403
Korean J Vet Serv 34(4) : 403~407 (2011)
*Corresponding author: Ok-Jin Kim, Tel. +82-63-850-6668, Fax. +82-63-850-7308, E-mail. [email protected]
시추 개에서 발생한 T-cell 유래 림프육종 증례
오홍근ㆍ정영호1ㆍ이현아2ㆍ홍선화2ㆍ김옥진2*
와우동물병원, 1중부대학교 애완동물자원학과, 2원광대학교 동물자원개발연구센터
(접수 2011. 11. 29; 수정 2011. 12. 2; 게재승인 2011. 12. 5)
Spontaneous canine T-cell lymphosarcoma in a Shih Tzu dog
Hong-Guen Oh, Yung-Ho Chung1, Hyun-A Lee2, Sun-Hwa Hong2, Ok-Jin Kim2*
Wow Animal Medical Clinic, Iksan 570-210, Korea
1Department of Companion Animal and Animal Resources Science, Joongbu University, Geumsan 312-702, Korea
2Center for Animal Resource Development, Wonkwang University, Iksan 570-749, Korea (Received 29 November 2011; revised 2 December 2011; accepted 5 December 2011)
Abstract
This study describes a canine lymphosarcoma with a rapid proliferation and recurrence. A 4-year-old, male, Shih Tzu dog was examined for acute swelling mass. The mass had been identified since 3 months ago and enlarged 10×7 cm and located in the right axillary region. The surgical removal was recommended when patient visited veterinarian and the operation was conducted. The removed tumor was 11×8×7 cm and firm, lobulated and white cut surface. Routine screening laboratory test was as- sessed with blood and radiological analysis. The metastasis sign was not detected on thoracic and ab- dominal radiography. Blood test revealed decreased lymphocytes. After surgical removal of the mass, microscopic histopathological examination was performed to determine the final diagnosis.
Histopathologically, the tumors are characterized by the same histological features, including the pres- ence of neoplastic cellular populations, and lymphocytes infiltration in varying proportions. Also, DNA was extracted and PCR analysis was employed to analyze the origin of tumor cells. T-cell specific nu- cleic acid fragments were specifically amplified by PCR. On the basis of the laboratory results, the tu- mor was diagnosed with canine T-cell lymphosarcoma. On the basis of our knowledge, this is the first report of canine T-cell lymphosarcoma in a Shih Tzu dog.
Key words : Lymphosarcoma, T-cell, Tumor, Shih Tzu, Canine
서 론
개의 림프육종(lymphosarcoma)은 악성 림프종(malig- nant lymphoma)라고도 불리며 개의 종양 중에서 7∼
24%를 차지하는 것으로 알려졌다(Vail과 Oglivie, 1994). 개 림프육종은 임상병리학적으로는 다중심형 (multicentric form), 전종격형(mediastinal), 소화기형 (alimentary form) 및 피부형(cutaneous form)의 4가지 로 분류되며 개에서는 다중심형이 가장 흔하고 이환
된 개의 80%에서 림프절의 변성과 림프절 종창이 국 소적으로 발생한다(MacEween과 Young, 1996). 일반 적으로 림프육종은 림프절, 비장, 골수와 같은 림프 양 조직에 주로 발생하며 임상단계, 조직학적 형태, 발생부위에 따라 예후는 다양하다(MacEween과 Young, 1996). 림프육종의 진단은 증상이 장기로서 발현된 대부분 림프절과 같은 장기의 침습적 생검(simple fine needle aspirate)에 의하여 채취된 조직 또는 적출 된 종양 조직의 포르말린 고정과 파라핀 포매 후 절 편과 염색을 거쳐 병리조직학적 검사에 의해서 이루 어진다(Ballegeer 등, 2007; Dickinson, 2008).
