사상체질학회지 J.of 않S 삐g Canst. Med
Vol. 15. No 2. 2003
빼훌白虎홉이 移植 皮홉 뚫否反聊 違延에 미XI 는 홉響
전준영,
박성식
I Abstract I
Inhibitory effects of Yangdokbackhotang on the Immune
Hypersensitive Reaction in skin transplant mice
Jean Jun Young' . Park Seong Sik'
Dept. of Sasang Constitutional Medicine. College of Oriental Medicine Dongguk University
Objective: 까피s study was carried our to ev 허uate the inhibirory effect on immme hypersensitive
reaction by Yangdokbackhotang extract.
meth 여s : To srudy, We divided 4 weeks old rats inro three groups of 20, which are the constrasive
group with nothing treated, the skin transplated only, and the Yangdokbackhotang extract fed before
skin transplamation.
And did the experimem.
Results:
1. The car swelling in mice treated with YB noticeably decreased than only DNCB treated mice.
2. As shown in Table3, also results in a significanr decrease of YB group than ST group in the number
of positive cells of NF- κH, COX-2, IL-12H, and lCAM-I.
From the above results, it could be concluded that Yangdokbackhotang showed benificial immunosupressive
effect on the hypersensitive reaction.
I. 縮 論 서 「少陽A 찮論」 에 수록된 新定 處方 IJ으로
少陽A의 陽끓發짧에 주로 사용하는 淸熱降火 하는 방제 라 할 수 있다
2)
陽毒發짧은 한의학 陽끊白虎 Y易은 李濟馬의 『東醫壽世保元」 에
동국대학교 한의과대학 사상채질과 교신저자 전준영 주소)
경냥 김해시 상방동 690-1 동원아파트상가 11 동 201 호 동방부부한의원 전화) 055)324-0994 E-mail [email protected]
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적으로는 皮웹病을 포괄하는 넓은 의미의 病 證으로 양의학적으로는 全身性紅班性狼擔, 아 토피성피부염 , 알레르기성육아종성피부염 , 건 선, 베체트병 동의 면역이상 또는 과민반응을 유발하는 病證들과 類似하다
3)
최근 의료기술향상에 의한 皮뺨나 職器移植 의 증가와 環境의 變化로 인한 연역과민반응 을 유발하는 질환들이 늘어나는 추세이며
4)
이 에 따라 면역억제제의 사용도 증가하고 있으 나 그에 따른 문제점 또한 간과할 수 없다 .
면역억제제의 문제점은 크게 두 가지로 나눌 수 있는데 藥效의 비특이성과 부작용이라 할 수 있다’
,6,7)
이에 따라 부작용이 없는 대체의 연역억제 제의 연구가 활성화되고 있는 시기이다 . 이런 필요성에 따라 행해진 면역반응항진에 대한 최근 한의학적 연구에 의하면 주로 淸熱시키 는 방제들이 면역과민반응에 임상적 활용가능 성이 있음이 보고되고 있으며8.애),
개괄적인 면 역과민반응 및 알레르기 조절에 관한 연구
8-13)
’ 接觸皮I협갖에 관한 연구14.2 이, 연역과민반 응의 측면에서 본 瑞息에 관한 연구21.25), 藥針 에 대한 연구
26)
둥이 있었으나 白鼠의 同種 皮I협利植에 의해 請發된 면역반응항진에 대한 陽毒되虎場의 효과에 대해서는 연구가 없었 다.
이에 陽毒되虎場이 면역반응항진에 미치는 영향을 관찰하기 위해 白鼠의 同種 皮f협移植 後의 否反應이라는 꿇한 면역반응항진 상태 에서의 皮I혐의 外形的 形態 변화 , *-없왔學的
변화 , 免흉
*없짧學的 변화 등을 관찰함과 동시 에 ear swelling test 를 통하여 陽毒白虎場이 면 역억제제로서의 有意性 있는 結果를 얻었기에 報告하는 바이다.
