과 melatonin의영 향을알아보기 위하여흰쥐의 선조체내로이러한약물들을직 접투여하여조사하였다.
실험 방법
시약및약물
L P S(£. coli serotype 026; B26, phenol extraction) 와 NOS 저해제인 N A M E과 melatonin은 Sigma(St. Louis, MO, USA) 에서 구입하였고 GC 저해제인 lH-[l,2,4]oxadiazolo[4,3-a]
quinoxaline-l-one(ODQ)와 NOS 저해제인 diphenyleneiodonium (DPI)는 Tocris cookson(Bristol, U K)에서 구입하였고 florinated phenyl amino quinone 계 약물인 6-N-[(2,3,4-trifluorophenyl) amino]-5,8-quinolinedione(OQ 2 1)은이화여자대학교대학원약 학과정량분석실에서 합성된 것을시용하였다. LPS는생리식 염수(0.9% NaCl)에 녹여 사용하였으며 melatonin, NAM E, ODQ, DPI는 각각 dimethylsulfoxide(DMSO) 에 녹여 stock
solution을제조하여시용시매일 생리식염수를이용하여용매
인 D M S 0의최종농도가 10%가되지않도록 희석하였다. 마취 제인 pentobarbital은한림제약(서울, 한국)에서 구입하여사'용하 였다.
ROS를 측정하는 실험에서 HEPES, sucrose와 형광의 정량 물 질로 사용한 2\7’-dichlorofluorescin(DCF)는 Sigma(St. Louis, MO, USA)에서 구입하였고 hydrogen peroxide sensitive dye인 DCFH diacetate(DCFH-DA)는 molecular probe(Eugene, Oregon, USA)에서 구입하였다. Lipid peroxidation의즉정을위해서사용 한 2-thiobarbituric acid(TBA), trichloroacetic acid(TCA)와 기 준 정량 물질로 사용된 l，l，3，3-tetaethoxypropane(TEP)액은 Sigma(St. Louis, MO, U SA)에서구입하였다.
실험동물
Sprague Dawley(SD)계의 수컷 쥐를실험 동물(제일동물，서
울)에서 구입하여 온도 2 0 ~ 2 2 oC, 습도 50 ~ 6 0%와조명시간이 12시간으로조절된실험동물실에서 고형사료 (삼양유지)와물을
자유롭게 섭취하게하면서 실험에 적당한체중인 2 0 0 ~ 3 0 0 g이
될때까지약일주일이상사육및적응시킨후, 실험에시용하 였다.
LPS-유도 산회스트레스에 대한 이어 와 GC 저해제들의 작용 349
쥐뇌의선조체및복강내로의약물투여와조직적출 세부위의 뇌조직에서 L P S에의해유도되는 RO S 생성과지 질과산화정도를조사하기위해서 먼저동물실에서 적응시킨흰
쥐복강내로 LPS를투여하였다. 뇌선조체로투여된약물작용
을조사하기 위한실험에서는 pentobarbital sodium(40 m g^g)으
로마취시킨뒤 L P S를투^하고 마취시킨뒤，면도하여수술부
위의 털을제거한早 stereotaxic 기구(Various사, USA)에고정
한시킨후, 두피를 제거하고두개골 접합부중 bregma점을기
준으로 anterior 1.2 mm, lateral±2.5 mm, ventral 6.5 mm 위치 의양측 선조체부위에 23 gauge의 disposable needle 로구멍 을 뚫은 뒤에 Hamilton사(Nevada, USA) 의 hamilton 70 1N syringe(10 너)를이용하여 시험 약물들을투여하였다. GC 저해 제인 0DQ(2 nmoW2 yd 10% DMSO/hemisphere), NOS 저해 제인 DPI(2 nmole/2 |i/ 10% DMSO/hemisphere) 와 NAM E(2 nmole/2 yd 10% DMSO/hemisphere), flurinated quinone 물질 인 ᄋQ 21(6 nmole/2 \d 10% DMSO/hemisphere), melatonin (100 nmole/2 yd 10% DMSO/hemisphere) 또는 대조액인 10%
DMSO(2m/)와 saline(2 네를 동일한 선조체 부위에 0.5|o//min 의속도로주입하였다. L P S 또는 saline 의복강내투여후6시 간뒤에단두하여두개골을 제거하고뇌를적출한후，뇌조직을 부위별(선조체，해마, 대뇌피질)로얼음상에서 신속히게분리하 여액체 질소통에 신속히 옮겨 보관하였다.
