Paclitaxel 전처치에 의한 광역동치료의 증강효과

Paclitaxel은 G2-M 세포 주기 정지와 아포토시스를 유발한다. 우선 paclitaxel에 의한 세포 증식 억제와 세포사멸 효과를 MTT 분석으로 측정한 결과 NCI-N87과 YGIC-6B 세포주에서 IC₂₅는 각각 4.8 nM, 5.1 nM이었고 IC₅₀은 각각 11.3 nM, 13.1 nM이었다. Paclitaxel 전처치 에 의한 광역동치료의 증강효과를 분석하기 위하여 24시간 전에 IC₂₅의 paclitaxel을 4시간 동안 처치한 다음 IC₂₅, IC₅₀의 광량으로 광역동 치 료를 시행하였다. 광역동치료 후 48시간에 시행한 MTT 분석상 paclitaxel 전처치군에서 세포의 생존 분획이 현저하게 감소하였으며 이 는 paclitaxel과 광역동치료 각각의 효과를 산술적으로 더한 값보다 컸 다 (자료 제시 안 함). Paclitaxel의 전처치에 의한 상승효과를 산술적으 로 측정하기 위하여 증강지수의 개념을 도입하였다. 즉, IC₂₅의 paclitaxel을 전처치한 후 광량을 달리하여 광역동치료를 시행하여 MTT 분석을 시행한 다음 paclitaxel 자체에 의한 증식억제 효과를 보 정함으로써 표준화된 생족곡선을 구하였다. 그림 16과 같이 paclitaxel 을 전처치하였을 때, NCI-N87, YGIC-6B 두 세포주 모두에서 증강효 과를 나타내었으며 (그림 16), 전처치 여부에 따른 광량의 IC₂₅, IC₅₀을 계산하여 비교함으로써 증강효과를 지수화하였을 때, NCI-N87, YGIC-6B 세포주에서 paclitaxel 전처치에 의한 증강지수는 각각 1.25, 1.21로 뚜렷한 상승효과를 보였다 (표 1). MTT 분석의 결과를 보다 명확히 하 고자 NCI-N87 세포주에서 마찬가지 방법으로 콜로니 형성 분석을 시 행하였다. Paclitaxel 전처치군에서 광역동치료 후 14일 째 측정한 콜로 니 수는 현저하게 감소하였으며 표준화된 생존곡선을 얻었을 때, MTT 분석과 마찬가지로 뚜렷한 상승효과를 나타내었다 (그림 17).

Paclitaxel 전처치 여부에 따른 효과를 flow cytometry로 분석하였을 때, 광역동치료 단독군에 비하여 paclitaxel 전처치군에서 세포주기의 G2-M 분획과 subG1 분획이 현저하게 증가하였다 (그림 18).

Paclitaxel 전처치에 의한 효과를 DAPI 염색으로 관찰한 결과, 전처치 를 시행하지 않은 군에 비하여 광역동치료 후 4시간에 전형적인 아포토 시스의 양상을 보이는 세포의 수가 크게 증가하였고 24시간 뒤에는 거 의 모든 세포가 완전히 사멸한 소견을 보였다 (그림 15).

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0

다. PDT, Photodynamic therapy; Pct, Paclitaxel

1. Paclitaxel 전처치에 의하여 유도된 광역동민감화에 대한 증강지수

Cell Treatment IC25

(mJ/cm²) ER IC50

PDT, Photodynamic therapy; Pct, Paclitaxel; ER, Enhancement ratio

26

No pretreatment

Paclitaxel pretreatment

0 20 40 60 80 100

0 100 200 300 500 700

Light dose (mJ)

% cell survival

PDT only Pct+PDT A

B

그림 17. Paclitaxel 전처치 여부에 따른 콜로니형성 분석. A. Crystal violet으로 염색한 콜로니. B. 콜로니 수를 측정한 생존곡선. Paclitaxel (IC₂₅, 3nM)을 24 시간 전에 4시간 동안 전처치 후 verteporfin (2 μg/ml)을 이용한 광역동치료를 시행한 뒤 NCI-N87 세포 1 X 10³개를 60 mm 배양접시에 분주하여 14일간 배양한 다음 crystal violet로 염색하여 형성된 콜로니수를 측정하였다. 상승효과는 MTT 분석과 마찬가지로 paclitaxel에 의한 효과를 보정하여 계산하였다. PDT, Photodynamic therapy; Pct, Paclitaxel

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Control Paclitaxel only PDT only Paclitaxel + PDT 4 Hour

24 Hour

그림 1 배

양접시에 배양한 세포에 paclitaxel 전처치 여부에 따른 광역동치료 시행 후 trypsin을 이용하여 세포를 수거한 뒤 propidium iodide 염색 후 FACS를 이용하여 분석하였다.

Paclitaxel을 전처치한 경우에 subG1 분획이 현저하게 증가되어 있다.

전기영동으로 DNA 분절을 확인한 소견도 마찬가지로 paclitaxel 전