Cytokine modulation in Raw 264.7 macrophages treated with ginseng fermented by Penibacillus MBT213

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Copyright: © 2018 Korean Journal of Agrcultural Science

https://doi.org/10.7744/kjoas.20180057

FOOD & CHEMISTRY

Cytokine modulation in Raw 264.7

macrophages treated with ginseng fermented by Penibacillus MBT213

Ji Yoon Son

¹

, Gereltuya Renchinkhand

¹

, Hyoung Churl Bae

¹

, Seung-Hee Paik

²

, Jo Yoon Lee

³

, Myoung Soo Nam

^1,*

1

Laboratory of Milk Food Biochemistry and Biotechnology, College of Agriculture and Life Sciences, Chungnam National University, Daejeon 34134, Korea

2

Division of Food Service Industry, Yonam College, Cheonan 31005, Korea

3

College of Tourism & Health, Joongbu University, Geumsan 32713, Korea

*Corresponding author: [email protected]

Abstract

The fermentation of Panax ginseng yields many compounds including ginsenosides that have various biological functions. The objective of this study was to investigate the modulation of nitric oxide (NO), Interleukin (IL)-6 and tumor necrosis factor (TNF)-α in Raw 264.7 cells treated with ginseng fermented by Penibacillus MBT213. Nitric oxide production in the Raw 264.7 cells treated for 24 hours with fermented ginseng at 3, 7, and 14 days after the treatment decreased to 74, 43, and 36%, respectively, compared with the positive control. The production of IL-6 was inhibited in all the cells treated with fermented ginseng at 3, 7, and 14 days after the treatment except for the positive control. The TNF-α production in the Raw 264.7 cells treated with fermented ginseng for 6 hours at 3, 7, and 14 days after the treatment was about 40,000, 85,000 and 65,000 pg/mL, respectively. Moreover, the TNF-α production in the Raw 264.7 cells treated with fermented ginseng for 24 hours at 7 and 14 days after the treatment was about 160,000 and 180,000 pg/mL, respectively. However, TNF-α production was inhibited in the Raw 264.7 cells at 6 and 12 hours after the treatment with fermented ginseng. herefore, it was confirmed that the immunological activity of the Raw 264.7 macrophages was affected by the treatment with fermented ginseng. It was concluded that ginseng fermented by Paenibacillus MBT213 possesses a potential anti-inflammatory activity and could be used as an ingredient in functional foods and pharmaceutical products.

Keywords: ginseng, IL-6, NO, Paenibacillus, TNF-α

Introduction

인삼(

^{Panax ginseng Meyer}

,

^Araliaceae

)의 뿌리는 항 당뇨병, 항 염증 및 항 알레르기 효과를 나타 내기 때문에 한국, 중국 및 기타 국가에서 약물로 오랫동안 사용되어 왔다(

^Kitagawa

,

¹⁹⁸⁷

;

^{Attele et} al

.,

¹⁹⁹⁹

). 또한 다양한 약리학적 활성 기능이 있는 인삼의 주요 성분은 사포닌(

^{Cheng et al}

.,

²⁰⁰⁶

)은

40

종 이상의

ginsenosides

로 구성되어 있다. 다양한 세균에 의한

ginsenosides

의

ginsenoside Rg3

에

OPEN ACCESS

Accepted: July 24.2018 Revised: July 15.2018 Received: May 30.2018 DOI:

Citation: Son JY, Renchinkhand G, Bae HC, Paik SH, Lee JY, Nam MS. 2018.

Cytokine modulation in Raw 264.7 macrophages treated with ginseng fermented by Penibacillus MBT213.

Korean Journal of Agricultural Science.

https://doi.org/10.7744/kjoas.20180057

대한 가수분해는 다양한 생리활성 효과를 증대시킬 수 있으며 주요

ginsenosides

(

^Rb1

과

^Re

)를 작은

ginsenosides

(

^Rd

,

^F2

, 화합물-

^K

와

^Rh2

)로 효율적으로 전환시킬 수 있는 미생물이 발견되었다(

^{Chi and Ji}

,

²⁰⁰⁵

).

Ginsenoside Rd

는 인삼 뿌리에서

⁸⁰

% 이상의 성분인

ginsenoside Rb1

,

^Rb2

,

^Rc

의 주요 가수분해 생성물이다(

^{Kim et al}

.,

1987

;

^{Son et al}

.,

²⁰⁰⁸

). 또한

ginsenoside Rd

는 생물학적 활성이 높은

ginsenoside Rg3

,

^Rh2

,

^F2

및

^Compund

-

^K

의 주요 전 구물질이다(

^{Chi and Ji}

,

²⁰⁰⁵

;

^{Cheng et al}

.,

²⁰⁰⁸

).

