Chapter 15. Indican ( 화학적 검사)

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요화학 및 일반검사

(Urinalysis & General Analysis Lab)

임상병리학과 김 평 환

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Chapter 15. Indican ( 화학적 검사)

 단백의 부패로서 생기며 질병 진단상 특이적이 가치를 가지는 것은 아니고 단지 체내 의 부패기전의 정도를 타나냄.

- Tryptophan 이 장내세균에 의해 분해된 것으로 정상인의 요에서도 소량 (2~4mg/24hrs) 존재.

- 장관 폐쇄 시 강한 양성 반응이 일어남.

- 증가질환 : 장 내용물의 정체 (변비, 장폐쇄) 장내 이상분해 (장결핵, 복막염) 장 이외의 암, 괴저, 농양

: 생 성

- 장관 내에서 tryptophan이 분해되어 indole, skatole 형성  혈액  간 : 산화  Indoxyl + Skatoxyl  Sulfate (황산)과 결합  Indoxyl sulfate + Skatoxyl sulfate 생 성

 이 중 indoxyl sulfate을

Indican

→ 혈액으로 흡수 -- 신장 -→ 뇨

Indican (인디칸뇨)

▲ 검사법

1. Obermayer test

- 원리 : indoxyl sulfate + Obermayer 시약 (강 산 HCl, FeCl₃) → indoxyl -산화→

Indigo blue - 시약 : Obermayer시약 (강 산 HCl + FeCl₂), Chloroform

- 판정 : 양성이면 Indigo blue 2. Jaffe test

- 원리 : 인디칸을 강산(conc. HCl)으로 가수분해하여 생긴 indoxyl을 산화

 Indigo blue - 시약 : conc. HCl, Ca. hypochlorite, Chloroform

- 판정 : 양성이면 chloroform층이 청남색, Indigo blue 3. Jolles test

- 시약 : Obermayer시약, Thymol solution, Chloroform - 판정 : 양성이면

홍색

Indican (인디칸뇨)

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Chapter 20. Hematuria,

Hemoglobinuria, myoglobinuria

( 잠혈 occult blood)

 요 중 의 혈 뇨 (Hematuria) 와 혈 색 소 뇨 (Hemoglobinuria) 및 , 근 색 소 뇨 (Myoglobinuria)의 존재여부를 화학적으로 검출.

1) 혈뇨 : 깨어지지 않은 적혈구가 섞인 뇨 => 적색 현미경 검사가 필수

: 원인 - 신장질환 : 사구체신염, 감염, 염증, 종양, 결핵, 신장외상 혈액질환 : 백혈병, 혈우병

방광질환 : 전립선비대, 방광기생충감염

2) 혈색소뇨 : 적혈구가 용혈되어 혈색소가 유리된 상태로 존재하는 것 => 적색 Hb(heptoglobin)의 신역치 100~140mg/㎗ 이다.

: 원인 – 부접합 수혈, 혈관 내 용혈성 빈혈, 심한 화상, 독사, 독거미에 물렸 을때

3) 근색소뇨 : 근육에서 유리한 myoglobin이 사구체를 통과하여 요로 배출되는 경우로 근육질환, 근손상 시 나타남.

혈장 내 Haptoglobin과 결합되어 있지 않고 농도가 낮다.

300 - 2,000 mg/dl 이상 → 요중 배설

잠혈 (Occult blood)

검 사 법 혈 뇨 혈 색 소 뇨 근 색 소 뇨

Microscopic (현미경검사) + - -

Chemical (잠혈반응) ± + +

80% amm. sulfate 용해시헙 - + (갈색)

1) 시험지법 : 과산화물 (H₂O₂) 산소 해리  chromogen (색원체) 산화하여 발색 Blood + H₂O₂ + chromogen (tetamethylbenzidine)

 Oxidized chromogen + H₂O (colorless) (Color Development)

2) Benzidine test : 청록색

Blood + H₂O₂ + Benzidine oxidized chromogen

 Oxidized chromogen + H₂O (colorless) (Color Development: 그린블루) 3) Ortho-tolidine test : 청록색

Blood + H₂O₂ + O-toluidine oxidized chromogen  Oxidized chromogen + H₂O (colorless) (Color Development)

: Benzidine법 보다는 감도가 좋음.

