Antioxidant Activities and Skin-Whitening Effects of Nano-encapsuled Water Extract from Rubus coreanus Miquel

복분자 추출물의 나노입자화를 통한 항산화 및 미백 효과 증진

정향숙*·한재건*·하지혜*·김 영*·오성호*·김승섭*·정명훈*·최근표**·박욱연**·이현용*^,***^†

*강원대학교 BT특성화학부대학, **강원도립대학 식품가공제과제빵과, ***강원대학교 생명공학연구소

Antioxidant Activities and Skin-Whitening Effects of Nano-encapsuled Water Extract from Rubus coreanus Miquel

Hyang Suk Jeong

^*

, Jae Gun Han

^*

, Ji Hye Ha

^*

, Young Kim

^*

, Sung Ho Oh

^*

, Seoung Seop Kim

^*

, Myoung Hoon Jeong

^*

, Geun Pyo Choi

^**

, Uk Yeon Park

^**

, and Hyeon Yong Lee

^*,***†

*

College of Bioscience & Biotechnology, Kangwon National Univ., ChunCheon 200-701, Korea.

**

Department of Food Processing & Bakery, Gangwon Provincial Univ., Gangneung 210-804, Korea.

***

Research Institute of Bioscience and Biotechnology, Kangwon National Univ., Chuncheon 200-701, Korea.

ABSTRACT : This study was performed to improve antioxidant activities and skin-whitening effects of Rubus coreanus

Miquel extracts by nano-encapsulation. R. coreanus was extracted at 60 ^℃ and encapsulated by lecithin and gelagine. Nano- encapsulated extracts showed highest free radical scavengering effect as 97.62% in adding sample (500 ^㎍ / ^㎖ ), compared to the extracts from conventional processes. It was showed strong inhibition effect on melanin production test by Clone M-3 cells as 55.23%. High inhibitory potency on tyrosinase was also measured as 155.8% by adding nano-sample of 1 ^㎎ / ^㎖ . The improvement of biological activity was demonstrated by real time confocal microscope. We could consider that the water soluble extracts of R. coreanus could be definitely enhanced by nano-encapsulated as a potent natural resources for antioxi- dant and skin-whitening agent.

Key Words : Nano-encapsulation, Rubus coreanus Miquel, Antioxidant Activities, Skin-Whitening Effects

서 언

최근 대기의 오염이 심각해짐에 따라 오존층의 파괴가 가속 화되고 있고 , 자외선으로부터 깨끗한 피부를 지키기 위한 노 력이 남성과 여성을 불문하고 높아지고 있다 . 따라서 미백 효 과가 있는 향장품에 대한 인기는 날로 높아지고 있다 . 유해한 화학 성분을 대체할 수 있는 천연물을 이용한 기능성 화장품 이 주목받고 있는 것이다 . 학계에서는 기능성 성분과 항산화 물질이 함유된 열매나 식물을 개발하는 연구가 활발히 진행되 고 있다 . 최근의 연구에 의하면 복분자 과실은 암이나 심장마 비와 같은 다양한 질병의 위험을 감소시키는데 크게 기여한다 고 보고되고 있다 (Park et al. , 2004). 이러한 이유는 과실

내에 함유된 수많은 생리활성 물질 때문일 것이다 (Park et

al ., 2008).

복분자 ( Rubus coreanus Miquel) ^{는 장미과에 속하고 우리나}

라 중부 이남의 산기슭 양지에 자라는 식물로 높이가 2~3 m

정도이며 , ^{줄기는 흰 분이 덮여 있고 갈고리 모양의 가시가}

있는 것이 특징이다 . 5~6 ^{월에 꽃이 피며} 7~8 ^{월에 열매가 성숙}

되어 둥글고 붉은색으로 익다가 나중에 흑색으로 완숙된다

(Bae, 2000). ^{한방에서는 기운을 북돋으며 몸을 가볍게 하고}

백발이 생기지 않게 하는 효능을 가지고 있다고 알려져 있다 .