Mono (absolute) 103/μl 0.2* 0.3∼0.8 Granulocyte (absolute) 103/μl 12.7* 1.2∼6.8
RBC 106/μl 6.89 5.5∼8.5
Hb g/dl 16.07 12∼18
HCT % 42.78 37∼55
MCV fL 62* 66∼77
MCH pg 23.33 20∼25
MCHC g/dl 37.56 32∼36
PLT 103/μl 326 160∼430
ALB g/dl 3.6 2.5∼4.4
ALP u/l 34 20∼150
ALT u/l 40 10∼118
AMY u/l 297 200∼1,200
T-BIL mg/dl 0.3 0.1∼0.6
BUN mg/dl 17 7∼25
CA mg/dl 9.8 8.6∼11.8
PHOS mg/dl 4.0 2.9∼6.6
CRE mg/dl 0.8 0.3∼1.4
GLU mg/dl 90 60∼110
NA+ mMol/l 140 138∼160
K+ mMol/l 4.7 3.7∼5.8
TP g/dl 7.2 5.4∼8.2
GLOB g/dl 3.9 2.3∼5.2
*Difference with normal range.
도가 lymphocytosis, 30∼50%가 thrombocytopenia를 유 발하는 것으로 알려져 있다(Withrow와 Vail, 2007).
Thrombocytopenia는 드물게 림프육종 개에서 출혈을 유발하기도 하는 것으로 보고되고 있다(Withrow와 Vail, 2007). 림프육종 개에서 hypercalcemia는 종양세 포에 의한 부갑상선호르몬 관련 펩타이드의 2차적인 분비 증가로 유발되며, 혈중 칼슘이온의 증가를 가져 온다(Weir 등, 1988). 림프육종 개에서 악성 hyper- calcemia는 T-cell 유래 림프육종과 밀접한 관련이 있 다(Withrow와 Vail, 2007). 림프육종 개에서 hyper- calcemia와 관련되어 흔히 유발되는 임상증상은 다뇨 증, 다음다갈증, 근육 위축, 혼수, 체중감소, 중추신경 억압 등이 있다(Meuten 등, 1983).
이번 증례에서는 우측 액와 림프절의 종대를 보이 며 제거 수술 후 1달 내에 다시 재발한 4년령의 시추 수컷으로서 전이의 소견은 보이지 않았으나 수술 제 거 후 같은 자리에 같은 크기로 다시 재발하여 재수 술과 항암치료를 권고하였으나 보호자의 거부로 안 락사된 발생 예를 보고하고자 한다.
증 례
2009년 1월경 4년령의 중성화되지 않은 수컷 시추 가 우측 액와 부위부터 목 밑에까지 이르는 10×7 cm 정도의 덩어리를 지닌 상태로 본원에 내원하였다.
전신검사 및 혈액소견
체온은 38.7oC로써 정상이었으며, 심박수, 호흡수, 식욕과 배뇨, 배변도 정상이었다. 우측 액와 부위부 터 목 부위에 이르는 혹(mass)은 촉진상 농양으로 의 심되지는 않았으며, 주사기로 세포액 검사를 시도하 였으나 흡인되지는 않았다. 전이 여부를 위하여 흉부 와 복부 방사선 사진촬영을 하였으나 다른 실질 장기 에 전이소견은 발견되지 않았다. 혈액검사 소견은 Table 1과 같이 림프구의 감소가 인지되었다. 피부와 의 분리 또한 쉽게 되는 점을 고려하여 제거 수술을 결정하였다.
수술
수술 시작 전 정맥을 확보하여 하트만 용액(중외제 약, Korea)을 점적하였으며, cephalosporine (CephradineⓇ, 대한뉴팜(주), Korea, 20 mg/kg, IV)을 투여하였다. 전 마취로서 atropine sulfate (AtropineⓇ, 대원제약 Korea 0.05 mg/kg, SC)를 주사하였고 전신마취로써 ketamine HCl (ketamine 50주Ⓡ, 유한양행, Korea, 5 mg/kg, IV) 과 xlyazine (RompunⓇ, Bayer Korea LTD., Korea, 2.33 mg/kg, IV)을 1:1로 혼합하여 정맥에 주사하여(0.2 ml/kg) 마취를 하였다. 환축을 ventrodorsal로 수술대 에 보정하고 일반적인 방법에 따라 술부를 소독하고, 액와 부위의 혹에 대해 제거수술을 하였다.
