약학희지 제38권제5호 614-620(1994) Yakhak Hoeji Vol. 38, No. 5
Propionibacterium sher/nanii에 의한 버타민
Bn
의 생성에 영항을미처는 배지첨;^떨들에 대한 연구
김지영* • 김공환 • 김경자^ • 구양모*
아주대학교 생물공학파. ^ 순천향대학교 유전공학과, * 서울대학교 (Received August 8, 1994)
약학과
Study on the Effects of Supplemented Factors on the Production of Vitamin B12 by
Propionibacterium shermanii
J i Y o u n g K im , K o n g H w a n K im , ^ K y o u n g J a K i m a n d *화Y a n g M o G o o Department of Biotechnology, Ajou University, Suwon 440-749,
^Department of Genetic Engineering, Soonchunhyang University, Onyang, 337-880 and
^Department of Pharmacy, Seoul National University, Seoul 151-742, Korea
A b s tr a c t— F o llo w in g th e s tu d y o n th e fe r m e n ta tio n c o n d itio n s in flu e n c in g th e p ro d u c tio n of v ita m in B i2 by Propionibacterium shermanii{Korean J. Biotechnol. Bioeng. 1, 126-131, 1992), th e effects o f som e facto rs s u p p le m e n te d in th e m e d iu m o n th e p ro d u c tio n o f v ita m in Bi^ w e re s tu d ie d . M a x im u m p ro d u c tio n o f v ita m in B 12 w a s o b se rv e d w h e n C o니 w as s u p p le m e n te d at th e c o n c e n tra tio n p f 2-4 p p m in th e fe rm e n ta tio n m e d iu m . In c re a s e o f th e s u p p le m e n te d C o 니 to 12 p p m d id n o t in h ib it th e g ro w th o f th e o rg a n is m , b u t it a c c e le rate d th e ly sis of th e o rg a n is m . In th e lite ra tu re , p e p to n e w a s re p o rte d to activ ate th e b io s y n th e s is o f v ita m in B 12. E x a m in a tio n o f th e effect of p e p to n e o n th e g ro w th an d th e p ro d u c tio n o f v ita m in B 12 sh o w e d th a t at e arly stage m o r e v ita m in B 12 w as o b se rv e d in th e s u p p le m e n te d m e d iu m , b u t n o d iffe re n c e w as o b se rv e d in th e la te r stage o f fe rm e n ta tio n . E x a m in a tio n of th e tim e fo r a d d itio n a n d th e a m o u n t o f 5 ,6 - d im e th y lb e n zim id a z o le , a p re c u rs o r k n o w n to in flu e n c e th e p r o d u c tio n o f v ita m in B 12, sh o w e d th a t a m a x im u m y ie ld of v ita m in B 12 w as o bse rv e d w h e n 15 m g /L w as a d d e d to th e fe r m e n ta tio n m e d iu m a fte r 2 days* in c u b a tio n . T h e effect w as co m p a ra b le w ith th e in cre ase o f th e p r o d u c tio n o f v ita m in B 12 w h e n th e fe r m e n ta tio n c o n d itio n w as ch a n g e d to aero b ic c o n d itio n a fte r 2 d ay s' c u ltu r e u n d e r a n a e ro b ic c o n d itio n .
K eyw ords □ V ita m in B 12, F e r m e n ta tio n , P ro d u c tio n , Propionibacterium shermanii. C o b a lt ion, 5,6- D im e th y lb e n z im id a z o le .