또한 복분자는 면역 조절 효능이 있어 허약한 체질에 효과적 으로 작용하는 한약재로서 몸을 따뜻하게 하여 신체의 회복을 돕고 피부의 색깔을 좋게 하며 오장 ( 五臟 ) 을 편안하게 한다

(Kwon et al ., 2007). 특히 복분자의 유용 생리 활성 물질은 간과 신장에 효과적으로 작용해 튼튼하게 한다 . ^{생리 활성 물}

질의 종류로는 열매에서는 sanguiin H-4, gallic acid, 잎에서는

ellagic acid, quercetin, 줄기에서는 epicatechin, procyanidin B- 4 등이 보고되었다 (Yang et al ., 2007). 이러한 복분자는 현 재 식용으로는 청량음료와 다류 등으로 이용되고 최근에는 주 류의 원료로서 크게 각광받고 있으며 이를 뒷받침하기 위한 기초자료들이 많이 보고되었다 (Kwon et al ., 2006). 그러나 향장품에 대한 복분자의 생리활성 효능에 관한 연구는 미흡한 편이다 .

†

Corresponding author: (Phone) +82-33-250-6455 (E-mail) [email protected]

Received February 24, 2009 / 1st Revised March 17, 2009; 2nd Revised April 8, 2009 / Accepted April 11, 2009

물질은 나노미터 (10

⁻⁹

m) ^{스케일에서 새로운 물리화학적 특}

성을 나타내게 되고 , ^{이러한 특성들을 잘 활용하여 기존에 구}

현하지 못했던 많은 기술적 성과들을 얻을 수 있다 (Kim,

2006). 나노입자는 인체에 쉽게 침투할 수 있기 때문에 순환

을 통하여 각기 다른 신체 부위로 전달되며 , 특히 100 ㎚ 이 하의 소수성 표면을 갖는 리포솜은 분자성 약물의 운반을 용 이하게 하여 세포에 대한 친화성이 증가하게 된다 . 일반적으 로 수용성 성분은 용매에 이온상태로 존재하여 그 활용성이 높을 것으로 기대된다 (Rhaese ^{et al.,} 2003). ^{하지만 인체 피}

부의 내피세포는 인지질로 구성되어 있어 수용성 성분이 침투 하기 어려운 구조로 되어 있다 . 따라서 수용성 물질의 세포내 침투 효율 향상을 위해서 활성물질을 유상이 포집한 리포솜 형태로 제조하고 이를 생체에 적용시켜 높은 침투력 및 생체 활용성을 나타내고자 하는 연구가 많이 진행되고 있다 (Kim and Kwak, 2004).

본 연구에서는 보통 열수추출 방법을 통해 얻은 복분자 추 출물을 나노입자화 하여 대조함으로써 항산화 및 미백활성 증 진 효과를 알아보고 , 더 나아가 향장소재와 관련된 분야에 활 용하기 위한 기초 자료로 이용하고자 연구를 수행하였다 . 실 제 생체에 무해한 한약재에 대해 나노 입자화를 적용하므로 생체에 적합한 레시틴과 젤라틴 제재를 사용해 천연물을 포집 함으로써 나노입자를 제조하였고 , ^{포집물의 경제성 및 안정성}

을 비교하였다 .

재료 및 방법

1. ^실험재료

본 실험에 사용된 복분자 ( Rubus coreanus ) 는 2008 년 7 월 에 발교산 부근에서 채취한 것을 구입하였으며 재료를 실온에 서 음건 시킨 후 사용하였다 . ^{일반적인 추출방법으로 수직 환}

류 냉각기에 부착된 추출 flask 에 시료 중량에 대하여 시료에

10 배의 증류수를 가하여 60 ℃ , 100 ℃에서 각각 24 시간 동안 추출하였으며 , 얻어진 추출물을 감압농축장치 (Rotary Vacuum Evaporator N-N series, EYELA, USA) 로 농축을 하였고 , 동 결건조를 한 후에 실험에 사용하였다 (Kim et al ., 2008). 본 실험에서 60 ^{℃ 열수추출물은} NE60 ^으로 , ^{대조군으로 사용된} 100 ℃ 열수추출물은 NE100 으로 표기하였다 .