R O S의측정
흰쥐의 대뇌 선조체의 약물의 주입 후의 R O S # 측정하기
위하여 2',7'-dichlorofluorescin diacetate(DCFH-DA)를사용하 였다. 이분석은 처음에 Keston and Brandt27베 의해 고안된 방법으로서 수용액에서 측정이 가능하며 원리는 D CFH -D A가 형광을띠지 않는안정한물질인데 alkaline hydrolysis에의해 deesterify 되고 역시 형광을 띠지 않는 D C F H가 형성된다.
D CFH는 RO S에반응하여 빠른 속도로 산화되어 매우 형광을
띠는 D C F으로 되며 이형광을 측정하는 원리이다. 액체 질소
에보관된 선조체륜 꺼내 신속히 무게를 재고그무게의 1 5배
용량의 0.32 M sucrose 용액음 가하여 homogenizer(Wheaton 사’ millville, NJ, USA)로분쇄한후 저온 원심분리기(54 17R ; Eppendolf사，Hamburg, Germ any)를이용하여 4°C, 20800 ^ g 에서 10분간 원심 분리하였다. 그 다음 pellet 만유 취하여 sucrose와동량의 H E P E S buffer(PH 7.4)를가하여 resuspen
sion 시켜서대략 0 .0 7 g/m/의 농도가 되도록 하였다. 25 |o/
suspension을 에탄올로 제조한 12 .5 mM stock solution을 62.5 nM이되도록 DCFH -DA와 incubation을하였는데 이때는 최종부피가 lm Z이되도록 H E P E S buffer를넣어 3시간동안 370C에서 시행하였다. 이후 96 well plate에각각 2 0 0여씩 넣 어 excitation wavelength 485 nm (bandwidth 20 nm), emission
wavelength 530 nm(bandwidth 2 5n m ) 에서 florom eter인 F L - 600(Bio-Tek, VT, U SA)을이용하여 형광을 측정하였다. 각 분 획의 autofluorescence는 DCFH-DA를 넣지않은 blank 실험을 함으로써보정하였고 RO S 정량은 D C F의검량선(0 .0 5 ~ 1.0 ^M ) 과뇌조직의 단백질 정량으로부터 계산하여 nmol DCF/h/m g protein으로표시하였다.28)
지질고 ^화 측정
L P S 등에 의해서 생성되는 R O S에의해 지질 과산화(lipid
peroxidation)가일어난다. 따라서 산화적 스 레 스 의 척도로 지
질과산화의측정을하였으며 그측정은 Baegue 둥295의방법에
따라측정한 T B A test를따랐다. 이는 실험동물의 조직에서 지
진과산화반응을측정할때널리사용되는민감한분석 방법으 로조직 homogenate를공기와의 접촉하에 incubation 할때 지
질 과산화 반응시 생성되는 이차 생성물인 malondialdehyde
(MDA) 및 alk-2-enal 등과 같은 물질과 T B A가서로 반응하여
적색 색소를형성하게 되이 이를 5 3 2 n m에서흡광도를 측정하
는방법이다.30’31)
액체 질소에 보관된 선조체를 꺼내 신속히 무게를 측정하고 조직 15 0 mg당 P B S(P H = 7.4 ) 2 m/의비율로 넣어분쇄시켰다. 이렇게마련된 선조체 homogenate 10 j i , 10% T C A액 500 pi, 0.6% T B A액 500 에 P B S 완충액 490 p/를 넣고 잘혼화시켜
100oC에서 1시간동안 가열시켰다. 이경우공기와의접촉을 잘
할수있도록 반응용기의 뚜껑은 열어두었다. 반응후얼음상 (0oC)에서 일마동안식힌투 800 |a/의 n-butyl alcohol을첨가하
여혼합액을잘 섞이도록혼화한 뒤 4000 rpm에서 5분간 원심
분리히여 96 well plate에누증으로분리된용액중 red pigm ent 가추출된 상등액을 200 n/씩취하여 54 0 n m에서 Bio-Rad사의 Benchmark microplate reader(Richmond, CA, U S A )ir 이용하 여흡광도를측정하였다. 정량할때의 기준물질로는 T E P의검 량곡선 (calibration curve)을얻어 시료-2 * 정량하고 단백질 분석 음하여보정해주었다. 단백질 정량은표준물질로서 B S A를 이 용하여 Low ry법321으로시행하였다.
자료분석
실험 data의분석은각평균값에대해 ANOVA를시행하여 p <
0.05인것음유의성 있는결과로하였다.