병리조직학적 소견
제거된 조직은 육안검사를 한 결과, 11×8×7 cm의 크기로 단단한 경도가 있었으며, 단면은 유백색에 분 엽으로 분리된 것을 볼 수 있었다(Fig. 1). 육안 검사
Fig. 1. The removed tumor was 11×8×7 cm and firm lobulated and white cut surface.
Fig. 2. Neoplastic immature lymphoid cells (arrows) may be larger than neutrophils, possess granular chromatin, have visible nucleoli, and have a nucleus to cytoplasm ratio that is lower than that of a mature lymphocyte. H&E stain. ×400.
Bar=100 nm.
Fig. 3.Gel electrophoresis of the PCR-amplified DNA fragment of TCR gene. Lane M: DNA marker (50-bp DNA ladder), P:
positive control of canine T-cell DNA, N: negative control, S1: DNA extracted from the submitted sample.
후 적출된 조직은 10% 중성완충 포르말린용액에 고 정하였다. 고정이 완료된 조직들은 병리조직학적 검 사를 위한 통상적인 방법을 사용하여 파라핀 포매한 후, 4 μm 두께로 절편하여 H & E 염색 후 병리조직 학적인 검사를 수행하였다.
병리조직학적 검사 결과, 림프구 유래 악성 종양세 포들로 구성된 종양 조직이 관찰되었다(Fig. 2). 종양 조직 내에 악성 종양세포들은 대부분 호중구보다 크 고 성숙 림프구보다 핵의 크기가 큰 미성숙 림프구 유래 세포들로 구성되어 있었으며, 핵분열 세포들이 자주 관찰되었다.
분자생물학적 진단
림프육종 조직의 림프구 유래를 확인하기 위한 분 자생물학적 진단법으로 Jeon 등 (2007)의 방법에 의 하여 T-cell receptor γ (TCRγ) genes을 검출하기 위한 PCR을 수행하였다. 림프육종 조직으로부터 1 g을 세 절하여 AccuPrep genomic DNA extraction kit (Bioneer Corporation, Korea)를 이용하여 제조사의 권장 proto- col에 따라 DNA를 추출하였다. 추출된 DNA는 Tris- EDTA buffer (pH 8.0)로 농도에 맞게 분주한 후 PCR 에 사용될 때까지 20oC에 저장하였다. PCR 검사를 위하여 추출된 Template DNA (50 ng)와 20 pmol의 각 primer를 PCR mixture tube (AccuPower PCR PreMix;
Bioneer Corp., Korea)에 분주하였다. PCR mixture tube (AccuPower PCR PreMix; Bioneer Corp., Korea)는 Taq DNA polymerase 2.5 U, 250 μM 농도의 각각의 deox- ynucleoside triphosphate, 10 mM Tris-HCl (pH 8.3), 40 mM KCl, 1.5 mM MgCl2 및 gel loading dye가 포함된 제품이었다. 최종 반응 volume을 증류수를 이용하여 50 μl로 조정하였다. PCR을 위한 primer 쌍은 T-cell 항원 CDR3를 coding하는 J 영역과 V 영역을 표적으 로 하는 TCRγ1, TCRγ2 및 TCRγ3 primers를 이용하였 다(Jeon 등, 2007). T-cell 항원 CDR3를 확인하는 pri- mer 쌍은 TCRγ1 primer; ACC CTG AGA ATT GTG CCA GG, TCRγ2 primer; GTT ACT ATA AAC CTG GTA AC, TCRγ3 primer; TCT GGG A/GTG TAC/T TAC TGT GCT GTC TGG로 제작하였다. 반응조건은 95oC에서 15분간 pre-denaturation을 실시한 후 94oC에 서 30초, 60oC에서 30초, 72oC에서 30초를 30주기로 시행하고 마지막으로 72oC에서 3분간 post-polymer- ization 단계를 거쳐 반응을 마무리한 후, 분석이 이루 어질 때까지 4oC에 보관하였다. PCR 반응은 My Genie 32 Thermal Block PCR (Bioneer, Korea)을 이용
폭산물을 확인할 수 있었다(Fig. 3).