2. ^{나노입자 제조 및 확인}

본 실험에서는 나노입자화를 통한 생체활용성 증진효과의 탐색을 위해 천연 항산화 및 미백 효과가 기대되는 복분자 추 출물을 이용해 nanoparticle 을 제조하였다 . 복분자 60 ℃ 물 추 출 시료 50 ^㎎을 1 ^㎎ / ^{㎖의 농도로 증류수에 녹인다} . ^둥근바

닥플라스크에 각각 레시틴 , ^{젤라틴을 녹여 감압기를 사용해} multilayer 를 형성시킨다 . 완전히 건조되어 layer 가 형성된 둥

근바닥플라스크에 액상의 복분자 추출시료를 넣고 , ^{초음파 분}

산기를 이용하여 상온에서 2 ^{시간 동안 균질화시켜 수용성 나}

노입자를 제조하였다 (Kang et al ., 2005). 본 실험에서 레시

틴 제재로 포집한 복분자 나노 추출물은 NELE 로 , 젤라틴 제

재로 포집한 복분자 나노 추출물은 NEGE 로 표기하였다 .

3. ^{세포주 및 세포 생육 배지}

세포배양에 필요한 배지로 RPMI 1640 ^{을 사용하였고} , ^{그 밖}

에 배양에 필요한 시약으로 hepes buffer (SIGMA, USA) ^와 fetal bovine serum (GIBCO, USA), gentamycin sulfate (SIGMA, USA), trysin-EDTA (SIGMA, USA) 를 사용하였다 .

실험에 이용된 세포주로 마우스 흑색종 세포인 Clone M-3

(Cloudman S91 melanoma, mouse, KCLB, KOREA) 를 사 용하였다 . 세포는 RPMI 1640 배지에서 10% heating-inacti- vated FBS (fetal bovine serum) ^{으로 적응시켜 배양하여 실험}

에 이용하였다 . ^{추출물 및 나노입자의 정상 세포에 대한 독성}

을 알아보기 위해 인간 신장 세포인 HEK293 (Kidney nomal, Human, ATCC, USA) 를 사용하였고 RPMI 1640 배지에서

10% heating-inactivated FBS (fetal bovine serum) 으로 적응 시켜 배양하여 실험에 이용하였다 .

4. ^{정상세포 독성 측정}

세포독성 측정을 위해서 SRB assay 를 이용하여 측정하였다 .

Sulforhodamine B (SRB) assay 는 세포 단백질을 염색하여 세 포의 증식이나 독성을 측정하는 방법으로 실험 대상 세포인

HEK293 (in 10% FBS media) 의 농도를 4~5 × 10

⁴

cell/ ㎖으 로 96 well plate 의 각 well 에 100 ㎕ 씩 첨가하여 24 시간 배양 (37 ℃ , 5% 동안 CO

2

) 한 후 , 각각의 시료를 최종농도

0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 ^㎎ / ^㎖로 100 ^{㎕ 씩 첨가하여} 48 ^시간

배양하였다 . ^{배양이 완료 된 후에 상등액을 제거하고 차가운} 10% (w/v) TCA (tri chloroacetic acid) 100 ㎕ 가하여 4 ℃ 에서 1 시간 동안 방치한 후 증류수로 4~5 회 세척하여 TCA 를 제거하고 실온에서 plate 를 건조한 뒤 각 well 에 1% (v/v) acetic acid 에 녹인 0.4% (w/v) SRB 용액을 100 ㎕ 씩 첨가하 고 상온에서 30 분 동안 염색시켰다 . 결합되지 않은 SRB 염색 액은 1% acetic acid ^로 4~5 ^{회 정도 세척} , ^{건조시킨 후에} 10 mM Tris buffer 100 ㎕ 를 첨가하여 염색액을 녹여낸 후

540 ㎚에서 microplate reader 를 이용하여 흡광도를 측정하였 다 (Dol and Peto, 1981).