II. 材料및方法 1. 動뺑 및 훌훌융훌후分類
실험에서는 移植皮I현 供與者로 Iα겨l 생쥐
를, 皮f협移植 受與者로 BALB/c 계 생쥐를 설정 하였다 . 동물은 대한실험동물센터에서 분양 받은 始敵 4 주된 것으로 無園폐育장치내에서
2주간 적응시킨 후 BLAB/c 계 생쥐는 체중
20g, ICR 계 생쥐는 체중 25g 것을 선별하여 사용하였다. 實驗群은 피부이식이 없는 對照 群, 皮 I 펴移植群 ( 이하 ST 훌휴, 陽毒되虎j易 처리 후 皮I헨移植群 ( 이하 YB 群) 으로 나누었다 다 시 ST 群과 YB 群은 皮I혐移植 後 시간의 경과 에 따라 12 日과 14 日로 細分시켰으며 , 各各에 는 10 마리씩 配定하였다 . 한편 陽毒되虎場의 週延形過敏反應 f!JJ 옮tJ효과와 부작용 유발여부 조사를 위해 따로 10 마리씩 配定하였다. 2. 陽毒터虎楊 抽出 훌의調製와 投與
실험에 사용된 陽뚫白虎場의 處方內쯤은
『東醫흡世保元』에 { 衣據하였으며 榮材는 동 국대학교 한방병원에서 조제 (Table. 1) 된 것으 로 I貼 分量을 증류수 1,000 뼈에 넣고 3시간 동안 팩場하고 遠JL0t 離시킨 후 뼈;過하였다.
그 演뻐을 rota π evaporator 에서 100m£ 로 i關칩
하였다. 憶縮된 陽毒터虎j
易 抽出滅은 YB群에 皮I협 移植 [ 14 日 前부터 每 日 3.3m£/kg 씩 經口投 與하였다 .
Table. 1. The amount and
YangdockBaec 싱10rang αB)
composition of
繼 -댐懶뼈網뼈樹
-計
生쫓名 llHit(g)
Gypsm Fibroswn 20.0
khmanniae Radix 16.0
Anemarrhenae 에,izoma 8.0
Schizoneepetae Herba 4.0
Ledeb αuiellae Rad α 4.0
Arclii Frucrus 4.0
’ 6.0
3. 皮I홈移植
본 실험의 皮 I 협移植은 Luo 등(1998) 이 記述 한 방법 27) 에 의해서 시행되었고 皮빼移植홈쩌立
로 다리부위에서 혐훌사。l의 血管이 잘 발달 된 등 부위가 선택되었다 . 전 移植과정은
- 陽훌딩It 훌이 移챔 1I 뼈否反 훌延에 미치는 影8-
clean bench 안에서 이루어졌다 . 그 과정을 살펴
보면 우선 移햄皮I혐 供與者인 ICR 계 생쥐를 S여iurn pentobarbit 외 용액으로 마취 하고 移植片 皮關 주위를 面刀하였다. 그리고 70% ethyl
외cohol 로 洗峰하고 圓* 반지 름 0.5cm) 의 移樞
片 조직을 切取하였다 . 切取된 조직은 생리식 염수 처리된 filter paper 위 에 훨皮조직 이 위 쪽 을 向하게 위치시켰다 . 한편 移植皮I협 受與者 인 BALB/c 계 생쥐도 皮I협移植 부위를 面刀한 다음 70% ethyl alcohol 로 洗i條한 後 생 리식 염 수 처리로 수분을 유지 시켰다. 그런 다음 移 햄片 조직보다 약간 크게 移植部位 皮I혐를 切 取하고 준비된 ICR 계 생쥐의 移植片 조직을 移햄하였다 移빼 - 部位는 수술용 tape (3M, USA) 로 감아 ￥IJ 뼈皮I협 離脫을 막았으며 移植 後 7 日이 "r'I"::r. 過했을때 I徐去하였다. 본 실험에 서는 移햄펌否反應을 4群으로 나누어 초기 形띠형성을 1 점 , 部分 移植[ffi 否 2 점 , 全體 移 따租否 3 점 그리고 移植보否로 인한 조직 脫 落 4 점으로 계산하여 移t밤巨否 指數를 계산했 다.
