서 론
결핵은 유병률이 지속적으로 감소되어 왔지만 여전히 미국, 서구 유럽의 여러 나라에 비하여 우리나라에서 높은 유병률을 보이는, 국가에서 3종 법정전염병으로 관리하고 있는 감염성질 환이다[1, 2]. 최근에는 면역결핍 환자들에 있어서의 결핵균 감 염, 약제내성 결핵균의 등장, 비결핵항산균에 의한 감염의 증가
103 DOI 10.3343/kjlm.2008.28.2.103
103 103 103
접 수: 2007년 10월 24일 접수번호:KJLM2081 수정본접수: 2008년 1월 11일
게재승인일: 2008년 1월 11일 교 신저 자: 박 경 운
우 463-707 경기도 성남시 분당구 구미동 300 분당서울대학교병원 진단검사의학과 전화: 031-787-7692, Fax: 031-787-4015 E-mail: [email protected]
실시간-중합효소연쇄반응을 이용한 결핵균의 검출
Detection of Mycobacterium tuberculosis complex Using Real-time Polymerase Chain Reaction
Ho Eun Chang
1, Se Ran Heo
1, Kwang Cheol Yoo
1, Sang Hoon Song, M.D.
3, Sung-Han Kim, M.D.
2, Hong Bin Kim, M.D.
2, Kyoung Un Park, M.D.
1,3, Junghan Song, M.D.
1,3, Jae Ho Lee, M.D.
2, Sung Sup Park, M.D.
3, and Eui Chong Kim, M.D.
3Departments of Laboratory Medicine1, Internal Medicine2, Seoul National University Bundang Hospital, Seongnam;
Department of Laboratory Medicine3, Seoul National University College of Medicine, Seoul, Korea 장호은1∙허세란1∙유광철1∙송상훈3∙김성한2∙김홍빈2∙박경운1,3∙송정한1,3∙이재호2∙박성섭3∙김의종3
분당서울대학교병원 진단검사의학과1, 분당서울대학교병원 내과2, 서울대학교 의과대학 검사의학교실3
Background : For the detection of Mycobacterium tuberculosis complex (MTB), PCR is known to be sensitive, specific, and rapid compared to the conventional methods of acid-fast-bacilli (AFB) smear and culture. We evaluated a new approach for MTB detection using real-time PCR.
Methods : The specificity of real-time PCR was evaluated using 20 MTB isolates and 37 nontuber- culous mycobacteria (NTM) isolates identified by AccuProbe Mycobacterium tuberculosis complex colony identification test (Gen-Probe Inc., USA) and Myco-ID (M&D, Korea). One hundred sputum specimens (50 AFB smear-positive and 50 negative specimens) were analyzed using real-time PCR and Amplicor Mycobacterium tuberculosis test (Roche, Germany). The results of real-time PCR posi- tives (55 samples) and negatives (598 samples) were analyzed by AFB smear and culture.
Results : The real-time PCR assay accurately discriminated between MTB and NTM species. Real- time PCR and Amplicor test yielded the same results in 96.0% (96/100) of the sputum specimens tested. The sensitivity and specificity of real-time PCR based on AFB culture were 97.4% and 88.5%, respectively. Of the 55 real-time PCR positive specimens, 83.6% (46/55) were culture-positive, 30.9
% (17/55) were smear-positive, 52.7% (29/55) were smear-negative and culture-positive, and 14.5%
(8/55) were both smear and culture-negative. Among the 598 real-time PCR negative specimens, 60 were not tested for AFB smear or culture and 10 were contaminated. Of the remaining 528 specimens, 478 (90.5%) were both smear and culture-negative and 39 (7.4%) were culture-positive.
