약학학희지 제32권 제6 호 377〜 385 (1988)
Yakhak Hoeji Vol. 32，No. 6
Glycyrrhetinic Acid
가 간Morphine-6-Dehydrogenase
활성에 미치는 영향
허 근 • 김학성5•= • 김 영 문* * . 신억섭
영 남대 학교 약학대 학, *충북대 학교 약학대 학，**포항간호전문대 학 (Received October 19， 1988)
Effect of Glycyrrhetinic Acid on the Hepatic Morphine-6-Dehydrogenase Activity Keun Huh, Hak-Sung Kim,* Young-Moon Kim* and Uk-Seob Shin
College o f pharmacy, Yeungnam Universityy Gyeongsan 632，
^College o f Pharmacy, Chungbuk National University y Che ong ju 360-763 and
^ P o h a n g Junior College o f Nursing, Pohang 795-940， Korea
A bstract■一The biologically active component of licoris(Glycyrrhizae Radix L .) is considered to be glycyrrhetinic acid, an aglycone of glycyrrhizin, on the basis of chemical and pharmacolo
gical studies. The present study was undertaken to investigate the effect of glycyrrhetinic acid on the hepatic morphine-6-dehydrogenase activity, which catalize morphine to morphinone.
Morphine-6-dehydrogenase was further purified by centrifugation, (N H4) 2SC>4 fractionation, sephadex G-100, hydroxyapatite column. Hepatic morphine-6-dehydrogenase activity was significantly decreased by the treatment of glycyrrhetinic acid. W hen effect of glycyrrhetinic acid on the hepatic morphine-6-dehydrogenase was investigated in vitro, it was powerfully inhibited the enzyme activity with dose-dependent manner. From the above results, glycyrrhetinic acid inhibits hepatic morphine-6-dehydrogenase activity and decreases the morphine induced harm ful side effects.
M o rphine은 Sertiiner에 의해서 opium에서 분 리，명명된 이래 G u lla n d와 Robinson” 에 의해 그 구조가 밝혀졌으며 m orphine에 의한 진통,
위장관운동억제 및 오심，구토 등 다양한 약리
작용이 보고2〜 10> 되어진 후 많은 연구과정을 거
쳐 현재 임상에서 진통제로 사용되어지고 있다.
그러나 좋은 진통효과를 갖고 있으면서도 습관 성 내지는 탐닉성유발때문에 m orphine을 사용함 에 있어 많은 제한을 받고 있으며 또한 안전성 이 절실히 요구되어지고 있다.
이와 같은배경을 토대로하여 E cK enho任11> 등
에 의해 m orphine중독에 대한 해독제연구가 시
작되기에 이르렀다.
M o rphine은 opiate receptor 중 j i receptor에 작용하여 진통효과를 나타낸다고 밝혀져 있으 며12，13> endorphin, enkephalin과같은 endogenous
com pound가 m orphine receptor에 작용할것으로 생각되어지고 있다. 14~16>
체내에 투여되어진 m orphine은 주로 간에서
glucuronide포합 또 는 N - dem ethylation되어배설
되어지며 일부는 간장중의 cytosc)l분획에 존
재하는 morphine-6-dehydrogenase에 의해 산화 되어 m orphinone으로 된 다음 이것이 비단백성
sulfh ydryl화합물과 포합하여 뇨중으로 배설되어
진다. 19，20>
Morphine-6- Dehydrogenase^
N-CHo
Scheme. 1—Formation of Morphinone from Morphine by morphine-6-dehydrogenase.
n - c h3
378 허 근 • 김 학 성 • 김 영 분 • 신 억 섭
M o rp hin e의 m inor metabolic pathw ay의 중간 대사물인 m orphinone은 그 독성이 강한 물질21J
로서 m orphine투여시 탐닉성 및 내성유발의 원
인물질로 생각되어지고 있어20，22,26> 이 물질에 대한 연구가 진행되고 있다.
고래로부터 한방요법에 많이 응용되는 동의보 감이나 방약합편에 감초가 앵속과 같이 처방되 어 있는 점과 감초가 여러가지 독성물질의 해독 제로 널리 이용되어지고 있는23，24> 점 등을 고려 하여 감초성분인 glycyrrhetinic acid가 m or
phinone 생성효소인 morphine-6-dehydrogenase의 활성에 어떤 영향을 주는가를 관찰하는 한편
morphine-6-dehydrogenase를 부분정제하고 이
효소활성억제제로 알려진 naloxone의 작용25J과
비교 검토하였다.