이식거부지수{%) = 이식거부 상태에 따른 획득점수 / 이식개체의 이식거부 총점 x 100
4. 運延形過敏反應‘ 柳制能 調훌
i앓延形過敏反應‘을 등%發시 키 기 위 해 2, 4-
din it roc hi oro benzene (DNCB: Sigma, USA) 를
acetOne 과 이ive oil 이 4: 1로 混合된 i장波에 5%
로 fffl 釋한 다음 사용하였다. 陽뚫B虎場을 14 日 問 經口投與한 後 생쥐 오른쪽에 DNCB 25 따를 쏠布한 후 72 시간이 되었을 때 귀의 두 께 를 dial thickness cage (MicutOyo, JAPM ‘J) 로 측 정 한 다음 ear swelling 평 균값을 구하여 각각 의 차이를 비교하였다 .
5. 移植皮 I 훌 標本 製作
皮 1 혐移植 後 12, 13 및 14 日째에 S여lurn
pentobarbital 溶浪으로 編훨쭈한 다음 4%
paraformaldehyde 로 心陽貴流固定을 시 행하였다.
移植j 支I협를 補出하여 室溫에서 10% 中性 포 르말린용액에 24 시간 동안 고정한 후 通常的 인 方法으로 paraffin 에 포매하고 5μm 두께 로 연속절편을 만들었다. 만들어진 연속절편은
HematOxylin 과 Eosin 에 쌓色한 後 光學청흉i렐鏡으
로 관찰하였다.
6. 陽毒白虎楊 投與 副作用 調훌
陽뚫白虎場 投與로 인한 府과 賢鷹에서의 부작용 발생 여부를 조사하기 위하여 본 실 험의 총 실험기간인 28 日동안 陽毒터虎場을 經口投與한 後 8꾸과 뽑腦組織의 標本을 제작 하였다 . 標本製作 방법은 移植皮!혐 切片製作 과 同一한 방법이었으며 다만 梁色은 아래에 기술된 Wright stain 을 실시하였다 .
7. 組織化學的 梁色
가. 血짤 分布 變化 觀察 血쉽:
分布 변화를 조사하기 위해서 皮I혐組 織을 Wright stain 용액 에 20 分 동안 쌓色하는
Wright stain 을 시행한 후 表皮와 훨皮에서 나
타나는 血즐分布의 변화를 光學顯做鏡으로 관 찰하였다.
나. 服滿細脫의 分布 變化 觀察
갖:JJE 반응에 關與하는 nr. 滿細8包의 分布와 形
態 변화를 관찰하기 위해 Luna ’s method 를 통
한 *없짧化學的 梁色을 실시하였다. 우선 5μm
두께의 연속절편을 허dehyde fuchsin 에 30 分間 梁色한 후 Weigert ’s iron hematoxylin 과 methyl
orange 용액에 각각 1 分, 5 分 동안 對照梁色하
였다.
8. 免投組織化學的 쌓色 가. 皮I협上皮 t 曾植 變化 觀察
皮 I 협上皮內 細뼈分製 변화를 조사하기 위해 BrdU 를 이용한 免홉
*없앓化學的 梁色을 실시하 였다. 우선 실험동물에서 移植皮I협를 總出하기 5시간 전, 3 시간 전, 1시간 전에 생리식염수에 녹인 5-bromc ←2’-deoxyuridine (BrdU, Sigma) 50mg.!
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kg 을 복강주사하였다 . 얻어진 연속절편은 4 °C
와 37 °C의 2N HO 용액에서 각각 20 분씩 반응 시 켜 DNA-denatution 을 일으켰다. O.lM borate 완충용액 처리로 안정시킨 후 비특이적 연역반 응을 柳制하기위해 0.01% 의 proteinase K (DAKO,
Denmark)7r 포항된 normal goat serum (1:20,
DAKO) 에 1 시간동안 반응시켰다. 그런 다음 l
차 항체인 mo 따e anti-mouse BrdU (1:50, Amersham,
UK) 에 4 t incubation chamber 내 에 서 48 시 간
反應시켰고 2차 항체인 biotinylated goat
anti-mouse IgG (1: 100, DAKO) 에 실 온 에 서
4시간동안 反應시켰다 . Avidin biotin complex
(ABC: Vector Lab, USA) 에 1시 간 동 안 실 온
에 서 反應시 킨 후 0.05% 3, 3-diaminobenzi 이 ne
(DAB: Sigma) 과 0.01% HO 이 포함된 0.05M
tris-HO 완충용액 (pH 7씨에서 發色시킨 후,
hematOxylin 으로 對照쌓色하여 光學顯微鏡으로
관찰하였다.