Conclusions : For the detection of MTB, real-time PCR was sensitive and specific and compara- ble to conventional methods. It can be used for rapid identification of M. tuberculosis in clinical lab- oratories. (Korean J Lab Med 2008;28:103-8)
Key Words : Mycobacterium tuberculosis complex, Real-time polymerase chain reaction, Sensi- tivity, Specificity
등으로 결핵균의 신속한 검출과 동정에 대한 관심이 커지고 있다 [3-5]. 미국 등 상대적으로 비결핵항산균의 빈도가 높은 지역에 서는 항산균 도말 양성 객담의 30%에서 50%까지 비결핵항산균 이 분리되고 있으며 국내에서도 기존에는 10.3%에서 12.2%까 지 보고되어 왔으나 최근에는 30% 수준까지 그 비율이 높아지 고 있는 추세이다[3, 6]. 그러므로 결핵균과 비결핵항산균을 신 속하게 구별할 수 있는 적절한 검사방법이 요구되고 있다[7, 8].
이에 항산균을 보다 민감하고 신속히 검출 및 동정하기 위해 여 러 분자유전학적 검사방법들이 시도되어 왔다[9-12].
본 연구에서는 실시간-중합효소연쇄반응을 이용하여 결핵균 을 검출하고 기존의 분자유전학적 방법들과 비교하였다.
대상 및 방법
1.대상1)항산균 집락의 동정
항산균 배양 양성인 균주 중 AccuProbe Mycobacterium tuberculosiscomplex colony identification test (Gen-Probe Inc., San Diego, CA, USA)와 Myco-ID (M&D, Wonju, Korea) 에서 결핵균으로 동정된 20균주와 비결핵항산균으로 동정된 37 균주를 대상으로 하여 실시간-중합효소연쇄반응을 시행하였다.
2)객담 검체에서의 결핵균 검출
항산균 도말 양성인 객담 50검체와 음성인 객담 50검체를 대 상으로 항산균 배양, Amplicor Mycobacterium tuberculosis test (Roche, Penzberg, Germany)와 실시간-중합효소연쇄 반응을 시행하였다.
3)실시간-중합효소연쇄반응 결과의 분석
2006년 1월부터 6월까지 결핵균 중합효소연쇄반응 검사가 의 뢰된 653건을 대상으로 하였다.
2.방법
1)항산균 도말 및 배양
항산균 도말은 Ziehl-Neelsen 염색법을 이용하였고 배양은 3% Ogawa 배지(Shin-yang chemical, Seoul, Korea)를 이용 하였으며, 최대 8주까지 배양하였다. 항산균 도말 결과는 미국 질병예방통제국의 기준에 따라 음성, trace 및 1+부터 4+로 판 정하였다[13].
2)항산균의 분리 및 동정
(1) Amplicor Mycobacterium tuberculosistest
항산균 도말 및 배양 후 남은 침사를 -70℃에 보관 후 검사를 시행하였다. Amplicor Mycobacterium tuberculosistest (Ro- che) 제품을 이용하여 제조회사의 지시에 따라 시행하였고 흡광 도가 0.35 이상인 경우 양성으로 판정하였다[10].
(2) AccuProbe Mycobacterium tuberculosiscomplex colony identification test
AccuProbe Mycobacterium tuberculosiscomplex colony identification test (Gen-Probe) 제품을 이용하여 제조회사의 지시에 따라 시행하였고 형광값이 30,000 RLU (relative light units) 이상인 경우 결핵균으로, 30,000 RLU 이하인 경우 비결 핵항산균으로 판정하였다[14].
(3) Myco-ID
항산균 배양에서 균이 자라 AccuProbe (Gen-Probe)검사에 서 비결핵항산균으로 선별된 균주는rpoB유전자를 대상으로 중합효소연쇄반응-제한절편길이다형성을 이용하는 Myco-ID (M&D)검사를 시행하여 비결핵항산균을 동정하였다. 핵산 추출 은 100℃에서 20분간 가열하고 15,000 rpm에서 5분간 원심분 리한 후 상층액을 취하는 방법을 이용하였다. 추출한 핵산은 이 중-중합효소연쇄반응을 시행한 후 360 bp의 증폭산물을 전기 영동으로 확인하였다. 증폭산물을MspI 효소로 처리하여 4%
아가로오즈 겔에 전기영동한 후 나타나는 핵산 절편 양상을 마 이코박테리아 및 노카디아 동정 알고리즘에 따라 분석하였다.