실험재료 및 방법
시약ᅳM orphine .H C 1 은 제일제약, n a lo x o n e은 삼진제약의것을， b o vin e serum alb u m in , jS-nico- tinam ide adenine dinucleotide, hydroxyapatite는
S ig m a , 2-m e rcap to e th an o l, g ly c y rr h e tin ic a c id는 W ako, alanin aminotransferase (이하 A L T 라 약 함)와 aspartate am in o tran sfe rase (이하 A S T라 약함) 측정용 K i t는 E iken, se p h a d ex G - 1 0 0은
Pharm acia제품을 사용하였으며 그외 모든 시약
은 시판되는 특급 또는 일급품을 구입하여 사용 하였다.
실험동물一본 대학 동물사에서 일정한 조건으
로 사육한 외관상 건강한 200g 내외의 웅성
Sprague-Dawley계 흰쥐를 사용하였다.
G lycyrrhetinic acid는 Polyethylene glycol 400
(이하 P E G 400이라 약함)에 용해하여 용량(5〜
4 0 m g /k g )과 투여기간(1 〜4일)별로 복강내로 주 사하였으며 대조군은 동량의 P E G 400을 투여하 였다. 실험동물은 실험전 24시간동안 물만주고 절식시켰다. 실험동물의 처치는 24시간 절식시
킨 흰쥐를 ether로 가법게 마취시킨 다음 복부
정중선을 따라 절개한 후 복부대동맥으로부터
혈액을 채취하고 0 .9 % N a C l용액으로 관류시킨
간장을 적출하여 깨끗이 씻은 다음 간조직 l g당
0. l M sodium p h osp h ate b u ffe r (p H 7 . 4, 10 0 m M 2 -m e rca p to e th a n이함유，이하 N a . P b u ffe r라 약 함) 2배량을 가하여 빙냉상태에서 g la ss teflon h o m ogen izer로마쇄하였다. 이마쇄액을 1 0 5 ,0 0 0 X g에서 1시간 초원심분리하여 얻은 상등액을
m o rp h in e -6 -d e h y d ro g e n a se 활성측정에 효소원으 로 사용하였다. 한편 채취한 혈액은 실온에서
3 0분정도 방치시켜 응고시킨다음 3 ,0 0 0 r p m에서
1 5분간 원심분리하여 혈청을 취하여 실험에 사 용하였다.
M orphine-6-dehydrogenase 의 정 제 一실 험 동 물로 부터 적출한 간장을 Y a rn a n o 등26>의 방법 을 약간 변경하여 마쇄，원심분리 후 취한 상등
액에 (N H 4) 2S 04결정을 미세분말로 하여 4 5 %
포화시키고 원심분리하여 취한 침전물을 0 .0 5 M N a . P b u ffer (p H 8 .0 , 10 0 m M 2 -m ercap to eth an o l
함유)에 현탁시킨다음 투석막속에 넣고 1 ,0 0 0배 량의 10 0 m M 2 -m e rca p to e th a n o l이함유된 0. 0 5M N a * P b u ffer (p H 8. 0) 외액속에서 1 2시간 동안
Rat Liver
0 . 1 M Na.P. buffer,pH 7.4
(contained lOOmM 2-merc ap to et ha no l) Homogenate
| at 105,000x8 for lhr
I
Supernatatn
j 45% sat'd, (NH4 )2S O스, ce ntrifugation
Pellet Supernatant
| resuspended 0.05M N a .P . b u f f e r , pH 8 .0 Suspension
I dialysis against 0. 0 5 M Na.P. buffer,pH 8.0 J for 12hr
Solution
elute of 0. 1 M Na.P. bu ff er ,p H 8.0 in sephadex G- 1 0 0 column
Effluent
| A5% s a t M , (N H4) 2 Sᄋ스, ce nt ri fu ga ti on_______
Pellet Supernatant
| resuspend 0. 0 5 M N a .P . b u f f e r , pH 8.0 Suspension
| dialysis against 0. 0 5 M Na.P. buffer pH 8.0, for 12hr
Solution
I elute of Na.P. buffer, pH 8.0 in hy droxyapatite column Effluent( purified enzyme )
Scheme. 2—Procedure of enzyme purification.