혈뇨, 혈색소뇨, 근색소뇨 화학적 감별법

4) Guaiac test : 경계면에 청록색

Blood + H₂O₂ + Guaiac oxidized chromogen  Oxidized chromogen + H₂O (colorless) (Color Development)

※ 감 도

: OTB 〉 Kastle-Meyer의 phenolphthalein (적색이 양성) > Benzidine (청색이 양성) 〉 Guaiac (녹청색이 양성)

※

시험지법에 의한 요 검사 중 H

O

가 관계하는 것 : 당, 잠혈반응

혈뇨, 혈색소뇨, 근색소뇨 화학적 감별법

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Chapter 18. 세균뇨와 아질산염

세 균 뇨

- 정상뇨 : 무균(방광), 균이 요로에 의한 상향 감염

- 감염균 : E. coli, Proteus, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter 및 Salmonella등 - 검사원리 : 요 중의 질산염 (Nitrate)을 아질산염 (Nitrite)으로 환원

미량 포도당 검출법

- 검사법 ① Catalase 시험 (세균 10⁵/㎖이상, RBC, WBC 20개 이상/시야)

: 양성이면 작은 기포가 상층에 층을 이루든가 관 벽에 다수 부착됨.

② TTC (triphenyltetrazolium chloride) 환원법

③ 아질산염(Nitrite) 시험

Nitrite (NO₂) + Sulfanilamide  diazonium + 3-hydroxyl-1,2,3,4-tetrahydro-7,8- benzoquinoline  Pink-red color

④ Glucose-oxidase 시험

- 채뇨 : 방광에서 4-6시간 있던 뇨가 좋으며, 제일 좋은 건 아침 첫소변

▲ 세균뇨 검사법

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Chapter 19. 백혈구뇨

백혈구뇨

▲ 백혈구 검사법

- 호중구에 있는 많은 양의 esterase 활성측정.

(ester—esterase  alcohol + acid)

- 건강인 요 : 60-100만개 WBC/day (Abnormal : 시야당 5개 이상 호중구인 경우) - 검사목적 : 요로 감염유무를 알아보는 선별검사

- 검사법 : Cytur-test, Combur 9 test, Leukostix - Diazonium 염과 결합 후 violet azo 색소 형성

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Chapter 17. 요중 전해질 (칼슘)

칼 슘

- 혈액의 칼슘 양 : 9-11 mg/dL

- 요 중 농도 0.1~0.3 g/day : 섭취량에 따라 변동폭이 크다.

- 혈중 칼슘의 농도는 부갑상선 호르몬 (PTH) 작용으로 조절.

저칼슘혈증  PTH 자극  Vitamin D 활성화 --> 장에서 칼슘과 인의 흡수 촉진 뼈에서 칼슘 유리  혈중 농도 상승 고칼슘혈증  갑상선의 칼시토닌 분비  뼈에서 칼슘 유리 억제 혈중 농도 감소 - 검사법 : Sulkowitch test

① 원 리 : 요(Ca) + Oxalate + acetate buffer → Ca.Oxalate 불용성 침전물 생성

② 시 약 : Oxalic acid (옥살산), Amm.oxalate, GAA

③ 결 과 : 무혼탁 (-) - calcium배설의 저하 중등도혼탁 - 정상인 calcium함량 심한 혼탁 - calcium 배설의 증가

※ 이 검사에서 침전물이 없으면 혈청 calcium치는 7.5mg/dl 이하이다.