비타민B i2는생체내에서 c a rb o x y l기, h y d r o x y l기, 또
는a m in o기를수소원자와자리바꿈을수행하거나Ci
화합물의 대사에 관여하는보조효소이다."^ 채식을하 는 사람이나소화흡수에 요구되는 in trin s ic facto r가
걸여된사람은비타민 Bi2롤보조영양제로섭취하거나
주사롤 맞아야 한다. 공업적으로 미생물을 발효하면 비타민B i2를대량 생산시킬 수 있다. 톡히p ro p io n ic a c id를생산하는 박테리아들^*과m e th a n e 생성 박테
리아둘을 사용하여 비타민 Bi2외 발효가수행되고있
*본 논문에 관한 문의는 이 저자에게로
다3- 6> 비타민 Bi2의발효에 이용되는p ro p io n ic acid
박테리아로는 대표적으로 P r o p i o n i b a c t e r i u m와 P r o - p i o n i b a c t e r i u m f r e u d e n r e i c h i i ^ 있다.구'®^ P . s h e r m a -
mY를발효하여 비타민 Bi2를생산할때, 산소, 온도에
의한 영향과최적의 란소원과 질소원에 대한 조사결 과가보고되 었다 . 본논문에서는동일균주로비타민
B i2를 생산할 때배지첨가물, 톡히 pe ptone , 5, 6 - d im e th y lb e n zim id a zo le (D M B ) 등을 배지에 첨가
시켜 줄때 비타민 Bi2외 생산에 미처는 영향을 조사
하여 비타민 Bi2의 생산을 위한 최적외 조건을 규명
하고자 하였다.
실험방법
기기 및 시약一 Milton Roy 회사의 Spectronic
21-U VD를분광광도계로 사용하였다. Sigm a에서 구
입한비타민 Bi2를표준 비타민으로 사용하였고 5,6-
dim ethylbenzim idazole(DM B)은 득일외 A ldrich회
사에서 구입하였다.
균주一P r o p i o n i b a c t e r i u m s h e r m a n i i IFO 12391은 일본의 Institute of Ferm entation in O saka에구입 하여 사용하였고 비타민 Bi2외검색용균주인L a c t o b a c i l l u s l e i c h m a n n i i K C T C 1058은 한국종균보관소
(K C T C)에서 분양받아 사용하였다.
배지~비타민 Bi2외생성용 복합배지로는 glucose 30 g, yeast extract 20 g, cobalt nitrate(6 H2O) 0.015 용을중류수 1 L에녹인 것을 사용하였고L . l e i c h m a -
nmV의보관용 배지로는 yeast extract 7.5 g peptone
7.5 g, glucose 10 g, K H2PO4 2 g, tomato 쥬스용액은
캔에든 tomato 쥬스를 원심분리하여 얻은 상등액 1
L에 celite 5요을넣고 잘 섞고 걸러주는 과정을 반
복하여 맑은노란색의 용액을얻어서약간의 toluene
을 부어 냉장고에 보관한 것이다. 비타민 Bi2검색배
지는 D ifco회사제품을 사용하였다.
균주의보 관 s h e r m a n i i는비타민 Bi2외생성용
배지에 혐기적 조건하에서 30°C에서 48시간 동안
120 rpm으로 진탕배양한후에 냉장고에 보관하였다.
이것을 보관용 균주로 또는 inoculum으로 사용하였
다. 보관한균주는 4주마다계대배양하여 주었다. L .
l e i c h m a n n i i는보관용 배지에 inoculation한후에 36
°C에서 1일에 한번썩 stab배앙하여서 계대하여 주었
다. 배지는 활성을유지하기 위하여 3일이상오래된 것은 사용하지 않았다.
버타민 B ,,의검색용 시약의 준버■비타민 추 출용 용액은 disodium phosphate 7.5 g, 무수 citric acid 7.5 g, sodium m etabisulfate 10 금을물 100 m/에 녹인 것을 사용하였다. 표준 cyanocobalam ine외보 관용액은데시케이터에서 하루이상 건조시킨 비타민 B i2 2.5 m g을 25% etharwl수용액 250 m/에녹인 것을 사용하였다. 이 용액은 빛이 들어가지 않도록 알루
미늄 foil로싸서냉장고에보관하였다. 이용액을 25%
ethanol 수용액으로 비타민외 농도가 0.03 ng/m/가
되게 희석하여 사용하였다.