Pellet
J . Pharm. Soc. Korea
61ycyrrketinic Acid가 간 Morpkine-6-beiiydrogeriase에 口i ᄎj 는 셜넣: 37§
투석시켰다. 투석시켜 얻은 효소액을 sephadex
G-100 column에 주입 하고 0. 05M N a .P buffer (p H 8 .0 , 10 0 m M 2 -m e rcap to e th a n o l 함유)로 유줄시킨다음 이유줄액을 다시 45% (N H4)2S O4 포화，농축시킨 후 0. 0 5M N a * P b u ffe r (p H 8. 0, lOOmM 2 -m e rcap to e th an o l 함유)로 1 2시간투석 시킨다음 부분정제된 효소액을 h y d ro x y a p a tite colum n에 주입하고 stepwise gradient 방법으로 0. 05M, 0. 075M, 0. l M N a .P buffer(pH 8. 0, lOOmM 2 -m e rcap to e th an o l 함유)로 유출시켰다.
각 단계의 유출액은 단백질을 정량하면서 효소 의 활성을 측정하여 정제율을 비교하였다.
M o r p h i n e - 6 - d e h y d r o g e n a s e의 활성측정ᅳ
T o k i 등26>의 방법에 준해 0. l M g ly c in e -N a O H * N a C l buffer (p H 9 .7 ) 일정량에 )3-nicotinamide ad en in e din ucleo tid e 1 . 5jw m ole 및 기질인 m o r
p h in e 1 . 5ᄍ m ole과 적당량의 흰/쥐 C y to so l분획 또는 정제효소액을 첨가하고 2 5 0C에서 2 0분간 반응시켰다. 반응종료 후 생성된 N A D H를 파장
34 0 n m에서 흡광도의 변화를 읽고 검량선에 준
해 산정하였다.
효소의 활성도는 1시간당 l g의 단백질이 생성
한 N A D H의 양을 n m oles로서 표시하였다.
혈청 a m i n o t r a n s f e r a s e의활성측정一R e itm an
과 F r a n k e l의 방법27J 에 준해 조제된 K it를 사용 하여 측정하였다.
즉 A L T ( 1 0 0 m l당 D L - a la n in e 1 , 780m g 및 a - K e to g lu ta ric acid 29. 2 m g함유)，A S T ( 1 0 0 m l당
L - a s p a r t ic acid 2, 660m g 및 a - K e t o g lu t a r ic acid 2 9 .2 m g함유) 기질액 1 .0 m l를 가하고 3 7 0C에서
5분간가온한 다음 혈청 0 .2 m l를 넣어 3 7 0C에서
A L T는 3 0분，A S T는 60분간 반응시킨 후 반응 을 종료시킬 목적으로 정색시약(2 .4 -d in itr o p - h e n y lh y d ra z in e : 10 0 m l당 1 9 . 8 m g함유) 1 . 0 m l를 첨가한 다음 0 .4 N - N a O H용액을 10 m l를 가해 잘
혼합하여 1 0분간 방치하고 파장 50 5n m에서 홉
광도를 측정한 다음 표준곡선에 의거해 그 활성 도를 산정하였다. 효소의 활성도는 혈청 l m l당
K a rm e n u n it28) 로 표시하였다.
단백질으| 정량一단백질정량은 L o w r y 등29>의 방법에 준해 b o vin e serum alb u m in을 표준품으
로하여 측정하였다. 한편 실험결과의 통계처리 는 studen t t- t e s t를 이용하였다.
실 험 결 과
Sephadex G-100 column을 통한 morphine-
6 - d e h y d r o g e n a s e의 정제ᅳ흰쥐 간 c y t o s이을
am m onium s u lfa te fra c tio n a tio n단계를 거친 다 음 부분정제된 m o r p h in e -6 -d e h y d r o g e n a s e를 se- p h a d e x G - 1 0 0 co lu m n에 주입하고 0. 0 5 M N a . P buffer (pH 8. 0, 100mM 2-mercaptoethan 이함유) 로 유출시켜 단백 및효소의 활성을 나타내었다.