핵산 절편 양상이 알고리즘과 정확히 일치하지 않는 경우Hae III, AluI 등의 효소로 처리하여 확인하였다[14].
(4) 실시간-중합효소연쇄반응 검사
항산균 도말 및 배양 후 남은 침사를 -70℃에 보관 후 검사를 시행하였다. 침사를 0.5 M HCl로 처리한 후 리트머스 종이에 일 부를 떨어뜨려 중화 상태임을 확인하였다. 중화된 침사에 Insta- Gene Matrix (Bio-Rad laboratories, Hercules, CA, USA) 200 L를 첨가하여 56℃에서 20분, 100℃에서 20분 가열하고 15,000 rpm에서 5분간 원심분리한 후 상층액을 취해서 -70℃
에 보관하여 실시간-중합효소연쇄반응에 사용하였다. 배양균주 에서는 핵산의 추출을 위해 100℃에서 20분간 가열하고 15,000 rpm에서 5분간 원심분리한 후 상층액을 취하였다.
실시간-중합효소연쇄반응을 위한 시발체와 소식자는 결핵균의 SenX3-RegX3부위를 대상으로 제작되었다[15]. 시발체의 염
기서열은 TAQ-T1 5′-GTA GCG ATG AGG AGG AGT GG- 3′과 TAQ-T2 5′-ACT CGG CGA GAG CTG CC-3′였고 소 식자의 염기서열은 TAQ-Tp 5′-FAM-ACG AGG AGT CGC TGG CCG ATC C-TAMRA-3′였다(Bioneer, Daejeon, Korea).
시발체 염기서열과 소식자 염기서열의 결핵균에 대한 특이도는 www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST에서 확인하였다. 반응액의 조 성(20 L)은 다음과 같았다: 10×LightCycler DNA Master HybProbe (Roche, Penzberg, Germany) 2.0 L, 3.0 mM Mg2+, 0.4 M 각 시발체, 0.4 M 소식자, 추출된 핵산 3 L.
증폭반응은 검체의 경우 95℃에서 3분 동안 초기 변성을 시행하 였고, 95℃에서 10초, 58℃에서 20초, 72℃에서 20초의 순서로 50회 반복하고 40℃에서 10초 동안 안정화시키도록 시행하였다.
균주의 핵산을 대상으로 한 경우의 증폭반응은 95℃에서 3분 동 안 초기 변성을 시행하였고, 95℃에서 5초, 58℃에서 10초, 72℃
에서 10초의 순서로 50회 반복하고 40℃에서 10초 동안 안정화 시켰다. 증폭신호의 검출을 위해서 측정파장 530 nm, 분석파장 530/705 nm로 설정하여 연장반응에서의 형광신호를 단발적으 로 측정하였다(single fluorescence measurement). 증폭반응 에는 LightCycler 2.0 (Roche, Penzberg, Germany)을 이용 하였다. 반응이 끝난 후 crossing point (Cp)값을 산출하고 완 만한 증폭곡선을 나타낸 경우 양성으로 판정하였다. 양성대조 물질은 AccuProbe (Gen-Probe)검사와 Myco-ID (M&D)검사 에서 결핵균으로 동정된 균주의 핵산을, 음성대조물질은 증류 수를 이용하였다.
3)실시간-중합효소연쇄반응 결과의 분석
결핵균 실시간-중합효소연쇄반응검사가 의뢰된 총 653건에 대한 항산균 도말과 배양 결과를 분석하였다. 항산균 배양과 도 말의 결과는 실시간-중합효소연쇄반응이 의뢰된 동일한 종류, 3일 이내 검체의 경우를 기준으로 하였다.
결 과
1. 실시간-중합효소연쇄반응을 이용한 항산균 집락의 동정
AccuProbe 검사와 Myco-ID 검사를 통해 최종 동정결과가 결핵균인 20균주와 비결핵항산균 16종의 37균주에 대하여 실 시간-중합효소연쇄반응을 시행한 결과, 결핵균은 20균주 모두 에서 양성이었고 비결핵항산균 37균주는 모두 음성이어서 균주 를 대상으로 하였을 경우 민감도와 특이도는 모두 100%였다. 비 결핵항산균 16종은 Table 1에 표시했다. 실시간-중합효소연쇄
반응 양성인 균주의 평균 Cp값은 23.87이었다. AccuProbe 검 사에서 결핵균의 평균 RLU값은 662,445이었고 비결핵항산균 의 평균 RLU값은 1,100이었다(Table 1).