발효기구一균외 배앙은 300 m/ 삼각폴라스크에 배
양액을 담아 희전식 진탕배앙기(K orea M anhattan
Co. M odel 8480S)에서 수행하였다. 배앙플라스크는
시료를채취하거나용액또는배지를주사기로주입할 수 있는고무마개로막아공기의 유입을 차단하였다. 고무마개에는 질소를 채운풍선을 단주사기를 꽃아 배양플라스크내에 혐기적 조건을 유지시켰다.
환원당의 정량一환원당의 앙은 D initrosalicylic acid범 을 사용하여 정량하였다. 당 농도가 2 .0 g/L
이하가되도록 희석한 시료용액 8 m i에, 또 는 0 ~ 2.0
g/L농도 범위에 들어있는 당 표준용액 8 m/에 0.3N
Ba(0H)2 용액과5%(w/w) ZnSCX 용액을 1 m/씩넣어
주었다. 이용액을 원심분리(6000 rpm, 10분)하여 상
등액 1 m/에 D N S시약 1 mi를 가한 후에 100°C 항온 수조에서 5분간 가열한 다옴 급속냉각한 뒤 물 10 m/을 가하여 분광광도계로 540 nm에서흡광도를측 정하였다. D N S시약은 dinitrosalicylic acid 1 평과 Ro-
chele salt 30 담에 2N NaOH 20 m/를 첨가한 뒤가
열하면서"녹여 흔합물의 최중부피를 100 m/로 맞춘 것을 사용하였다.
균의성장측정 ■ 배양액외균체량은 배양액을 10배
희석한 후에 inoculum이 들어있는 초기 배지에 기
준하여 eOOnm에서 분광광도계로 흡광을 측정하여
상대적인앙을구하였다.
비타민 의 정랑~비타민 의 정량을 Difco
m annual파 AO AC 및 U S P에기재된방범을변형하여
사용하였다.™"* 1 ~ 2일에 한번썩 stab배양을 10번 />1상수행한 L. l e i c h m a n n i i외검색균주와준버한 지 4일이 지나지 않은 이균주의 배앙배지를 사용하여 수행하였다. 배앙배지의 조성에서 a ga r를 변조성의 배지 10 m/에 stab배앙에서 L . l e i c h m a n n i i를옮겨
36°C에서 1 6 ~ 2 4시간배양한후에원심분리하여 얻은
균을 saline buffer로 3회 세척한 후에 50배 희석한
균용액을 inoculum으로 사용하였다. 비타민 Bi2검색
용시료에 비타민 Bi2추출용 용액 25 m/를 넣어 주고
10분간 121°C 에서 autoclave한 후에 1 m/당 비타민
Bi2의앙이 표준곡선에 맞는 앙이 되도록 검색용액을 준비하였다. 비타민 B ,2검색용 배지를 1.0 m/썩 넣어
주고 증류수로 2.0 m/가되게 맞춘 후에 멸균하였다.
3쌍외 실험관에 비타민 Bi2 검색용 시료용액 0.4, 0.6,
0.8m/를 가하고 비타민 Bi2 검색용 배지 I m /씩을
가하고증류수로 2.0 m/가되게맞춘후에멸균하였다.
5개의 실험관에 비타민 6,2검색용 배지를 I m/썩가
면봉으로 바꾸어 주고 진탕배양하여 이루었다. 배양 액의 pH조절은 배양액외 pH를 측정한 후에 pH를
7.0으로 맞추기 위하여 필요한 1N N aOH의앙을구
하고 이값을 폴라스크내에 남아 있는 배양액에 환
산하여주고 2N N aOH용액을 가하여 주어 배양액의
pH를 7.0으로 맞추어 주었다. 배앙은 500 m/ 삼각톨
라스크에 200 m/의 배지를 가하고 수행하였으며 시
료의 채취는 2 .0 ~ 3 .5 m/썩하였다. Inoculum은배지
외 10%가 되도록가하였다.