Ginsenoside

중 미량의

ginsenoside Rd

는 면역억제 활성(

^{Wang et al}

.,

2012

), 항 염증 활성(

^{Yang et al}

.,

²⁰¹²

), 면역보조제 활성(

^{Han and Rhew}

,

²⁰¹³

;

^Kim

,

²⁰¹³

), 신경줄기세포의 증식 촉진 효과 (

^{Lin et al}

.,

²⁰¹²

;

Palaniyandi et al

.,

²⁰¹⁵

)에 대한 연구가 진행되었다. 온화한 조건에서의 산 가수 분해(

^{Han et al}

.,

¹⁹⁸²

), 효 소 전환(

^{Ko et al}

.,

²⁰⁰³

) 및 미생물 전환(

^{Bae et al}

.,

²⁰⁰²

;

^{Senthil et al}

.,

²⁰⁰⁹

)과 같은

ginsenosides

를 생산하기 위해 다양한 형질전환 방법이 사용되어왔다. 이 방법들 중에서 효소전환은 특정

ginsenosides

생산에 가장 바람직한 방법이다(

^{Kim et al}

.,

2005

).

Lactobacillus plantarum CRNB22

(

Renchinkhand et al

.,

²⁰¹⁵

),

Enterococcus faecalis CRNB

-

^A3

(

Renchinkhand et al

.,

2016

),

Paecilomyces sp

.와 같은

^β

-

glucosidase

를 생산하는 미생물을 이용하는 미생물 생물 전환 방법(

^{Yan et al}

.,

²⁰⁰⁸

) 및

Microbacterium sp

. (

^{Cheng et al}

.,

²⁰⁰⁸

)는

ginsenisides

를 생산하는데 사용되었다.

대식세포(

^macrophage

)는 탐식세포로 체내 이물질에 대하여 초기 면역 반응을 담당하고 유도한다. 활성화된 대식세포는 표적세포 살해뿐만 아니라, 세포 독성능이 있는

Iinterleukin

(

^IL

)-

⁶

,

^{tumor necrosis factor}

(

^TNF

)-

^α

,

^{nitric oxide}

(

^NO

) 같은 물 질을 분비한다. 본 연구는 인삼

Paenibacillus MBT213

을 접종하여 발효시킨 인삼발효액을 마우스 대식세포인

^{Raw 264}

.

⁷

에 처리하여 대식세포가 생산하는

^cytokine

의 발현 조절에 미치는 영향을 조사하기 위해 수행하였다.

Materals and Methods

Fermented ginseng

충남 금산에서 생산한

⁶

년근 인삼을

Renchinkhand et al

. (

²⁰¹⁷

)의 방법으로 발효시켜 시료로 사용하였다.

Cell culture

수컷

^BALB

/

^{c mouse macrophage cell line}

인

^{Raw 264}

.

⁷

세포는

^KRIBB

(

^Daejeon

,

^Korea

)에서 분양 받았고

^Dulbecco

’

^s modified Eagle

’

^{s medium}

(

^DMEM

)에

¹⁰

%

^{fetal bovine serum}

(

^FBS

;

^Gibco

,

^Rockville

,

^MD

,

^USA

), 과

¹

% (

^{100 U}

/

^mg

)

penicillin

/

streptomycin

(

^Sigma

,

^St

.

^Louis

,

^MO

,

^USA

)을 첨가하고,

³⁷

℃,

⁵

%

^CO

2와 대기 습도가 유지되는 배양조건에서 배 양하였다.

²⁴

-

^well

(

^Sigma

,

^St

.

^Louis

,

^MO

,

^USA

)에

⁴

×

¹⁰

⁵

^CFU

/

^mL

조정하여

²⁴

시간 배양 후 인삼 발효액을

^{50 μg}

/

^mL

처 리하였다.

Cell viability by water soluble tetrazolium (WST) assay

인삼 발효액이

^{Raw 264}

.

⁷

세포에 미치는 세포독성 여부 측정은

^{96 well}

에

¹

×

¹⁰

⁴

^cells

/

^well

이 되도록 분주하고

²⁴

시간 배양 후

⁰

,

³

,

⁷

,

¹⁴

일 동안 발효시킨 인삼 발효액

^{50 μg}

/

^well

를 처리하여

³⁷

℃,

⁵

%

^CO

2에서

⁶

,

¹²

,

²⁴

시간 배양 후

^{WST assay}

를 실시하였다.