치료 및 예후
환축은 마취 회복 후 항생제 및 소염제 내복약과 함께 퇴원하였다. 항암치료를 권고하였으나, 보호자 의 거부로 수술 후 항암치료는 수행되지 못하였다.
퇴원 후 1개월 후 환자는 우측 액와 부위에 종대를 보이며 재발하여 다시 내원하였다. 재수술과 항암치 료를 권고하였으나 보호자의 거부 및 안락사 요청으 로 추가 관찰이 이루어지지 못하였다.
고 찰
림프육종은 개에서 림프세망 내피세포 유래의 악 성 종양 중 가장 흔한 종양이다(Vail과 Oglivie, 1994;
MacEween과 Young, 1996). 주로 림프절, 비장, 골수 와 같은 림프양 조직에서 발생하였다. 관련 보고에 의하면 종 특이성은 Boxer, Basset Hound, St. Ber- nard, Scottish terrier, Airedales, Bull dogs에서 높은 발 생률을 나타내지만, Dachshund, Pomeranian에서는 낮 은 발생률을 보인다(Seacy, 1995). 림프육종의 분류에 의한 발생빈도는 다중심형 80%, 전종격형 5%, 소화 기형 5∼7%로서 그 중 다중심형의 40%가 체중소실, 혼수, 식욕결핍 등의 비특이적 증상을 나타내고 27∼
34%는 방사선상에서 폐의 미만성 침윤을 확인할 수 있다(MacEween과 Young, 1996). 이번 증례는 우측 액 와 림프절에서 발병한 림프육종으로 다중심형으로 분류될 수 있고, 발생 부위가 국소적인 림프절에 국 한되는 점으로 판단하여 세계보건기구(WHO)에서 분 류한 임상적 단계로는 stage II로 분류될 수 있다.
림프육종의 원인은 고양이, 가금, 사람에서 retro- virus와 관련이 있다는 것이 증명되었으나 개에서는 그 원인이 확실하지 않다(MacEween과 Young, 1996).
화학, 물리적 종양인자에 노출되는 것 또한 중요한 원인이 될 수 있다. 그러나 이번 환축의 보호자로부 터 병력 청취 시 상기에 관련된 정보는 없었다. 보편 적으로 림프육종의 전이는 림프양 조직뿐 아니라 거 의 모든 기관에서 일어나며 전종격동에 종괴를 형성
림프구의 감소가 인지되었을 뿐 다른 특이한 소견은 관찰되지 않았다.
진단에서 육안검사와 방사선학적 진단만으로는 확 진이 어려우므로 반드시 조직학적 검사가 이루어져 야 한다. 이번 증례에서도 조직학적 검사결과 미성숙 림프구 유래 악성 종양세포로 구성된 림프육종으로 진단할 수 있었다. 림프육종은 종양 세포의 유래에 따라 B-cell 또는 T-cell 유래로 분류해 볼 수 있다 (Jeon 등, 2007). 이번 증례의 림프육종은 분자생물학 적 분석으로 PCR을 이용하여 T-cell 항원 CDR3를 coding하는 J 영역과 V 영역을 표적으로 하는 TCRγ1, TCRγ2 및 TCRγ3 primers를 이용하여 PCR 분석한 결 과 T-cell에 특이적인 반응을 확인할 수 있었다. 이번 증례는 실험실 분석 결과, canine T-cell lymphosarco- ma로 진단되었다. 발생 부위가 국소적인 림프절에 국 한되는 점으로 판단하여 다중심형인 것을 알 수 있었 으며, 세계보건기구(WHO)에서 분류한 임상적 단계 로는 stage II로 분류되었다.