0,
0 0.006 0.012 0.018 0.024 0.03
Conc. of Vitamin B12 (ng/mt)
F ig . 1 — S ta n d a r d c u rv e fo r th e assay o f v ita m in B 12.
하고 중류수로 2.0 m/가되게 맞춘 후에 멸균하였다.
5개의 실험관에 비타민 B,2 검색용 배지 I m/와 중
류수 1 m/를가한 용액을 동일한 조작을 하여 2개는
blank로 사용하였고 3개에는 inoculum을가하여 버
타민 Bi2 가 결여된 배지에서의 균주의 생장 정도를
결정하는 blank로 사용하였다. 멸균한 실험관을 사
용하였으며 배양액을 실험관에 가한 후에는 1 2 1 t에 서 3 ~ 5분간 autoclave하여 준 후에 inoculum을 1
방울썩 가하여 주고 36°C 에서 1 6 ~ 2 4시간 배양하였
다. 배앙중에배양액을 2시간간격으로조사하여표준
비타민 B,2를가장많이 가한실험관에서흔탁도가더
이상 중가하지 앉을 때에 배앙을 중지하고 각 배앙
액외 600 nm에서의 흡광도를측정하였다. Inoculum
을 가하지 않은 배양액을 blanki_ 사용하여 흡광 0
점으로 계산하였다. 이때 얻어진 비타민 B,2 의대표 적인표준곡선이 F i g . l에보이고 있다. 비타민 B,2의 검색이필요할때마다표준곡선을같이구하여비타민
외앙을 정량하였다.
P. shermaniiSi 배양과 버타민 B u의 생산성 조사
■혐기적 조건은고무마개로배양액이 들어 있는폴 라스크를막은후에주사기를이용하여내부의공기를 뻬내고 질소를 채운 고무풍선에 연결된 솜을 채운 주사기를꽂아폴라스크를 질소로 채웠다. 이과정을 반복하여 폴라스크의 내부의 공기를 질소로 완전히 바꾸어 주었다. 배앙을 하는 중에도 폴라스크 내에 외부보다 더높은 압력을 유지하기 위하여 질소 풍 선을 폴라스크 고무마개에 계속 꽂아 두었다. 호기 적인조건은폴라스크의 질소고무풍선과고무마개를
결과 및고찰
비타민B,2의정랑과P. shermanii의배양一비타민
B,2의 앙을..분석하는 방법으로는 성분이 정확히 정 의된 합성배지를 사용할 수 있다. 초기에 이방법을 여러번 시도하였으나 사용한 시약의 순도때문에 실 패하였다. 검색에 사용한균주가워낙 미량의비타민 Bi2를 감지하기 때문에 20여가지의 시약을조성으로
가지는 비타민 B,2가 전혀 안들어 있는 검색용 합성
배지를만드는것이 어려웠다. 그래서 본실험에서는
D ifco회사에서 제조한비타민 Bi2검색용배지를사용
하였다. 비타민 Bi2의앙을 정량하기 위하여 매번 보
정곡선을 2개이상의 자료를 평균하여 구하여야하기 때문에 많은 앙의 배지가 요구되었다. 그래서 본연
구에서는 상용하는 10 m/외용액대신에 2 m/썩을사
용하여L . l e i c h m a n n i i를배앙하여표준곡선을구하고
비타민 8,2외앙을 정량하였다. 대표적인표준곡선이
Fig. 1에 보이고 었다. 표준곡선의 R값은 0.99에서
0.98까지 얻어졌다. 오차가많이 포함된 경우에는재
분석하였다.