^EZ

-

^{Cytox WST assay reagent}

(

^{Daeil Lab Service Co}

.,

^Ltd

.,

^Seoul

,

^Korea

)을

^{10 µL}

첨가하고

²

시간 후에

ELISA reader

를 이용하여

^{450 nm}

에서 흡광도를 측정하였다.

Production of NO

Nitric oxide

의 생산량은 세포배양 상층액

^{50 μL}

와 동량의

^{griess reagent}

(

^Sigma

-

^{Aldrich Co}

.,

^St

.

^Louis

,

^MO

,

^USA

)를 혼 합하여

¹⁵

분 반응 후

^{540 nm}

에서 흡광도를 측정하였다.

Expression of Cytokine

인삼 발효액을 처리한

^{Raw 264}

.

⁷

세포의 염증관련

^cytokine

인

^IL

-

⁶

,

^TNF

-

^α

의

^mRNA

의 발현은

^PCR

(

^{Applied Biosystems}

,

Foster City

,

^CA

,

^USA

)로 수행하였다.

^{Positive control}

은

Lipopolysaccharide

(

^LPS

) (

^Sigma

-

^{Aldrich Co}

.,

^St

.

^Louis

,

^MO

,

USA

)

^{1 μg}

/

^mL

을 처리하였다. 배양한 세포를 회수하여

^{1 mL TRizol}

(

^{Invitrogen Corporator}

,

^Carlsbad

,

^CA

,

^USA

)을 넣고

¹⁰

분 동안 방치한 후

^chloroform

을 넣고

¹⁰

초 동안 격렬하게 흔든 다음

¹⁵

,

⁰⁰⁰

×

^g

에서

¹⁵

분 동안 원심분리하고 상층액을 취 하여 동량의

isopropanol

을 혼합하여 흔들어주었다.

¹⁵

,

⁰⁰⁰

×

^g

에서

¹⁰

분 동안 원심분리하여 상층액을 제거하고

^pellet

은

diethyl pyrocarbonate

(

^DEPC

)-

^{DW 60 μL}

에 녹여

^RT

-

^PCR

에 사용하였다.

^RT

-

^{PCR kits}

(

^Madison

,

^WI

,

^USA

)에

^{Oligo dT}

,

dNTP mix

,

Ribonuclease inhibitor

,

^M

-

^{MLV Reverse} Transcriptase

,

^M

-

^{MLV RT 5X buffer}

를 사용하여

⁴⁵

℃에서

³⁰

분,

⁹⁴

℃ 에서

⁵

분 동안 반응시킨 후

⁹⁴

℃에서

³⁰

초 동안

denaturation

시키고,

⁵⁵

-

⁶²

℃에서

³⁰

초 동안

^annealing

시킨 다음,

⁷²

℃에 서

¹

분 동안

²⁴

-

^{27 cycle}

반복한 뒤, 마지막

^extension

은

⁷²

℃에서

⁵

분 동안

^PCR

(

^{Applied Biosystems}

,

^Foster

,

^CA

,

^USA

) 을 수행하였다.

^PCR

산물은

²

%

^{agarose gel}

에 주입하고

^{100 V}

조건에서

¹⁵

분 동안 전기영동을 수행하였다.

^RT

-

^PCR

에 사용한

primer

는

glutaldehyde

-

³

-

^phosphate dehydrogenase

(

^GAPDH

):

Forward

:

ACAGTCTTCTGGGTGGCAGT

,

Reverse

:

CCATCACCATCTTCCAGGAG

;

IL

-

⁶

:

Forward

:

TGGAGTCACAGAAGGAGTGGCTAAG

,

Reverse

:

TCTGACCACAGTGAGGAATGTCCAC

;

TNF

-

^α

:

Forward

:

ATGAGCACAGAAAGCATGATCCGC

,

Reverse

:

CCAAAGTAGACCTGCCCGGACTC

이다.

Quantity of cytokine

Raw 264

.

⁷

세포를

²⁴

-

^well

(

^Sigma

,

^St

.

^Louis

,

^MO

,

^USA

)에

⁴

×

¹⁰

⁵/

^mL

로 조정 후

^LPS

(

^{Sigma Aldrich}

)

^{1 μg}

/

^mL

을 처리 하고, 대조군과 인삼 발효 추출물

³

,

⁷

,

¹⁴

일로 나누어 배양액을

^{50 μg}

/

^mL

을

^{Raw 264}

.