5. DPPH ^{라디칼 소거 활성}

복분자 과실 추출물의 항산화 활성 측정은 메탄올 0.5 ㎖에 각각 50, 100, 250, 500 ^㎍ / ^{㎖의 농도로 추출물을 녹여 시료}

를 조제하였으며 , ^{대조군으로} L-ascorbic acid ^{를 사용하였다} .

이 후 0.15 mM 의 DPPH 용액 2 ㎖을 첨가한다 . 반응액을 완

전히 섞기 위해서 10 ^초간 vortexing ^한다 . ^실온에서 30 ^{분간 반}

응시킨다 . ^남아있는 DPPH ^{의 양을 측정하기 위해서} UV-vis spectrophotometer 를 이용하여 517 ㎚에서 흡광도를 측정한다

(Seo et al ., 2008).

6. Clone M-3 ^으로부터 melanin ^{생성량 측정}

쥐 유래 melanocyte 인 Clone M-3 세포는 멜라닌을 생성한 다 . ^{멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신의 대사과정 중 마지}

막 생성물로서 표피에서는 갈색의 넓게 퍼진 점들로 존재한 다 . 이는 가시광선 영역대의 흡광도를 측정함으로써 생성량을 비교할 수 있다 (Lim et al ., 2006). 따라서 본 연구에서는

Clone M-3 세포를 6well plate 에 1 × 10

⁵

cells/well 로 접종한 후 CO

2

Incubator (5%, 37 ℃ ) 에서 세포가 well 바닥에 80%

이상 부착될 때까지 배양하였다 . 배지를 제거한 세포를 PBS

(phosphated buffer saline) ^{로 세척하고 이것을} Trypsin-EDTA

로 처리하여 세포를 회수하였다 . ^{회수된 세포는} 5,000 rpm ^으

로 10 분간 원심 분리한 후 상층액을 제거하여 pellet 을 얻어

60 ℃에서 건조하였다 . 10% DMSO 가 함유된 1 M NaOH 100 ㎕ 를 넣어 60 ℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 얻었다 . Microplate reader 로 490 ㎚에서 흡광도를 측정하여 세포 일정 수당 멜라닌의 양을 구하였다 (Kim et al ., 2008).

7. Tyrosinase ^{억제 효과 탐색}

Tyrosinase 저해 활성 실험은 피부내의 미백효과를 측정하는

실험으로서 , 0.25 M L-Tyrosine, 0.4 M Hepes buffer (pH 6.8), 1000 unit/ ㎎ Mushroom Tyrosinase 가 필요하다 . 96 well plate 각 well 에 Hepes buffer 70 ㎕ , 복분자 시료를 농도별로

20, 40, 60, 80, 100 ㎕ 을 각각 넣어주고 , 또 Tyrosinase

Fig. 1.

The nanoparticles of (a) lecithin and (b) gelatine by TEM.

(a) TEM micrograph of nanoparticle from the

R. coreanus

extract by lecithin-encapsulation. Scale of bar is 100

^㎚

.

(b) TEM micrograph of nanoparticle from the

R. coreanus

extract by gelatine-encapsulation. Scale of bar is 200

^㎚

.

50 ^{㎕을 각} well ^{에 넣었다} . ^이후 Tyrosine ^을 100 ^{㎕ 씩 분주}

하였고 , 475 ^{㎚에서 흡광도를 찍었다} . 15 ^{분 뒤 효소 반응이}

끝났다고 간주하여 한 번 더 475 ㎚에서 흡광도를 찍었다 . Tyrosinase 억제 정도는 다음과 같이 계산하였다 .