L l e i c h m a n n i i는 짧은 간균 형태이지만 비타민
Bi2가 들어 있지 않은 함성배지에 배앙하였을 때는
비타민 Bi2의결여로인하여보통의 길이보다약 10배
정도.더 긴모양으로 번형되는 것이 관찰되었다. 이
것은 버타민 Bi2가 결여되어 deoxyribonucleotide가
합성되지 못하여 균의 정상적인분열이 일어나지 못 하는 반면 다른 영양분이 충분하여 균체의 성장이
계속 일어나 생겨나는 현상으로 생각된다. P . s h e r-
mamY외 petri d ish상외 배앙은도말한 아가판을 약
0.5^정도외 pyrogallol과 2N N aO H용액 2 ~ 3 m/를
넣은 윗 뚜낌에 포개어 parafilm으로 잘 밀봉하여
30°C에보관하여 이루었다. 24시간후에 노란색의 큰
김 지 영 • 김 공 환 • 김 경 자 • 구양모
a
0.3
21aa
E{ C 0
09WXJO
콜로니를 형성하였다.
P. shemanii는성장하면초산과 propionic acid를 생
성하여배양액외 pH 가떨어진다. 특히균을접종하여
배양하면 2 4 ~ 3 6시간 동안에 균이 왕성하게 생장하
면서배양액의 pH가급격히떨어진다. 따라서되도록 좋은배앙조건을만들어 주기 위하여서는 짧은 시간 안에 pH를보정하여 주는 것이 요구되는데균을 접
종한후에 24시간 동안에는 12시간마다 2 4 ~ 3 6시간
사이에는 6시간 마다배양액의 pH를보정하여 주었
다. 96시간 이후에는 균외 분해와 유기산의 생성이
균형을 이루어 배양액의 pH의 번화는 관찰되지 않 는다.
험기적 조건과 호기적 조건이 P. shermanii9\ 배
앙에서 버타민 B,2의 생산에 미처는 영향一이미 보
고한 바와같이호기적인조건하에서P. shermanii를
배양하면균의 생장이 현저히 떨어지고 비타민 Bi2의
생산도 거의 없 었다 . 혐 기적 인 조건하에서는 균의 생장도 뛰어나 48시간후에 최고에 달하고 비타민 B
12은 168시간 까지 계속 증가하는 것이 관찰되었다.
혐기적 조건으로 3일간 배양한후에 호기적인 조건
으로 바꾸어 주면 비타민 Bi2의 생산을 혐기적 조건
을계속유지하는경우보다거의 2배까지 더많았으나 배앙을 계속하면 균이 더 많이 분해되는 것이 관찰
되었다. 비타민 Bi2의발효에서 산소가미처는영향은
전논문*'*H1 자세히 인용되어 있고 결과도자세히 기
술되어 있다.
Co+^Sj 농도가 비타민 Bu의 생산에 미처는 영항
은 비타민 분자에 들어있는 중금속으로
비타민 Bi2의생합성에 중요한조절기능을하리라 생
각된다. 1964년에 Sathyanarayana는 미량의 C o우허
비타민 Bi2의생산을촉진시키며 배양액에 3 mg/L외 농도가되도록 을가하여주면 3배더많은앙의
비타민 Bi2가 생성된다고보고하였다.® 그러나 4 ~ 5
m g/L의 C o+액 농도는균외생장을저해하고비타민
Bi2 의 생산도 오히려 감소시킨다고 보고하였다. 본 실험에서도유사한 결과를 얻었다. 즉 cobaltous ni- trate를 0, 5 ,10 , 20, 40, 60, 80 및 100 ppm이들어있는 폴라스크에 균을 혐기적으로 배양하여 배양 7일째 생성된비타민 의양을조사하였을때 Fig. 2에보인 바와같이 cobaltous nitrate가 10 ~ 2 0 ppm들어 있는
배양액, 즉 C o+허 2 ~ 4 p p m들어 있는 배양액에서
가장많은앙외비타민 B,2가가장많이발견되고있다.
I
F ig.