나. 移植 指否關聯 細8包 活性 변화 관찰 移植指否反應에 대한 陽끓白虎場의 t!P 밟I] 효
과를 관찰하기 위해 nuclear factOr (N 타KB,
cyclooxygenase (COX)-2, IL-12B 그리고 ICAM 의
변화를 관찰하기 위한 免홉組織化學的 쌓色을 실시 하였다 . 우선 切片을 protei 따se K (20 μgj 뼈) 에 5 분 동안 proteolysis 과정 을 거친 후 blocking
serum 인 10% normal goat serum 에서 1시간 동
안 反應시켰다 . 그리고 1차 항체인 rabbit
anti-mouse NF-KB p65 (1:200, Santa Cruz Biotec,
USA), rabbit 삐ti-mouse COX-2 (1 :500, Chyman,
USA), rabbit anti-mouse IL-12B 어o (1 :200, Santa
Cruz Biotec) 그리 고 hamster anti-mouse
CD54-1 (1:100, Serotec, UK) 에 4
°C hωnidified
chamber 에서 48 시간 동안 반응시켰으며 이후
과정은 위에 기술한 免홈組織化學的 잖色法과 同-하였다 .
9. Apoptosis 뿔化 觀察
ApoptOtic 細뼈의 分布변화를 조사하기 위
해 ill silll apopcosis detecrion kit (Apoptag,
Intergen, USA) 를 이 용한 TUNEL (terminal
deoxynucleotid transferase-mediated dUTP-biotin
nick-end labelling) 方法을 실시하였다. 먼저
組織 切片을 proteinase K 에 5分 rJj proteolysis
시 킨 다음 equilibration buffer 에 서 20 초간 처
리하였다 그런 다음 strength TdT enzyme (36 μ TdT enzyme: 72 때 reaction buffer) 을 처 리
하여 37 °C 의 humidified chamber 에 서 1시 간
동안 反應시 킨 후 strength scop/wash buffer 에 서 10 分 동안 처리하였다. Anti ←-d바Igo>야x앤‘
P
야e하roαx치‘Cl버da엉se 。어에1] 1μλ시1 간 동안 反F應훌시 킨 후 DAB 를 처 리하였다 . Hemacoxylin 으로 對벤쌓色한 후 광학현미경으로 관찰하였다.
10. 映像分析과 統計處理
免1 풋組織化學과 TUNEL 梁色 결과의 수치화 를 위해 Optimas 5.2 (Optima Co., USA) 를 이용 한 映像分析 (image an 때ysis) 을 실시하였다. 映 像分析 결과는 Sigma Plot 4.0 (Sigma) 을 통한
student T tcst 로 有.Tr..\.!. 性을 검증하였다
ill. 成 績
1. 移植 皮I 홈 外部形態 變化
ST 합은 皮r펴移植 後 10 日 에 6마리 에서 最初 移*直 指否反應이 일어났으며
, 11 日에 7마리 ,
12 日에는 7 마리에서 관찰되었다 (Fig. 5). 이러 한 移t합딛否의 外部 形態的 변화는 初期에는 移植皮 I혐와 많存 皮I혐가 만나는 境界部位에서 나타나는데 , 出血性의 조직손상으로 생긴 멜l
形의 띠가 관찰되었다 (Fig. 1). 이러한 l당l形의 띠 중 특정 부위로 組織指傷이 확장되며 (Fig 2) 마침내는 移植片 피부조직 全뽑에서 移植 指否반응이 나타났다 (Fig. 3). 그 후 移핸ltE 否 된 組織은 말라 혈병 (bl ∞d clot) 상태로 있다 가 떨어져 나가며 (Fig. 4) 그 부위는 주변에서 새로 생성된 피부로 대지되었다 . 즉 ST 群의 경우 移精 後 14 日에는 生存個體 8마리에서
TIme (days) 3Group
10 II 12 13 14
Heads 6 7 7 0 0
ST
Index 7.5 238 48.8 75 95
Heads 0 4 6 6 2
VB
Index 0 5 15 45 62.5
Group thickness (¾Ð) increase (%)
CON 323.0t 2.0
DNCB 515.0tI2.7 1 9.4
VB 402.0t 5.8. 124.5
- 陽훌nt 훌이 移뼈 .It 펌否反 훌표에 미치는 影톨-
皮I협離脫이 관찰되 었다 (Fig. 7, Table. 2).