2.객담에서 실시간-중합효소연쇄반응을 이용한 결핵균 검출방법의 비교
항산균 도말, 항산균 배양, Amplicor 검사, 실시간-중합효소 연쇄반응의 네 가지 검사가 모두 양성 또는 음성으로 일치하는 경 우가 항산균 도말 양성의 경우 78.0% (39/50), 음성의 경우 94.0
% (47/50)이었다. 항산균 도말 결과 양성이었으나 배양 결과 비 결핵항산균으로 동정된 경우는 일치하는 것으로 판단하였다. 불 일치를 보인 14건의 경우 실시간-중합효소연쇄반응과 Amplicor 검사 사이에 일치된 결과를 보인 경우가 71.4% (10/14)였다(Table 2). 항산균 배양 결과를 기준으로 할 때 실시간-중합효소연쇄반 응의 민감도와 특이도는 각각 97.4% (38/39)와 88.5% (54/61)로 Amplicor 검사와 동일했다.
3.임상검체에서 실시간-중합효소연쇄반응을 이용한 결핵균 검출성적
결핵균 중합효소연쇄반응 검사가 의뢰된 653건의 임상검체 중 실시간-중합효소연쇄반응 결과 양성은 55건이었고 음성은 598건이었다. 양성결과 중 동일인의 2회 양성으로 중복된 경우 는 4명의 8건이었고 항산균 배양 양성은 83.6% (46/55), 항산 균 도말 양성은 30.9% (17/55)였으며, 항산균 도말 음성이었으 나 배양 양성인 경우는 52.7% (29/55)였다. 항산균 도말 및 배 양에서 모두 음성이었지만 실시간-중합효소연쇄반응에서 양성
*Species and number of isolates of NTM are as bellow: M. abscessus 5; M. asiaticum 1; M. avium 5; M. fortuitum type I, 4; M. gordonae type I, 1; M. intracellulare type I, 5; M. kansasii type I, 1; M. kansasii type II-1, 1; M. kansasii type III-1, 1; M. mucogenicum 3; M. nonchromogenicum 2; M. peregrinum 1; M. scrofulaceum 2; M. septicum 2; M. shimoidi 2 and M. pulveris 1.
Abbreviations: MTB, M. tuberculosis complex; NTM, nontuberculous my- cobacteria; RLU, relative light units; Cp, crossing point.
AccuProbe (RLU) Real-time PCR (Cp) Mycobacteria
species (N) Mean SD Median Mean SD
NTM (37)* 1,100 776 857.0 - -
MTB (20) 662,445 121,573 713,643.5 23.87 2.9 Table 1. Comparison of relative light units values from AccuProbe test and crossing point values from real-time PCR assay for M.
tuberculosis complex and nontuberculous mycobacteria species
을 보인 경우는 14.5% (8/55)였다. 음성결과는 598건이었으나 60건이 항산균 도말 또는 배양이 의뢰되지 않았고, 10건은 오염 된 경우로 분석이 가능한 결과는 모두 528건이었다. 528건 중 결핵균은 39건, 비결핵항산균이었던 경우는 8건이었다. 또한 도말 양성은 5건이었는데 3건은 배양 음성이었고 1건은 비결핵 항산균이었다(Table 3).