0 10 40 80
5 20 60 100
Cone, o f cobaltous nitrate (p pm )
2 — E ffe c t o f c o b a lto u s n itr a te c o n c e n tr a tio n o n v ita m in B 12 p ro d u c tio n .
이 결과는 Sathyanarayana 등의 연구와 동일한 결
파가얻어졌다. 그러나 Sathyanarayanano 등은
이 4 ~ 5 p p m일때는균외 성장과 비타민 Bi2외생성
량이 감소한다고 보고하였지만 Fig. 2에 보인 바와
같이 C o우오이 12 ppm이될때까지 비타민 Bi2의 생산
량온줄지않는것으로나타났다. Cobaltous n itrate를
0, 20, 100 ppm의농도로 첨가시킨 배지에서 P . s h e -
m am Y를배양하여 C o"허 과잉으로 존재할때균의
생장에머처는영향을조사하였다. Fig. 3에보인바와 같이 96시간 까지외 배양에서는균의 생장에는 영향 이없는 것으로 나타났고그 이후에는 균의 양이 감 소하는것이 관찰되어 균의 보존능력에는 C o ^ ^ l 영 향을 꺼처는 것으로 나타났다. 을 과량으로 첨 가시킨 배앙액에서는 60시간이 지나면서 배양액이 적색을 띄기 시작하였는 데 첨가한 C o+^외 농도가 높을수록 짙은붉은색이되었다. 그러나 가들어 있지않은대조배앙액에서는적색화현상이 관찰되지 않았다. 대조배양액에 가하여 준 yeast extract 에
C o+2이포함되어 있어서 control에서도 비타민 Bi2가
어느정도 생성되었는데 cobalt n itrate를 20 ppm을 가하여 준 배양액에서는 약 3배 정도 더 많은 앙의
비타민 Bi2가 생성되었다(Fig. 4 참조). 비타민 B,2의
발효중에 배양액에 첨가한 은중금속으로생체의
많은 종류외 효소외 inhibitor로 기능할 수 있어 이
금속이온이 균의 포도당외 대사속도에 영향을 미처 는지를조사하였다. C o우"의농도에 관계없이 48시간 째배지에 첨가한 포도당은 거의 다소비되었다. 이
Vol. 38, No. 5, 1994
cy0 24 48 72 96 120 144 168 192
Time (h r)
F ig . 3 - " ...
O.CL0 24 48 72 96 120 144 168
Time (hr)
F ig . 4 - , _____ _________ _
Bi2 by P. shermanii.
결 과 에 서 과 량 의 이 포 도 당 의 대 사 와 성 장 에 는
영 향 이 없 으 며 초 기 에 비 타 민 B,2 외 생 성 을 활 성 화
시 키 는 것 이 관 찰 되 었 다 .
Peptone이 균 주 의 생 장 과 버 타 민 B,z의 생 ■ £_!에 미 처 는 영 항 一 Kaleja/® Baranova, * 가 그 리 고 Marawa- ha* ^ 는 아 머 노 산 과 맵 타 이 드 가 균 의 생 장 을 촉 진 하 고
비 타 민 Bi2 외 생 성 에 좋 은 효 과 를 나 타 내 는 것 으 로
보 고 하 였 다 . 그 래 서 본 연 구 에 서 도 배 지 에 peptone을
첨 가 하 여 주 면 비 타 민 Bi2외 생 산 이 되 는 지 또 는 균
주 의 생 장 에 영 향 을 꺼 처 는 지 를 조 사 하 였 다 . F ig . 5와
6에 보 이 고 있 듯 이 peptone은 균 주 외 생 장 에 는 거 의
영 향 을 보 이 지 않 았 으 나 비 타 민 B ,2외 생 산 은 7 2시
간 이 될 때 증 가 하 였 으 나 168시 간 외 배 양 후 에 는 pe
ptone을 가 한 배 앙 액 이 나 가 하 지 않 은 배 양 액 에 동
일 한 앙 이 관 찰 되 었 다 .