* Sa : ^{시료를 가지는 용액의 배양 후 흡광도} , Sb : ^시료를

가지는 용액의 배양 전 흡광도 , Ca : ^{시료를 가지지 않는 배양}

후 흡광도 , Cb : 시료를 가지지 않는 배양 전 흡광도

8. Confocal microscope ^측정

복분자 ( Rubus coreanus ) 나노 시료가 면역세포 (Raji) 에 결합한다는 사실에 근거하여 나노시료에 의한 면역세포의 분 포양상을 공초점 레이저 주사 현미경 (Confocal laser scanning microscopy) 을 통해 관찰하였다 . 1 ㎖의 면역세포 (Raji, 2 × 10

⁸

) 를 CO

2

농도 5%, 30 ℃의 incubator 에서 배양한 후 , 100

㎕의 복분자 ( Rubus coreanus ) 나노시료 (1 ㎎ / ㎖ ) 와 일반열수 추출물을 1 시간 동안 반응시켰다 . 세포들을 공초점 레이저 주 사 현미경 LSM510 META NLO (Carl Zeiss Jena GmbH, Germany) 으로 관찰하였다 (Lee et al ., 2007).

9. ^통계처리

SPSS program (ver. 12.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA)

의 T-test 로 검정하였으며 모든 data 는 평균오차 ± 표준오차

(Mean ± standard error) 로 나타내었다 .

결과 및 고찰

1. ^{나노입자의 확인}

진피 세포의 간극 Fig. 1 은 TEM 으로 촬영한 나노입자의

모습이다 . 입자들의 모양은 구형이다 . 나노입자들은 negative

staining 에 의해서 하얗게 보이는 구형들이다 . 염색에 사용한

phosphotungstic acid 는 수용성 부분을 염색시킨다 . 그러므로 지질이 포함되어 있는 나노입자에는 염색이 되지 않아 하얗게 보인다 . ^{이를 통해 제조된 나노입자는 수용성 추출물을 유상}

이 포집한 w/o 형태의 리포솜으로 구성된다 . 이를 Dynamic Light Scattering (DLS, BENTHOS, USA) 로 측정한 결과 , Fig. 2 (a) 에서 제조된 레시틴 나노입자는 10~100 ㎚의 범위 로 형성된 것을 확인하였다 . 분포의 정도를 피크로 나타내었 는데 50 ㎚에서 조밀한 분포를 나타낸다 . Fig. 2 (b) 에서 제조 된 젤라틴 나노입자는 100~300 ㎚의 범위로 형성된 것을 확 인하였다 . ^이는 200 ^{㎚에서 조밀한 분포를 나타낸다} . ^포집한

제재의 종류에 따라 다른 크기의 나노입자가 생성될 수 있으 며 , 본 복분자 나노입자의 나노향장품화가 DLS 측정치의 균

일한 분포를 가짐으로써 안정성이 있다고 평가할 수 있다 . 평 균 200 ^{㎚인 표피와 크기를 고려한다면 제조된 나노입자는 생}

체에 효과적으로 흡수 가능한 제형이라고 생각된다 . 2. ^{나노입자의 세포독성}

SRB assay 를 통해 세포 독성을 측정하였는데 Fig. 3 에서 복 분자는 1.0 ㎎ / ㎖ 최고 농도에서도 모두 25% 이하의 세포독성 을 보였다 . 1.0 ㎎ / ㎖ 의 농도에서 NE100, NELE, NEGE, NE60 의 순서로 각각 21.3%. 20.2%, 19.5%, 16.8% 의 세포독성 을 보였다 . ^{레시틴과 젤라틴으로 포집한 복분자 나노입자가 보}

통 열수추출물들과 대조했을 때 2~3% 낮거나 높은 세포독성을 보임으로써 , 정상세포에서 나노입자의 안전성을 확인할 수 있다 . 3. DPPH ^{라디칼 소거 활성}

DPPH 라디칼 소거능 측정법은 항산화 활성 측정방법의 하

나이다 . ^안정한 free radical ^{은 이 홀전자로 인해 상자성} (paramagnetism) ^{을 띄게 되며 전자나} hydrogen radical(H·) ^을

받아들여 안정화시키기 쉽다 . 또한 그 홀전자 때문에 517 ㎚ 근처에서 강한 흡수가 일어나기 때문에 용액은 짙은 보라색으 로 보인다 . 이 색은 다른 전자나 라디칼과 결합하여 전자쌍을

Tyro asesin Inhibition( )

% 1

(^Sa

–

^Sb)

C_a

–

C_b

( )

---

⎝

–

⎠

⎛ ⎞×

100

=

Fig. 2.