고 찰
본 연구에서는 결핵균의 검출을 위하여 실시간-중합효소연쇄 반응을 사용하였다. 실시간-중합효소연쇄반응은 유전자의 증폭 산물에 결합된 형광물질로부터 방출되는 형광량을 실시간으로 측정하여 분석하는 방법으로 중합효소연쇄반응 이후 전기영동, 교잡반응과 같은 추가적인 과정없이 분석이 가능하므로 기존 중 합효소연쇄반응보다 오염 가능성이 개선되고 검사소요시간도 단 축되는 장점을 가진 방법이다. 또한 한 쌍의 시발체와 소식자가 함께 사용되어 비특이적 반응이 감소되고 특이도가 향상되는 방 법이다. 이는 유사한 유전정보를 가진 항산균에서 결핵균을 특이 적으로 검출하는데 도움이 될 수 있는 장점이다. 실시간-중합효 소연쇄반응 시에는 증폭과정에 대한 조건을 설정하는 것 이외에 핵산 추출의 과정을 고려해야 했다. 높은 민감도와 특이도로 결 핵균을 검출할 수 있는 중합효소연쇄반응의 조건을 갖춘 방법이 라 하더라도 양질의 핵산 추출이 선행되지 않으면 최종적으로 좋 은 결과를 산출할 수 없다는 점이 간과되어서는 안된다[15, 16]. 본 연구에서는 핵산 추출을 위해 컬럼을 이용하는 방법, 기존의 페 놀을 이용하는 방법 등 여러 가지 방법을 시도해 보았으나 Insta-
Gene matrix 를 이용하는 방법이 가장 결과가 우수하여 최종적 으로 선택했다[10, 17].
저자들이 항산염색 양성과 음성 각각 50검체를 대상으로 수 행한 실시간-중합효소연쇄반응을 기존의 Amplicor 검사와 비 교하였을 때, 두 방법 간 일치를 보인 경우는 96.0% (96/100)이 었고 불일치를 보인 경우는 4% (4/100)였으며, 민감도, 특이도 가 각각 97.4%와 88.5%로 Amplicor 검사와 동일했다. 이는 기 존의 검체를 대상으로 한 결핵균 검출방법의 민감도와 특이도 에 대한 보고 중, 이 등[9]의 88.8%, 86.8%, 최 등[10]의 80.8%, 99%, 김 등[11]의 82.9%, 93.8%, Ozkutuk 등[18]의 73%, 100%
결과와 실시간-중합효소연쇄반응을 이용한 보고 중 Broccolo 등[15]의 94.0%, 100%, Bruijnesteijn 등[16]의 66.7%, 100%의 결과와 비교해 볼 때 뒤지지 않는 결과라고 판단되었다. 또한 결 핵균 20균주에서는 모두 양성, 비결핵항산균 37균주에서는 모 두 음성을 보여 배양된 균주에 대한 실시간-중합효소연쇄반응 의 민감도와 특이도가 매우 우수하다는 것을 확인할 수 있었다.
6개월간 임상 검체를 대상으로 실시간-중합효소연쇄반응을 시행하여 항산균 도말 및 배양 결과를 분석하였을 때 양성 55건 중 83.6% (46/55)가 배양 양성, 52.7% (29/55)는 도말 음성, 배 양 양성이었고 음성 중 배양이 의뢰되지 않은 경우와 오염의 경 우를 제외한 528건에서 91.9% (481/528)가 배양 음성이었다. 전 체 양성률은 8.4% (55/653)로 나타났다. 이는 중합효소연쇄반 응법에 의한 기존의 평균 양성률 보고 7.9%보다 약간 높은 결과 이다[19]. 또한 598건의 음성 결과 중 3건의 배양음성, 도말 양성, 8건의 배양 결과 비결핵항산균인 경우는 신속하지만 특이도가 떨어지는 항산균 도말의 단점을 보완할 수 있으리라 판단되었다.
8건의 실시간- 중합효소연쇄반응 양성, 배양 음성의 경우는 2건 은 결핵환자, 2건은 예전에 결핵으로 진단받은 환자의 검체였고 4건은 결핵과 무관한 환자의 검체였다. 한편, Amplicor 검사와
*M. tuberculosis complex and NTM were identified using AccuProbe test.
Abbreviations: MTB, M. tuberculosis complex; NTM, nontuberculous mycobacteria.