5,6-Dim ethylbenzim idazole(DI\1B)가 b | 타 민 Bn의 생 산 에 미 처 는 영 항 "Marawaha외 연 구 에 서 3일 째
호 기 적 인 조 건 으 로 바 꾸 어 배 양 할 때 DMB는 6일 째
배 양 액 에 첨 가 하 여 줄 때 최 대 의 비 타 민 6 , 2 의 생 산 이 관 찰 됨 을 보 고 하 였 다 . 본 연 구 에 서 는 혐 기 적 인 배 앙 을 수 행 하 면 서 DMB를 배 양 2, 4 및 6일 째 15 mg/
L가 되 도 록 가 하 여 주 어 Fig. 7에 보 인 결 과 를 얻 었 다 .
배 양 초 기 에 그 리 고 4일 째 DMB를 첨 가 하 여 준 배 양
액 에 서 는 비 타 민 Bi2 외 생 산 이 증 가 되 었 으 나 6일 째 넣 어 준 배 앙 액 에 서 는 전 혀 영 향 을 보 이 지 않 았 다 . 균
■ t i i e c t 01 co b alt io n o n th e g ro w th o f F. sher
manii.
F ig . 5 — E ffect of p e p to n e o n th e p ro d u c tio n o f v ita m in Bi2 by P. shermanii.
Tim e (hr)
Effect of cobalt ion on the nrndiirtinn nf vitamin
Time (hr)
F ig. 6 — E ffect o f p e p to n e o n th e g ro w th o f P. shermanii.
control
20 ppa of cobaltous nitrate 100 ppi of cobaltous nitrate
김 지 영 • 김공 환 • 김 경 자 • 구양모
50505
Z
2
r
1
a 3iac!ujdw!aJo
us u .2
84d
Q
{luj009}
d o
1.5
1
0.5 0/&E}어
ac!UJO;!>p t
08 0
Tim e (hr)
F ig . 7 — In flu e n c e o f 5 ,6 - d im e th y lb e n zim id a z o le a d d i
tio n at d iffe re n t p h ase s o f c u ltiv a tio n o n v ita m in B i2 p r o d u c tio n by P. shermanii.
§
Tim e (hr)
F ig . 8 — In flu e n c e o f 5 ,6 - d im e th y lb e n zim id a z o le a d d i
tio n at d iffe re n t p h a se s of c u ltiv a tio n o n g ro w th o f P. shermanii.
외 성장이 끝난 2일째 D M B를 배양액에 가하여 주
었을 때비타민 Bi2외샘산이 가장많이 증가하였다.
Fig. 8에보이고 있는 바와 같이 D M B는균주의 생
장에 거외 영향을 미처지 못하였다.
감사의 말씀
본 연구는 과학재단 설립 신 의약품 연구센타의 연구비 지원과 순천향대학교 연구버 지원에 외하여 수행되었다.
문 헌
1) D o lp h in , D ., 19832, B 12, V o ls. 1 a n d 2, J o h n W ile y a n d S o n s , N e w Y o rk .
2) H e tin g a , D . H . a n d R e in b o ld , G . W ., 1972, T h e p r o p io n ic a cid bacteria- A R e v ie w , / M ilk Food Te- chnol, 35, 295-447.
3) N is h io , N ., Y a n o , T., a n d K a m ik u b o , T . 1 9 75 , Is o la tio n o f m e th a n o l u tiliz in g b a c te ria a n d its v it a m in B i2 p ro d u c tio n . Agric. Biol Chem., 39» 21-27.
4) N is h io , N ., U d d a , M ., O ip a e , Y ., H a y a s h i, M . a n d K a m ik u b o , T., 1976, U tiliz a tio n o f h y d r o c a r b o n a n d v ita m in B 12 p r o d u c tio n by Bacillus badius, Agric.
Biol. Chefn., 40, 2037-2043.