⁷

에 처리하고,

⁶

,

¹²

,

²⁴

시간 배양 후 상층액을 모아

^enzyme

-

^{linked immune}

-

^{sorbent assay}

(

^ELISA

)

^kit

(

^{BD Bioscience}

,

^USA

)를 이용하여

^TNF

-

^α

와

^IL

-

⁶

를 측정 하였다.

Statistics

통계분석은

^{SAS version 9}

.

⁴

(

^{SAS Institute Inc}

.,

^USA

)을 이용하였고, 처리 평균간의 유의성은

^Duncan

'

^{s multiple range}

test

를 이용하여

^p

<

⁰

.

⁰⁵

수준에서 유의적 차이를 검정하였다.

Results and Discussion

Cell viability

Human mast cell

(

^HMC

)-

¹

세포주에 발효시킨 인삼발효액을 처리하여

^{WST assay}

를 통하여 세포 독성을 조사한 결과는

Fig

.

¹

에 나타난 바와 같다.

^WST

는 수용성의

tetrazolium salt

가 살아있는 세포와 반응하여

^fomazan

을 생성하여 세포내의 모 든

dehydrogenase

와 반응하여 세포의 상태를 명확하게 파악하는 것이 가능하다.

^Fig

.

¹

에 나타난 바와 같이 인삼발효액은

Raw 264

.

⁷

세포의 성장을 저해하는 독성이 없는 것으로 나타났다. 대조구을

¹⁰⁰

% 기준으로

³

,

⁷

,

¹⁴

일 동안 배양한 인삼발 효액은 대조구보다 높은 생존율을 보임으로서 인삼발효액이 세포성장에 독성효과가 전혀 나타내지 않았다.

Production of NO

마우스 대식세포에서 염증성 자극이나 면역학적 자극에 의하여 합성되고 다량의

^NO

를 생성한다 (

^{Stuehr and Marletta}

,

1985

).

^NO

는 침입한 미생물이나 종양 세포에 대한 독성을 갖는 방어물질로서 작용하고 (

^{Hierholzer et al}

.,

¹⁹⁹⁸

), 때로는 숙 주에 치명적인 결과를 초래할 수 있는 것으로 보고되고 있다 (

^{McDaniel et al}

.,

¹⁹⁹⁶

). 인삼을

³

,

⁷

,

¹⁴

일 동안 발효한 인삼발 효액을

⁶

,

¹²

,

²⁴

시간 동안

^{Raw 264}

.

⁷

세포에 처리하여

^NO

의 생산량을 측정한 결과는

^Fig

.

²

와 같다.

^{Raw 264}

.

⁷

세포에

⁶

시간 배양에서는

^{positive control}

,

^{negative control}

,

³

,

⁷

,

¹⁴

일 모두

⁹

-

^{13 μM}

이 생산됨에 따라 시료 간의 차이가 없었다.

¹²

시간 배양에서는

⁶

시간 배양 보다

^{positive control}

과

^{negative control}

이

¹³

-

^{18 μM}

로 약간 높게 생산되었고,

³

,

⁷

,

¹⁴

일 배양 액에서는

⁶

시간 배양과 동일한

⁹

-

^{13 μM}

이 생산됨에 따라

⁶

시간과

¹²

시간 배양에는 시료 간의 차이가 거의 없었다. 반면

²⁴

시간 배양인 경우는

^{positive control}

은

^{35 μM}

인데 비해,

³

일,

⁷

일,

¹⁴

일 배양액의

^NO

생산량은 각각

⁹

,

²⁰

,

²²

.

^{5 μM}

로 나타 나

^{positive control}

과 비교하면 각각

⁷⁴

,

⁴³

,

³⁶

%로 현저하게 감소하였다. 이러한 결과는 인삼발효액이

^NO

의 생산을 억제 하여 염증 반응에 관련된 물질을 조절하는 효과가 있는 것으로 사료된다. 이는

^{Raw 264}

.

⁷

세포에 현삼 메탄올 추출물을 처 리하여

¹⁸

시간과

²⁴

시간 동안 배양 후

^NO

의 생산량을 측정한 결과 유의성 있게 억제되었다는

^{Byun et al}

., (

²⁰⁰⁵

)의 보고와 동일하였다. 이와 같이 인삼 발효 시간이 길어짐에 따라

^NO

생산은 증가하였는데 이는

ginsenoside Rb1

이

^Rd

로 전환되는 양이 증가 (

Renchinkhand et al

.,

²⁰¹⁷

)한 영향과 또 다른 대사산물이

^{Raw 264}

.

