제 10 주

제 10 주

DNA 염기서열 결정법

(DNA Sequencing)

1. 이론적 배경

• DNA 염기서열에 대한 지식

– 기초 생물학의 연구나 DNA 염기서열을 이용하는 다른 분야에서 필수적인 요소

• 진단검사의학, 생명공학, 법의학, 계통학과 같은 다양한 응용분야

• 진단검사의학 분야

– 유전자 이상을 간단하고 신속하게 검출하는 방법은 다양함 – 최종적 확인에는 염기서열 결정이 필수적

• 분자진단법

– 증폭법 – 교잡법

2. Maxam-Gilbert 방법

• Maxam-Gilbert method

– 1977년 Harvard 대학교 Allan Maxam과 Walter Gilbert에 의해 개발된 방법 – 화학적 방법(chemical method)

• DNA 조각의 5’ 말단에 동위원소로 표지

• 각 염기에 특이적으로 작용하는 화학약품을 처리

• 인산디에스테르 결합을 끊음

• 전기영동하여 염기서열을 결정

3. Sanger 방법

• Sanger method

– 1977년 Cambridge 대학교 Frederick Sanger에 의해 개발된 방법 – 사슬종결법(chain termination method)

• DNA primer, DNA polymerase, dNTP, 방사성 동위원소 표지 ddNTP(dideoxynucleotidetriphosphate)

4. 자동염기서열 결정법

• Pyrosequencing

• A sequencing method based on real-time monitoring of the DNA synthesis

• First described in 1985

• The method is optimal for sequencing of short sequences (typically 40~50 bases of a DNA)

The pyrosequencing principle

• Enzymes

• DNA polymerase I

• ATP sulfurylase

• Luciferase

• Apyrase

• Enzyme substrates

• Adenosine phosphosulfate (APS)

• D-luciferin