AFB culture MTB NTM AFB
smear
Ampli- cor
Positive* + - + + 35 (70.0) 50 (100)
+ - - + 1 ( 2.0)
+ - + - 1 ( 2.0)
- - + + 6 (12.0)
- + - - 4 (8.0)
- - - + 1 ( 2.0)
- - - - 2 ( 4.0)
Negative + - + + 2 ( 4.0) 50 (100)
- - + - 1 ( 2.0)
- - - - 47 (94.0)
Table 2. Comparison of AFB stain, AFB culture, real-time PCR, and Amplicor test from 50 AFB smear positive and 50 AFB smear negative specimens
*Number of smears scored as ‘trace’.
Abbreviations: See Table 2.
AFB smear Positive Negative
Real-time PCR AFB culture Total
Positive MTB 17 (1)* 29 46
NTM 0 0 0
No growth 1 8 9
Negative MTB 1 (1)* 38 39
NTM 1 7 8
No growth 3 478 481
Total 23 (2) 560 583
Table 3. The results of AFB culture and smear from 55 real- time PCR-positive and 528 real-time PCR negative specimens
Real-time PCR
Specimens N (%)
Total (%)
병행 시행한 객담 검체에서 항산균 배양 양성, 도말 음성이고 실 시간-중합효소연쇄반응 양성이었던 경우가 4% (2/50)이었던 반 면(Table 2), 실제 6개월간의 실시간-중합효소연쇄반응 결과 분 석에서 도출된 55건의 실시간-중합효소연쇄반응 양성 중 배양 양성, 도말 음성인 경우는 52.7% (29/55)로서 차이를 나타내었 다(Table 3). 이는, Amplicor 검사와 병행 시행한 검체군의 경우 하나의 검체로 항산균 도말, 배양, Amplicor 검사와 실시간-중 합효소연쇄반응의 네 가지 검사를 병행하기 위해 침사를 분주하 고, 핵산을 추출하였으므로 실시간-중합효소연쇄반응에 사용된 핵산의 양이 실제 검사를 시행하면서 사용되는 핵산의 양과 차이 가 있었던 것으로 판단된다. 또한 Amplicor 검사와 병행 시행한 검체군은 결핵균 검사실에 의뢰된 검체를 대상으로 하였고, 6개 월간의 실시간-중합효소연쇄반응 결과 분석의 대상이 되는 검체 군은 분자유전검사실에 의뢰된 검체를 대상으로 하여 검체군에 도 차이가 있었을 것으로 판단된다.
실시간-중합효소연쇄반응의 오염에 의한 위양성의 위험이 매 우 낮은 장점은 집락을 대상으로 하는 경우 특히 유용할 수 있다.
또한 검사과정이 단축되어 간편하므로 대량의 검체를 대상으로 하는 검사실에서 적용하기에 매우 효과적이다. 검사과정상의 효 율성, 검체와 균주 모두에 적용이 가능한 활용도까지 고려하면 검사실에서 신속하고 정확하게 결핵을 진단하는 실용적인 방법 이 될 수 있다고 생각된다.
요 약
배경 : 중합효소연쇄반응을 이용하여 결핵균을 검출하는 방 법은 기존의 항산균 염색과 배양과 비교했을 때 민감하고 특이 적이며 빠른 것으로 알려져 있다. 저자들은 새로운 접근법인 실 시간-중합효소연쇄반응을 이용하여 결핵균을 검출하는 방법을 평가하였다.
방법 : 실시간-중합효소연쇄반응의 특이도는 AccuProbe Mycobacterium tuberculosiscomplex colony identification test (Gen-Probe Inc., USA)와 Myco-ID (M&D, Korea)로 동정된 20개의 결핵균과 37개의 비결핵항산균을 이용하여 평 가하였다. 100개의 객담 검체(항산균 도말 양성 50검체와 음성 50검체)를 실시간-중합효소연쇄반응과 Amplicor Mycobac- terium tuberculosistset (Roche, Germany)로 분석하였다.
임상검체 중 실시간-중합효소연쇄반응 양성 55건 및 음성 598 건의 검체에서 항산균 도말과 배양결과를 조사했다.