이 에 반해 YB 합의 경 우 移植租否反應이 皮 I협移樞 後 10 日 까지는 나타나지 않았으며 11
日에 4 마리에서 最初 관찰되었다. 그 후 12 日 에 6마리 (Fig. 6), 13 日 6마리 , 14 日에 2 마리에 서 移植租否 반응이 관찰되었으며 ST 군처럼 移植皮I협가 離脫하는 경우는 발견되지 않았다
(Fig. 8, Table. 2).
Table. 2. 꺼1e mitigated effects of allograft
rejection in YB treated murine skin after skin
transplancacion.
<Abbreviarion)
ST : skin rransplanced mice
YB : YangdockBaeckhotang treated mice before
skin cransplancation
Heads: number of firsr srage allograft elicitation
Index: near allograft skin damage vs
total calculated damage.
2. 運延形 過敏反應 柳制效果
陽毒白虎場의 면역억제효과를 事前 調효하 기 위해서 시행된 運延形 過敏反應 등청發결 과 DNCB 쩔布 後 72 시간이 되었을 때 생쥐 오른쪽 귀의 두께는 515.0t 12.7 μm로 323.0:t2.0
μm인 對!照群에 比하여 159.4% 증가한 것으로 관찰되었다. 이에 반해 陽毒B 虎場이 事前 투 여 한 YB 群의 경 우 귀 의 두께 가 402.0t5.7 μm
으로 對照群에대해 124.5% 가 增加된 것으로 나타났다. 그 결과 YB 군이 DNCB 單獨 處理 群에비해 22.0% 정도의 有意性있는 遭延形 過 敏反應 1fJJ 制效果가 있는 것으로 나타났다
(Table 3).
Table. 3. The inhibition effect of YB on delayed
rype hype πensitivity (DTH) reaction to
DNCB in mice.
<Abbreviation)
M t S.D : Mean t standard Deviation
CON: Acetone & olive oil only treated mice
DNCB : DNCB painced mice
YB : YangdockBaeckhotang extracts administered
mice before DNCB paincing
* : P < 0.05 compared with DNCB.
The ear swelling in mice treated with YB
noticeably decreased than only DNCB treated mice
at hour-72 after DNCB painitingd and this
inhibition had probabiliry in P<0.05 of student T
test.
3. 移植 皮I 홉 組織內 -般的인 形顧뿔化 對照‘群은 실험기간동안 皮!협組織의 形態 변 화가 관찰되지 않았다. 이에 반해 ST 群과 YB 群은 對照群과는 달리 皮I혐移植 後 일어나는 移植租否에 따른 形態的 변화가 관찰되었다.
皮 ! 협移植 後 ST 群의 皮 I 협
*없缺에서 나타나는
변화는 12 日群에서 잘 관찰되었다 . 이러한 변화 는 移.i 혐밟짧 주변의 表皮에서 角質形成細뼈
(keratin αγ te) 의 過形成 (hype φlasia) 으로 인한 皮
댐t 皮層數의 급격한 증가, 基底層 아래공간으 로 漫潤 (inftltration) 하는 림프구의 증가가 확인되 었다 (F 핑. 9, 18). 한편 移植된 組織에서는 上皮細 뼈의 t했E 繼뚫성분의 증가, 훌皮에서 립프구를 비롯한 갖在關與細뼈의 증가가 두드러지게 관찰 되었다. 일부지역에서 렴프구가 급격하게 모여 연결 형성된 띠모양이 나타났다 그러나 모든
樹혐職들이 탈락하는 14 일에서는 移植片 탈락 155
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지역에 새로운 皮햄가 急速하게 형성함으로써 角質形成의 過形成과 血管新生成증가가 관찰되 었다 .