^{2 cell}

에서

^NO

의 생산에 영향을 미치는 것으 로 사료된다.

Fig. 1. Effect of fermented ginseng by Penibacillus MBT213 on the cell viability water soluble

tetrazolium (WST)-1 in Raw 264.7 cells for 6, 12, 24 h at 37℃. Fermented ginseng by Penibacillus MBT213 were treated to Raw 264.7 cells for 3, 7, 14 days. Each bar represents the average ± SE

Cytokine expression and production

IL

-

⁶

는

^B

세포가 항체 생산을 위해

^plasma

세포로 분화되는 마지막 단계를 활성화시켜 항체 분비를 촉진한다. 또한 염증 반응에서

^IL

-

⁶

는 항상 증가한다 (

^{Delgado et al}

.,

²⁰⁰³

).

^{Raw 264}

.

⁷

세포에

Penibacillus MBT213

으로 배양한 인삼발효액을 처리한

^IL

-

⁶

와

^TNF

-

^α

의 발현은

^Fig

.

³

에 나타난 바와 같다.

^IL

-

⁶

는

³

,

⁷

,

¹⁴

일 동안 발효시킨 인삼발효액을

⁶

,

¹²

,

²⁴

시간 처 리한 결과

^{positive control}

은 처리 시간에 비례하여 강하게 발현을 하였지만

^{negative control}

과

³

,

⁷

,

¹⁴

일 배양액에서 발현 되지 않았다. 이는 인삼발효액이

^{Raw 264}

.

⁷

세포에 작용하여

^IL

-

⁶

의 발현을 강하게 억제하는 것으로 사료된다.

TNF

-

^α

는 대식세포와 비만세포에서 분비되는데 암세포에 세포독성을 나타내며 만성염증반응과 관련이 있다 (

^{Delgado et} al

.,

²⁰⁰³

).

³

,

⁷

,

¹⁴

일 동안 발효시킨 인삼발효액을

⁶

,

¹²

,

²⁴

시간 처리한

^{positive control}

은 처리 시간에 비례하여

^TNF

-

^α

가 발 현하였는데

²⁴

시간 처리에서 가장 강하게 발현한 반면,

³

,

⁷

,

¹⁴

일 동안 발효시킨 인삼발효액을

⁶

시간 처리시에는 아주 미약 하게 발현되었고,

¹²

시간 처리시에는 약하게,

²⁴

시간 처리시에는 강하게 발현되었다. 이는 인삼발효액이

^{Raw 264}

.

⁷

세포에 처리했을 때

^TNF

-

^α

의 발현은 처리 시간에 따라 매우 민감하게 나타났다. 이와 같은 결과는 인삼발효액이

⁶

시간과

¹²

시간보

Fig. 3. The expression of tumor necrosis factor (TNF)-α and Iinterleukin (IL)-6 in Raw 264.7 cells

by fermented ginseng by Penibacillus MBT213 for 6, 12, 24 h at 37℃. Fermented ginseng by Penibacillus MBT213 were treated to Raw 264.7 cells for 3, 7, 14 days. GAPDH, glutaldehyde-3- phosphate dehydrogenase; LPS, Lipopolysaccharide.

Fig. 2. The production quantity of nitric oxide (NO) in Raw 264.7 cells by fermented ginseng

by Penibacillus MBT213 for 6, 12, 24 h at 37℃ of fermented ginseng by Penibacillus MBT 213 were treated to Raw 264.7 cells for 3, 7, 14 days. Each bar represents the average ± SD of three independent experiments. Lipopolysaccharide (LPS) (1 μg/mL) treatment alone served as a positive control. Level of significance was identified statistically compare with control using Duncan's multiple range test (*p < 0.05).

다

²⁴

시간 처리시에

^{Raw 264}

.

⁷

세포에 더 크게 영향을 미치기 때문으로 사료된다.

^{Raw 264}

.

⁷

세포에서

^IL

-

⁶

와

^TNF

의 생산 량을 측정한 결과는

^Fig

.

⁴

와 같다.

^Fig

.

³

의 발현과 동일하게

^IL

-

⁶

의 생산은

³

,

⁷

,

¹⁴

일 동안 발효시킨 인삼발효액을

⁶

,

¹²

,

²⁴

시간 처리한 결과

^{positive control}

은 처리 시간에 비례하여 많이 생산하였지만

^{negative control}

과

³

,

⁷

,

¹⁴

일 배양액에서는 아주 적은 량을 생산하였다.