개에서 림프육종의 치료는 환축의 신체 상태와 보 호자의 경제적 요건을 고려해서 치료 여부를 결정할 수 있는데, 림프육종의 효과적인 치료를 위하여 외과 적 처치 후 화학적 요법을 병행하는 것이 필요하다.
외과적 성공률은 10% 미만으로 임상적 단계와 성차 에 따라 다르며 stage I, II의 환축이 보다 생존기간이 길고 암컷이 수컷에 비해 생존기간이 더 길다고 보고 되었다(Priester와 McKay, 1980). 적절한 항암치료로 환축의 생존기간을 연장시킬 수 있으며, 삶의 질을 향상시킬 수 있는 것으로 보고되고 있다(Withrow와 Vail, 2007). 화학적 요법으로 doxorubicine과 같은 항 암제들이 사용될 수 있으며 단독보다는 합제로 사용 될 경우 치료효과가 더 큰 것으로 보고되었다(Seacy, 1995). 항암 치료로서 CHOP (cyclophosphamide, dox- orubicin, vincristine, prednisone, 1/2 l-asparaginase)에 기초한 치료 프로토콜은 림프육종 환축에 우수한 치 료 효과를 보이는 것으로 보고되었다(Withrow와 Vail, 2007).
림프육종은 그 발생의 원인이 명확하지 않아 예방 이 어려우며, 한편 임상단계가 많이 진행되었을 경우 고가의 항암 치료비용으로 인해 많은 보호자들이 치 료를 포기하게 된다. 그러나 질병 초기 단계에서는
치료 효과가 높은 편이므로 정기적인 진단이 필요할 것으로 보인다.
이번 증례는 시추 개에서 발생한 다중심형, stage II 의 canine T-cell lymphosarcoma 사례였다. 전이가 발 견되지 않아 수술 후 항암치료가 병행되었다면, 예후 가 좋았을 것으로 판단되는데, 보호자의 경제적 사정 으로 항암치료가 병행되지 못하였고, 1개월 후에 재 발하여 안락사된 사례로서, 보호자의 동의를 받지 못 해 계속적인 추가 연구를 수행하지 못한 점이 연구의 제한점으로 판단된다.
결 론
우측 액와 부위부터 목 부위에 이르는 종대된 혹을 가진 건강해 보이는 4년령의 중성화 하지 않은 시추 가 내원하였다. 내원 당시 환축은 우측 액와 부위에 종대된 혹을 제외하고는 비교적 건강하였으며, 처음 엔 작았던 혹이 불과 1달 사이에 급속한 성장을 하여 10×7 cm로 커진 것으로 확인되었다. 혈액검사와 방 사선 검사에서 전이가 없음을 확인하고 종양으로 잠 정 진단하여 제거 수술을 하였고 제거된 조직은 조직 검사를 하였다. 진단결과 림프육종으로 판정되었으나 전이 여부는 여전히 존재하지 않았다. 분자생물학적 분석 결과 환축의 림프육종은 T-cell 유래임을 알 수 있었다.
감사의 글
이 논문은 2011년도 정부(교육과학기술부)의 재원 으로 한국연구재단의 기초연구사업(2010-0021940)을 지원받아 수행되었으며, 이에 감사드립니다. 또한, 이 연구의 수행 동안 기술적인 지원을 아끼지 않은 원광 대학교 동물자원개발연구센터(Center for Animal Re- sources Development)의 한상준, 김동우, 최용식 연구 원의 수고에 감사드립니다.
참 고 문 헌
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