이에 반해 YB 群의 移植 12 日에서는 ST 群에 비해 상대적으로 낮은 角質細脫過形成 , ?훌j 댐
립프구의 감소가 移
*함且織 周邊表皮에서 관찰 되었고 또한 移植組織에서도 상대적으로 낮은 上皮細뼈의 t 했E 鐵維성분의 증가, 힐皮에서 짧효關與細8包의 沈積 감소 성향으로 관찰되었
다 (Fig. 11). ST 群의 모든 移植組織들이 14 日
에 脫落한 것 비해 組織의 脫落이 없었던 YB 群에서는 일부 利植組織에서 指줌反應에 의한 組織根傷이 발견되었다. 그러나 이는 ST 群의
12 日에 비하여 상대적으로 약한 組織指傷을 보였으나 , 같은 YB 群보다는 組織揚傷-이 증가 된 것으로 관찰되었다
4. 移植 皮I 홈 組織의 組織化學的 變化 가 . 皮 I협內 血휩 훌훌化
對 ‘群은 皮I협組織 內 血管分布의 변화가 관찰되지 않았다. 皮뱀移植 後 ST 群에서 血管 의 分布가 증가한 것으로 나타났으며, 특히 移植周邊部位의 힐皮 유두를 비롯한 힐皮 全 體지역에서 잘 관찰되었다 (Fig. 12). 이에 반 해 YB 群은 일부 합皮 유두에서만 血짤分布가 관찰되었으며 그 수도 ST 群에 비해 상대적으 로 적 었다 (Fig. 13).
나. 월皮內 滿細뼈의 形觀와 分布 변화 對照群은 실험기간동안 皮I 혐組織 內 ijE 滿細
8包의 形態와 分布 변화가 관찰되지 않았다 .
皮I혐移植 後 ST 群에서 ijE 滿*BIH 包의 分布가 증가하였다. 특히 , 移植周邊부위의 월皮 유두 에서 잘 관찰되었으며 관찰된 細뼈의 形態는 분 비과립 다수가 분비된 脫훌縣立形態(degranulaced
type) 을 취하고 있었다 (Fig. 14, 15). 한편 YB
군에서도 빠짧뼈힘의 數가 對照群에 比해 증가 하였으나 그 형태는 대부분 購힘廳 (gran 띠 aced
type) 을 취하고 있었다 (Fig. 16). 또한 분비세
포의 크기도 ST; 群에 비해서도 작았다
5. 移植 皮I홉 組織의 組織化學的 변화 가. 皮I혐 內 細B包自己殺뽑와 t 皮 야t 흉 變化 皮 I현移植 後 12 日 경과되었을 때 ST 群에서 는 核 部位에 행한 TUNEL 陽性반웅 (Fig. 18) 을 보이는 apoproclC 째脫의 分布가 移 fj[ 境界부 위의 합皮에서 다수 관찰되었다 . 映像分析 결 과 36857 .Ot 1051.2 / 200,000 pick cell 로 나타났
다 (Fig. 17, Table. 4). 이에 반해 YB 群의
apoprocic 細뼈의 分布는 ST 群보다 더 많았는데
133.0% 증가된 49030.0 土1581.1 pick cell 이 관찰
되 었다 (Fig. 19, Table. 4).
細脫分짧상태에 있는 皮I협 上皮쩌 TIn 힘의 核과 그 周邊 ,쩌Hij 包質에서 양성반응 (Fig. 21) 을 보이 는 BrdU 는 그 分布가 皮I혐移植 後 증가하였 다. 映像分析 결과 12 日群에서 1263.0 土76.2 /
200,000 pick cell 로 관찰되었다 (Fig. 20, Table.
4). ST 군의 이 러 한 증가에 비해 YB 群은 BrdU 양성반응 細脫의 分布가 적었는데 12 日群에서 는 71.5% 가 감소된 360.0:t9.1 pick cell 이 관찰
되었다 (Fig. 22, Table. 4)
나. 移植 뚫否關聯 웹1ft 包 活性 훌化
ST 群에서는 *mH 包質에 행한 陽性반응을 보이
는 NF- κB p657} 皮 I 협移뼈 後 합-皮에서 증가
되었으며 , 映像分析 결과 12 日群에서 對!!« 群 보다 464.4% 증가한 17390.0t 759.0 / 200,000 pick cell 로 나타났다 (Fig. 23, Table. 4). 이 에 반해 YB 군의 NF-KB p50 는 ST 군보다 낮은 分 布를 보여, 12 日群에서는 ST 군보다 18.0% 감
소된 14256.0 土715.0 pick cell 로 관찰되었다
(Fig. 24, Table. 4).