Raw 264

.

⁷

세포에

³

,

⁷

,

¹⁴

일 동안 발효한 인삼발효액을

⁶

,

¹²

,

²⁴

시간 처리한

^{positive control}

은 처리 시간에 비례하여

TNF

-

^α

가 생산되었는데,

²⁴

시간 처리에서 가장 많이 생산된 반면,

³

,

⁷

,

¹⁴

일 동안 발효시킨 인삼발효액을

⁶

시간 처리시에는

40

,

^{000 pg}

/

^mL

정도 생산되었고,

¹²

시간 처리시에는

⁷

일과

¹⁴

일 인삼발효액에서 각각

⁸⁵

,

^{000 pg}

/

^mL

과

⁶⁵

,

^{000 pg}

/

^mL

정도 생산되었고,

²⁴

시간 처리시에는

⁷

일과

¹⁴

일 인삼발효액에서 각각

¹⁶⁰

,

^{000 pg}

/

^mL

과

¹⁸⁰

,

^{000 pg}

/

^mL

정도 생산되었다. 이러 한 결과는 인삼발효액을

^{Raw 264}

.

⁷

세포에 처리했을 때

^TNF

-

^α

의 억제는 처리 시간이 짧을 때 효과가 있는 것으로 사료된 다.

^IL

-

⁶

의 발현과 생산은 인삼 발효 시간에 관계없이 강하게 억제하는 것으로 조사되었는데, 이는

ginsenoside Rb1

이

^Rd

로 전환된 것과 또 다른 대사산물의 양에 상관없이

^IL

-

⁶

의 발현과 생산에 영향을 미치는 것으로 사료된다. 한편, 인삼 발효 시간 이 길어짐에 따라

^TNF

-

^α

의 발현과 생산은 증가하는 것으로 조사되었는데 이는

ginsenoside Rb1

이

^Rd

로 전환되는 양이 증 가 (

Renchinkhand et al

.,

²⁰¹⁷

)한 영향과 또 다른 대사산물이

^{Raw 264}

.

^{2 cell}

에서

^TNF

-

^α

의 발현과 생산에 영향을 미치는 것 으로 사료된다.

한편, 유익한 미생물을 이용한 발효 인삼의

ginsenoside

전환에 대해

Renchinkhand et al

., (

²⁰¹⁶

)은

Enterococcus faecalis CRNB

-

^A3

를 접종하여 발효시킨 인삼의

ginsenoside

의 분포는

^Rb1

이

^Rg3

(

^{epimer S}

/

^R

)와

^Rg5

로 전환되었음을 보고하였고,

Microbacterium sp

.

^GS514

로 발효시킨

ginsenoside Rb1

은

^Rg3

로 전환되었다고

^{Cheng et al}

. (

²⁰⁰⁸

)이 보고하였다. 또한

Chi and Ji

(

²⁰⁰⁵

)는

ginsenoside Rb1

을

Bifidobacterium sp

.

^{Int 57}

과

Bifidoacterium sp

.

^SJ32

로 발효시키면

^compound

-

^K

(

^Rb1

→

^Rd

→

^F2

→

^compound

-

^K

) 로 전환되었음 보고하였다.

Conclusion

Fig. 4. The production quantity of tumor necrosis factor (TNF)-α and Iinterleukin (IL)-6 in Raw

264.7 cells by fermented ginseng by Penibacillus MBT213 for 6, 12, 24 h at 37℃. Fermented ginseng by Penibacillus MBT 213 were treated to Raw 264.7 cells for 3, 7, 14 days. Each bar represents the average ± SD of three independent experiments. Lipopolysaccharide (LPS) (1 μg/

mL) treatment alone served as a positive control. Level of significance was identified statistically compare with control using Duncan's multiple range test (*p < 0.05).

였고,

^TNF

-

^α

의 생산 억제효과는

⁶

시간과

¹²

시간으로 처리시간이 짧을 때였다. 따라서

Paenibacillus MBT213

에 의해 발효 된 인삼발효액은 항염증기능이 있어 기능성 식품과 의약품 소제로 산업에 적용가능 할 것이라 사료된다.

Acknowledgements

본 연구는

²⁰¹⁶

년 충남대학교

^CNU

연구지원사업(과제번호:

²⁰¹⁶

-

¹³⁵⁶

-

⁰¹

)의 지원에 의해 수행되었으며 이에 감사드립 니다.

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