그림에서 볼 수 있듯이 단백질은 주로 2 5 m l에
서 60m l 사이에서 유출되었으며 m o r p h in e - 6 - d e h yd ro g e n ase의 활성은 단백질이 많이 유출되 어 나오는 2 5 m l에서 50 m l 사이에서 높게 나타남 을 알수가 있다. 그러므로 2 5 m l에서 5 0 m l사이 유출액을 모아 농축하여 다음 정제단계에 사용
하였다 ( F ig . 1 ) . *
H y d r o x y a p a t i t e c o lu m n을 통한 m o r p h i n e - 6 - d e h y d r o g e n a s e 의 정제ᅳS e p h a d e x G - 1 0 0
co lum n을 통해 유출된 활성부분을 모 아 농축，
투석시킨다음 hydroxyapatite co lu m n에 주입하
고 N a .P bu ffe r(p H 8 .0 ， 100mM 2-mercaptoe- th an o l 함유)를 0 .0 5 M 에서 0 . 1 M 까지 s te p w is e
F ig . 1—Elution profile of protein and morphine-6- dehydrogenase from sephadex G-100 column.
The assay was described in the experimental methods. Column diameter: 2 .2cm, column length: 10cm, flow rate: 3ml/hr, pro
tein, o—o; morphine-6-dehydrogenase acti
vity.
Vol. 32，
380 허 S • • 김학심 . 김명분 • 신역섭
Table. I —Purification of rat liver morphine—5-dehydrogenase
Purification step Total protein (mg)
Total activity*
Specific
activity** Purification
(fold) Yield (% )
105, OOOxg centrifugation (N H4) 2SC>4 fraction Sephadex G-100 column
Hydroxyapatite column
12,144.8 4,084.8 931.0 15.0
137.0 80.1 44.6 2.8
11.28 19.62 47.94 188.88
1.0 1.7 4.3 16.8
100 58.5 34.0 2.1
**» N A D H n moles/hr, **; N A D H 'n moles/g protein/hr
Fig. 2—E l u t i o n profile of protein and morphine-6-
dehydrogenase from hydroxyapatite column.
The assay procedure was described in the experimental methods. Column diameter; 1.2 cm, column length; 10cm, flow rate; 3ml/hr,
• — •，protein, o一 o ; m o rp h in e -6-dehydroge- nase activity.
gradient 방법으로 유출시켜 단백 및 효소의 활
성을 나타내었다.
단백질은 0.05M에서부터 0 .1 M까지 계속적으 로 유출되었으나 morphine-6-dehydrogenase의
활성은 0.075M 분획에서 높게 나타남을 알수가
있다. 그러므로 0.075M N a .P buffer로 용출되 어나온 분획을 모아 이하의 in vitro 실험에 사 용하였다(Fig. 2 참조).
정제단계별 morphine-6-dehydrogenase활성
— Cytosol 분획중에 함유되어 있는 morphine-6- dehydrogenase의 총활성치는 137. On moles/hr이 었으며 최종단계인 hydroxyapatite로정제하였을 때는 효소의 총활성이 2.8n moles/hr로서 약 2 .0% 의 수율을 나타내었다. 한편 가용성분획 에 함유되어 있는 rnorphine-6-dehydrogenase의 specific activity는 11. 28n moles/g protein/hr이
Concentrat ion ( )
Fig. 3—Effect of glycyrrhetinic acid and naloxone
on the hepatic morphine-6-dehydrogenase activity in vitro.
The assay procedure was described in the experimental methods. Each point represents the means of 3 experiments, o—o; glycyrr
hetinic acid, naloxone.
었으며 hydroxyapatite column을 통과시켜 얻은 morphine-6-dehydrogenase의 specific activity는 188.88n moles/g protein/hr으로서 약 17배 정 도 부분정제되었음을 알수가 있다(Table 1 참 조
).