꽃在細8包 漫 j 댐지역에서 分布하는 COX-2 陽 性反應細脫는 쩌n뼈質에서 꿇한 陽性반응을 보 이는 것으로 관찰되었으며 , 皮I협移빼 後 증가 하였다. 이러한 分布는 12 日群에서는 對照群 에 比해 1181.9% 증가한 1300.0 土77.6 / 200,000 pick cell 로 관찰되었다 (Fig. 25, Table. 4). ST 群 의 이러한 증가에 比해 YB 群은 COX-2 陽性반 웅 細뼈의 증가폭이 적어 12 日群에서는 40%
가 감소된 781.0t 15.2 로 관찰되었다 (Fig. 26,
- 陽훌er,t; 훌이 移핸 mil 否反l! 훌延에 미치는 彩흩-
Table. 4).
쩌un 힘質 가장자리에서 弱한 陽性반응을 보이
는 IL-12B 는 ST 혐의 훌皮유두에서 分布가 증
가되어 12 日群에서 對照群에 比해 246% 증가 한 5370.0:t115.1 / 200,000 pick cell 로 관찰되 었 다 (Fig. 27, Table. 4). YB 군에서는 ST 보다는
77.3% 감소한 1216.0 土76.2 로 관찰되었다 (Fig.
28, Table. 4).
*'RH 包質 가장자리에서 彈한 陽性반응을 보이 는 lCAM-l 는 ST 群의 륨皮유두에서 분포가 증 가되어 12 日群에서 對照群에 比해 1444.9% 증 가한 4927.0:t86.3 / 200,000 pick cell 로 관찰되 었다 (Fig. 29, Table. 4). YB 群에서는 ST 보다는
66.6% 감소한 1648.0:t36.1 로 관찰되었다 (Fig.
30, Table. 4).
Table. 4. 끼le image analysis of immunohistochemistry
and TUNEL in YB treated murine skin
at day-12 after skin transplantation.
Anti!> 닝‘
Group
ST YB
CON
ApoPlosis 3468:!9.7 )68570:t1051.2 49030.0:! 1’ 81.1
BrdU 112.0!8.6 1263.0t76.2 3C찌 0:!9.1
NF-KB r‘;5 3745.0:! 121.7 17390.0t759.0 14256.0t715 。
COX.2 llO.Ot79 1300.0H76 7810t15.2
IL.12B 218.0t20.5 ’ 370.0t \I ’ 1 12I6.0t76.2
1CA.\i-1 3410:!7.9 4927.0t86.3 1648.0t36.1
(analysis for 200000 parcicles / range of intensity:
50 - 150)
<Abbreviation)
M :!: S.D : Mean :t Standard Deviation
CON: no-trared mice
ST : skin cransplanted mice
YB : YangdockBaeckhorang treated
before skin transplamation
* : P < 0.05 compared with ST.
rruce
6. 뺨과 賢廳메서의 副作用 뚫發 調훌
陽毒白虎場投與한 HfMI 織에서는 正常的인
8돼mH包板(hepatic plate) 의 맴B列을 볼 수 있었으
며, HfffJl 織 손상의 증거인 府쩌n뼈의 t혔死
(necrosis), t했E된 Hf*'RH 包 周邊의 림 프구나 織
維아세포의 따횟infI1t 때ion), 疑血(bl( 여 C맹비ation) 및 액 포화 {vacuolation) 에 의 한 府細脫質의 그물 구조 등의 形態的 변화는 나타나지 않았다
(Fig. 31).
한편 딸鷹에서도 .IE 常的인 구조가 나타났는 데 , 콩팔소체 (renal corpuscles) 에서 보우만주머니
(Bowman ’s caps 띠e) 의 요세 관공간 {urinary space) 은
사구체 (glomerulus) 로 꽉 차 있었으며, 보우만주 머니의 외벽(parie 때 layer) 은 單層扁平上皮의 形 態로 관찰되 었다 (Fig. 32).