결과 : 실시간-중합효소연쇄반응은 정확히 결핵균과 비결핵 항산균을 구별했다. 객담 검체의 96.0% (96/100)는 실시간-중
합효소연쇄반응과 Amplicor 검사에서 일치했다. 항산균 배양을 기준으로 할 때 실시간-중합효소연쇄반응의 민감도, 특이도는 각각 97.4%, 88.5%였다. 55건의 실시간-중합효소연쇄반응 양 성 검체에서 83.6% (46/55)는 항산균 배양 양성이었고 30.9%
(17/55)는 항산균 도말 양성이었다. 항산균 도말 음성이나 배양 양성인 경우는 52.7% (29/55)이었다. 실시간-중합효소연쇄반 응 양성이나 항산균 도말 및 배양에서 음성인 경우는 14.5% (8/
55)이었다. 실시간-중합효소연쇄반응 음성인 598건 중 60건은 항산균 배양 또는 도말이 의뢰되지 않았고 10건은 배양 결과 오 염된 경우였다. 이들 경우를 제외한 528건 중 항산균 배양과 도 말이 모두 음성인 경우는 90.5% (478/528)였고 7.4% (39/528) 는 배양 양성이었다.
결론 : 실시간-중합효소연쇄반응을 이용하여 결핵균을 검출 하는 방법은 민감하고 특이적이었으며 기존의 분자검사들과 대 등했다. 이 방법은 임상검사실에서 결핵균을 신속히 검출하는데 사용할 수 있다고 판단된다.
참고문헌
1. World Health Organization. Global tuberculosis control: surveil- lance, planning, financing (WHO Report 2004). Geneva: World Health Organization, 2004.
2. Dye C, Scheele S, Dolin P, Pathania V, Raviglione MC. Consensus statement. Global burden of tuberculosis: estimated incidence, preva- lence, and mortality by country. WHO Global Surveillance and Mon- itoring Project. JAMA 1999;282:677-86.
3. Koh WJ, Kwon OJ, Yu CM, Jeon K, Suh GY, Chung MP, et al. Recov- ery rate of nontuberculous mycobacteria from acid-fast-bacilli smear- positive sputum specimens. Tuberc Respir Dis 2003;54:22-32. (고원 중, 권오정, 유창민, 전경만, 서지영, 정만표, 등. 항산균 도말양성 객 담에서 비결핵성 마이코박테리아의 분리 비율. 결핵 및 호흡기질 환 2003;54:22-32.)
4. Yim JJ and Han SK. Diagnosis and treatment of nontuberculous myco- bacterial pulmonary diseases. J Korean Med Assoc 2005;48:563-70.
(임재준 및 한성구. 비결핵성 마이코박테리아 폐질환의 진단과 치 료. 대한의사협회지 2005;48:563-70.)
5. Marin M, Garcia de Viedma D, Ruiz-Serrano MJ, Bouza E. Rapid direct detection of multiple rifampin and isoniazid resistance mutations in Mycobacterium tuberculosis in respiratory samples by real-time PCR.
Antimicrob Agents Chemother 2004;48:4293-300.
6. Wright PW, Wallace RJ Jr, Wright NW, Brown BA, Griffith DE. Sen-
sitivity of fluorochrome microscopy for detection of Mycobacterium tuberculosis versus nontuberculous mycobacteria. J Clin Microbiol 1998;36:1046-9.
7. Koh WJ and Kwon OJ. Diagnosis and treatment of pulmonary tuber- culosis. Tuberc Respir Dis 2005;58:438-51. (고원중 및 권오정. 폐결 핵의 진단과 치료. 결핵 및 호흡기질환 2005;58:438-51.)
8. Lee JY, Kim MN, Chung HJ, Jun KR, Choi HJ, Lee HY, et al. Clinical significance of low-colony count scotochromogen nontuberculous mycobacteria. Tuberc Respir Dis 2005;59:39-46. (이정연, 김미나, 정 희정, 전경란, 최희진, 이혜영 등. 균집락수가 적은 암색소성 비결 핵항산균 배양의 임상적 의미. 결핵 및 호흡기질환 2005;59:39-46.) 9. Lee JS, Ji HS, Hong SB, Oh YM, Lim CM, Lee SD, et al. Clinical util-
ity of polymerase chain reaction for the differentiation of nontuber- culous mycobacteria in patients with Acid-fast Bacilli smear-posi- tive specimens. Tuberc Respir Dis 2005;58:452-8. (이재승, 지현숙, 홍상범, 오연목, 임채만, 이상도 등. 객담 항산균 도말 양성 환자에 서 비결핵항산균과의 감별을 위한 결핵균 중합효소연쇄반응 검사 의 유용성. 결핵 및 호흡기질환 2005;58:452-8.)