Morphine-6-dehydrogenase 활성에 미치는 glycyrrhetinic acid 및 naloxone의 영향 Glycyrrhetinic acid 및 morphine-6-dehydrogenase inhibitor로 알려진 naloxone을 시험관내에 농도 를 달리하여 첨가하였을 때 첨가농도에 따라서 효소의 활성이 억제되어 glycyrrhetinic acid를 5 X l(T 5g /m l를 첨가하였을 때는 대조치인 188.0 n moles/g protein/hr에 비해 26. On moles/g protein/hr으로서 약 90% 정도 현저하게 억제되 었으며 naloxone을 5 X lO -5g /m l되게 첨가하였을 때는 89. 3n moles/g protein/hr로서 약 50% 정도
J. Pharm. Soc. Korea
Glycyrrhetinic Acid가 찬 MorpJime-6-Detiycirogenase환^ 에 口1 치 는 영 # 381
0 5 10 20 AO (rnR/k 8 >
Fig. 5—Change of hepatic morphine-6-dehydrogenase activity in glycyrrhetinic acid-treated rats.
Glycyrrhetinic acid (lOmg/kg) was injected intraperitoneally in various time course be
fore sacrifice. Rats were decapitated 24 hr after the last administration. Values are means士 S.E. of 5 animals in each group. *; p< 0. 05,
* * ； pCO .Ol.
서는 효소활성이 7. On moles/g protein/hr로서 대조군에 비해 약 40% 정도 유의하게 억제되었 으며 4일투여군에서는 4. 2n moles/g protein/hr 로서 65% 정도 현저하게 억제됨을 관찰할 수 있 었다. 그러므로이하의 실험에서는 glycyrrhetinic acid롤 3일간 투여한 다음 실험을 행하였다(Fig.
5 참조).
G lycyrrhetinic acid 투여가 morphine-6-
dehydrogenase의 반응속도에 미치는 영향一
Glycyrrhetinic acid(10m g/kg) 을 투여한 실험군
과 PEG 400만을 투여한 대조군의 간으로부터
얻은 효소의 활성을 각각 측정하는 반응액에 기 질의 첨가농도를 달리하면서 morpliine-6-dehy- drogenase의 활성을 측정하여 Lineweaver-Burk plot로 나타내었을때 glycyrrhetinic acid 투여군 의 Vmax치는 대조군에 비해 약 1.2배 정도 감 소됨을 관찰할 수 있었으나 km치는 별 차이가 없음을 알 수 있었다(Fig. 6 참조).
혈청 am inotransferase 활성에 미치는 glyc-
yrrhetinic acid으| 영향一Glycyrrhetinic acid
(10mg/kg) 을 3일간 투여한 실험군과 P E G .400 만을 주사한 대조군의 혈청중 A L T 및 A S T활 성변화를 관찰하였을때 A L T의 경우 대조군이 30. 0+2. 4 Karmen u nit/m l of serum이 고 glyc- 억제되었다(Fig. 3 참조).
Glycyrrhetinic acid 투여용량에 따른 간 morphine 6-dehydrogenase활성변 호 In vitro 실험에서 glycyrrhetinic acid는 효소활성을 현저 하게 억제하고 있음이 관찰되었으므로 실험동물 에 용량(5，10, 20，40mg/kg) 별로 glycyrrhetinic acid롤 투여하면서 효소의 활성을 측정하였을때 PEG 400만을 투여한 대조군의 효소활성이 11.3 n moles/g protein/hr인데 비해 5mg투여군은 약 간 억제되었으나 유의한 것은 아니었다. 반면 10，20, 40mg을투여하였을때는효소활성이 7. 6， 5. 3, 3. 2n moles/g protein/hr로서 대조군에 비 해 약 35%, 55%, 70% 정도 현저하게 억제되었 다. 그러므로 이하의 실험에서는 glycyrrhetinic acid를 10mg/kg을 투여한 다음 실험을 행하였 다 (Fig. 4 참조).
Glycyrrhetinic acid 투여기간에 따른 간 morphine-6-dehydrogenase 활성변 동 ᅳ Glycy
rrhetinic acid(10mg/kg) 를 투여하면서 경시적으 로 효소의 활성을 관찰하였을 때 대조군의 효소 활성이 11. 3n moles/g protein/hr인데 비해 1일 및 2일 투여군에서는 약간 억제되는 경향은 보 였으나 유의성은 없었다. 그러나 3일 투여군에
Fig. 4ᅳDose response of glycyrrhetinic acid on the hepatic morphine-6-dehydrogenase activity in rats.