Legends for Figure
Fig. I. The morphology of Back from mice at
day 10 after skin graft. The allograft
rejection is invoked in outside of
transplamed skin. x2
Fig. 2. The morphology of partial skin allograft
rejection. x2
Fig. 3. The morphology of emire skin allograft
rejection. x2
Fig. 4. The morphology of disappearance of
allograft rejeceted skin x2
Fig. 5. The morphology of Back from mice at
day 12 after skin graft. The allograft
rejection is invoked in parcial region of
transplanted skin. x2
Fig. 6. The morphology of Back from YB treated
mice at day 12 after skin allograft. 끼1e
allogr 짜 rejection is soften than Fig. 12.
x2
Fig. 7. The morphology of Back from mice at
day 14 after skin graft. The allograft
rejeceted skin is disappeared. x2
Fig. 8. The morphology of Back from YB treated
mice at day 14 after skin allograft. The
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- 사싱채질의학회지 제 15 권 제2호 2003 -
panial skin allograft rejection is invoked.
x2
Fig. 9. The morphology of skin from mice at day
12 after skin graft. The hyperplasia in
epidermis (EP), cordlike shape of
lymphocytes (arrow), and inftltration of
i며larnmarory component cell 【o allografted
tissue were appeared. H & E. x200
Fig. 10. The mangnification of cordlike shape of
lymphocytes in Fig. 17. The infUtrated
lymphocytes and fibrosis were increased. H
& E. x400
Fig. 1 1. The morphology of skin from YB treated
mice at day 12 after skin allograft. The
hyperpl 잃ia in epidermis (EP), cordlike shape
of lymphocytes, and inftltrarion of
i며1따nmarory component cell to allografted
tissue were disappeared. H & E. x 200
Fig. 12. The morphology of blex 녕 vessels (arrow)
on skin from mice at day 12 after skin
graft. The increase of bl ∞d vessel in
epidermis and dermis were seen. Wright ’s
stain. x 200
Fig. 13. The morphology of bl α성 vessels (arrow)
on skin from YB treated mice at day 12
after skin allograft. The bl α펴 vessel in
epidermis and dermis were decreased Fig.
20. Wright ’s stain. x200
Fig. 14. The morphology of mast cell on skin
from mice at day 12 after skin graft. The
noticeable increase of mast cells (arrow) in
dermis is seen. μma ’s method. x2oo.
Fig. 15. 까Ie mangnification of degranulated 마pe
mast cells in Fig. 22. Luna ’s method. x400
Fig. 16. The morphology of mast cell on skin
from YB treated mice at day 12 after skin
allograft. 까Ie number of mast cells is
decreased. Luna ’s method. x 200.
Fig. 17. The apoprotic cells (arrow) are seen in
the dermis from mice at day 12 after skin
graft. TUNEL method. x200.
Fig. 18. The magnification of Fig. 25. TUNEL
method. x400.
Fig. 19. The numerical increase of apopcotic cells
(arrow) cells in dermis fcom YB treated
mice at day 12 after skin allograft. TUNEL
method. x200.
Fig. 20. The immunohistochemical stain for BrdU
from mice at day 12 after skin graft. The
numerical increase of BrdU positive cells
(arrow) were seen. x200
Fig. 21. The magnification of BrdU positive cells
in stratum spinosum (SS) and stratum
basale (SB) of Fig. 28. x4OO.
Fig. 22. The immunohistochemical stain for BrdU
from YB treated mice at day 12 after skin
allograft. The distribution of BrdU positive
cells (arrow) were decreased. x200.
Fig. 23. The immunohistochemical stain for
NF-KB p65 from mice at day 12 after skin
graft. The numerical increase of NF- κB p65
positive cells (arrow) in dermis were seen.
x200.
Fig. 24. The immunohistochemical stain for
NF-KB p65 from YB treated mice at day
12 after skin allograft. The diStribution of
NF-KB p65 positive cells (arrow) were
decreased. x2oo.
Fig. 25. The immunohistochemical stain for
COX-2 from mice at day 12 after skin
graft. 까Ie numerical increase of COX-2
positive cells (arrow) in inflammation
invoked dermis were seen. x200.
Fig. 26. The immunohistochemical stain for
COX-2 from VB treated mice at day 12
after skin allograft. The distribution of
COX-2 positive cells (arrow) were decreased.
x200.
Fig. 27. 까Ie immunohistochemical stain for
11-12B from mice at day 12 after skin