결과 및 고찰
L P S의복강투여에의해 유도된산화적 스트레스
L P S를복강 내로용량 별로투여했을 때뇌조직 중선조체
(striatum), 해마(hippocampus), 대뇌피질(cerebral cortex)는 각 각용량의존적으로 RO SS} 지질과산화이 증가됨을 볼수 있다
350 배미경 • 최신규 • 고문정 * 하헌주 * 김화정
Fig. 1 - The changes of ROS formation administered LPS i.p. in brain. (A) In striatum, (B) in hippocampus, and (C) in cerebral cortex, LPS increased dose dependency ROS formation. Rats were sacrificed by decapitation 6 hrs after LPS administration (i.p) were done. Values represent mean±S.E.M. * 尸<0.05 relative to saline administration (0 mg/kg).
(Figs. 1 & 2). 복강내에 LPS를 lm ^ k g의용량으로투여했을 때，선조체에서 RO S의증가가 대조군(0.9% NaCl)에비해 1.4 배증가하였으나유의할만한수준은아니었고2 mg^kg의농도 로투여하였을때 2배정도높게 유의성 있게 중가하였다(Fig.
1A ). 해마에서 역시 나징의 복강투여에 의해 농도의존적으로
ROS는2 mg/kg의농도로투여한경우대조군에비해 2배가량
유의성 있게증가되었으며 해마에서의수치는선조체의 수치와 유사하였다(Fig. IB ). 대뇌피질에서도 L P S의복강투여에 대해서 농도 의존적으로증가하여 RO S가2 mg/kg 투여에 의해서 2배 가량높게유의성있게증가하였다(Fig. 1C ). 따라서 RO S는 L P S 의농도 의존적으로증가하였음을확인하였다. 지질 과산화역 시농도의존적으로증가하여 선조체에서 L P S 2 mg/kg를투여
Fig. 2 - The changes of lipid peroxidation administered LPS i.p. m brain. (A) In striatum, (B) in hippocampus, and (C) in cerebral cortex, LPS increased dose dependency lipid peroxidaton. Rats were sacrificed by decapitation 6 hrs after LPS administration (i.p) were done. Values represent mean±S.E.M. * 尸<0.05 relative to saline administration (0 mg/kg).
했을시대조군의 1.5배증가하였으나유의성을 나타내는농도
는아니었고(Fig. 2A), 해마에서는나징의 1 mg/kg의농도에서 1.5배， 2 mg/kg의농도에서 1.7배더높게유의성있게중가하였 다(Fig. IB). 대뇌피질에서는 L P S의 1 mg/kg의농도에서 1 . 1 배，
2 mg/kg의농도에서 1.5배가량유의성 있게중가하였다(Fig. 2).
이러한결과로부터 LPS를복강내로투여시 L P S가뇌의 blood brain barrier(BBB)를통과하여 뇌조직에 RO S와지질과산화 증가의 산화적스트레스를농도의존적으로 나타냄을알수있 었다. 본연구의이러한결과는 Sew erynek 등22’23)의 L P S의복 강투여로뇌，폐，간에서 지질과산화가증가되었다는보고와간 에서 항산화작용을 가진총 glutathione 농도가 증가하고간과
뇌에서 glutathione peroxidase의활성의 증가되었다는보고가
A
* B *
* C *
14 12 108
6
4
2
109 8 7 6 5 4 3 2
9 8
7 6
5 4
3 2
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LPS-유도산회스트레스에대한 NOS 와 GC 저해제들의작용 3 5 1
있었으므로본실험의 결과도 이러한 L P S로인한산화적스트 레스의중가결과와일치한다.
L P S에의해유도된 R O S 증가에대한 N O S 저해제와 G C 저해 제의영향
NO/cGMP 경로는세포내주요 생리기능에관여하므로이경
로가 저해되면 뇌의 기능손상이 유발되고반대로과도한 NO
생성에 의해 유도되는 R O S S 인한세포내 산화적 스트레스가
NOS 억제에 의해서 감소될수 있다고예측할수 있다. 그러나
이러한두경로가뇌의 산화적스트레스반응에 어떠한역할을
하는지에대한연구는많이보고되어 있지 않다. 따라서 LP S에
의해유도된 ROS 생성증가효과에 대한 NOS 억제제및 GC 억 제제들의 영향을알아보기 위하여 약물을뇌의 선조체 내로직 접투여하여 조사하였다. 사용한약물인 ODQ는처음으로밝혀 진선택적이고강력한 soluble GC 저해제이고335 DPI는 NOS와 NADH oxido-reductase와 같은 flavoenzyme의 저해제이다. N A M E는 NOS 기질인 arginine의구조 유사체로서 작용하여
NOS를 저해하는약물이다.