Glycyrrhetinic acid (5，10，20 and 40mg/kg) was injected to rats intraperitoneally daily for 3 days. Rats were decapitated 24hr after the last administration. Values are means 士S.E. of 5 animals in each group. *; p<*
0.05， * * ； pC-0.01.
Vol. 32，No. 6, 1988
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1 /Morphi ne( 10~-^M)
F ig . 6ᅳLineweaver-Burk plots of the hepatic mor- phine-6-dehydrogenase in glycyrrhetinic acid- treated rats.
Rats were received glycyrrhetinic acid intra
peritoneally daily for 3 days. The reaction mixture contained 0. lM Glycine • NaCl • NaOH buffer (pH 9.7), 卢-nicotinamide adenine dinucleotide (1.5ᄍ mole) and various concen
tration of morphine, control or glycyrrhetinic acid-treated enzyme solution. Points are the means of 3 separate experiments, o—o; con
trol, • —• ；glycyrrhetinic acid (lOmg/kg).
Fig. 7ᅳEffect of glycyrrhetinic acid on the serum alanine and aspartate aminotransferase (ALT, AST) activities in rats.
Glycyrrhetinic acid (lOmg/kg) was injected intraperitoneall daily for 3 days. The assay procedure was described in the experimental methods. Values are means±S.E. of 3 experi
ments. 杯 ; Karmen unit/m l of serum. A;
control group, B; glycyrrhetinic acid-treated
• group. □ ； ALT, ■ ; AST.
yrrhetinic acid를 투여한 실험군이 35. 2土3. 2 Karmen unit/m l of serum으로서 대조군에 비해 별다른 영향을 관찰할 수 없었다.
한편 A ST의 경우에 있어서도 대조군이 58.0 土4. 2 Karmen unit/m l of serum, glycyrrhetinic acid를 투여한실험군이 62. 0士4. 6 Karmen unit/
ml of serum으로서 대조군에 비해 별영향이 없 다는 것을 알수 있었다(Fig. 7 참조).
고 찰
Morphine의 minor metabolic pathway의 중간
대사물인 morphinone은 양적으로는 소량이지만
독성이 강할21>뿐아니라 morphine의 중독증상과 관련이 있을 것으로 생각되어지고 있다. 20，22，26)
morphine을 계속하여 투여하던가 다량투여했을
경우 내성 내지는 탐닉성유발과 밀접한 관련성 이 있을 것으로 생각되어지므로 감초성분으로 해독작용이 있는 것으로 알려진 glycyrrhetinic
acid가 어떤 영향을 주는가를 관찰할 목적으로
morphinone 생성효소인 morphine-6-dehydroge- nase활성에 대한 작용을 비교 관찰하였다.
간 cytos이분획에 존재하는 본 효소를 부분정
제하고 활성변동에 대한 glycyrrhetinic acid의 영향을 관찰한 in vitro실험에서는 naloxone보다 더 강력하게 억제하였다. naloxone은 morphine 의 가장 강력한 antagonist로 morphine중독의 진 단 및 치료에 쓰이며30) morphine-6-dehydro- genase의 강력한 inhibitor임25}을 고려할때 glyc
yrrhetinic acid가 morphinone 생성효소를 강력 하게 억제한다는 본 실험성적은 매우 흥미있는 것으로 생각된다.
Morphine-6-dehydrogenase를 정제하는 과정 에서 Yamano 등26} 이 sephadex G-100 column에 서 마지막 단계인 DE 32 cellulose column을 통 과시켰을때 약 2배정도 정제되었는데 비해 DE 32 cellulose대신 hydroxyapatite를 사용한 본 실 험에서는 전 단계에 비해 4배정도 정제되었으며 이것은 morphine-6-clehydrogenase 를 정제할때 D E 32 cellulose대신 hydroxyapatite의사용이 보 다효과적으로 정제할 수 있을 것임을 시사하여 주었다.