10. Choi YM and Lee MH. Detection of Mycobacterium tuberculosis in spu- tum by using polymerase chain reaction. Korean J Clin Microbiol 1999;2:144-51. (최윤미 및 이명희. 객담에서 중합효소연쇄반응을 이 용한 결핵균 검출법의 평가. 대한임상미생물학회지 1999;2:144-51.) 11. Kim SR, Shin JH, Jeong J, Lee SH, Chang CH, Son HC. Clinical per- formance of the amplified Mycobacterium tuberculosis direct test�for the detection of mycobacterium tuberculosis in non-respiratory speci- mens. Korean J Clin Pathol 1999;19:315-9. (김성률, 신정환, 정윤성, 이선호, 장철훈, 손한철. 비호흡기 검체에서 결핵균의 검출을 위한 Amplified Mycobacterium tuberculosis Direct Test�의 임상적 유용 성. 대한임상병리학회지 1999;19:315-9.)
12. Lee H, Park HJ, Cho SN, Bai GH, Kim SJ. Species identification of mycobacteria by PCR-restriction fragment length polymorphism of the rpoB gene. J Clin Microbiol 2000;38:2966-71.
13. Diagnostic standards and classification of tuberculosis in adults
and children. This official statement of the American thoracic soci- ety and the centers for disease control and prevention was adopted by the ATS board of directors, July 1999. This statement was endors- ed by the council of the infectious disease society of America, Septem- ber 1999. Am J Respir Crit Care Med 2000;161:1376-95.
14. Park CM, Heo SR, Park KU, Song JH, Lee J, Lee CT, et al. Isolation of nontuberculous mycobacteria using polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism. Korean J Lab Med 2006;
26:161-7. (박철민, 허세란, 박경운, 송정한, 이재호, 이춘택 등. 중합 효소연쇄반응-제한절편길이다형성을 이용한 비결핵항산균의 분리.
대한진단검사의학회지 2006;26:161-7.)
15. Broccolo F, Scarpellini P, Locatelli G, Zingale A, Brambilla AM, Cichero P, et al. Rapid diagnosis of mycobacterial infections and quantitation of Mycobacterium tuberculosis load by two real-time calibrated PCR assays. J Clin Microbiol 2003;41:4565-72.
16. Bruijnesteijn Van Coppenraet ES, Lindeboom JA, Prins JM, Peeters MF, Claas EC, Kuijper EJ. Real-time PCR assay using fine-needle aspi- rates and tissue biopsy specimens for rapid diagnosis of mycobac- terial lymphadenitis in children. J Clin Microbiol 2004;42:2644-50.
17. Joo SI, Cho SI, Choi HS, Kim EJ. Evaluation of commercial PCR test kits for the detection of Mycobacterium tuberculosis from clinical spec- imens. J Clin Pathol Qual Control 1997;19:237-44. (주세익, 조성임, 최혜심, 김의종. 임상검체에서 상품화된 kit 시약을 이용한 결핵균 PCR 검사성적의 비교. 임상병리와 정도관리 1997;19:237-44.) 18. Ozkutuk A, Kirdar S, Ozden S, Esen N. Evaluation of cobas amplicor
MTB test to detect Mycobacterium tuberculosis in pulmonary and extrapulmonary specimens. New Microbiol. 2006;29:269-73.
19. Lee KE, Park DS, Lee YJ, Cho JH. Effects on detection rate and tur- naround time by changes in the mycobacterial culture and identifi- cation Methods. Korean J Lab Med 2005;25:46-52. (이기은, 이영진, 박도심, 조지현. 항산균 배양 및 동정방법의 변화에 따른 양성률과 보고시간 변화. 대한진단검사의학회지 2005;25:46-52.)