5) K a m ik u b o , T., H a y a s h i, M ., N is h io , N . a n d N a g a i, S., 1978, U tiliz a tio n o f n o n - su g ar so u rc e s fo r v ita m in B i2 p ro d u c tio n , Appl Environ. Microbiol, 35, 971-973.
6) S o d a n o , C . S. V ita m in s . S y n th e s is , p r o d u c tio n a n d u se. A d v a n c e s sin c e 1970. 1978. N o y e s D a ta C o r p o ra tio n , P a rk R id g e , N e w Je rs e y , pp. 61-83.
7) C r u e g e r W a n d C ru e g e r, A . 1984. B io te c h n o lo g y (A h a n d b o o k of in d u s tr ia l m ic ro b io lo g y ), S c ie n c e T ech., pp. 187-190.
8) L ago, B . D . a n d K a p la n , L . 1981, In **A d v a n c e s in B iotechnology "*, V o l. 3, P ro c. 6 th In t. F e r m . S y m p ., L o n d o n , C a u d a , P e rg a m o n , pp. 241-246.
9) F lo re n t, J. a n d N in e t, L , 1979, In *"M icro b ial Te- c h n o lo g /\ H . J. P e p p ie r a n d D . P e r m a n , E d s , 2 n d E d ., V o l. 1, A c a d e m ic P re s s, N . Y . p p . 497-519.
10) K im , J. Y., K im , K . H ., a n d G oo , Y. M ., 1992, S tu d y o n th e fe r m e n ta tio n c o n d itio n s in flu e n c in g th e p r o d u c tio n o f v ita m in B 12 by Propionibacterium shermanii Korean J. Biotechnol. Bioeng., 7, 126-131.
11) G . H . M ille r , 1959, U s e o f d in itr o s a lic y lic a c id r e a g e n t fo r d e te r m in a tio n o f r e d u c in g s u g a r. A nal Chem. 31, 426-428.
12) D ifc o M a n n u a l, 10 th E d . 1984. D ifc o L a b .
13) A O A C M e th o d s . 14 th E d . 1984. W a s h in g to n D . C.
A O A C . pp . 862-865.
14) U . S. P h a r m a c o p e ia N a tio n a l F o r m u la ry . U S P X X L R o c k v ille , M D , U .S . P h a r m a c o p e ia l C o n v e n tio n , pp.
1183-1185.
15) S a th y a n a ra y a n a , R . S.: W a h s in g to , D . R . 1964, I n
김 지 영 • 김 공 환 • 김 경 자 • 구앙모
flu e n c e o f co b alt io n o n Propionibacterium freude- reichii. Nature, 212-213.
16) K ale ja, E . 1964. T h e in flu e n c e o f s o m e a m in o acids, trace e le m e n ts , a n d B g ro u p v ita m in s o n th e g ro w th a n d v ita m in B 12 b io s y n th e s is o f Propionibacterium shermanii c u ltu re s. Mikrohiol Protsessy i Proizv., Akad. Nauk Latv. SSR, Inst. Mikrobiol. 15-21. C A ,
62, 4355.
17) B a ran o v a, N . A . a n d V o ro b e v a, L. I. 1971. In flu e n c e o f p e p tid e s o n v ita m in B 12 b io s y n th e s is by Propio
nibacterium shermanii. Biol Nauki 14, 97-99. C A , 75, 18548.
18) M a rw a h a , S. S.: S e th i, R . P.: K e n n e d y , J. F. 1983.
R o le o f a m in n o acids, b e tin e a n d c h o lin e in v ita m in B i2 b io s y n th e s is by s tra in s o f P ro p io n ib a c te riu m . Enzyme Microbiol. Technol, 5, 454-456.
19) M a rw a h a , S. S.: S e th i, R . P.: K e n n e d y , J. F. 1983, In flu e n c e o f D M B o n b io s y n th e s is by stra in s o f P ro p io n ib a c te riu m . Enzyme Microbiol. TecknoL, 5, 361-364.