이와 같은 in vitro 실험성적을 토대로하여
glycyrrhetinic acid를 실험동물의 복강내로 주사
J. Pharm. Soc. Korea 허 슨••김학성 •김 영 분 • 소H 섭
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Glycyrrhetinic Acid가 간 Morphine-6-Dehydrogenase 활성 에 미 치 는 영 향 383
하면서 관찰한 실험에서 5m g/kg을 3일간 투여 한 실험군에서는 대조군과 별다른 차이를 나타 내지 않았으나 10mg/kg이상 투여시에는 mor- phine-6-dehydrogenase 활성이 대조군보다 40%
이상 감소되는 현저한 효소활성저해효과를 관찰 할 수 있었다. 또한 morphine-6-deliydrogenase
활성을 현저하게 억제하는 용량인 10mg/kg의
glycyrrhetinic acid를 4일간 계속 투여하면서 본 효소활성변동을 관찰한 실험에서 2일까지는 별 다른 변동이 없었으나 3일 투여에서부터 유의성 있는 효소활성저해효과를 관찰할 수 있었다. 이 와 같은 효과는 glycyrrhetinic acid(10mg/kg) 를 3일간 투여한 후 간 cytosol 분획을 분리한 다음 ammonium sulfate fraction을 얻고 Lineweaver-
Eurk plots로 관찰하였을 때 얻어지는 성적으로
보아 glycyrrhetinic cxid는생채내에서 morphine- 6-dehydrogenase생합성에 관여하는 반응과정을 저해하기 때문에 본 효소활성을 억제할 것으로 생각되어진다.
Glycyrrhetinic acid 의 morphine-6-dehydro-
genase활성억제작용이 간손상을 일으키는 간기
능저해작용 때문인지를 검토하기 위해 일반적 으로 간가능검사의 지표로 널리 쓰이고 있는 serum aminotransferase활성변동을 관찰하였을 때 대조군의 정상치와 거의 일치하는 것으로 보 아 glycyrrhetinic acid가 간조직손상을 유발하기 때문에 이에 따라 morphine-6-dehydrogenase활 성이 억제되었을 것이라고는 생각할 수 없었다. 뿐만아니라 pyridine으로 초래되었던 간손상이 glycyrrhetinic acid에 의해 개선되었다는 보고31>
를 고려하면 glycyrrhetinic acid에 의한 효소활 성억제작용은 간조직손상에 따른 작용이라고 간 주할 수가 없다.
이상과 같은 실험성적을 한방고서에 앵속과 감초가 같이 처방되어져 있다는 점과 감초가 해 독제의 목적으로 이용되어지고 있음을 관련시켜 볼 때 감초성분인 glycyrrhetinic acid의 mor- phine-6-dehydrogenase 활성억제작용을 관찰한 본 연구는 매우 흥미 있는 것으로 생각되어지며
앞으로 계속 연구를 진행하여 morphine 중독에
대한 morphinone 생성의 의의 및 이중간대사물
생성억제작용에 대한 glycyrrhetinic acid의 약리 학적 평가가 기대된다.
결 론
감초성분 glycyrrhizin의 aglycone인 glycyrrhe
tinic acid를 대상으로 하여 morphine 독성의 원 인물질로 생각되는 morphinone생성효소인 mor- phine-6-dehydrogenase활성변동과 연관지어 비 교 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
(1) In vitro 실험에서 glycyrrhetinic acid 및 morphine ᅳ 6-dehydrogenase inhibitor 로 알려진 naloxone을 시험관내에 첨가하면서 morphine-6-
dehydrogenase의 활성을 측정하였을때 효소활성
억제현상을 관찰하였으며 naloxone보다 glycyr- rhetinic acid가 더 강력하게 억제시켰다.
(2) Glycyrrhetinic acid를 용량별과 투여기간 별로 실험동물에 주사하였을 때 10m g/kg을 3일 간투여한 경우가 간 morphine-6-dehydrogenase
의 활성을 약 40% 정도 억제시켰다.
(3) Glycyrrhetinic acid(10m g/kg) 을 3일간투 여한 실험군의 혈청중 A L T 및 A S T의 활성은 대조군과 별다른 차이가 없었다.
(4) Glycyrrhetinic acid (10m g/kg) 을 3일간투 여하여 morphine-6-dehydrogenase와 기질간의 친화력 및 반응속도를 관찰하였을 때 K m치는
별 차이가 없었으나 V m ax치는 1 .2배 감소되 었다.
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