먼저쥐를 pentobarbital로마취시키고대조군혹은 L P S를복
강으로투여한뒤 stereotaxic 기구에 고정시켜서 시험 약물들을
뇌선조체로투여하고6시간뒤에단두，뇌의 선조체를 적출하 였다. 이실험에서는뇌조직으로의약물의 주입없이 LP S의복
□ CONTROL (I.p.)
■ L P S (I.p .) *
control ODQ DPI NAME
Fig. 3 - Effects of intrastriatal treatement of ODQ, DPI or NAME on LPS-induced ROS generation. Rats were anesthetized and intrastriatally injected with ODQ (2 nmole/2 \d/
hemisphere), DPI (2 nmole/2 (j//hemisphere) or NAME (2 nmole/2 (^//hemisphere) right after the treatment (i.p.) of saline (control) or LPS (2 mg/kg). Rats are sacrificed 6 hr after i.p. treatment. Striatal homogenates were prepaired for ROS assay. None increased significantly ROS production.
* P <0.05 relative to control of control (i.p.). Values represent mean±S.E.M.
강투여시의 RO S 생성을측정한앞의실험과비교할 점이 있었
는데마취제 자체가 RO S의생성에 미치는영향과 약물을녹일
때사용하였던 용매효과에 대한것이었다. Fig. 3에서 볼수있 듯이 대조군과 LP S를투여한군모두 pentobarbital을투여하지 않았던선조체에서 p en to b a rb ita l 투여했을때대조군은 3 5 .1% , L P S를투여하였을 경우는 70.2%의 RO S 생성 증가를 보였다.
Sew erynek 동13’22’23)에 의한 보고에서도 쥐에 복강으로
phenobarbital을투여했을시간과뇌에서 산화적 스트레스가증
가된것이관찰된바있다. 따라서 pentobarbital 자체가뇌내에 작용하여 선조체에서 ROS를중가시켰을것으로사료된다. 약물 중 ODQ와 DPI는용매로서 10% DM SO를사용하였고 DM SO 에의한산화적 스트레스에 대한영향을살펴본 결과복강으로 대조군과 L P S를투여한 경우 모두에서 10 % D M SO의 처리는
뇌선조체에 RO S 형성에영향을미치지 않았다. L P S의복강투
여(Fig. 1 A)에서와마찬가지로마취시킨 뒤 L P S를 복강투여했
을때역시 대조군을투여한것에비하여 R O W 유의성있게증
가된것을 관찰하였다. 그러나마취제를투여한경우 L P S에의
한 RO S 생성효과가미취제를■¥여하지 않은 경우보다약간낮
게나타났다. 즉, 마취제를투여하지않았을때 (Fig. 1A)에는 L P S
2 mg/kg에의해서 100%가증가되었으나마취제를투여하였을
경우는선조체에서 대조군과비교시 약 30%의증가효과가 관
찰되었다. 이런 현상은 pentobarbital에의해이미 산화적스트레
스가형성되었으므로 L P S에의한산화적 스트레스증가반응이 둔화되어 나타난것으로추정된다.
복강으로 L P S를투여한군과대조군동물의 뇌선조체로 ODQ,
DPI 또는 N A M E의약물을주입했을 때 RO S 생성에변화가나 타나지 않았다(Fig. 3). 대조군동물에서 L P S와같이 RO S 생성 을 증가시키는 자극이 존재하지 않았을 때는 ODQ, D PI 및
N A M E 모두약물자체가 ROS 생성에아무 영향도미치지 않은
것으로 생각된다. L P S 처치에 의해 NOS 유도에 의한 NO 생성 이증가되고따라서 GC도활성화 되리라예측되는상태에서도 NO S의저해또는 G C의저해가 L P S로유도된 RO S의증가에
영향을주지못한이유는 L P S에의해서 N O S 뿐만 아니라다른
여러 세포내단백질중 cytokine 생성이중가되는 연쇄빈움이 일
어나고 이에 따라 NOS 이외의 염증 반응 관련 단백질들(e.g.
cyclooxygenase)의발현증가둥의 NOS 경로이외의다른 경로
로도 RO S를생성할수있으므로본실험에사용된 약물농도에
서의 NOS 저해작용만으로는 L P S에의한최종적인 RO S 생성 변화에 영향을나타내지 않는것으로설명되어 질수도 있다. 그 러나이약물들의작용을더명확히 확인하기 위해서는이들약
물들의 농도를 변화시켜 RO S 생성변화를비교해 보는실험뿐
아니라본연구에서 조사된 1회투여에 의한 단시간내 (6시간) 의효과이외에 24시간이상으로실험하는 것이 필요하리라여 겨진다.