④ 임상적 의의

․ 증가 : 원발성 부갑상선 기능항진증, 악성종양, sarcoidosis, vitamin C과잉증

․ 감소 : 저 albumin혈증, 만성신부전증, 부갑상선기능저하증, vitamin D 결핍증

▲ Cloride

- Fantus 검사법 : silver nitrate 이용  적갈색 침전물 생성

▲ Calcium

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Chapter 7. 아미노산뇨

(Phenylketouria, alkaptonuria)

아미노산뇨

콩팥의 토리에서 여과된 후 요세관에서 많은 양이 재흡수 되어 미량의 아미노산이 요에 서 검출  아미노산에 대한 Threshold가 높기 때문.

1. 콩팥 아미노산뇨

: 요세관 재흡수 결함 때문에 특정 아미노산이 콩팥에서 배설되는 양이 증가하는 것.

▲ 아미노산뇨의 분류

: 판코니증후군, 시스틴증, 윌슨병, 갈락토오스혈증 2. 과다유출 아미노산뇨

: 혈장 아미노산의 농도가 병적으로 증가하여 소변에 배출되는 것

: 간질환, 납중독, 윌슨병, 단풍시럽뇨병, 페닐케톤뇨증, 페닐알라닌혈증

3. 아미노산 유래 비정상 유도생성물

: 알캅톤뇨, 올살산증, 티리신증, 엽산결핍증

아미노산뇨

▲ Phenylketouria (PKU)

- Phenylketon 뇨증은 phenylalanine 대사의 선천적 장애일 때 나타남.

★ phenylalanine hydroxylase의 결핍으로 phenylalanine을 tyrosine 으로 전환시킬 수 없기 때문에 여러 중간 산물이 요중에 대량 존재

- 흔히 출생후 2~6주 내에 많이 나타나며 모든 신생아에게 권장 검사 항목임.

- 검사법

① Ferric chloride test

- 요중 40~50㎍ phenylpuruvic acid/ml 농도 이상이 되어야 검출되며 PKU 어린이는 하루에 100~300 ㎍/ml 정도 배설한다.

- 양성 : 녹회색(grayish green), 청록색(blue green)

② Guthri test=세균억제법

- 출생 3~4일 이내에 신생아 발뒷꿈치에서 채혈하여 검사하는 방법으로 고초균 (Bacillus subtilis)의 성장에 필요한 아미노산 대사 저해제를 함유한 배지에서 발육이 억제되면 정상임.

▲ Alkaptonuria

- 유전성 대사질환으로 homogentisic acid oxidase의 결핍으로 생기며 phenylalanine과 tyrosine의 대사에 결함이 있어서 대사가 안된 homogentisic acid가 축적되어 배설됨. (요가 알칼리로 될 때 검게 변함.)

- 환자의 골격이나 관절에 흑색 색소 침착 - 검사법

아미노산뇨

① Ferric chloride test

- 가 검 뇨 에 FeCl₃을 몇 방 울 가 할 때 homogentisic acid가 존재하면 검청색 으로

나타났다가 소멸.

② Alkali test

- 가검뇨에 10% NaOH 몇 방울 가하면 표층 으로부터 흑청색으로 변함.

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Chapter 8. Melanin

Melanin

▲ Melanin

- 피부와 모발의 색소인 melanin은 요에서 발견되는 비정상적인 색소 - tyrosine의 최종 대사산물

- Melanogen(무색)이 Dopa의 산화에 의해 생성되어 요에서 발견되는 비정상 색소 공기 중 방치 시 서서히 Brown → Black

- 흑변시 Alkaptouria와 구별 : Melanoma환자에서 Phenylalanine, Catacolamine이 증가 - 검사법

① Ferric chloride

- 원리 : ferric chloride에 의해서 melanin의 전구물질인 tyrosine이 melanogen, melanin 으로 산화되는 반응을 이용

- 판정 : melanin이 존재하면 회색, 흑색의 침전물이 생긴다.

② Thormahlen test(특이적이고 예민하다)

- 원리 : Sod. niroprusside는 melanogen에 의해 ferrocyanide (prussian blue)로 환원.

- 판정 : melanogen 존재시 적색이 청록색으로 변색

※ Tyrosine ──────→ DOPA, Melanin

tyrosinase => 결핍시에는 백색증(albinism) 유발