Size distribution of nanoparticles with (a) lecithin and (b)

gelatine using dynamic light scattering (DLS).

이루면 사라지게 된다 . ^이 DPPH ^{는 물에 잘 녹지 않고 알코}

올용액에는 5 × 10

⁻⁵

M ^{정도까지 녹일 수 있다} . DPPH ^용액의

색깔은 pH 변화에 크게 영향 받지 않기 때문에 pH 5.0-6.5 에

서는 흡수량에 거의 변화가 없다 . DPPH 용액을 공기 중에

두면 활성도가 떨어지므로 질소 중에 보관해야 하고 , pipette

으로 옮길 때에도 빛이 들어가지 못 하게 최대한 주의를 기울 여야 한다 . DPPH 가 ascorbic acid, tocopherol, polyhydroxy

방향족 화합물 등에 의해 전자나 수소를 받아 불가역적으로 안정한 분자를 형성하여 환원되어짐에 따라 보라색이 탈색되 어지는 원리를 이용하여 측정한 추출물의 전자공여능 효과는

Fig. 4 와 같다 . 보통 열수추출물의 free radical 소거능에 비해

나노 공정을 거친 시료가 평균 10% 이상의 좋은 활성을 나타

냈다 . ^특히 , NEGE ^{의 경우} 97.82% ^{의 높은 라디칼 소거 활성}

을 보였다 . ^{따라서 복분자에는 항산화 활성을 증진시키는 성}

분이 함유되어 있으며 기존의 저온 및 고온 열수 추출물에서 는 낮은 항산화 활성을 보이지만 나노 제조 공정이 병행되면 서 용출이 용이하게 물성이 변함에 따라 더 높은 활성을 낼 수 있을 것으로 기대된다 . 따라서 저온에서 추출한 복분자 젤 라틴 나노입자의 항산화능은 97.82% 로 , 짚신나물 잎의 물 추

출물의 83.4% ^{와 비교했을 때 연구가치가 있는 수치가 나왔음}

을 알 수 있다 (Seo ^{et al} , 2008).

4. Clone M-3 ^으로부터 melanin ^{생성량 측정}

복분자 추출물의 Clone M-3 세포주 melanin 생성에 미치

Fig. 3.

Cytotoxicity of the nano particle of

R. coreanus.

†

NE60 : Normal Water Extraction at 60

^℃

††

NE100 : Normal Water Extraction at 100

^℃

†††

NELE : Nano Encapsulation with lecithin in NE60

††††

NEGE : Nano Encapsulation with gelatine in NE60

Fig. 4.

DPPH radical scavenging activity on

R. coreanus.

†

NE60 : Normal Water Extraction at 60

^℃

††

NE100 : Normal Water Extraction at 100

^℃

†††

NELE : Nano Encapsulation with lecithin in NE60

††††

NEGE : Nano Encapsulation with gelatine in NE60

Fig. 5.

Melanin contents inhibitory activity of the

R. coreanus

extracts in Clone M-3 cells.

†

NE60 : Normal Water Extraction at 60

^℃

††

NE100 : Normal Water Extraction at 100

^℃

†††

NELE : Nano Encapsulation with lecithin in NE60

††††

NEGE : Nano Encapsulation with gelatine in NE60

Fig. 6.

Tyrosinase inhibitory activity of the

R. coreanus

extracts.

†

NE60 : Normal Water Extraction at 60

^℃

††

NE100 : Normal Water Extraction at 100

^℃

†††

NELE : Nano Encapsulation with lecithin in NE60

††††

NEGE : Nano Encapsulation with gelatine in NE60

는 영향을 알아보기 위해서 각각 12.5, 25, 50 ㎍ / ㎖의 농도 로 샘플 처리하여 멜라닌 생성량을 측정하였다 . Melasolv 는 대 조군으로서 미백제로 알려진 합성물질이며 처리 시 56% ^{의 저}

해활성을 보였다 . Fig. 5 에서 알 수 있듯 복분자는 50 ㎍ / ㎖의 농도에서 나노입자화 한 NELE 와 NEGE 가 각각 49.35%,

55.23% 로 높은 멜라닌 생성 저해 활성을 보였다 . 미백제로 사

용되는 Melasolv 와 비교했을 때 50% 가 넘는 높은 비율로 미 백작용을 하는 복분자 젤라틴 나노입자의 경우 , 열수 추출로 용출되어 나온 유용생리활성 물질이 나노 제조 공정을 통해 흡수 이행 속도가 빨라진 것으로 사료된다 . ^{당귀의 경우 초고}

압 15 분 추출물이 멜라닌 생성을 가장 적게 한다고 보고된 바 있다 (Kim et al ., 2008). 이를 통해 복분자 , 당귀와 같은 천 연물에서 보통 열수추출로는 얻을 수 없는 유용 물질들이 초 고압 공정과 같은 특수한 추출 공정을 통해 용출되어 나오고 ,

나노 제조 공정을 통해 효과적으로 세포 내 투과가 이루어 질 수 있음을 확인할 수 있다 . 미백 활성을 가지는 생리활성 물 질이 세포벽의 견고함과 식물 조직의 단단함으로 인해 열에너 지만을 가했을 때는 용출이 되지 못하다가 초고압이나 나노제 조공정의 초음파 공정과 같은 강한 에너지를 가했을 때 체내 흡수 이행 경로의 이점이 생기는 것으로 사료된다 .

5. Tyrosinase ^{억제 효과 탐색}

Tyrosinase ^{는 멜라닌 색소를 생성하는 효소이다} . ^따라서

tyrosinase ^{의 생성이 적을수록 좋은 미백활성을 갖는다고 평가}

할 수 있다 . Fig. 6 은 복분자의 tyrosinase 저해 비율을 나타 낸 것으로 , 젤라틴 나노입자 추출물이 1 ㎎ / ㎖ 의 농도에서

100% 의 높은 tyrosinase 저해 활성을 보인다 . 모든 조건의 농 도에서 젤라틴으로 포집한 복분자의 추출물이 미백작용을 가 장 효과적으로 하고 있다 . 하지만 젤라틴으로 포집한 복분자 외에 다른 조건의 복분자의 농도 수준에서 비교를 할 때 , 1 ^㎎ / ^{㎖의 농도보다} 0.8 ^㎎ / ^{㎖의 농도에서} tyrosinase ^{가 더욱}

효과적으로 억제된 점은 특이할 만한 점이다 .

6. ^{나노입자 추출물의 세포투과 속도 비교}

Fig. 7 은 1 시간에 걸쳐 real time 으로 매 5 분씩 confocal 현 미경을 이용해 찍은 사진으로서 , ^{나타난 면역세포에서 복분자}

추출물 나노 입자의 침투정도를 확인할 수 있다 . Real time

confocal 현미경 사진을 통해 복분자 나노입자가 세포 내에 들

어간 것을 알 수 있다 . 따라서 본 연구를 위해 제조한 나노

시료의 경우 입자의 크기가 50~200 ㎚로 분산됨에 따라 세포

의 침투의 용이성이 일반 열수 추출물에 비해 뛰어난 것을 확

인 할 수 있다 . 100 ^{㎚ 이하의 소수성 표면을 갖는 리포솜은}

약물의 분자성 약물의 운반을 용이하게 하여 세포에 대한 친 화성이 증가하게 된다 . 복분자와 같은 수용성 성분을 레시틴 ,

젤라틴으로 포집시킴으로써 인지질로 구성된 인체의 내피세포 에 대해 수용성 물질의 세포내 침투 효율 향상시킬 수 있다 .

감사의 글

본 연구는 농촌진흥청 바이오그린 21( ^과제번호 : 200704010

34013) 연구지원으로 수행된 것으로 이에 심심한 사의를 표합

니다 .

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Kim CH, Kwon MC, Han JG, Na CS, Kwak HG, Choi GP, Park UY and Lee HY. (2008). Skin-whitening and UV- protective effects of

Angelica gigas

Nakai extracts on ultra high

Fig. 7.

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R. coreanus.

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